丹參酮IIA的研究進(jìn)展

1、丹參酮IIA的研究進(jìn)展         11-04-28 10:34:00     編輯：studa20          作者：李玉萍，顧兵，劉建濤，熊向源，周春麗，吳光杰【摘要】  丹參是一種中國(guó)傳統(tǒng)草藥，丹參酮IIA是丹參的主要活性成分之一，是發(fā)揮藥理活性的基礎(chǔ)。該文章就近5年來(lái)國(guó)內(nèi)外有關(guān)丹參酮IIA的提取、含量測(cè)定和生物活性的研究成果進(jìn)行綜述，為全面開發(fā)利用丹參提供參考

2、。 【關(guān)鍵詞】  丹參酮IIA; 提取; 測(cè)定; 藥理作用丹參為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖，主產(chǎn)于河北、安徽、江蘇、四川等地。其化學(xué)成分分為脂溶性和水溶性兩部分，前者以丹參酮型的二萜類化合物為主，主要有丹參酮I、丹參酮IIA(tanshinone IIA )、丹參酮IIB、隱丹參酮、羥基丹參酮、丹參羥甲酯、二氫丹參酮I，以及異丹參酮I、異丹參酮II、異隱丹參酮、二氫異丹參酮I;后者主要為酚酸類化合物，包括丹參素(丹參酸甲)，原兒茶醛，丹參酸乙、丹參酸丙、丹酚酸A、丹酚酸C和迷迭香酸等1。其中丹參酮IIA是脂溶性成分的代表，集中分布在丹

3、參根的皮部，木質(zhì)部的分布甚微或沒有，通過韌皮部縱向運(yùn)輸，不能橫向運(yùn)輸?shù)侥举|(zhì)部中去2,3。本文就近年來(lái)國(guó)內(nèi)外對(duì)丹參酮IIA的研究現(xiàn)狀作一綜述，為丹參的進(jìn)一步開發(fā)利用提供理論依據(jù)。1 丹參酮IIA的理化性質(zhì)丹參酮IIA又稱丹參醌I(xiàn)I, 丹參醌I(xiàn)IA，為一種櫻紅色針狀結(jié)晶，mp 209210;不溶或微溶于水，易溶于二甲基亞砜 (25 mg/ml)、乙醇 (5 mg/ml) 、丙酮、乙醚和苯等有機(jī)溶劑;丹參酮IIA乙醇溶液和水溶液隨溫度升高穩(wěn)定性下降，其標(biāo)準(zhǔn)品穩(wěn)定易得4;丹參酮IIA含有醌型結(jié)構(gòu)，電子行為活躍，易被氧化還原，可參與機(jī)體的多種生化反應(yīng)而有多種生物活性。其結(jié)構(gòu)式見圖1。圖1 丹參酮IIA化

4、學(xué)結(jié)構(gòu)2 丹參酮IIA的提取丹參酮IIA的充分浸出提取是含量準(zhǔn)確測(cè)定的前提，因此提取方法的研究對(duì)于丹參酮IIA的含量測(cè)定非常重要，但是有關(guān)提取方法的系統(tǒng)研究報(bào)道尚不多見?，F(xiàn)將主要的提取方法概括如下。2.1 醇提法由于丹參酮IIA不溶于水，多用乙醇提取，包括乙醇滲濾法和回流法。滲濾法：黃琳等5采用正交實(shí)驗(yàn)考察了4因素(乙醇濃度、浸泡時(shí)間、提取時(shí)間和溫度)對(duì)丹參酮IIA提取率的影響，提取溫度、浸泡時(shí)間、提取時(shí)間、醇濃度(70%90%)和乙醇用量對(duì)提取率均有影響。使用高濃度(90%)的醇溶劑、加溫(8087)、浸泡時(shí)間延長(zhǎng)(6 h)可相應(yīng)縮短提取時(shí)間(2 h)，可獲得丹參酮IIA 4.451 0 m

