干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制和臨床前研究指導(dǎo)原則(試行)

1、干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則（試行）(征求意見稿）一、前言二、干細(xì)胞制劑的質(zhì)量控制(一）干細(xì)胞的采集、分離及干細(xì)胞(系）的建立（二）干細(xì)胞制劑的制備（三）干細(xì)胞制劑的檢驗(yàn)（四）干細(xì)胞制劑的質(zhì)量研究三、干細(xì)胞制劑的臨床前研究(一）安全性評(píng)價(jià)(二）有效性評(píng)價(jià)名詞解釋參考文獻(xiàn)一、前言干細(xì)胞是一類具有不同分化潛能，并在非分化狀態(tài)下自我更新的細(xì)胞。干細(xì)胞治療是指應(yīng)用人自體或異體來源的干細(xì)胞經(jīng)體外操作后輸入（或植入）人體，用于疾病治療的過程.這種體外操作包括干細(xì)胞的分離、純化、擴(kuò)增、修飾、干細(xì)胞（系）的建立、誘導(dǎo)分化、凍存和凍存后的復(fù)蘇等過程.用于細(xì)胞治療的干細(xì)胞主要包括成體干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞及

2、誘導(dǎo)的多能性干細(xì)胞（iPSC)。成體干細(xì)胞包括自體或異體、胎兒或成人不同分化組織，以及發(fā)育相伴隨的組織(如臍帶、羊膜、胎盤等)來源的造血干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、各種類型的祖細(xì)胞或前體細(xì)胞等。目前國內(nèi)外已開展了多項(xiàng)干細(xì)胞（指非造血干細(xì)胞)臨床應(yīng)用研究，涉及多種干細(xì)胞類型及多種疾病類型.主要疾病類型包括骨關(guān)節(jié)疾病、肝硬化、移植物宿主排斥反應(yīng)（GVHD）、脊髓損傷及退行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病和糖尿病等.其中許多干細(xì)胞類型,是從骨髓、脂肪組織、臍帶血、臍帶或胎盤組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞，它們具有一定的多向分化潛能及抗炎和免疫調(diào)控能力等。用于干細(xì)胞治療的細(xì)胞制備技術(shù)和治療方案,具有多樣性、復(fù)雜性和特殊性。但作為一種

3、新型的生物治療產(chǎn)品,所有干細(xì)胞制劑都可遵循一個(gè)共同的研發(fā)過程，即從干細(xì)胞制劑的制備、體外試驗(yàn)、體內(nèi)動(dòng)物試驗(yàn),到植入人體的臨床研究及臨床治療的過程。整個(gè)過程的每一階段，都須對(duì)所使用的干細(xì)胞制劑在細(xì)胞質(zhì)量、安全性和生物學(xué)效應(yīng)方面進(jìn)行相關(guān)的研究和質(zhì)量控制。本指導(dǎo)原則提出了適用于各類可能應(yīng)用到臨床的干細(xì)胞（除已有規(guī)定的造血干細(xì)胞移植外）在制備和臨床前研究階段的基本原則。每個(gè)具體干細(xì)胞制劑的制備和使用過程，必須有嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)操作程序并按其執(zhí)行，以確保干細(xì)胞制劑的質(zhì)量可控性以及治療的安全性和有效性。每一研究項(xiàng)目所涉及的具體干細(xì)胞制劑，應(yīng)根據(jù)本指導(dǎo)原則對(duì)不同階段的基本要求，結(jié)合各自干細(xì)胞制劑及適應(yīng)癥的特殊性，

4、準(zhǔn)備、申請(qǐng)并實(shí)施相關(guān)的干細(xì)胞臨床前研究.二、干細(xì)胞制劑的質(zhì)量控制（一)干細(xì)胞的采集、分離及干細(xì)胞(系）的建立1。對(duì)干細(xì)胞供者的要求每一干細(xì)胞制劑都須具有包括供者信息在內(nèi)的、明確的細(xì)胞制備及生物學(xué)性狀信息。作為細(xì)胞制備信息中的重要內(nèi)容之一，需提供干細(xì)胞的獲取方式和途徑以及相關(guān)的臨床資料，包括供者的一般信息、既往病史、家族史等。既往史和家族史要對(duì)遺傳病(單基因和多基因疾病,包括心血管疾病和腫瘤等)相關(guān)信息進(jìn)行詳細(xì)采集。對(duì)用于異體干細(xì)胞臨床研究的供者，必須經(jīng)過檢驗(yàn)篩選證明無人源特定病毒（包括HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、CMV等）的感染，無梅毒螺旋體感染.必要時(shí)需要收集供者的ABO血型、

