可口可樂(lè)無(wú)菌驗(yàn)證

1、實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案無(wú)菌線測(cè)試（ S2S11）S1：設(shè)備出廠前作的驗(yàn)證，在設(shè)備生產(chǎn)廠家內(nèi)部進(jìn)行。S2：評(píng)估 COP/SOP對(duì)無(wú)菌區(qū)的清潔和殺菌效能驗(yàn)證。S3：包裝材料外表面滅菌消毒效果測(cè)試。S4：包裝材料內(nèi)表面滅菌消毒效果測(cè)試。S5：注入無(wú)菌環(huán)境測(cè)試。S6：整個(gè)生產(chǎn)線的無(wú)菌效果驗(yàn)證，認(rèn)證從滅菌到無(wú)菌缸到充填及旋蓋的全部過(guò)程。S7：注入封蓋系統(tǒng)的無(wú)菌環(huán)境驗(yàn)證，認(rèn)證從滅菌到充填及旋蓋的整個(gè)過(guò)程的無(wú)菌效果。S8：隔離系統(tǒng)的抗污染能力驗(yàn)證。S9：運(yùn)輸測(cè)試，測(cè)試運(yùn)輸期間，對(duì)微生物敏感的產(chǎn)品在分類(lèi)卡車(chē)上，貯存和裝卸條件下對(duì)包裝完善方面的影響。S10：飲料生產(chǎn)允許測(cè)試，確認(rèn)無(wú)菌線是有能力對(duì)不同類(lèi)型的飲料產(chǎn)品進(jìn)行大批

2、量的生產(chǎn)。S11：飲料生產(chǎn)接受測(cè)試， 證明無(wú)菌生產(chǎn)線是具備商業(yè)長(zhǎng)期產(chǎn)生不同飲料的能力的。無(wú)菌線 S2 驗(yàn)證 SOP目的：評(píng)估 COP/SOP對(duì)無(wú)菌區(qū)的清潔和殺菌效能應(yīng)用：無(wú)菌灌注系統(tǒng)無(wú)菌區(qū)的設(shè)備外部表面，此鋼片測(cè)試應(yīng)于培養(yǎng)基注入測(cè)試之前進(jìn)行第一部分：準(zhǔn)備工作1. 儀器與試劑：移液槍?zhuān)?1ml，0.1ml ，0.01ml ，推薦另配一把 1-9ml ）以及槍頭各 100 個(gè)，鋼片 50 片（Krones 提供接種好的鋼片），100ml 塑料圓盒 50 個(gè)，不銹鋼托盤(pán) 3 個(gè)，錫箔紙 5 卷，平皿（塑料 / 玻璃均可），TSA培養(yǎng)基，PCA培養(yǎng)基，精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案石英砂、 3M膠帶、扎帶，針筒

3、（ 1ml，10ml 各一個(gè)），振蕩器 1 臺(tái)，搖床（采購(gòu)中），Duran 瓶，或者三角瓶以制備培養(yǎng)基以及無(wú)菌水，2. 洗脫液配制：吐溫 0.1% 、蛋白胨 0.1%、石英砂稍許、氯化鈉 0.85%3. 其它：酒精燈、過(guò)濾膜、試管第二部分：操作要求1. S2 驗(yàn)證都應(yīng)當(dāng)在穿著無(wú)菌服，手套，進(jìn)行全身殺菌的條件下進(jìn)行2. 將樣品按照驗(yàn)證程序要求， 進(jìn)行相應(yīng)的處理， 完畢后采用無(wú)菌取樣的方式移出，進(jìn)行微生物檢驗(yàn)。3. 操作前，按照要求進(jìn)行洗手、更衣、消毒等人員衛(wèi)生程序。4. 不相關(guān)的人員嚴(yán)禁進(jìn)入凈化間，避免人為污染的存在。5. 所用工具事先完成消毒處理。6. 操作過(guò)程中產(chǎn)生的廢棄包裝物、廢棄樣品和防

4、護(hù)用品等物品及時(shí)銷(xiāo)毀，并對(duì)相關(guān)操作區(qū)域和接觸過(guò)的區(qū)域進(jìn)行徹底消毒處理。7. 凡是使接觸或可能接觸過(guò)菌種的地方都要進(jìn)行消毒，尤其是生產(chǎn)車(chē)間內(nèi)的灌裝間，凡是接觸過(guò)菌種的設(shè)備，工具，儀器表面必須進(jìn)行高溫滅菌或者相對(duì)應(yīng)的處理8. 接種室的準(zhǔn)備：一房間作為接種室，內(nèi)部有恒溫設(shè)施，溫度計(jì)，濕度計(jì)，生石灰（作為干燥劑），桌，椅各一張。出入此房間人員必須嚴(yán)格控制或者指定專(zhuān)人房間保管鑰匙第三部分： S2 驗(yàn)證步驟1設(shè)備進(jìn)行 CIP 和 SIP，SIP 時(shí)用溫度測(cè)試條對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室中的殺菌鍋，灌注 UHT系統(tǒng) SIP 溫度， UHT保持管末端溫度進(jìn)行驗(yàn)證2著色試驗(yàn)，確定S2 驗(yàn)證中所掛鋼片的位置精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文

5、案3掛鋼片之前，由Krones 人員做陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)， 10 組4無(wú)菌鋼片安置（協(xié)助Krones 人員做）：鋼片使用塑料扎帶或者雙面膠，懸掛或黏貼在之前通過(guò)著色實(shí)驗(yàn)確認(rèn)的30 個(gè)點(diǎn)上。安置鋼片時(shí)，可由三人進(jìn)行操作，一人在無(wú)菌環(huán)境內(nèi)安置，其余兩人則協(xié)助鋼片安置人，比如為其用酒精消毒，穿戴鞋套，遞送工具等。鋼片安置完畢之后，關(guān)閉灌裝機(jī)各個(gè)密封門(mén)，并且確認(rèn)。之后，進(jìn)行 COP/SOP，并且期間有相關(guān)人員對(duì)于 Hygiene Center 上的參數(shù)，與灌裝間 COP/SOP的實(shí)際時(shí)間進(jìn)行確認(rèn)。關(guān)于 COP/SOP參數(shù)，需事先從 Ecolab 取得，后依照此數(shù)據(jù)，在 Hygiene Center 核對(duì)，并

6、且通過(guò)秒表記數(shù)驗(yàn)證數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性，確認(rèn)方法亦從 Ecolab 得到。（需設(shè)記錄實(shí)驗(yàn)的表格）5無(wú)菌鋼片卸載（協(xié)助Krones 做）：COP/SOP結(jié)束后，卸載鋼片，可由三人進(jìn)行操作，一人在無(wú)菌環(huán)境內(nèi)安置，其余兩人則協(xié)助鋼片安置人，比如為其用酒精消毒，穿戴鞋套，遞送工具等。鋼片背部以及邊緣，需使用酒精或者PAA稀釋等消毒液進(jìn)行消毒，但是消毒液絕對(duì)不允許接觸鋼片正面，消毒完畢后，用9ml 無(wú)菌水沖洗，并立即放入 100ml 洗脫液的塑料盒中，上下?lián)u晃 20 分鐘。6 洗脫液膜過(guò)濾（微生物品控員做） ：洗脫液塑料盒搖晃 20 分鐘后，置于超凈工作臺(tái)上取出，直接對(duì)洗脫液進(jìn)行膜過(guò)濾，如產(chǎn)生泡沫，使用100ml