5、g/g。但因丹參脂溶性成分對(duì)熱不穩(wěn)定，醇提后處理工序(貯放、回收乙醇、濃縮、干燥)是丹參酮IIA熱降解損失的主要工序，因此加熱時(shí)間范圍內(nèi)應(yīng)控制在24 h6?；亓鞣ǎ河诩冺档?采用乙醇加熱回流法，通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)獲得提取丹參酮的最佳提取條件為：丹參粉碎后過4號(hào)篩，乙醇濃度為75%，提取溫度為65，提取時(shí)間為2.5 h，料液比為124。楊廣德等8通過正交實(shí)驗(yàn)確定了最佳提取溶劑倍量、回流時(shí)間和回流次數(shù)?？疾煸囼?yàn)中，由于溶劑用量超過7倍后，丹參酮IIA提取量無(wú)顯著差異，考慮到大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)的成本與資源利用等因素，選擇用7倍量溶劑進(jìn)行提取較為合適。2.2 超聲提取法超聲能產(chǎn)生空化效應(yīng)，具有粉碎、攪

6、拌等特殊作用，使丹參根植物組織在溶劑中瞬時(shí)產(chǎn)生的空化泡崩潰，而使組織中的細(xì)胞破裂，有利于溶劑滲透進(jìn)植物細(xì)胞內(nèi)部，使細(xì)胞中的有效成分進(jìn)入溶劑中，加速相互滲透、溶解，提高溶解度。于純淼等7超聲提取丹參酮，稱取6份5 g丹參粉，加入75%乙醇溶液120 ml，稱重，分別用40 KHz超聲波提取10，20，30，40，50和60 min。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，利用超聲波法(1次，30 min)從丹參中提取丹參酮IIA的提取率比加熱回流法(1次，150 min)的提取率高約ll%，且無(wú)需加熱。黃喜茹等9用甲醇為提取液，超聲提取40 min，平均回收率為99.3%，RSD=1.2%。王猛等10用正交實(shí)驗(yàn)法分別考察

7、3種提取方法(冷浸法、熱回流法、超聲法)對(duì)丹參藥材提取液中丹參酮IIA含量的影響，優(yōu)選出丹參酮IIA的最佳提取工藝：4倍量95%乙醇超聲2次，30 min/次，丹參酮IIA在25.2126 g/ml范圍內(nèi)良好線性關(guān)系。本法具有實(shí)驗(yàn)設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便，提取無(wú)需加熱、時(shí)間短，提取率高、污染少等特點(diǎn)，優(yōu)于傳統(tǒng)的醇提法，可增加藥材的利用率。2.3 索氏提取法徐義等11將丹參粉末用濾紙包好放進(jìn)索式提取器里，再將一定量的苯放入圓底燒杯中，在水浴加熱下將苯蒸出，通過索式提取器冷凝后，熱的苯溶液流入索式提取器中，浸泡裝有藥品的濾紙包，重復(fù)操作，直至索式提取器里的熱苯溶液為無(wú)色。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器將溶液中的苯蒸出，殘

8、留物為丹參酮IIA。2.4 微波提取法微波提取是一項(xiàng)新興的技術(shù)，加熱升溫快、能耗低、選擇性好，應(yīng)用于中藥提取具有穿透力強(qiáng)、選擇性高等顯著特點(diǎn)。焦士龍等12稱取已粉碎的丹參藥材10 g, 加入6倍量95%乙醇微波提取30 min，微波功率320 W進(jìn)行微波回流提取然后按照藥典法醇提。2.5 超臨界CO2萃取(SFECO2萃取)超臨界CO2流體萃取技術(shù)是近20年來(lái)發(fā)展起來(lái)的在分離領(lǐng)域出現(xiàn)的一種新技術(shù)，它與常規(guī)溶劑萃取的區(qū)別是選用一種稱為超臨界流體(SF)的物質(zhì)代替有機(jī)溶劑作為萃取劑。它是利用在臨界點(diǎn)四周，體系溫度和壓力的微小變化可導(dǎo)致物質(zhì)溶解度發(fā)生幾個(gè)數(shù)量級(jí)的突變的特性實(shí)現(xiàn)物質(zhì)的分離。該法具有無(wú)毒