5、HLAI類和II類分型資料,以備追溯性查詢.如使用體外授精術(shù)產(chǎn)生的多余胚胎作為建立人類胚胎干細(xì)胞系的主要來源,須能追溯配子的供體,并接受篩選和檢測.不得使用既往史中患有嚴(yán)重的傳染性疾病和家族史中有明確遺傳性疾病的供者作為異體干細(xì)胞來源。自體來源的干細(xì)胞供者,根據(jù)干細(xì)胞制劑的特性、來源的組織或器官，以及臨床適應(yīng)癥，可對(duì)供體的質(zhì)量要求和篩查標(biāo)準(zhǔn)及項(xiàng)目進(jìn)行調(diào)整。2。干細(xì)胞采集、分離及干細(xì)胞（系)建立階段質(zhì)量控制的基本要求。應(yīng)制定干細(xì)胞采集、分離和干細(xì)胞(系)建立的標(biāo)準(zhǔn)操作及管理程序，并在符合GMP要求基礎(chǔ)上嚴(yán)格執(zhí)行。標(biāo)準(zhǔn)操作程序應(yīng)包括操作人員培訓(xùn);材料、儀器、設(shè)備的使用和管理；干細(xì)胞的采集、分離、純

6、化、擴(kuò)增和細(xì)胞（系）的建立;細(xì)胞保存、運(yùn)輸及相關(guān)保障措施,以及清潔環(huán)境的標(biāo)準(zhǔn)及常規(guī)維護(hù)和檢測等.為盡量減少不同批次細(xì)胞在研究過程中的變異性,研究者在干細(xì)胞制劑的制備階段應(yīng)對(duì)來源豐富的同一批特定代次的細(xì)胞建立多級(jí)的細(xì)胞庫,如主細(xì)胞庫（Master Cell Bank）和工作細(xì)胞庫(Working Cell Bank）。細(xì)胞庫中細(xì)胞基本的質(zhì)量要求，是需有明確的細(xì)胞鑒別特征,無外源微生物污染.在干細(xì)胞的采集、分離及干細(xì)胞（系）建立階段,應(yīng)對(duì)自體來源的、未經(jīng)體外復(fù)雜操作的干細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞鑒別、成活率及生長活性、外源致病微生物，以及基本的干細(xì)胞特性檢測.而對(duì)異體來源的干細(xì)胞，或經(jīng)過復(fù)雜的體外培養(yǎng)和操作后

7、的自體來源的干細(xì)胞，以及直接用于臨床前及臨床研究的細(xì)胞庫（如工作庫)中的細(xì)胞,除進(jìn)行上述檢測外，還應(yīng)進(jìn)行全面的內(nèi)外源致病微生物、詳細(xì)的干細(xì)胞特性檢測，以及細(xì)胞純度分析.干細(xì)胞特性包括特定細(xì)胞表面標(biāo)志物群、表達(dá)產(chǎn)物和分化潛能等。（二)干細(xì)胞制劑的制備1.培養(yǎng)基干細(xì)胞制劑制備所用的培養(yǎng)基成分應(yīng)有足夠的純度并符合無菌、無致病微生物及內(nèi)毒素的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，殘留的培養(yǎng)基對(duì)受者應(yīng)無不良影響；在滿足干細(xì)胞正常生長的情況下，不影響干細(xì)胞的生物學(xué)活性,即干細(xì)胞的“干性”及分化能力。在干細(xì)胞制劑制備過程中，應(yīng)盡量避免使用抗生素.若使用商業(yè)來源培養(yǎng)基，應(yīng)選擇有資質(zhì)的生產(chǎn)商并由其提供培養(yǎng)基的組成成分資料及相關(guān)質(zhì)量合格證明