7、 無(wú)菌水加入濾杯助濾，取下濾膜，放入事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基平板（事先傾倒好TSA無(wú)菌培養(yǎng)基）。實(shí)驗(yàn)后，平皿放入35-38 培養(yǎng)箱， 48 小時(shí)后計(jì)數(shù)第四部分： S2 驗(yàn)證過(guò)程中無(wú)菌流體的取樣從 S2 開(kāi)始至結(jié)束，工廠品控人員需依據(jù)取樣頻率，進(jìn)行微生物取樣。要求現(xiàn)場(chǎng)微生物 QC取樣，取樣后進(jìn)行膜過(guò)濾，以總菌以及霉菌/ 酵母溫度培養(yǎng)。1無(wú)菌水總出水口2V401，V165，V825無(wú)菌空氣精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案3COP/SOP時(shí)化學(xué)中心無(wú)菌空氣4COP/SOP時(shí)化學(xué)中心無(wú)菌水第五部分：用差值法計(jì)算每片濃度為6 log 的鋼片所減少的微生物的數(shù)量級(jí)：R = log (C0) log (Ct),即：R=數(shù)量級(jí)

8、縮減量或者數(shù)量級(jí)毀滅量，C0 =初試微生物數(shù)量和Ct = 滅菌后微生物存活數(shù)量無(wú)菌區(qū)鋼片測(cè)試可接受運(yùn)行結(jié)果參考標(biāo)準(zhǔn)（COP/SOP）：5 log Spore test6 log細(xì)菌量 測(cè)試鋼片strip通過(guò)<1 帶菌鋼片至少殺滅每條帶菌鋼片上所含的log 微生物未通過(guò)1 帶菌鋼片 1片帶菌鋼片，被殺滅微生物量小于 log無(wú)菌線 S3 驗(yàn)證 SOP目的：驗(yàn)證系統(tǒng)對(duì)包裝材料外部表面消毒滅菌效果。應(yīng)用：瓶，蓋必須與即將投入生產(chǎn)線生產(chǎn)的瓶，蓋設(shè)計(jì)形狀，尺寸相一致第一部分：準(zhǔn)備工作1. 微生物品控準(zhǔn)備工作：移液槍?zhuān)?1ml，0.1ml ，0.01ml ，推薦另配一把 1-9ml ）以及滅菌過(guò)的槍頭

9、各100 個(gè)，細(xì)菌懸濁液，菌液濃度確認(rèn)后，將原液和108 濃度的菌懸液冷藏待用，裝有洗脫液 100ml 的塑料圓盒 198 個(gè)（ 121 20 分鐘滅菌），無(wú)菌澆好 TSA培養(yǎng)基的小平皿250 套左右，和樣品數(shù)量相當(dāng)?shù)?.45um的無(wú)菌濾膜，無(wú)菌針筒（1ml，10ml 各一個(gè)），2. 洗脫液配比：吐溫 0.1% 、蛋白胨 0.1%、石英砂稍許、氯化鈉 0.85%3. 小圓盒上用標(biāo)簽識(shí)別 5 個(gè)組和陽(yáng)性對(duì)照精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案4. 采樣點(diǎn)所需物品準(zhǔn)備無(wú)菌空氣采樣管、無(wú)菌空氣取樣器、無(wú)菌水取樣器等，注意：除了正常采樣數(shù)量，還必須增加化學(xué)中心的無(wú)菌空氣和無(wú)菌水5. 至少 2L 無(wú)菌水（用于過(guò)濾沖洗）

10、6. 無(wú)菌 9ml 稀釋液，數(shù)量根據(jù)陽(yáng)性對(duì)照數(shù)量確定7. 75%酒精， 35-38 的培養(yǎng)箱，取塑料袋放入紫外燈下殺菌后備用。酒精消毒不銹鋼托盤(pán)備用 3 個(gè)，錫箔紙 5 卷，口罩若干，塑料手套若干，搖床，振蕩器8. 準(zhǔn)備接種用 PET瓶至少 600 個(gè)（包括陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中掉落損失）9. 強(qiáng)力剪刀 1 把，不銹鋼剪刀 2 把 ，鑷子 2 把，紙箱 30 個(gè)，10.1500ppm PAA 2L（以 1L 燒杯 / 塑料杯盛放，保證能覆蓋到整把剪刀以及鑷子上沿），標(biāo)簽紙（根據(jù)樣品個(gè)數(shù)準(zhǔn)備）11. 確認(rèn)現(xiàn)場(chǎng)的 PAA濃度符合要求第二部分：操作要求1. S3 驗(yàn)證都應(yīng)當(dāng)在穿著無(wú)菌服，手

11、套，進(jìn)行全身殺菌的條件下進(jìn)行2. 將樣品按照驗(yàn)證程序要求， 進(jìn)行相應(yīng)的處理， 完畢后采用無(wú)菌取樣的方式移出，進(jìn)行微生物檢驗(yàn)。3. 操作前，按照要求進(jìn)行洗手、更衣、消毒等人員衛(wèi)生程序。4. 不相關(guān)的人員嚴(yán)禁進(jìn)入凈化間，避免人為污染的存在。5. 所用工具事先完成消毒處理。6. 操作過(guò)程中產(chǎn)生的廢棄包裝物、廢棄樣品和防護(hù)用品等物品及時(shí)銷(xiāo)毀，并對(duì)相關(guān)操作區(qū)域和接觸過(guò)的區(qū)域進(jìn)行徹底消毒處理。7. 凡是使接觸或可能接觸過(guò)菌種的地方都要進(jìn)行消毒，尤其是生產(chǎn)車(chē)間內(nèi)的灌裝間，凡是接觸過(guò)菌種的設(shè)備，工具，儀器表面必須進(jìn)行高溫滅菌或者相對(duì)應(yīng)的精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案處理8. 接種室的準(zhǔn)備：一房間作為接種室，內(nèi)部有恒溫設(shè)

12、施，溫度計(jì)，濕度計(jì)，生石灰（作為干燥劑），桌，椅各一張。出入此房間人員必須嚴(yán)格控制或者指定專(zhuān)人房間保管鑰匙第三部分： S3 驗(yàn)證步驟1. 生產(chǎn)部保證灌裝機(jī)可以正常運(yùn)行2. 生產(chǎn)部要在注入間內(nèi)放置兩張用于放置瓶子和剪瓶子的非木質(zhì)桌子。3. 微生物工程師準(zhǔn)工作（由克朗斯微生物工程師主導(dǎo)） ：104 接種：將稀釋至 106/10 5 菌懸液，用移液槍取0.01ml/0.1ml至驗(yàn)證所用 PET空瓶外表規(guī)定區(qū)域，在該區(qū)域作好標(biāo)記，室溫干燥4-8 小時(shí)不等，具體數(shù)量和部位參照Validation Protocol（可以事先備好生石灰做干燥劑） 。準(zhǔn)備好30個(gè) 1.25L 產(chǎn)品的紙箱，頂端開(kāi)瓶口大小圓孔，

13、安置倒置干燥之 PET瓶，空瓶按照實(shí)際情況放置（比如接種點(diǎn)為瓶底，瓶子要倒置插在紙箱上安放，干燥） 。4. 接種瓶上菌液干燥后，就可進(jìn)行 S3。5.接種后 PET瓶，使用塑料袋，按照不同部位，將 175 個(gè)已接種的 PET瓶分成 5 個(gè)組別，從接種室轉(zhuǎn)移到注入間，以 35 個(gè)一組（ 5 個(gè)備用），掛上風(fēng)道。6. 按照規(guī)定最大灌裝速度（比如 NT480瓶型對(duì)應(yīng)的 36000bph），進(jìn)行驗(yàn)證。7. 殺菌后 PET瓶不封蓋，迅速?gòu)淖⑷霗C(jī)出口運(yùn)輸帶取出，放入已殺菌的速封袋，轉(zhuǎn)移至指定區(qū)域，把 PET瓶做標(biāo)記部分剪下，放入洗脫液中（放置洗脫液與接種樣品的小盒子，必須事先用標(biāo)簽紙標(biāo)示清楚，待用） 。8.

