淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體1對肺癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后評價(jià)的意義研究

1、淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體1對肺癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后評價(jià)的意義研究摘要目的檢測肺癌患者血清淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體1（LYVE-1）水平，并探討血清LYVE-1用于判斷肺癌患者是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)測患者預(yù)后的臨床意義。方法采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測57例肺癌患者血清中LYVE-1的水平，同時(shí)分析血清LYVE-1水平與患者臨床病理特征的關(guān)系，通過受試者工作曲線（ROC）分析血清LYVE-1用于判斷肺癌患者是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可行性，Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析，評價(jià)LYVE-1用于預(yù)測病人預(yù)后的臨床意義。結(jié)果肺癌患者血清LYVE-1為1625.0±343.0pg/mL；血清LYVE

2、-1與肺癌患者性別、腫瘤組織學(xué)分型、血清CEA和CA125無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05），而與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況有關(guān)（P0.05）；血清LYVE-1用于診斷肺癌患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的曲線下面積為0.728（95% CI：0.685-0.747，P0.05）；LYVE-1的為1821pg/mL時(shí)，其診斷的敏感性為79%，特異性為68%；血清LYVE-1大于1821pg/mL的肺癌患者預(yù)后要比血清LYVE-1小于1821pg/mL的肺癌患者預(yù)后差，兩組總生存時(shí)間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.035）。結(jié)論血清LYVE-1可用于確定肺癌患者是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，并可用于評估病人預(yù)后。關(guān)鍵詞：淋巴管

3、內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體1；肺癌；轉(zhuǎn)移；預(yù)后The significance of serum lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor-1in the metastasisand prognosis of lung cancerAbstractObjective Todetect the level of the serum lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor-1(LYVE-1) in lung cancer patients, and to investigate the sign

4、ificance of serum LYVE-1 in the metastasis and prognosis of lung cancer. Methods: Serum levels of LYVE-1 in 57 lung cancer patients were detected by Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA); Clinical and pathologic features were analysed with levels of LYVE-1; The specificity and sensitivity of seru

5、m LYVE-1in determine whether lymph node metastasis or not were analyzed by receiver operating characteristic(ROC) curve; KaplanMeier methodwas used to evaluate overall survival according tocutoff serum LYVE-1 level in patients.Results: Serum LYVE-1 levels were 1625.0±343.0pg/mL; A high cancer s

6、taging, occurrence of lymph-node metastases, and occurrence of distant metastases patient wereassociated with high LYVE-1 levels; A LYVE-1 value = 3542pg/ml had a sensitivity of 68% and a specificity of 79%, with an area under the curve (AUC) of 0.728, p<0.05, for identifying lymph node metastase

7、s in patients with lung cancer, and the higher serum LYVE-1 level predicates poorer prognosis. Conclusion: The serum levels of LYVE-1 might be a helpful biomarker in identified lymph node metastases, it also may be useful for evaluating lung cancer progression. Keywords: lymphatic vessel endothelial

8、 hyaluronan receptor-1; lung cancer; metastasis;prognosis肺癌是發(fā)病率和死亡率增長最快的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅人群健康和生命安全。根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）發(fā)布最新的資料，全球肺癌的發(fā)病率和病死率高居各類惡性腫瘤之首1。在我國，肺癌也已成為發(fā)病率最高的惡性腫瘤2。肺癌發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移非常常見，有研究顯示肺癌發(fā)生縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率達(dá)30403。對肺癌患者是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移提供準(zhǔn)確的判斷，有助于更準(zhǔn)確地進(jìn)行TNM分期及選擇最佳的治療方案和預(yù)測病人預(yù)后。然而現(xiàn)臨床上對于肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢查技術(shù)有限，急需開發(fā)新的檢查方法。近年來有報(bào)道淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)

9、酸受體1（Lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor-1, LYVE-1）在多種腫瘤組織中高表達(dá)且與腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)，涉及結(jié)直腸癌、胃癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤4。本研究報(bào)道了肺癌患者LYVE-1的血清水平，分析其與病人淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，并對LYVE-1用于預(yù)測肺癌患者的預(yù)后做了研究，報(bào)道如下。1.材料和方法1.1 研究對象本研究收錄對象為2012年9月至2013年9月期間于我院就診并初次確診為的肺癌患者，經(jīng)排除伴有其它腫瘤或急性肺炎患者，共有57例患者納入本研究，其中男性41例，女性16例，年齡57.8±12.2歲；所有患者均經(jīng)組

10、織學(xué)或細(xì)胞學(xué)確診，且患者臨床病理資料完整。病理診斷分型：小細(xì)胞肺癌19例，非小細(xì)胞肺癌40例（鱗狀細(xì)胞癌15例、大細(xì)胞癌12例、腺癌8例、腺鱗癌3例）；TNM分級方法對患者進(jìn)行分期，I期患者為9例，II期患者15例，III期患者20例，IV期患者13例。本研究經(jīng)本院倫理委員會審批通過。1.2 研究方法患者入院次日早晨取靜脈血，43000 rpm離心10min，上清儲存在-80°C待測，此外患者均檢測血常規(guī)、肝功能、腎功能、頭頸和胸腹部CT、顱腦CT、全身骨掃描。血清LYVE-1水平通過酶聯(lián)免疫法測定，Human LYVE-1Duoset ELISA kit 購自美國R&D公司