8、.必要時(shí)，應(yīng)由專業(yè)檢定機(jī)構(gòu)對(duì)每批培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，并出具檢驗(yàn)報(bào)告。除特殊情況外，應(yīng)盡可能避免在干細(xì)胞培養(yǎng)過程中使用人源或動(dòng)物源性血清,不得使用同種異體人血清或血漿.如必須使用動(dòng)物血清,應(yīng)確保其無特定動(dòng)物源性病毒污染。嚴(yán)禁使用海綿體狀腦病流行區(qū)來源的牛血清。若培養(yǎng)基中含有人的血液成份,如白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和各種細(xì)胞因子等,應(yīng)明確其來源、批號(hào)、質(zhì)量檢定合格報(bào)告，并盡量采用國家已批準(zhǔn)的可臨床應(yīng)用的產(chǎn)品.2.滋養(yǎng)層細(xì)胞用于體外培養(yǎng)和建立胚胎干細(xì)胞及iPS細(xì)胞的人源或動(dòng)物源的滋養(yǎng)層細(xì)胞，需根據(jù)外源性細(xì)胞在人體中使用所存在的相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素，對(duì)細(xì)胞來源的供體、細(xì)胞建立過程引入外源致病微生物的風(fēng)險(xiǎn)等進(jìn)行相關(guān)的檢

9、驗(yàn)和質(zhì)量控制.建議建立滋養(yǎng)層細(xì)胞的細(xì)胞庫，并按細(xì)胞庫檢驗(yàn)要求進(jìn)行全面檢驗(yàn),特別是對(duì)人源或動(dòng)物源特異病毒的檢驗(yàn)。3。干細(xì)胞制劑的制備工藝應(yīng)制定干細(xì)胞制劑制備工藝的標(biāo)準(zhǔn)操作流程及每一過程的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）并定期審核和修訂；干細(xì)胞制劑的制備工藝包括干細(xì)胞的采集、分離、純化、擴(kuò)增和傳代，干細(xì)胞（系)的建立、向功能性細(xì)胞定向分化,培養(yǎng)基、輔料和包材的選擇標(biāo)準(zhǔn)及使用，細(xì)胞凍存、復(fù)蘇、分裝和標(biāo)記，以及殘余物去除等.從整個(gè)制劑的制備過程到輸入（或植入）到受試者體內(nèi)全過程，需要追蹤觀察并詳細(xì)記錄。對(duì)不合格并需要丟棄的干細(xì)胞制劑，需對(duì)丟棄過程進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)管理和記錄。對(duì)于剩余的干細(xì)胞制劑必須進(jìn)行合法和符合倫理要求

10、的處理,包括制定相關(guān)的SOP并嚴(yán)格執(zhí)行。干細(xì)胞制劑的相關(guān)資料需建檔并長期保存。應(yīng)對(duì)制劑制備的全過程，包括細(xì)胞收獲、傳代、操作、分裝等，進(jìn)行全面的工藝研究和驗(yàn)證，制定合適的工藝參數(shù)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),確保對(duì)每一過程的有效控制.(三)干細(xì)胞制劑的檢驗(yàn)1.干細(xì)胞制劑質(zhì)量檢驗(yàn)的基本要求為確保干細(xì)胞治療的安全性和有效性,每批干細(xì)胞制劑均須符合現(xiàn)有干細(xì)胞知識(shí)和技術(shù)條件下全面的質(zhì)量要求。制劑的檢驗(yàn)內(nèi)容,須在本指導(dǎo)原則的基礎(chǔ)上,參考國內(nèi)外有關(guān)細(xì)胞基質(zhì)和干細(xì)胞制劑的質(zhì)量控制指導(dǎo)原則,從生物技術(shù)產(chǎn)品、細(xì)胞制品和治療性干細(xì)胞產(chǎn)品三個(gè)層次綜合考慮，進(jìn)行全面的細(xì)胞質(zhì)量、安全性和有效性的檢驗(yàn)。同時(shí)，根據(jù)細(xì)胞來源及特點(diǎn)、體外處理程