9、、快速、廉價(jià)、低溫操作等優(yōu)點(diǎn)。宋啟煌等13采用超臨界CO2萃取法提取了丹參酮IIA，討論了壓力、溫度、時(shí)間、乙醇流量對(duì)丹參酮IIA提取收率的影響。優(yōu)化最佳條件為：萃取壓力25 MPa，萃取溫度40，萃取時(shí)間2 h，乙醇流量1.0 ml/min，并得出超臨界CO2萃取法優(yōu)于乙醇提取法的結(jié)論。3 含量檢測(cè)方法丹參酮IIA的測(cè)定方法大致包括3類：一是以前常用的薄層掃描法(定性檢測(cè))、薄層-熒光法、薄層-紫外分光光度法、柱層析-紫外分光光度法、三波長(zhǎng)分光光度法、超臨界流體萃取法聯(lián)用毛細(xì)管氣相色譜法，二是2005版中國(guó)藥典質(zhì)控推薦的高效液相色譜法，三是最近才開始使用的反相高效液相色譜法。在各種檢測(cè)方法中

10、，報(bào)道最多的是高效液相色譜法。3.1 高效液相色譜法( high performance liquid chromatography , HPLC)HPLC法是2005年版中國(guó)藥典丹參中丹參酮IIA的含量測(cè)定方法。蘇連彩14、王懷明等15分別采用色譜柱Hypersil BDS C18 (4.6 mm×150 mm，5 m )，流動(dòng)相為甲醇-水溶液(7525)，檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm，在0.08450.2535 g 內(nèi)呈良好線性關(guān)系，r=0.9983，平均回收率為98.15%，RSD為1.05%。鄧寒霜2、曾令杰等3用HPLC法測(cè)定丹參藥材中丹參酮IIA的含量及分布規(guī)律，結(jié)果顯示丹參根皮

11、部丹參酮IIA含量為0.34%;木質(zhì)部丹參酮IIA含量為0.056%，皮部中丹參酮IIA的含量高出木質(zhì)部507%。應(yīng)用高效液相色譜法對(duì)中藥制劑中丹參酮IIA的含量測(cè)定，樣品不用事先進(jìn)行分離，操作簡(jiǎn)便，分離效率高，抗干擾能力強(qiáng)，測(cè)量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可作為多種丹參制劑中丹參酮IIA含量測(cè)定的常用方法和質(zhì)量控制，是目前丹參酮IIA定量分析方法中較為優(yōu)越的的方法。3.2 反相高效液相色譜法(RP-HPLC)反相高效液相色譜(Reversed-phase high performance liquid chromatograph，RP-HPLC)是迄今為止HPLC中使用最廣泛的技術(shù)，因?yàn)樗軕?yīng)用于大部分

12、的非極性化合物、許多可電離的及離子化合物的分析。黃喜茹等16用RP-HPLC方法，DiamonsilTM C18色譜柱(5 m, 250 mm× 4.6 mm)，流動(dòng)相為水-甲醇(2575，V/V)，流速為0.8 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm。在3.15222.06 g/ml的范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，平均回收率為99.87%(RSD=0.63%)。4 藥理作用及作用機(jī)制藥理學(xué)研究報(bào)道丹參酮IIA具有廣泛的生理活性，包括抗炎抑菌作用17，清除自由基與抗氧化作用18，保肝及改善肝功能18，19，保護(hù)脊髓背角神經(jīng)元作用20，保護(hù)腎小管的正常結(jié)構(gòu)和延緩腎間質(zhì)纖維化21、抗癌22、改善血循

