快速學會做藥敏試驗

1、快速學會做藥敏試驗一、藥敏實驗在臨床診斷中應用意義：1、在畜牧產(chǎn)業(yè)中，各種細菌性疾病很容易給養(yǎng)殖業(yè)造成經(jīng) 濟損失，使用抗生素防治細菌性疾病成為經(jīng)常性工作。但在 養(yǎng)殖過程中不科學的、盲目的濫用抗生素，造成細菌產(chǎn)生耐 藥性問題正變得越來越突出，使抗菌藥的療效降低，療程延 長，還使死亡率升高和治療費用增加，給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經(jīng) 濟損失。 2 、耐藥菌株還可能將耐藥性基因由動物轉移給人 類，對人類健康造成潛在威脅。如何避免濫用抗生素，藥敏 試驗在臨床診斷中的應用就顯得重要了。3 、藥敏實驗可以相對快速有效地檢測病原菌對各種抗菌藥的敏感性，指導臨 床合理用藥、靈活選藥?？梢栽诒镜貐^(qū)容易買到的藥品中選 出最

2、敏感的藥物，既能縮短病程，又能避免盲目用藥，減少 費用。 4 、因為藥敏實驗在動物體外進行，操作相對簡單， 成本相對較低，既經(jīng)濟又快速有效，可以對流行病學調查進 行監(jiān)控，控制和預防耐藥菌株的流行，在生產(chǎn)中具有非常重 要現(xiàn)實意義。二、藥敏試驗的步驟：1、瓊脂平板制備按照營養(yǎng)瓊脂干粉說明來進行稀釋，稀釋后瓊脂放在微波爐里進 行加熱，加熱后瓊脂移至超凈工作臺中，靜置待溫度降至50 C（手指能接受的最高溫度） 左右時， 開始倒平板， 內徑 225px 平皿每個平皿倒入約 10ml 瓊脂液，倒入后迅速混勻鋪滿平皿底部。2、藥液制備：按藥品使用說明書上的配料或飲水濃度配置 按 1g 需加多少毫升水或配多少

3、毫克飼料，就相當于配制藥 液所加蒸餾水的毫升數(shù)。如 10g 藥物可配 50kg 飼料，其換 算方法為： 1g 本品加 5000ml 蒸餾水。此溶液液即為用于做 藥敏試驗的藥液。 3 、藥敏紙片制備：要用質量較好的定性 濾紙，用普通的打孔器打成直徑 6mm 的圓形小紙片。取圓 紙片 50 片放入清潔干燥的小瓶或小平皿中，以單層牛皮紙 扎口或包扎。經(jīng)15磅15-20分鐘高壓滅菌后，置于 37 C溫 箱或烘箱中一天，使完全干燥。按每張紙片飽和吸水量為 0.01ml 計，在上述含有 50 片紙片的小瓶內加入藥液 0.5ml ， 不時翻動，使濾紙片將藥液均勻吸凈，一般浸泡 30 分鐘即 可。同時在記錄藥

4、物名稱， 于37C溫箱過夜。在溫箱或烘箱 中的時間不宜過長，以免某些抗生素失效。青霉素、金霉素 宜在低溫下真空干燥。干燥后即密封。切勿受潮，置陰暗干 燥處或家用冰箱中保存，有效期 4-6 個月。 4、病料接種取新鮮病料組織于超凈工作臺中或酒精燈旁， 剪取新鮮組織斷面無菌涂抹到營養(yǎng)瓊脂板上，涂布整個瓊脂 平板表面，反復涂布幾次，保證涂布均勻。5、貼藥敏紙片用無菌鑷子將紙片放于固體培養(yǎng)基表面并輕壓，使紙片與培 養(yǎng)基表面完全接觸。為了能準確觀察結果，要求藥敏紙片均 勻分布于培養(yǎng)基上，位置安排適中，防止出現(xiàn)抑制圈重疊。一般各紙片中心相距應大于 24mm ，可在平皿中央貼一片， 外周等距離貼 7 9 片

5、。記住每種藥敏紙片的名稱。6、溫箱培養(yǎng)貼完藥敏紙片的平皿倒放在37 C恒溫箱中培養(yǎng)24 小時以上。三、藥敏實驗結果觀察 四、藥敏實驗選藥原則 1 、在選擇高敏藥物時還應考慮藥物 的吸收途徑。因為藥敏試驗是藥液直接和細菌接觸，而在給 畜禽用藥時，必須通過機體的吸收才能使藥物發(fā)揮療效，所 以在給畜禽用藥時，高敏藥物一定要配合適宜的給藥方法， 并予以足夠劑量、足夠療程，才會取得好的治療效果。 2、 藥敏試驗結果僅為臨床選擇高敏藥物的參考。因動物機體及 環(huán)境等因素影響，藥物的藥敏試驗與臨床治療效果的符合率 一般為 7080% ，所以也不能過分地依賴藥敏試驗。 如發(fā)現(xiàn) 療效不顯著應及時換藥。 3、藥敏試