14、 將樣品的洗脫液充分搖勻晃 （接種在瓶口羅紋部分的樣品需要搖晃 25 分鐘，其余區(qū)段產(chǎn)品搖晃 20 分鐘），搖勻后將樣品置于超凈工作臺(tái)上取出，直接對(duì)洗脫液進(jìn)行膜過(guò)濾，取下濾膜，放入事先準(zhǔn)備好的 TSA培養(yǎng)基平板（事先傾倒好無(wú)精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案菌培養(yǎng)基）。將平皿放入 35-38 培養(yǎng)箱， 48 小時(shí)后計(jì)數(shù)。9. 每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照做 10-3 稀釋?zhuān)?10-4 稀釋?zhuān)?0.1*10 -3 稀釋各一次。陽(yáng)性對(duì)照建議一共 5 個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn) 5 組。注意：a.剪下帶有標(biāo)記的瓶子時(shí)，每完成一個(gè)瓶子的剪切，必須使用1500ppm的 PAA對(duì)雙手，剪刀進(jìn)行消毒。b. 由于剪切樣品數(shù)量較多，建議兩組人員進(jìn)行操作，

15、每組兩人，一人剪瓶，一人為另一人消毒）c. 過(guò)濾時(shí)，使用 100ml 無(wú)菌水加入濾杯助濾 .d. 以上項(xiàng)目由克朗斯培訓(xùn)，微生物品控操作，同時(shí)由克朗斯微生物工程師主導(dǎo)。第四部分：過(guò)程監(jiān)控取樣由 Krones 提供取樣培訓(xùn)、微生物品控取樣，生產(chǎn)部協(xié)助通知取樣時(shí)間、品控組長(zhǎng)協(xié)助取樣。從 S3 開(kāi)始至結(jié)束，工廠品控人員需依據(jù)取樣頻率，進(jìn)行微生物取樣（無(wú)菌水總出水口、無(wú)菌空氣、Hygiene Center無(wú)菌空氣、 Hygiene Center無(wú)菌水、沖瓶無(wú)菌水、沖瓶無(wú)菌空氣），取樣后進(jìn)行膜過(guò)濾，以總菌以及霉菌/酵母溫度培養(yǎng)。現(xiàn)場(chǎng)的檢測(cè)和巡檢項(xiàng)目和正常時(shí)一致。第五部分：用差值法計(jì)算每個(gè)瓶子，瓶蓋所減少微

16、生物的數(shù)量級(jí)：R = log (C0) log (Ct),即:R=數(shù)量級(jí)縮減量或者數(shù)量級(jí)毀滅量，C0 =初試微生物數(shù)量和Ct = 滅菌后微生物存活數(shù)量外部表面殺菌測(cè)試可接受運(yùn)行結(jié)果參考標(biāo)準(zhǔn)：精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案瓶子，瓶蓋外部殺菌通過(guò)所有瓶子，瓶蓋的每個(gè)接種點(diǎn)的生物負(fù)載量，至少減少 3log未通過(guò) 1 瓶子，瓶蓋的接種點(diǎn)的生物負(fù)載量減少量小于3 log無(wú)菌線 S4 驗(yàn)證 SOP目的：驗(yàn)證系統(tǒng)對(duì)包裝材料內(nèi)部表面消毒滅菌效果。應(yīng)用：瓶，蓋必須與即將投入生產(chǎn)線生產(chǎn)的瓶，蓋設(shè)計(jì)形狀，尺寸相一致第一部分：準(zhǔn)備工作 ：1. 儀器與試劑：移液槍?zhuān)?1ml，0.1ml ，0.01ml ，推薦另配一把 1-9ml

17、 ）以及槍頭，細(xì)菌懸濁液（枯草芽孢桿菌 ATCC 9372）， 100ml 塑料圓盒 150 個(gè)，不銹鋼托盤(pán)，錫箔紙，平皿（塑料 / 玻璃均可），OSA培養(yǎng)基，PCA培養(yǎng)基，吐溫試劑（0.1% Tween(界面活性劑 ) / 0.1% peptone( 蛋白胨 ) 溶液），3M膠帶，扎帶，針筒（1ml， 10ml 各一個(gè)），振蕩器，超聲波洗瓶器，搖床， Duran 瓶或者三角瓶制備培養(yǎng)基以及無(wú)菌水，以及其他微生物實(shí)驗(yàn)室儀器耗材等。2. 接種：10接種：將稀釋至 10菌懸液，用移液槍取 0.1ml 至剛吹好的 PET空瓶?jī)?nèi) / 空蓋內(nèi)，拍打空瓶 / 晃動(dòng)空蓋，使菌懸液呈小水珠附著于瓶?jī)?nèi)壁/ 分布

18、于空蓋底部。10接種：將稀釋至 10菌懸液，用移液槍取 0.1ml 至剛吹好的 PET空瓶?jī)?nèi) / 空蓋內(nèi)，拍打空瓶 / 晃動(dòng)空蓋，使菌懸液呈小水珠附著于瓶?jī)?nèi)壁 / 分布于空蓋底部。具體數(shù)量參照Validation Protocol，空瓶室溫干燥12-24 小時(shí) / 空蓋室溫干燥 2-4 小時(shí)（可以事先備好生石灰做干燥劑） 。第二部分：操作要求1、根據(jù)供應(yīng)商所提供說(shuō)明書(shū)用清洗滅菌條件的下限對(duì)無(wú)菌線設(shè)備進(jìn)行一次CIP, SIP/ COP, SOP ，生產(chǎn)線運(yùn)行平穩(wěn)時(shí)開(kāi)始進(jìn)行 S4 試驗(yàn)。2、接種 PET瓶安置：菌液干燥后，就可進(jìn)行 S4。接種后 PET瓶，使用塑料袋，精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案將 120