13、環(huán)2330等，其中對(duì)心腦血管作用的研究在醫(yī)藥領(lǐng)域尤其在中藥領(lǐng)域受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的高度重視，并得到廣泛應(yīng)用，主要概括如下。     11-04-28 10:34:00     編輯：studa204.1 改善冠狀動(dòng)脈血循環(huán)作用許濤等23用結(jié)扎狗冠狀動(dòng)脈前降支的心肌梗塞模型觀察丹參酮IIA的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)靜脈注射丹參酮IIA后心肌梗塞范圍明顯縮小，冠狀動(dòng)脈內(nèi)給藥后同樣顯著縮小狗心肌梗塞面積，其療效與潘生丁相當(dāng)。阻斷狗冠狀動(dòng)脈血流后，靜脈注射生理鹽水導(dǎo)致左心室肝舒張壓升高，而靜脈滴注丹參酮IIA導(dǎo)致左心室肝舒張壓明顯降低，

14、說明丹參IIA可能通過降低左心室壁張力和心肌體積而降低心肌耗氧量，改善缺氧后引起的心肌代謝紊亂。為此，目前丹參酮IIA經(jīng)磺化制得丹參酮IIA磺酸鈉，常用于治療冠心病，改善冠狀動(dòng)脈循環(huán)。4.2 血管內(nèi)皮細(xì)胞修復(fù)作用丹參酮IIA對(duì)過氧化氫(H2O2)損傷的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株(CRL-1730)具有保護(hù)作用，它能抑制H2O2引起的血管內(nèi)皮細(xì)胞減少，其作用主要是使S期和G2M期細(xì)胞比率劑量依賴性增加，G0/G1期細(xì)胞比率劑量依賴性減少，還能抑制過氧化氫損傷的CRL-1730釋放MDA和LDH，減輕H2O2損傷，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用24。4.3 抗動(dòng)脈粥樣硬化(AS)形成作用促血管生成因子白介素-

15、8(IL-8)和血管細(xì)胞黏附分子-1(VCAM-1)參與了AS的形成過程。丹參酮IIA能顯著降低動(dòng)脈粥樣硬化家兔血清IL-8濃度，減少動(dòng)脈粥樣硬化家兔主動(dòng)脈VCAM-1的表達(dá)25。崔廣智等26通過建立TNF-誘導(dǎo)的ECV-304細(xì)胞損傷模型，以抗氧化劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽做為對(duì)照，觀測(cè)了丹參酮IIA對(duì)TNF-誘導(dǎo)的ECV304細(xì)胞NF-B、IB-表達(dá)及粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表達(dá)的影響。結(jié)果顯示：低濃度的丹參酮IIA對(duì)TNF-引起的ECV304細(xì)胞NF-B的表達(dá)升高無(wú)明顯抑制作用,但可增加其IB-的表達(dá);高濃度的丹參酮IIA可明顯抑制NF-B的表達(dá),同時(shí)增加其抑制因子IB-

16、的表達(dá)，并抑制TNF-誘導(dǎo)的ECV304細(xì)胞ICAM-1、VCAM-1mRNA表達(dá)。其抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制是通過抑制轉(zhuǎn)錄因子NF-B的激活及其相關(guān)粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表達(dá)。呂炳強(qiáng)等27報(bào)道丹參酮IIA能增加動(dòng)脈粥樣硬化家兔血清NO濃度，降低血清甘油三酯(TG)濃度，從而達(dá)到抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。4.4 抗心肌肥厚作用丹參酮IIA對(duì)血管緊張素II誘導(dǎo)產(chǎn)生的心肌肥大有明顯的抑制作用，其機(jī)制之一是丹參酮IIA通過抑制血管緊張素II所致心肌細(xì)胞Ca2+ i 變化， 阻斷了心肌肥厚信號(hào)向核內(nèi)傳導(dǎo)，抑制原癌基因C-fos的表達(dá)28。馮俊等29報(bào)道丹參酮IIA可以抑制由于血管緊張索