11、度和臨床適應(yīng)癥等不同情況,對(duì)所需的檢驗(yàn)內(nèi)容做必要調(diào)整.另外,隨著對(duì)干細(xì)胞知識(shí)和技術(shù)認(rèn)識(shí)的不斷增加，細(xì)胞檢驗(yàn)內(nèi)容也應(yīng)隨之不斷更新.針對(duì)不同類型的干細(xì)胞制劑，根據(jù)對(duì)輸入或植入人體前誘導(dǎo)分化的需求，須對(duì)未分化細(xì)胞和終末分化細(xì)胞分別進(jìn)行必要的檢驗(yàn).對(duì)胚胎干細(xì)胞和iPS細(xì)胞制劑制備過程中所使用的滋養(yǎng)細(xì)胞，根據(jù)其細(xì)胞來源，也需進(jìn)行針對(duì)相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素的質(zhì)量控制和檢驗(yàn).為確保制劑的質(zhì)量及其可控性，干細(xì)胞制劑的檢驗(yàn)可分為質(zhì)量檢驗(yàn)和放行檢驗(yàn)。質(zhì)量檢驗(yàn)是為保證干細(xì)胞經(jīng)特定體外處理后的安全性、有效性和質(zhì)量可控性而進(jìn)行的較全面質(zhì)量檢驗(yàn)。放行檢驗(yàn)是在完成質(zhì)量檢驗(yàn)的基礎(chǔ)上,對(duì)每一類型的每一批次干細(xì)胞制劑，在臨床應(yīng)用前所應(yīng)進(jìn)行

12、的相對(duì)快速和簡化的細(xì)胞檢驗(yàn)。為確保制劑工藝和質(zhì)量的穩(wěn)定性,須對(duì)多批次干細(xì)胞制劑進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)；在制備工藝、場地或規(guī)模等發(fā)生變化時(shí),需重新對(duì)多批次干細(xì)胞制劑進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)。制劑的批次是指由同一供體、同一組織來源、同一時(shí)間、使用同一工藝采集和分離或建立的干細(xì)胞。對(duì)胚胎干細(xì)胞或iPS細(xì)胞制劑，應(yīng)視一次誘導(dǎo)分化所獲得的可供移植的細(xì)胞為同一批次制劑。對(duì)需要由多個(gè)供體混合使用的干細(xì)胞制劑,混合前應(yīng)視每一獨(dú)立供體或組織來源在相同時(shí)間采集的細(xì)胞為同一批次細(xì)胞.對(duì)于由不同供體或組織來源的、需要混合使用的干細(xì)胞制劑，必須提供所有獨(dú)立來源的細(xì)胞，在細(xì)胞質(zhì)量、免疫原性和生物學(xué)活性等方面均一性資料,以盡可能避免混合細(xì)胞制劑

13、可能具有的危險(xiǎn)因素。2。細(xì)胞檢驗(yàn)2.1 質(zhì)量檢驗(yàn)（1）細(xì)胞鑒別應(yīng)通過細(xì)胞形態(tài)、遺傳學(xué)、代謝酶亞型譜分析、表面標(biāo)志物及特定基因表達(dá)產(chǎn)物等檢測，對(duì)不同供體及不同類型的干細(xì)胞進(jìn)行綜合的細(xì)胞鑒別。（2）存活率及生長活性采用不同的細(xì)胞生物學(xué)活性檢測方法，如活細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞倍增時(shí)間、細(xì)胞周期、軟瓊脂糖膠內(nèi)克隆形成率、端粒酶活性等，判斷細(xì)胞活性及生長狀況。（3）純度和均一性通過檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物、遺傳多態(tài)性及特定生物學(xué)活性等，對(duì)制劑進(jìn)行細(xì)胞純度或均一性的檢測。對(duì)胚胎干細(xì)胞及iPS細(xì)胞植入人體前的終末誘導(dǎo)分化產(chǎn)物，必須進(jìn)行細(xì)胞純度和/或分化均一性的檢測。對(duì)于需要混合使用的干細(xì)胞制劑，需提供各獨(dú)立細(xì)胞來源之間細(xì)