19、 個(gè)已接種的 PET瓶，從接種室轉(zhuǎn)移到注入間，掛上風(fēng)道。按照規(guī)定最大灌裝速度（比如 NT480瓶型對(duì)應(yīng)的 36000bph），進(jìn)行驗(yàn)證。殺菌后 PET瓶中注入 100ml 無(wú)菌水后用無(wú)菌潔蓋 / 鋁箔封蓋，從注入機(jī)出口運(yùn)輸帶取出， 轉(zhuǎn)移至指定區(qū)域，開(kāi)蓋后加入對(duì)應(yīng)量的無(wú)菌吐溫試劑，細(xì)沙等, 劇烈晃動(dòng) 20 分鐘 （強(qiáng)烈建議使用超聲波水浴，對(duì)樣品進(jìn)行洗脫）。3、 空蓋安置： 使用托盤(pán)鋁箔紙，將接種好空蓋覆蓋好，轉(zhuǎn)移至注入間。從下蓋槽整齊排列。建議接種蓋與洗蓋槽中其他蓋，以顏色區(qū)別。按照規(guī)定最大灌裝速度進(jìn)行驗(yàn)證。殺菌后瓶蓋，從蓋取樣口，用已殺菌之容器盛接（例如燒杯 / 平皿容器等），然后放入對(duì)應(yīng)量的

20、已加入無(wú)菌吐溫試劑，細(xì)沙的小盒子中 , 劇烈晃動(dòng) 20 分鐘 （強(qiáng)烈建議使用超聲波水浴，對(duì)樣品進(jìn)行洗脫）。4、記錄下每個(gè)樣本運(yùn)行中的中斷與停頓，同時(shí)也要記錄下瓶，蓋鋁箔的殺菌條件，沖洗條件以及其他關(guān)鍵的無(wú)菌系統(tǒng)測(cè)試運(yùn)轉(zhuǎn)的參數(shù)。5、作為一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照，在當(dāng)天使用的樣品干燥后（干燥和當(dāng)天使用后），檢驗(yàn)在各個(gè)濃度的已接種的瓶子，瓶蓋各5 個(gè)，檢驗(yàn)它們上面的生物負(fù)載量6、 作為一個(gè)陰性對(duì)照， 取未接種的瓶子， 瓶蓋各 3 個(gè)，每個(gè)瓶子灌入± 100 ml 無(wú)菌吐溫試劑，然后用無(wú)菌的鋁箔或者瓶蓋封口，然后將這些瓶子然后充分搖動(dòng)瓶子 25 次，進(jìn)行膜過(guò)濾對(duì)瓶中全部?jī)?nèi)容物 ( ±100 m

21、l) 進(jìn)行檢驗(yàn)，來(lái)檢驗(yàn)三個(gè)瓶子，蓋子的總菌數(shù)。第四部分： S4 驗(yàn)證過(guò)程中無(wú)菌流體的取樣從 S4 開(kāi)始至結(jié)束，工廠品控人員需依據(jù)取樣頻率， 進(jìn)行微生物取樣 - 無(wú)菌水總出水口，無(wú)菌空氣， Hygiene Center 無(wú)菌空氣，無(wú)菌水，以及沖瓶 / 沖蓋無(wú)菌水，無(wú)菌空氣的取樣，要求現(xiàn)場(chǎng)微生物 QC取樣，取樣后進(jìn)行膜過(guò)濾，以總菌以及霉菌 / 酵母溫度培養(yǎng)。第五部分：用差值法計(jì)算每個(gè)瓶子，瓶蓋所減少微生物的數(shù)量級(jí)：R = log (C0) log (Ct),即：R=數(shù)量級(jí)縮減量或者數(shù)量級(jí)毀滅量，C0 =初試微生物數(shù)量和Ct = 滅菌后微生物存活數(shù)量?jī)?nèi)部表面殺菌測(cè)試可接受運(yùn)行結(jié)果參考標(biāo)準(zhǔn)：已接種 5

22、 log 細(xì)菌量的瓶子， 瓶蓋已接種 6 log細(xì)菌量的瓶子，瓶蓋所有瓶子，瓶蓋上含有 <1 個(gè)單位殺滅每個(gè)瓶子，瓶蓋上每個(gè)至少通過(guò)菌體數(shù)量log 微生物精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案未 通 1 個(gè)瓶子，瓶蓋含有 1 個(gè)瓶子，瓶蓋上的過(guò) 1 單位菌體數(shù)量被殺滅微生物量小于log無(wú)菌線 S5 驗(yàn)證 SOP目的：評(píng)價(jià) 注入環(huán)境和設(shè)備外表面的無(wú)菌程度應(yīng)用：這一測(cè)試在完成CIP/SIP/COP/SOP后和 LG培養(yǎng)基測(cè)試之前進(jìn)行的， 同時(shí)這一測(cè)試將在 LG培養(yǎng)基充填后再進(jìn)行一次。第一部分：準(zhǔn)備工作已倒入 TSA無(wú)菌平皿（塑料 / 玻璃均可） 7 個(gè)（ 2 個(gè)備用），無(wú)菌涂抹棒40 支， Duran 瓶，或

23、者三角瓶以制備培養(yǎng)基以及無(wú)菌水，以及其他微生物實(shí)驗(yàn)室儀器耗材等。溫度測(cè)試貼條第二部分：實(shí)驗(yàn)前處理及實(shí)驗(yàn)過(guò)程1. 試驗(yàn)前確認(rèn)：水處理、動(dòng)力中心、灌裝機(jī)、無(wú)菌水、化學(xué)中心處于正常狀態(tài)。2. 灌裝機(jī)、無(wú)菌水進(jìn)行 CIP、SIP，參數(shù)確認(rèn)，用溫度測(cè)試貼條對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室中的殺菌鍋， SOP管路溫度確認(rèn)。3. 通過(guò)煙來(lái)確認(rèn)無(wú)菌區(qū)域空氣的流向。4. 灌裝機(jī)進(jìn)行堿性 COP、酸性 COP，SOP，參數(shù)確認(rèn)5. 檢測(cè)無(wú)菌區(qū)和潔凈室的空氣質(zhì)量，在 1 立方米的空氣里取 3-5 個(gè)樣品。取樣器可以選用 Merck MAS ESO或者 Millipore 公司生產(chǎn) M air T 的壓縮空氣取樣器。選用 TSA培養(yǎng)基

24、培養(yǎng)。6. 對(duì)灌裝機(jī)進(jìn)行塵埃粒子計(jì)數(shù)。7. 灌裝機(jī)進(jìn)行 SOP。8. 做 S5 實(shí)驗(yàn)，根據(jù)公司標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行涂抹取樣分析。取樣位置需包括：灌裝閥，所有除菌后的噴嘴處，及其它可疑處。其中的一半用于分析總菌，另一半用于分析霉菌和酵母菌。記錄取樣點(diǎn)及各取樣點(diǎn)選取的原因。9. 灌裝機(jī)進(jìn)行堿性 COP、SOP第三部分：空氣取樣點(diǎn)和涂抹點(diǎn)空氣取樣點(diǎn)position of air-borneCODEName(Chinese)Name(English)QuantityResult精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案代碼名稱（中文）名稱（英文）數(shù)量TCM&Y1封蓋區(qū)Capper12灌注區(qū)Filler13沖瓶區(qū)Rinser1涂

25、抹點(diǎn)Swab Test PointsCODEName(Chinese)Name(English)QuantityResult代碼名稱（中文）名稱（英文）數(shù)量TC M&YC1浸泡前撥蓋器Cap combiner disk before1immersionC2蓋沖洗槽Cap rinsering slot1C3送蓋星輪Cap inlet star-wheel1C4封蓋頭內(nèi)Capping head inner1C5封蓋頭外Capping head exterior2 x 10C6進(jìn)蓋星輪前下蓋滑Cap chute before cap inlet1槽star-wheelC7封蓋器外圍支架背Th