11、，步驟參照試劑盒說明書操作。1.3 隨訪本研究開始于2012年9月隨訪至2014年9月，無失訪患者。生存期為確診肺癌開始至疾病進(jìn)展或死亡的時(shí)間，中位隨訪時(shí)間18個(gè)月。1.4 數(shù)據(jù)分析采用SPASS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料按其是否正態(tài)分布分別以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差或中位數(shù)表示，組間比較按照不同數(shù)據(jù)類型分別選用單因素方差分析或t檢驗(yàn)，血清LYVE-1作為肺癌轉(zhuǎn)移指標(biāo)的特異性和敏感性通過受試者工作特征（ROC）曲線確定，用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析，log-rank檢驗(yàn)分析不同組生存時(shí)間的差異，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.結(jié)果2.1 肺癌患者的臨

12、床資料情況57例肺癌患者的臨床資料如表1所示，血清LYVE-1為1625.0±343.0pg/mL，血清CA125和CEA分別為47.9±15.3 U/ml和10.4±7.2 ng/mL，均高于正常參考值（CEA < 5 ng/mL，CA125 < 35.0 U/mL）。表1 57例肺癌患者的一般臨床資料檢查項(xiàng)目值（±s）LYVE-1（pg/mL）1625.6±343.0年齡（歲）57.8±12.2肺部腫瘤大?。╩m）26.5±11.7血清白蛋白（g/L）58.3±26.4谷丙轉(zhuǎn)氨酶（U/L）25.6&

13、#177;11.8乳酸脫氫酶（U/L）207.6±83.6血清肌酐（mg/dL）0.85±0.21CA125（U/ml）47.9±19.3CEA（ng/mL）10.4±7.22.2 不同臨床資料患者血清LYVE-1的比較通過分析不同臨床資料患者LYVE-1的血清水平，發(fā)現(xiàn)在肺癌患者性別、腫瘤組織學(xué)分型、血清CEA和CA125等分組中血清LYVE-1無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05），而與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況有關(guān)（P0.05），提示血清LYVE-1與肺癌的轉(zhuǎn)移有關(guān)。表2 血清LYVE-1與肺癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系臨床特征n（%）LYVE-1（

14、pg/mL）P值性別男41（71.9%）1725.5±382.90.267女16（28.1%）1605.7±316.3病理分型小細(xì)胞癌17（29.8%）1571.7±309.30.154非小細(xì)胞癌40（70.2%）1716.9±361.5TNM分期I期9（15.8%）1371.4±264.70.001II期15（26.3%）1455.8±275.2III期20（35.1%）1734.5±372.6IV期13（22.8%）1942.8±413.6淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有26（45.6%）1753.5±393.40.00

15、1無31（54.4%）1422.7±251.4遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有13（22.8%）1942.8±413.60.001無43（71.2%）1592.5±286.2CA12535.0 U/mL46（80.7%）1650.3±358.50.39535.0 U/mL11（19.3%）1536.9±305.2CEA5ng /mL51（89.5%）1685.5±376.30.3365ng /mL6（10.5%）1529.6±345.62.3 血清LYVE-1用于判斷肺癌患者是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的準(zhǔn)確性評價(jià)采用繪制受試者工作特征(receiver

16、operating characteristic，ROC)曲線，血清LYVE-1用于診斷肺癌患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的曲線下面積（area under the curve，AUC）為0.728（95% CI：0.685-0.747，P0.05），通過最佳切點(diǎn)值分析得到LYVE-1的臨界值為1821pg/mL時(shí)，其診斷的敏感性為79%，特異性為68%，見圖1。圖1 血清LYVE-1用于診斷肺癌患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的評價(jià)2.4 血清LYVE-11821pg/mL和1821pg/mL兩組肺癌患者生存期的比較57例患者中血清LYVE-1值大于或等于1821pg/mL的有26例，小于1821pg/mL的有31例

17、。截止2014年9月，疾病進(jìn)展或死亡的患者為19例，其中血清LYVE-1大于1821pg/mL組12例（63.2%），小于1821pg/mL組7例（36.8%）；兩組總生存時(shí)間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.035）。大于1821pg/mL組患者中位生存期為10個(gè)月，小于1821pg/mL組中位生存期為16個(gè)月，結(jié)果見圖2。圖2 血清LYVE-11821pg/mL和1821pg/mL兩組肺癌患者生存期的比較3.討論外科手術(shù)是治療肺癌尤其是早期肺癌的首選方式，然而肺癌患者術(shù)后長期的生存率不容樂觀，約有50%的完全性切除的非小細(xì)胞肺癌患者手術(shù)治療效果不理想，其中因淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是術(shù)后腫瘤殘留而導(dǎo)致肺癌復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)