6、驗確定的首選藥物不是 一成不變。隨著藥物使用頻率的增加及新特藥的不斷出現(xiàn)， 細菌對原先的高敏感藥物可能不再敏感。因此，定期進行藥 敏試驗了解本場細菌對抗菌藥的敏感性情況是很有必要的。 4、窄譜抗生素能解決的問題不選廣譜抗生素，一種抗生素 可達到治療作用時，不要用兩種藥物聯(lián)合應用。必須應用兩 種抗生素時，應選擇聯(lián)合應用具有協(xié)同作用的藥物。 5、避 開已經(jīng)使用過的藥物或其同類藥物，發(fā)病期間已用過的藥物 或同類藥物一般不用。五、藥敏片的制作藥敏片一般可以由 廠家提供，也可以自己制作，制作藥敏片直接選用各藥廠的成品藥來做。 制作藥敏片設備和器皿： 需要恒溫箱、 平皿（直 徑 90mm 或更大一點的都行

7、） 、燒杯、蒸餾水、濾紙、打孔 器。具體的操作步驟： 1、將濾紙用打孔器打好適量直徑為 6mm 的小圓紙片。 2 、將所需培養(yǎng)皿或玻璃小瓶、玻璃棒、 微量吸管、鑷子、濾紙、濾紙片等進行高壓滅菌，一般121 C, 0.15帕斯卡，1520min。3、在烘干箱或恒溫箱內 3760 C, 放置1224小時直至烘干。4、將要選的藥用蒸餾水按藥品 使用治療量的比例配制成藥液， 按 5ml 藥液 3040 個小圓紙 片浸泡。 5、將浸泡好的藥敏片用鑷子夾出，放到另一干燥 平皿中， 注意藥敏做的多時， 放濕藥敏片不要完全重疊地放。 這樣會使有的藥敏片在干燥過程中所沾的藥量不一，影響您 對藥的評價。因為有的藥

8、不溶，藥廠會加一些助溶劑，干燥 過程中有的藥會析出。這時藥敏片疊放位置會影響所沾的藥 量的。6、將盛濕藥敏片的平皿放到恒溫箱中，溫度37C,放置 1224 小時，不同的藥干的時間也可能不一樣，所以 自己需要視情況而定。在這個過程中要注意勤翻一下藥敏片， 盡量不要讓它們沾在一起。 7、藥敏片的儲藏：將烘干的藥 敏片分裝，標上藥名和日期，儲存要注意防潮。短期可4C冷藏保存36個月，長期要-20C冷凍保存。六、培養(yǎng)基的 制備：獸醫(yī)臨床上一般用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。將成品營養(yǎng)瓊脂 培養(yǎng)基粉按說明取適量，加蒸餾水溶解，放入高壓滅菌鍋， 121 C滅菌1520min，冷卻到50C左右，傾注到已滅過菌的培養(yǎng)皿中，

9、厚度約 56mm，冷卻凝固后使用或放入 4C冰箱中備用。七、接種細菌：在對病死畜禽解剖時，切取一 小塊肝、脾等器官，使用新鮮創(chuàng)面在培養(yǎng)基上涂滿，操作時 就避免感染其他雜菌。八、粘貼藥敏紙片：將鑷子于酒精燈 火焰上滅菌后略停，取藥敏片貼到培養(yǎng)基表面。為了使藥敏 片與培養(yǎng)基緊密相貼，可用鑷子輕輕按壓幾下藥敏紙片。每 個培養(yǎng)皿所用藥敏紙片的數(shù)量和分布可根據(jù)培養(yǎng)皿的大小 確定，一般采用中央貼一片，周圍等距離貼 5 至 6 片。九、 培養(yǎng)細菌：將貼上藥敏紙片的培養(yǎng)基置于 37 C恒溫培養(yǎng)箱中 培養(yǎng) 12 18h ，觀察抑菌圈大小，判定結果。在涂有細菌的 瓊脂平板上，抗菌藥物在瓊脂內向四周擴散，其濃度呈梯度 遞減，因此在紙片周圍一定距離內的細菌生長受到抑制，形 成抑菌圈。按抑菌圈直徑大小判定敏感度高低，一般抑菌圈 直徑在 20mm 以上為極敏， 1520mm 為高敏， 1015mm 為中敏， 10mm 以下為低敏，無抑菌圈為不敏。十、指導用 藥：做藥敏試驗之后，應選擇高敏藥物進行治療，也可選用 兩種藥物協(xié)助使用，以減少耐藥菌株。因為藥液必須通過機 體吸收才能達到一定效果，所以選用高敏藥物同時，還應考 慮藥物的吸收途徑，配合適宜的給藥方法，才能達到更好的 治療效果。十一、注意事項：為了使試驗結果安全可靠，要 注意以下幾個影響藥敏結果的因素：同一平板上細菌