26、e rearcappingperipheral1frame側(cè)F1充填機(jī)進(jìn)口星輪頂Filler top inletstar-wheel1部F2充填機(jī)出口星輪底Filler bottom outlet1部star-wheel精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案F3充填機(jī)主體軸旋轉(zhuǎn)Filler bottom main rotary1下部partF4充填機(jī)主體軸旋轉(zhuǎn)Filler top main rotary part1上部F5灌注閥Filling valve4 x 15A1空氣輸送帶Air conveyor1R1沖瓶機(jī)入口星輪基Rinser inlet star-wheel1座base frameR2沖瓶機(jī)出口星輪

27、基Rinser outlet star-wheel1座base frameR3沖瓶頭Rinser head5 x 20R4沖瓶機(jī)轉(zhuǎn)接區(qū)頂部Rinser transfering top1燈圈light inner沖瓶機(jī)轉(zhuǎn)接星輪瓶Rinser transferingR5star-wheel bottle clamp1夾底bottomR6沖瓶機(jī)轉(zhuǎn)接區(qū)域 COP Rinser transfering COPpipe1bottom管下部R7沖瓶機(jī)平臺(tái)前內(nèi)側(cè)Rinser flat inner1L1燈圈Light cover2W1墻角corner of wall in3第四部分：對(duì)于環(huán)境測(cè)試的可接受水平精彩

28、文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案空氣樣品 Air samples (CFU/m 3)棉球樣 Swab samples (CFU/swab)合格3每個(gè)樣品 <1 CFU/1 個(gè)棉簽每個(gè)樣品 <1 CFU/m不合格樣品 1 CFU/m3 的數(shù)量 1樣品 1 CFU/1 個(gè)棉簽的數(shù)量 1注：離子數(shù)測(cè)試要符合100 級(jí)的需要（即干燥空氣每立方）：1ft3 0.5 m的微粒個(gè)數(shù) <100 個(gè)在干燥的、靜止的情況下。無(wú)菌線 S6 驗(yàn)證 SOP目的： 整個(gè)生產(chǎn)線的無(wú)菌效果驗(yàn)證，認(rèn)證從滅菌到無(wú)菌缸到充填及旋蓋的全部過(guò)程。應(yīng)用：用經(jīng)過(guò)滅菌過(guò)的 LG培養(yǎng)基來(lái)充填并且在正常的無(wú)菌生產(chǎn)條件下加蓋。 所有的樣品在一定

29、時(shí)間的放置后要進(jìn)行一次徹底的檢查， 同時(shí) LG培養(yǎng)基要在充填前保存 72 小時(shí)，被延長(zhǎng)的產(chǎn)品的無(wú)菌狀態(tài)需要被認(rèn)可。 測(cè)試中所使用的瓶子和瓶蓋要和將來(lái)生產(chǎn)中使用的一致。第一部分：準(zhǔn)備工作一. 可能影響影響驗(yàn)證的因素確認(rèn)及解善1）對(duì)吹瓶風(fēng)道空氣過(guò)濾器的維護(hù)，對(duì)風(fēng)道內(nèi)部的擦洗2）瓶蓋 / 空瓶檢驗(yàn)合格3）安排對(duì)灌注機(jī)和清洗消毒系統(tǒng)設(shè)備進(jìn)行自查（如灌裝機(jī)查漏，殺菌液濃度確認(rèn)等）4）膜包機(jī)長(zhǎng)時(shí)間不用，要在試驗(yàn)開(kāi)始前調(diào)試好5）保溫室（空間容量 , 溫濕度 , 光照等）二培養(yǎng)基的準(zhǔn)備（中性，PH6.5-6.8 ）培養(yǎng)基： LG培養(yǎng)基的配方（ 10000L）：1葡萄糖（食品級(jí)）200 kg精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案

30、2酵母提取物（粉狀分析級(jí)）35kg3蛋白胨（食品級(jí)）20kg4硫酸銨（化學(xué)純級(jí)）20kg5磷酸二氫鉀（化學(xué)純級(jí)）10kg6硫酸鎂（化學(xué)純級(jí)）10kgLG培養(yǎng)基的配制 （10000L）：1. 實(shí)驗(yàn)前對(duì)培養(yǎng)基原材料以以上比例進(jìn)行預(yù)調(diào)配小樣，并按照比例進(jìn)行添加酸堿，對(duì) pH進(jìn)行測(cè)試。而且需要事先檢測(cè)培養(yǎng)基是否能夠被污染。2. 向混合缸中注入 2000L 60 的處理水。3. 將 20 kg 蛋白胨用 300L 60 的處理水預(yù)混，通過(guò)濾網(wǎng)加入混合缸中。攪拌直至蛋白胨徹底溶解。4. 在攪拌器開(kāi)啟的情況下將其余的組分按下列次序加入：酵母提取物 35 kg ，葡萄糖 200 kg ，磷酸二氫鉀 10 kg

31、 ，硫酸銨 20 kg ，硫酸鎂 10 kg（注意： 酵母提取物必須采用粉狀分析級(jí)的。投料順序按照上述順序進(jìn)行，而且必須等待前一組分完全溶解后才能加入后一個(gè)組分。如能將這些組分分別使用小料缸預(yù)溶解后通過(guò)5u 濾網(wǎng)加入混合缸中更好。）5. 攪拌直至所各組分徹底溶解。目測(cè)檢查。6. 用 20oC 的處理水將混合缸定容至 10000L。7. 至少 30 分鐘攪拌，取樣測(cè)試 pH，濁度和白利度。將 LG培養(yǎng)基 pH值調(diào)至 6.5-6.8 （參考添加量： 110-130g 化學(xué)純 NaOH加入 1 噸 LG培養(yǎng)基），謹(jǐn)慎起見(jiàn)，酸堿精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案第一步添加量參考添加量下限的80%，然后按照實(shí)際情況，

32、逐漸加入余下量直至 pH達(dá)標(biāo)為止。8. 在 2 小時(shí)內(nèi)將培養(yǎng)基在 137，30 秒或相當(dāng)?shù)臏囟群蜁r(shí)間滅菌。儲(chǔ)存于無(wú)菌缸中，否則可能會(huì)引起微生物過(guò)度繁殖，造成培養(yǎng)基內(nèi)部渾濁。第三部分：灌注（測(cè)試中所使用的瓶子和瓶蓋要和將來(lái)生產(chǎn)中使用的一致。）1. 確認(rèn)生產(chǎn)線各個(gè)設(shè)備都在正常無(wú)故障狀態(tài)（前處理、動(dòng)力中心、PET、UHT、無(wú)菌罐、氮?dú)庀到y(tǒng)、膜包機(jī)等后工序） 。2. 確認(rèn)參與試驗(yàn)的的人員到位： 車(chē)間所有員工（溶糖、萃茶、套標(biāo)除外）、維修工、微生物品控員、成品品控員、跟班品控員、 SCMC工程師、克朗斯工程師、藝康工程師。3. 調(diào)配系統(tǒng)、灌裝機(jī)、無(wú)菌水、 UHT、無(wú)菌罐、氮?dú)庀到y(tǒng)進(jìn)行 CIP、SIP，記