14、胞表面標(biāo)志物、細(xì)胞活性、裝量、純度和生物學(xué)活性均一性的證據(jù)及標(biāo)準(zhǔn)。（4)無菌試驗(yàn)和支原體檢測應(yīng)依據(jù)現(xiàn)行版中華人民共和國藥典中的生物制品無菌試驗(yàn)和支原體檢測規(guī)程,對(duì)細(xì)菌、真菌及支原體污染進(jìn)行檢測.（5）細(xì)胞內(nèi)外源致病因子的檢測應(yīng)結(jié)合體內(nèi)和體外方法，根據(jù)每一細(xì)胞制劑的特性進(jìn)行人源及動(dòng)物源性特定致病因子的檢測.人源特定病毒包括HIV、HBV、HCV、EBV、CMV等;如使用過牛血清，須進(jìn)行牛源特定病毒的檢測;如使用胰酶等豬源材料，應(yīng)至少檢測豬源細(xì)小病毒；如胚胎干細(xì)胞和iPS細(xì)胞在制備過程中使用動(dòng)物源性滋養(yǎng)細(xì)胞，需進(jìn)行細(xì)胞來源相關(guān)特定動(dòng)物源性病毒的全面檢測。另外還應(yīng)檢測逆轉(zhuǎn)錄病毒。（6）內(nèi)毒素檢測應(yīng)依

15、據(jù)現(xiàn)行版中華人民共和國藥典中的內(nèi)毒素檢測規(guī)程，對(duì)內(nèi)毒素進(jìn)行檢測.（7）異常免疫學(xué)反應(yīng)檢測異體來源干細(xì)胞制劑對(duì)人總淋巴細(xì)胞增殖和/或?qū)Σ煌馨图?xì)胞亞群增殖能力的影響，或?qū)ο嚓P(guān)細(xì)胞因子分泌的影響，以檢測干細(xì)胞制劑可能引起的異常免疫反應(yīng)。（8）致瘤性對(duì)于異體來源的干細(xì)胞制劑或經(jīng)體外復(fù)雜操作的自體干細(xì)胞制劑，須通過免疫缺陷動(dòng)物體內(nèi)致瘤試驗(yàn)，檢驗(yàn)細(xì)胞的致瘤性.(9）生物學(xué)效力試驗(yàn)可通過檢測干細(xì)胞分化潛能、誘導(dǎo)分化細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和生理功能、對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)能力、分泌特定細(xì)胞因子、表達(dá)特定基因和/或蛋白等功能，判斷干細(xì)胞制劑與治療相關(guān)的生物學(xué)有效性.對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞，無論何種來源,應(yīng)進(jìn)行體外多種類型細(xì)胞（如成脂肪

16、細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞等)分化能力的檢測，以判斷其細(xì)胞分化的多能性（multipotency）。對(duì)未分化的胚胎干細(xì)胞和iPS細(xì)胞，須通過體外擬胚胎體形成能力，或在SCID鼠體內(nèi)形成畸胎瘤的能力，檢測其細(xì)胞分化的多能性（pluripotency）。除此以外，作為特定生物學(xué)效應(yīng)試驗(yàn)，項(xiàng)目申請(qǐng)者應(yīng)提供與其治療適應(yīng)癥相關(guān)的生物學(xué)效應(yīng)檢驗(yàn)內(nèi)容及結(jié)果。（10)培養(yǎng)基及其他添加成分殘余量的檢測應(yīng)對(duì)制劑制備過程中殘余的、影響干細(xì)胞制劑質(zhì)量和安全性的成分，如牛血清蛋白、抗生素、細(xì)胞因子等進(jìn)行檢測。2。2放行檢驗(yàn)項(xiàng)目申請(qǐng)者應(yīng)根據(jù)上述質(zhì)量檢驗(yàn)各項(xiàng)目中所明確的檢驗(yàn)內(nèi)容及標(biāo)準(zhǔn),針對(duì)每一類型干細(xì)胞制劑的特性，制定放行

17、檢驗(yàn)項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)。放行檢驗(yàn)項(xiàng)目應(yīng)能在相對(duì)短的時(shí)間內(nèi)，反映細(xì)胞制劑的質(zhì)量及安全信息。3。干細(xì)胞制劑的質(zhì)量復(fù)核細(xì)胞制劑的質(zhì)量復(fù)核包括細(xì)胞檢驗(yàn)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)復(fù)核。由中國食品藥品檢定研究院進(jìn)行細(xì)胞制劑的質(zhì)量復(fù)核，并出具檢驗(yàn)報(bào)告。為便于質(zhì)量復(fù)核,項(xiàng)目申請(qǐng)者應(yīng)向質(zhì)量復(fù)核單位提供臨床前干細(xì)胞制劑研究的綜合報(bào)告，報(bào)告內(nèi)容包括詳細(xì)的干細(xì)胞制劑制備工藝、治療適應(yīng)癥、所用輔料、包材，以及制備工藝各環(huán)節(jié)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。在進(jìn)行放行檢驗(yàn)時(shí),項(xiàng)目申請(qǐng)者需提供以往質(zhì)量檢驗(yàn)的檢驗(yàn)報(bào)告復(fù)印件。(四)干細(xì)胞制劑的質(zhì)量研究在滿足上述干細(xì)胞制劑質(zhì)量檢驗(yàn)要求的基礎(chǔ)上,建議項(xiàng)目申請(qǐng)者在申報(bào)臨床應(yīng)用前的各階段,利用不同的體外實(shí)驗(yàn)方法對(duì)干細(xì)胞制劑進(jìn)行全