18、處轉(zhuǎn)移的重要原因5。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移能夠增加原發(fā)肺癌病灶向全身擴(kuò)散，導(dǎo)致肺癌局部復(fù)發(fā)，同時(shí)也是影響病人預(yù)后的重要指標(biāo)之一6。肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢查方法包括常規(guī)病理檢查和生物學(xué)方法，常規(guī)病理檢查臨床使用廣泛，但容易漏檢淋巴結(jié)微小的轉(zhuǎn)移病灶；生物學(xué)檢查對象包括腫瘤特異性基因和肺癌組織的特異性蛋白類標(biāo)記物，應(yīng)用腫瘤組織特異性標(biāo)志物有助于提高臨床肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移診斷的準(zhǔn)確性，其中血清學(xué)檢查因具有方便快捷、無創(chuàng)等優(yōu)點(diǎn)，部分腫瘤標(biāo)志物還可作為評估療效和預(yù)后的監(jiān)測指標(biāo)備受青睞。自從Folkman提出腫瘤脈管生成的概念以來，有關(guān)腫瘤脈管生成的得到了深入的研究?，F(xiàn)已陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了幾種較為理想淋巴管內(nèi)皮的特異性標(biāo)記物，如血管內(nèi)

19、皮生長因子受體-3、LYVE-1、腎小球足突細(xì)胞黏蛋白(Podoplanin)及同源異型盒基因轉(zhuǎn)錄因子-1。其中LYVE-1被認(rèn)為是目前特異性最強(qiáng)的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物之一。LYVE-1是與CD44同源的一種透明質(zhì)酸受體，由322個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的跨膜糖蛋白，主要表達(dá)在淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞上，是被發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)淋巴管透明質(zhì)酸鹽受體。LYVE-1也是淋巴管內(nèi)的特異標(biāo)記物，能夠通過抗體標(biāo)記LYVE-1能簡單而準(zhǔn)確的識別淋巴管。作為淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞特異性透明質(zhì)酸的受體，LYVE-1能夠幫助從組織中攝取并轉(zhuǎn)運(yùn)透明質(zhì)酸進(jìn)入淋巴液，而在淋巴系統(tǒng)內(nèi)的透明質(zhì)酸又能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞及白細(xì)胞的遷移。間接而言LYVE-1在淋巴

20、管內(nèi)促進(jìn)了腫瘤的黏附、遷移，被認(rèn)為是腫瘤組織淋巴管形成與轉(zhuǎn)移的的的特異性標(biāo)記物7，在癌癥的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移尤其是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用8。目前大部分研究集中在腫瘤組織中的LYVE-1表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移、病人預(yù)后的關(guān)系，對于血清LYVE-1水平與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的報(bào)道則較少。本研究首次報(bào)道了肺癌患者血清LYVE-1的水平，并分析其用于判斷肺癌患者是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)測患者預(yù)后的臨床意義。結(jié)果顯示肺癌患者血清LYVE-1值為1625.0±343.0pg/mL，其血清內(nèi)存在LYVE-1可能是LYVE-1胞外段可從內(nèi)皮細(xì)胞表面脫落，通過淋巴循環(huán)進(jìn)入血液循環(huán)，血清中的LYVE-1可通過

21、ELISA和Western blotting檢測9。通過對不同臨床資料患者分組，比較不同分組肺癌患者的LYVE-1的血清差異，發(fā)現(xiàn)血清LYVE-1在不同肺癌患者性別、腫瘤組織學(xué)分型、血清CEA和CA125分組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05），而與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況有關(guān)（P0.05），TNM分期越差的肺癌患者血清LYVE-1越高，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的肺癌患者血清LYVE-1也要較未發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者高。結(jié)合現(xiàn)有關(guān)LYVE-1與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)報(bào)道10，我們認(rèn)為血清LYVE-1也可能與肺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。因此通過受試者工作特征曲線評價(jià)血清LYVE-1用于確定肺癌患者是否發(fā)生淋

22、巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可行性，分析結(jié)果顯示血清LYVE-1用于診斷肺癌患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC為 0.728），當(dāng)血清LYVE-1為1821pg/mL時(shí)，其診斷的敏感性為79%，特異性為68%，根據(jù)該結(jié)果可認(rèn)為血清LYVE-1有助于醫(yī)務(wù)工作者做出患者肺癌是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的判斷。以血清LYVE-1為1821pg/mL作為臨界值，將肺癌患者分為血清LYVE-1高于臨界值組和低于臨界值組，通過Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析，比較兩組的生存差異，結(jié)果顯示血清LYVE-1高于1821pg/mL的肺癌患者預(yù)后要差于血清LYVE-1低于臨界值的肺癌患者。綜合現(xiàn)有報(bào)道和本研究結(jié)果，血清LYVE-1或可用于確定

23、肺癌患者是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移并評估肺癌患者預(yù)后情況。參考文獻(xiàn)1Bulman W, Saqi A, Powell CA. Acquisition and processing of endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration specimens in the era of targeted lung cancer chemotherapyJ. Am J Respir Crit Care Med, 2012,185(6): 606-611.2錢桂生, 余時(shí)滄. 肺癌流行病學(xué)最新資料與啟示 J. 中華結(jié)核和呼吸雜志, 2012, 3