33、錄參數(shù)4. 按照要求調(diào)配 LG培養(yǎng)基，調(diào)配結(jié)束后立即通過(guò) UHT滅菌打入無(wú)菌罐進(jìn)行儲(chǔ)存。5. 灌裝機(jī)進(jìn)行堿性 COP、酸性 COP，產(chǎn)前準(zhǔn)備， SOP，記錄參數(shù)6. 開(kāi)機(jī)生產(chǎn)，按照要求進(jìn)行灌裝，每次分為半瓶不充氮、半瓶充氮兩種類(lèi)型進(jìn)行生產(chǎn)，在小于 35°C的條件下灌注培養(yǎng)基，噴碼時(shí)注意區(qū)分。如果檢測(cè)的是72 小時(shí)，則在24 小時(shí)的時(shí)候灌注三分之一；在48 小時(shí)灌注三分之一；在72 小時(shí)灌注剩下的三分之一。 合計(jì)灌注 10000 瓶。每次間隔都要進(jìn)行正常的COP/SOP處理過(guò)程。灌注需全速進(jìn)行（ 36000 瓶/ 小時(shí)）。半瓶瓶子中留出足夠的空間 ( 至少 50ml 左右 ) 。每 5

34、 分鐘檢查瓶子中殘留消毒劑的量，根據(jù)操作說(shuō)明確保無(wú)殘留。7. 現(xiàn)場(chǎng)人員安排安排人員在生產(chǎn)線上， 對(duì)高歪蓋產(chǎn)品進(jìn)行挑揀。 所有挑揀人員必須在實(shí)驗(yàn)之前，對(duì)雙手進(jìn)行全面消毒。安排品控員在線上對(duì)衛(wèi)生狀況進(jìn)行巡查。所有從生產(chǎn)線掉落的培養(yǎng)基和倒在輸送帶上的培養(yǎng)基都不得放回生產(chǎn)線。8. 灌裝結(jié)束按照正常的生產(chǎn)程序進(jìn)行結(jié)束生產(chǎn)。注：為防止有高歪蓋或其它樣品損失，注入機(jī)在灌注時(shí)均適量放大樣品量。第四部分： S6 驗(yàn)證過(guò)程中無(wú)菌流體的取樣1. 本試驗(yàn)可能持續(xù) 72 小時(shí)以上，品控應(yīng)準(zhǔn)備好培養(yǎng)基及空氣取樣過(guò)濾器2. 品控人員需依據(jù)無(wú)菌灌裝手冊(cè)中的取樣頻率，進(jìn)行微生物取樣 - 無(wú)菌水（UHT總出水口、沖瓶、 SIP

35、冷卻水），無(wú)菌空氣（沖瓶、洗蓋和灌注間， HC），以及 LN2精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案取樣。3. 對(duì)于無(wú)菌培養(yǎng)基（ V105），需放在無(wú)菌瓶中保溫培養(yǎng)。4. 對(duì)調(diào)配完成的 LG培養(yǎng)基料液 ，空蓋，空瓶，潔瓶，潔蓋進(jìn)行取樣并且進(jìn)行總菌，霉菌 / 酵母測(cè)試，以便對(duì)未來(lái)出現(xiàn)的危機(jī)進(jìn)行分析。5. 灌注結(jié)束后對(duì) ISOLATE設(shè)備進(jìn)行涂抹。灌注過(guò)程中對(duì) ISOLATE內(nèi)部空氣進(jìn)行總菌，霉菌 / 酵母的取樣測(cè)試（各 1000L）第五部分：樣品翻檢在 30-35 °C條件下，將樣品保溫 14 天；培養(yǎng)基培養(yǎng) 3 天后倒立瓶子，使瓶?jī)?nèi)液體與內(nèi)瓶壁以及蓋子充分接觸， 7 天后第一次翻檢， 14 天后再次翻

36、檢。保溫結(jié)束后，肉眼觀察所有瓶子是否有微生物污染 ( 膨脹的、渾濁的、變顏色的、絮狀的、產(chǎn)氣等 ) 。作為陽(yáng)性對(duì)照，向未污染瓶子內(nèi)的培養(yǎng)基接種枯草芽孢桿菌，以確保培養(yǎng)基是適合該菌生長(zhǎng)的。注：樣品必需在不同的砧板上放置并貼上標(biāo)識(shí)。 （本次試驗(yàn)需 10 個(gè)塑料砧板）第六部分：參考標(biāo)準(zhǔn)10000 瓶測(cè)試通過(guò)<1失敗 1無(wú)菌線 S7 驗(yàn)證 SOP目的： 注入封蓋系統(tǒng)的無(wú)菌環(huán)境驗(yàn)證，認(rèn)證從滅菌到充填及旋蓋的整個(gè)過(guò)程的無(wú)菌效果。應(yīng)用：用經(jīng)過(guò)滅菌過(guò)的LG培養(yǎng)基來(lái)充填并且在正常的無(wú)菌生產(chǎn)條件下加蓋。所有的樣品在一定時(shí)間的放置后要進(jìn)行一次徹底的檢查。測(cè)試中所使用的瓶子和瓶蓋要和將來(lái)生產(chǎn)中使用的一致。第一部

37、分：準(zhǔn)備工作一. 可能影響影響驗(yàn)證的因素確認(rèn)及解善6）對(duì)吹瓶風(fēng)道空氣過(guò)濾器的維護(hù)，對(duì)風(fēng)道內(nèi)部的擦洗7）瓶蓋 / 空瓶檢驗(yàn)合格精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案8）安排對(duì)灌注機(jī)和清洗消毒系統(tǒng)設(shè)備進(jìn)行自查（如灌裝機(jī)查漏，殺菌液濃度確認(rèn)等）9）膜包機(jī)長(zhǎng)時(shí)間不用，要在試驗(yàn)開(kāi)始前調(diào)試好10）保溫室（空間容量 , 溫濕度 , 光照等）二培養(yǎng)基的準(zhǔn)備（中性，PH6.5-6.8 ）培養(yǎng)基： LG培養(yǎng)基的配方（ 10000L）：1葡萄糖（食品級(jí)）200 kg2酵母提取物（粉狀分析級(jí)）35kg3蛋白胨（食品級(jí)）20kg4硫酸銨（化學(xué)純級(jí)）20kg5磷酸二氫鉀（化學(xué)純級(jí)）10kg6硫酸鎂（化學(xué)純級(jí)）10kgLG培養(yǎng)基的配制 （1

38、0000L）：9. 實(shí)驗(yàn)前對(duì)培養(yǎng)基原材料以以上比例進(jìn)行預(yù)調(diào)配小樣，并按照比例進(jìn)行添加酸堿，對(duì) pH進(jìn)行測(cè)試。而且需要事先檢測(cè)培養(yǎng)基是否能夠被污染。10. 向混合缸中注入 2000L 60 的處理水。11. 將 20 kg 蛋白胨用 300L 60 的處理水預(yù)混，通過(guò)濾網(wǎng)加入混合缸中。攪拌直至蛋白胨徹底溶解。12. 在攪拌器開(kāi)啟的情況下將其余的組分按下列次序加入：酵母提取物 35 kg ，葡萄糖 200 kg ，磷酸二氫鉀 10 kg ，硫酸銨 20 kg ，硫酸鎂 10 kg（注意： 酵母提取物必須采用粉狀分析級(jí)的。投料順序按照上述順序進(jìn)行，而且必須等待前一組分完全溶解后才能加精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)