18、面的安全性、有效性及穩(wěn)定性研究.1.干細(xì)胞制劑的質(zhì)量及特性研究1。1 生長活性和狀態(tài)生長因子依賴性的檢測:在培養(yǎng)生長因子依賴性的干細(xì)胞時(shí),需對(duì)細(xì)胞生長行為進(jìn)行連續(xù)檢測,以判斷不同代次的細(xì)胞對(duì)生長因子的依賴性.若細(xì)胞在傳代過程中，特別是在接近高代次時(shí)，失去對(duì)生長因子的依賴，則不能再繼續(xù)將其視為合格的干細(xì)胞而繼續(xù)培養(yǎng)和使用.1.2 致瘤性和促瘤性由于大多數(shù)間充質(zhì)干細(xì)胞制劑具有相對(duì)的弱致瘤性，建議項(xiàng)目申請(qǐng)者在動(dòng)物致瘤性試驗(yàn)中,針對(duì)不同類型的干細(xì)胞，選擇必要數(shù)量的細(xì)胞和必要長的觀察期.建議在動(dòng)物致瘤性試驗(yàn)不能有效判斷致瘤性時(shí),有必要檢測與致瘤性相關(guān)的生物學(xué)性狀的改變，如細(xì)胞對(duì)生長因子依賴性的改變、基因

19、組穩(wěn)定性的改變、與致瘤性密切相關(guān)的蛋白（如癌變信號(hào)通路中的關(guān)鍵調(diào)控蛋白）表達(dá)水平或活性的改變、對(duì)凋亡誘導(dǎo)敏感性的改變等，以此來間接判斷干細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的可能性。目前，普遍認(rèn)為間充質(zhì)干細(xì)胞“不致瘤”或具有“弱致瘤性”，但不排除其對(duì)已存在腫瘤的“促瘤性"作用.因此,建議項(xiàng)目申請(qǐng)者根據(jù)各自間充質(zhì)干細(xì)胞制劑的組織來源和臨床適應(yīng)癥的不同，設(shè)計(jì)相應(yīng)的試驗(yàn)方法，以判斷其制劑的“促瘤性"。1。3生物學(xué)效應(yīng)隨著研究的進(jìn)展，建議項(xiàng)目申請(qǐng)者針對(duì)臨床治療的適應(yīng)癥,不斷研究更新生物學(xué)效應(yīng)檢測方法。如研究介導(dǎo)臨床治療效應(yīng)的關(guān)鍵基因或蛋白的表達(dá),并以此為基礎(chǔ)提出與預(yù)期的生物學(xué)效應(yīng)相關(guān)的替代性生物標(biāo)志物(s

20、urrogate biomarker）.2.干細(xì)胞制劑穩(wěn)定性研究及有效期的確定應(yīng)進(jìn)行干細(xì)胞制劑在儲(chǔ)存（液氮凍存和細(xì)胞植入前的臨時(shí)存放)和運(yùn)輸過程中的穩(wěn)定性研究.檢測項(xiàng)目應(yīng)包括細(xì)胞活性、密度、純度、無菌性等。根據(jù)干細(xì)胞制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果,確定其制劑的保存液成份與配方、保存及運(yùn)輸條件、有效期,同時(shí)確定與有效期相適應(yīng)的運(yùn)輸容器和工具，以及合格的細(xì)胞凍存設(shè)施和條件。3.快速檢驗(yàn)方法的研發(fā)項(xiàng)目申請(qǐng)者應(yīng)根據(jù)新的干細(xì)胞基礎(chǔ)及實(shí)驗(yàn)技術(shù)研究成果，針對(duì)各自干細(xì)胞制劑的特性、特定的臨床適應(yīng)癥,研發(fā)新的反映干細(xì)胞制劑質(zhì)量、安全性和有效性的快速檢驗(yàn)方法。三、干細(xì)胞制劑的臨床前研究應(yīng)進(jìn)行干細(xì)胞制劑的臨床前研究，為治療方案