17、II誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞直徑、心肌蛋白質(zhì)合成速率及凋亡率的增加，降低凋亡基因 Fas mRNA的表達(dá)。長(zhǎng)期應(yīng)用丹參酮IIA治療可預(yù)防自發(fā)性高血壓大鼠左室肥厚的形成， 其機(jī)制可能與丹參酮IIA上調(diào)心肌細(xì)胞凋亡蛋白Bcl-2、下調(diào)Bax蛋白及抑制 p53蛋白的表達(dá)有關(guān)30。4.5 防治糖尿病的并發(fā)癥近年來(lái)有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病患者，特別是中老年糖尿病患者最突出、最主要的病理改變?yōu)槿硇詮浬⑿匝艿牟∽儯憩F(xiàn)為微循環(huán)障礙，微血管瘤形成和微血管基底膜增厚。藥理學(xué)研究和臨床觀察表明：丹參酮IIA有效地清除氧自由基22，并能降低血液中甘油三酯和膽固醇的含量27，可預(yù)防和治療糖尿病以及高血糖導(dǎo)致的大血管、微血管和

18、周圍神經(jīng)病變等嚴(yán)重并發(fā)癥。5 結(jié)語(yǔ)從藥用植物中篩選藥物是新藥開發(fā)的主要手段之一。丹參酮IIA是丹參的有效成分之一，具有多種藥理作用，除具有傳統(tǒng)的活血調(diào)經(jīng)、祛瘀止痛、養(yǎng)心安神之功效外，近年來(lái)對(duì)其抗氧化，抗菌，抗炎，降低血液粘度、抑制凝血、促進(jìn)纖溶、抑制血小板聚集、延長(zhǎng)血栓形成及促進(jìn)血栓溶解作用，保肝護(hù)肝，抗腫瘤，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，改善抗糖尿病微血管并發(fā)癥等藥理作用的研究日趨深入，使其擁有非常廣闊的臨床應(yīng)用前景。但值得引起注意的是：隨著丹參酮IIA的新藥理作用、作用機(jī)制和藥代動(dòng)力學(xué)研究的不斷深入，從丹參中提取的活性成分大量用于制藥工業(yè)，將對(duì)丹參藥材的需求不斷增加。因此必須重視對(duì)野生資源保護(hù)和合理開

19、發(fā)利用，同時(shí)應(yīng)加強(qiáng)合理應(yīng)用高新技術(shù)開發(fā)中藥制劑、丹參的人工種植技術(shù)和培育方法的研究，使之在治療疾病方面得到充分利用，促進(jìn)祖國(guó)醫(yī)藥與國(guó)際接軌，推動(dòng)中藥現(xiàn)代化的發(fā)展。【參考文獻(xiàn)】  1 國(guó)家藥典委員會(huì). 中國(guó)藥典，部S .北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2005:52.2 鄧寒霜, 李筱玲. 丹參根中丹參酮IIA及丹參素分布規(guī)律研究J 商洛師范專科學(xué)校學(xué)報(bào), 2005, 19(4): 45.3 曾令杰, 梁 暉, 陳 悅, 等. 丹參酮IIA與丹酚酸B在丹參藥材中的分布研究J 現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐, 2006, 20(2): 7.4 林恒標(biāo), 林恒寬. 丹參酮IIA的穩(wěn)定性研究J .中醫(yī)研究, 2005, 18(8): 16.5 黃 琳, 肖曉麗, 羅 杰, 等. 丹參醇提工藝條件的優(yōu)化研究J .中成藥, 2006, 28(9): 1385.6 陳占立, 孫愛平, 張卉朱, 等. 提取、濃縮及干燥工藝對(duì)復(fù)方丹參片中丹參酮IIA含量的影響J. 中國(guó)藥業(yè), 2006, 15(5): 59.7 于純淼, 于棟華, 于國(guó)萍. 丹參酮的提取工藝研究J .中國(guó)中醫(yī)藥科技, 2006, 13(3): 194.8 楊廣德, 張繼業(yè), 張 莉, 等. 丹參中丹參酮IIA和隱丹參酮的提取方法研究J .藥物分析雜志, 2006, 26(12): 1807.9