39、文案入后一個(gè)組分。如能將這些組分分別使用小料缸預(yù)溶解后通過(guò)5u 濾網(wǎng)加入混合缸中更好。）13. 攪拌直至所各組分徹底溶解。目測(cè)檢查。14. 用 20oC 的處理水將混合缸定容至 10000L。15. 至少 30 分鐘攪拌，取樣測(cè)試 pH，濁度和白利度。將 LG培養(yǎng)基 pH值調(diào)至 6.5-6.8 （參考添加量： 110-130g 化學(xué)純 NaOH加入 1 噸 LG培養(yǎng)基），謹(jǐn)慎起見(jiàn)，酸堿第一步添加量參考添加量下限的 80%，然后按照實(shí)際情況，逐漸加入余下量直至 pH達(dá)標(biāo)為止。16. 在 2 小時(shí)內(nèi)將培養(yǎng)基在 137，30 秒或相當(dāng)?shù)臏囟群蜁r(shí)間滅菌。儲(chǔ)存于無(wú)菌缸中，否則可能會(huì)引起微生物過(guò)度繁殖，造

40、成培養(yǎng)基內(nèi)部渾濁。第三部分：灌注（測(cè)試中所使用的瓶子和瓶蓋要和將來(lái)生產(chǎn)中使用的一致。）9. 確認(rèn)生產(chǎn)線各個(gè)設(shè)備都在正常無(wú)故障狀態(tài)（前處理、動(dòng)力中心、PET、UHT、無(wú)菌罐、氮?dú)庀到y(tǒng)、膜包機(jī)等后工序） 。10. 確認(rèn)參與試驗(yàn)的的人員到位：車(chē)間所有員工（溶糖、萃茶、套標(biāo)除外） 、維修工、微生物品控員、成品品控員、跟班品控員、 SCMC工程師、克朗斯工程師、藝康工程師。11. 調(diào)配系統(tǒng)、灌裝機(jī)、無(wú)菌水、 UHT、無(wú)菌罐、氮?dú)庀到y(tǒng)進(jìn)行 CIP、SIP，記錄參數(shù)12. 按照要求調(diào)配 LG培養(yǎng)基，調(diào)配結(jié)束后立即通過(guò) UHT滅菌打入無(wú)菌罐進(jìn)行儲(chǔ)存。13. 灌裝機(jī)進(jìn)行堿性 COP、酸性 COP，產(chǎn)前準(zhǔn)備， S

41、OP，記錄參數(shù)14. 開(kāi)機(jī)生產(chǎn)，按照要求進(jìn)行灌裝，每次分為半瓶不充氮、半瓶充氮兩種類(lèi)型進(jìn)行生產(chǎn)，在小于 35°C 的條件下灌注培養(yǎng)基，噴碼時(shí)注意區(qū)分。合計(jì)灌注 10000 瓶（充氮和不充氮各灌裝 5000 瓶）。一次性完成產(chǎn)品灌注。每次間隔都要進(jìn)行正常的 COP/SOP處理過(guò)程。灌注需全速進(jìn)行（ 36000 瓶/ 小時(shí)）。半瓶瓶子中留出足夠的空間 ( 至少 50ml 左右 ) 。每 5 分鐘檢查瓶子中殘留消毒劑的量，根據(jù)操作說(shuō)明確保無(wú)殘留。15. 現(xiàn)場(chǎng)人員安排安排人員在生產(chǎn)線上， 對(duì)高歪蓋產(chǎn)品進(jìn)行挑揀。 所有挑揀人員必須在實(shí)驗(yàn)之前，精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案對(duì)雙手進(jìn)行全面消毒。安排品控員在

42、線上對(duì)衛(wèi)生狀況進(jìn)行巡查。所有從生產(chǎn)線掉落的培養(yǎng)基和倒在輸送帶上的培養(yǎng)基都不得放回生產(chǎn)線。16. 灌裝結(jié)束按照正常的生產(chǎn)程序進(jìn)行結(jié)束生產(chǎn)。注：為防止有高歪蓋或其它樣品損失，注入機(jī)在灌注時(shí)均適量放大樣品量。第四部分： S7 驗(yàn)證過(guò)程中無(wú)菌流體的取樣6. 本試驗(yàn)可能持續(xù) 10 小時(shí)以上，品控應(yīng)準(zhǔn)備好培養(yǎng)基及空氣取樣過(guò)濾器7. 品控人員需依據(jù)無(wú)菌灌裝手冊(cè)中的取樣頻率，進(jìn)行微生物取樣 - 無(wú)菌水（UHT總出水口、沖瓶、 SIP 冷卻水），無(wú)菌空氣（沖瓶、洗蓋和灌注間， HC），以及 LN2 取樣。8. 對(duì)于無(wú)菌培養(yǎng)基（ V105），需放在無(wú)菌瓶中保溫培養(yǎng)。9. 對(duì)調(diào)配完成的 LG培養(yǎng)基料液 ，空蓋，空瓶

43、，潔瓶，潔蓋進(jìn)行取樣并且進(jìn)行總菌，霉菌 / 酵母測(cè)試，以便對(duì)未來(lái)出現(xiàn)的危機(jī)進(jìn)行分析。10. 灌注結(jié)束后對(duì) ISOLATE設(shè)備進(jìn)行涂抹。灌注過(guò)程中對(duì) ISOLATE內(nèi)部空氣進(jìn)行總菌，霉菌 / 酵母的取樣測(cè)試（各 1000L）第五部分：樣品翻檢在 30-35 °C條件下，將樣品保溫 14 天；培養(yǎng)基培養(yǎng) 3 天后倒立瓶子， 使瓶?jī)?nèi)液體與內(nèi)瓶壁以及蓋子充分接觸， 7 天后第一次翻檢， 14 天后再次翻檢。 保溫結(jié)束后，肉眼觀察所有瓶子是否有微生物污染 ( 膨脹的、渾濁的、變顏色的、絮狀的、產(chǎn)氣等 ) 。作為陽(yáng)性對(duì)照，向未污染瓶子內(nèi)的培養(yǎng)基接種枯草芽孢桿菌，以確保培養(yǎng)基是適合該菌生長(zhǎng)的。注：

44、樣品必需在不同的砧板上放置并貼上標(biāo)識(shí)。 （本次試驗(yàn)需 10 個(gè)塑料砧板）第六部分：參考標(biāo)準(zhǔn)10000 瓶測(cè)試通過(guò)<1失敗 1無(wú)菌線 S8 驗(yàn)證 SOP目的：隔離系統(tǒng)的抗污染能力驗(yàn)證。精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案應(yīng)用：這個(gè)測(cè)試是驗(yàn)證生產(chǎn)線從巴氏殺菌到裝填及壓蓋，總體的無(wú)菌等級(jí)，并且評(píng)估在生產(chǎn)線停機(jī)和操作人員介入期間，潔凈室和無(wú)菌區(qū)域的無(wú)菌狀態(tài)，提供日常的操作條件。 測(cè)試中所使用的瓶子和瓶蓋要和將來(lái)生產(chǎn)中使用的一致。第一部分：準(zhǔn)備工作一. 可能影響影響驗(yàn)證的因素確認(rèn)及解善11）對(duì)吹瓶風(fēng)道空氣過(guò)濾器的維護(hù)，對(duì)風(fēng)道內(nèi)部的擦洗12）瓶蓋 / 空瓶檢驗(yàn)合格13）安排對(duì)灌注機(jī)和清洗消毒系統(tǒng)設(shè)備進(jìn)行自查（如灌裝