21、的安全性和有效性提供支持和依據(jù)。在臨床前研究方案中,項(xiàng)目申請(qǐng)者應(yīng)設(shè)計(jì)和提出與適應(yīng)癥相關(guān)的疾病動(dòng)物模型,用于預(yù)測干細(xì)胞在人體內(nèi)可能的治療效果、作用機(jī)制、不良反應(yīng)、合理的輸入或植入途徑和劑量等臨床研究所需的信息。項(xiàng)目申請(qǐng)者應(yīng)在合適的動(dòng)物模型基礎(chǔ)上，研究和建立干細(xì)胞有效標(biāo)記技術(shù)和動(dòng)物體內(nèi)干細(xì)胞示蹤技術(shù),以便于研究上述內(nèi)容，特別是干細(xì)胞的體內(nèi)存活、分布、歸巢、分化和組織整合等功能的研究。在綜合動(dòng)物模型研究基礎(chǔ)上，項(xiàng)目申請(qǐng)者應(yīng)對(duì)干細(xì)胞制劑的安全性和生物學(xué)效應(yīng)進(jìn)行合理評(píng)價(jià).（一)安全性評(píng)價(jià)1。毒性試驗(yàn)可通過合適的動(dòng)物試驗(yàn)?zāi)Ｐ陀^察干細(xì)胞制劑各種可能的毒性反應(yīng)，如細(xì)胞植入時(shí)和植入后的局部和整體的毒性反應(yīng)。如難

22、以采用相關(guān)動(dòng)物評(píng)價(jià)人干細(xì)胞的毒性，可考慮盡可能模擬臨床應(yīng)用方式，采用動(dòng)物來源相應(yīng)的干細(xì)胞制劑，以高于臨床應(yīng)用劑量回輸動(dòng)物體內(nèi)，觀察其毒性反應(yīng)。2。異常免疫反應(yīng)對(duì)干細(xì)胞制劑特別是異體來源、經(jīng)體外傳代培養(yǎng)和特殊處理的自體或異體來源的制劑，應(yīng)通過體外及動(dòng)物試驗(yàn)評(píng)價(jià)其異常免疫反應(yīng)，包括對(duì)不同免疫細(xì)胞亞型及相關(guān)細(xì)胞因子的影響.對(duì)胚胎干細(xì)胞及iPS細(xì)胞，在體外誘導(dǎo)分化后重新表達(dá)供體的HLA抗原分子，植入體內(nèi)后可能形成的免疫排斥反應(yīng),需進(jìn)行有效評(píng)價(jià)。3。致瘤性對(duì)高代次的或經(jīng)過體外復(fù)雜處理和修飾的自體來源以及各種異體來源的干細(xì)胞制劑，應(yīng)進(jìn)行臨床前研究階段動(dòng)物致瘤性評(píng)估.建議項(xiàng)目申請(qǐng)者選擇合適的動(dòng)物模型,使用合

23、適數(shù)量的干細(xì)胞、合理的植入途徑和足夠長的觀察期，以有效評(píng)價(jià)制劑的致瘤性。4.非預(yù)期分化非預(yù)期分化包括非靶細(xì)胞分化或非靶部位分化.建議項(xiàng)目申請(qǐng)者利用特定的檢測技術(shù)，在體內(nèi)動(dòng)物試驗(yàn)中研究、評(píng)估和監(jiān)控干細(xì)胞非預(yù)期分化的可能性。（二)有效性評(píng)價(jià)1.細(xì)胞模型(見前述干細(xì)胞制劑的質(zhì)量研究）2。動(dòng)物模型用于觀察植入的干細(xì)胞或其分化產(chǎn)物改變模型中疾病的病理進(jìn)程;研究干細(xì)胞的歸巢能力和免疫調(diào)節(jié)功能；通過分析干細(xì)胞植入后,特定細(xì)胞因子和/或特定基因表達(dá)情況,提出替代性生物學(xué)效應(yīng)標(biāo)志物.若所申請(qǐng)的研究方案，因目前國際上干細(xì)胞生物學(xué)知識(shí)和技術(shù)方面的局限性,無法提出有效的體內(nèi)動(dòng)物模型研究內(nèi)容，則應(yīng)在立項(xiàng)依據(jù)中進(jìn)行全面細(xì)

24、致的說明.名詞解釋：干細(xì)胞制劑（Stem cellbased medicinal products）：是指用于治療疾病或改善健康狀況的、以不同類型干細(xì)胞為主要成分、符合相應(yīng)質(zhì)量及安全標(biāo)準(zhǔn),且具有明確生物學(xué)效應(yīng)的細(xì)胞制劑。胚胎干細(xì)胞（Embryonic stem cell)：源自第5-7天的胚胎中內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的初始（未分化）細(xì)胞,可在體外非分化狀態(tài)下“無限制地”自我更新,并且具有向三個(gè)胚層所有細(xì)胞分化的潛力,但不具有形成胚外組織(如胎盤)的能力。成體干細(xì)胞（Somatic stem cell）：位于各種分化組織中未分化的干細(xì)胞，這類干細(xì)胞具有有限的自我更新和分化潛力。間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchym

25、al stromal/stem cell， MSC)：一類存在于多種組織（如骨髓、臍帶血和臍帶組織、胎盤組織、脂肪組織等），具有多向分化潛力，非造血干細(xì)胞的成體干細(xì)胞.這類干細(xì)胞具有向多種間充質(zhì)系列細(xì)胞（如成骨、成軟骨及成脂肪細(xì)胞等）或非間充質(zhì)系列細(xì)胞分化的潛能，并具有獨(dú)特的細(xì)胞因子分泌功能。祖細(xì)胞（Progenitors）：一類只能向特定細(xì)胞系列分化，并且只具備有限的分裂增殖能力的成體細(xì)胞.前體細(xì)胞（Precursors）:一類只能向特定終末分化細(xì)胞分化的，較祖細(xì)胞更有限的增殖能力的成體細(xì)胞。造血干細(xì)胞(Hematopoietic stem cell）：具有高度自我更新能力和多向分化潛能的造

26、血前體細(xì)胞，可分化成紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板和淋巴細(xì)胞。誘導(dǎo)的多能性干細(xì)胞（Induced pluripotent stem cell, iPS）：一類通過基因轉(zhuǎn)染等細(xì)胞重編程技術(shù)人工誘導(dǎo)獲得的,具有類似于胚胎干細(xì)胞多能性分化潛力的干細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞系（Embryonic stem cell line）：在體外培養(yǎng)的條件下，可保持未分化狀態(tài)連續(xù)增殖的胚胎干細(xì)胞。全能性（Totipotent）:是早期數(shù)天胚胎中，具有分化成機(jī)體所有類型細(xì)胞和形成完全胚胎能力的干細(xì)胞。亞全能性（Pluripotent）:是具有形成機(jī)體各種類型細(xì)胞，即所有三胚層來源細(xì)胞的能力，但不具有形成胚外胎組織細(xì)胞的能力。多能性(

27、Multipotent):是指具有形成機(jī)體內(nèi)超過一種類型細(xì)胞的能力,但往往是針對(duì)特定細(xì)胞系列的。滋養(yǎng)層細(xì)胞（Feeder layer）:是指通過細(xì)胞-細(xì)胞相互作用，或分泌蛋白或其他物質(zhì),位于胚胎干細(xì)胞和iPS細(xì)胞的培養(yǎng)底層，以支持這些干細(xì)胞生長的動(dòng)物源性或人源性細(xì)胞.畸胎瘤（Teratoma)：一種含有三個(gè)胚層組織細(xì)胞和分化的組織的良性腫瘤.參考文獻(xiàn):1。人體細(xì)胞治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則（2003)2。中華人民共和國藥典2010版，第三部。3.European PharmacopeiaMethod 5。2.3-Cell substrates for the production of

28、 vaccines for human use。4。WHO Recommendations for the evaluation of animal cell cultures as substrates for the manufacture of biological medicinal products and for the characterization of cell banks (2010)。5. FDA Guidance for IndustryCharacterization and Qualification of Cell Substrates and other Biological Materials Used in the Production of Viral Vaccines for Infectious Disease Indications （2010)