45、機(jī)查漏，殺菌液濃度確認(rèn)等）14）膜包機(jī)長(zhǎng)時(shí)間不用，要在試驗(yàn)開(kāi)始前調(diào)試好15）保溫室（空間容量 , 溫濕度 , 光照等）二培養(yǎng)基的準(zhǔn)備（中性，PH6.5-6.8 ）培養(yǎng)基： LG培養(yǎng)基的配方（ 10000L）：1葡萄糖（食品級(jí)）200 kg2酵母提取物（粉狀分析級(jí)）35kg3蛋白胨（食品級(jí)）20kg4硫酸銨（化學(xué)純級(jí)）20kg5磷酸二氫鉀（化學(xué)純級(jí)）10kg6硫酸鎂（化學(xué)純級(jí)）10kgLG培養(yǎng)基的配制 （10000L）：17. 實(shí)驗(yàn)前對(duì)培養(yǎng)基原材料以以上比例進(jìn)行預(yù)調(diào)配小樣，并按照比例進(jìn)行添加酸堿，對(duì) pH進(jìn)行測(cè)試。而且需要事先檢測(cè)培養(yǎng)基是否能夠被污染。精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案18. 向混合缸中注入

46、2000L 60 的處理水。19. 將 20 kg 蛋白胨用 300L 60 的處理水預(yù)混，通過(guò)濾網(wǎng)加入混合缸中。攪拌直至蛋白胨徹底溶解。20. 在攪拌器開(kāi)啟的情況下將其余的組分按下列次序加入：酵母提取物 35 kg ，葡萄糖 200 kg ，磷酸二氫鉀 10 kg ，硫酸銨 20 kg ，硫酸鎂 10 kg（注意： 酵母提取物必須采用粉狀分析級(jí)的。投料順序按照上述順序進(jìn)行，而且必須等待前一組分完全溶解后才能加入后一個(gè)組分。如能將這些組分分別使用小料缸預(yù)溶解后通過(guò)5u 濾網(wǎng)加入混合缸中更好。）21. 攪拌直至所各組分徹底溶解。目測(cè)檢查。22. 用 20oC 的處理水將混合缸定容至 10000L

47、。23. 至少 30 分鐘攪拌，取樣測(cè)試 pH，濁度和白利度。將 LG培養(yǎng)基 pH值調(diào)至 6.5-6.8 （參考添加量： 110-130g 化學(xué)純 NaOH加入 1 噸 LG培養(yǎng)基），謹(jǐn)慎起見(jiàn)，酸堿第一步添加量參考添加量下限的 80%，然后按照實(shí)際情況，逐漸加入余下量直至 pH達(dá)標(biāo)為止。24. 在 2 小時(shí)內(nèi)將培養(yǎng)基在 137，30 秒或相當(dāng)?shù)臏囟群蜁r(shí)間滅菌。儲(chǔ)存于無(wú)菌缸中，否則可能會(huì)引起微生物過(guò)度繁殖，造成培養(yǎng)基內(nèi)部渾濁。第三部分：灌注（測(cè)試中所使用的瓶子和瓶蓋要和將來(lái)生產(chǎn)中使用的一致。）17. 確認(rèn)生產(chǎn)線各個(gè)設(shè)備都在正常無(wú)故障狀態(tài)（前處理、動(dòng)力中心、PET、UHT、無(wú)菌罐、氮?dú)庀到y(tǒng)、膜包機(jī)

48、等后工序） 。18. 確認(rèn)參與試驗(yàn)的的人員到位：車(chē)間所有員工（溶糖、萃茶、套標(biāo)除外） 、維修工、微生物品控員、成品品控員、跟班品控員、 SCMC工程師、克朗斯工程師、藝康工程師。精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案19. 調(diào)配系統(tǒng)、灌裝機(jī)、無(wú)菌水、 UHT、無(wú)菌罐、氮?dú)庀到y(tǒng)進(jìn)行 CIP、SIP，記錄參數(shù)20. 按照要求調(diào)配 LG培養(yǎng)基，調(diào)配結(jié)束后立即通過(guò) UHT滅菌打入無(wú)菌罐進(jìn)行儲(chǔ)存。21. 按照供應(yīng)商的要求對(duì)灌裝機(jī)進(jìn)行堿性 COP、酸性 COP，產(chǎn)前準(zhǔn)備， SOP，記錄參數(shù)22. 開(kāi)機(jī)生產(chǎn)，按照要求進(jìn)行灌裝，每次分為半瓶不充氮、半瓶充氮兩種類(lèi)型進(jìn)行生產(chǎn)，在小于 35°C 的條件下灌注培養(yǎng)基，噴碼時(shí)

49、注意區(qū)分。合計(jì)灌注 10000 瓶（充氮和不充氮各灌裝 5000 瓶）。一次性完成產(chǎn)品灌注。每次間隔都要進(jìn)行正常的 COP/SOP處理過(guò)程。灌注需全速進(jìn)行（ 36000 瓶/ 小時(shí)）。半瓶瓶子中留出足夠的空間 ( 至少 50ml 左右 ) 。當(dāng)完成 5000 瓶時(shí)，讓生產(chǎn)線暫停 60 分鐘。打開(kāi)無(wú)菌區(qū)域 Rinser ，F(xiàn)iller ，Capper 區(qū)域的任意兩扇的窗戶，保持敞開(kāi)一分鐘后，關(guān)好，運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)的 COP/SOP。重新啟動(dòng)生產(chǎn)線，在35條件下以最大速度灌注。這些樣品與其它樣品分開(kāi)保存。做好任何間斷和中斷的詳細(xì)情況，以及瓶子和蓋子的除菌條件，清洗條件和其它主要的無(wú)菌操作條件。每 5 分鐘檢查瓶子中殘留消毒劑的量，根據(jù)操作說(shuō)明確保無(wú)殘留。23. 現(xiàn)場(chǎng)人員安排安排人員在生產(chǎn)線上， 對(duì)高歪蓋產(chǎn)品進(jìn)行挑揀。 所有挑揀人員必須在實(shí)驗(yàn)之前，對(duì)雙手進(jìn)行全面消毒。安排品控員在線上對(duì)衛(wèi)生狀況進(jìn)行巡查。所有從生產(chǎn)線掉落的培養(yǎng)基和倒在輸送帶上的培養(yǎng)基都不得放回生產(chǎn)線。24. 灌裝結(jié)束按照正常的生產(chǎn)程序進(jìn)行結(jié)束生產(chǎn)。注：為防止有高歪蓋或其它樣品損失，注入機(jī)在灌注時(shí)均適量放大樣品量。第四部分： S8 驗(yàn)證過(guò)程中無(wú)菌流體的取樣11. 本試驗(yàn)可能持續(xù) 10 小時(shí)以上，品控應(yīng)準(zhǔn)備好培養(yǎng)基及空氣取樣過(guò)濾器12. 品控