當(dāng)前乳腺癌診治中病理學(xué)新發(fā)展介紹

1、當(dāng)前乳腺癌診治中的病理學(xué)新發(fā)展關(guān)鍵詞：乳腺癌；病理學(xué)乳 腺 癌是 我國(guó)女 性常 見(jiàn)的 一種 惡性腫 瘤，其死 亡率僅次 于肺癌 而位居 第 二位 ，且 發(fā)病 率 呈直 線上 升趨勢(shì) 。據(jù) 上 海市統(tǒng) 計(jì)，乳 腺 癌 發(fā) 病 率 已 從 1972 年的 17/10 萬(wàn)上 升 至 1993 年 的 37/10 萬(wàn)。近 年來(lái) ， 在有 關(guān) 乳 腺癌 的 病 因、 診 斷、 治療 、 預(yù)后判 斷 及乳 腺 癌 發(fā) 生 、 發(fā) 展 過(guò)程中 的 分子 生 物 學(xué) 變化 等的 研究 出 現(xiàn)了 許多 新 的 進(jìn) 展 。、關(guān)于乳腺癌的早期診斷乳 腺 癌 的 早 期診 斷需 要 病 理 科 、 外 科和 放 射科

2、 醫(yī) 師的 緊密 協(xié) 作 ：以 往 的 早 期 乳 腺 癌 病 人 多 因 能 觸 及 腫 塊 ，而 腫 塊 較 小 ，被 認(rèn) 為 尚處于 臨 床早 期，實(shí) 際 上 這 并 非真 正意義 上 的 早期診斷 。早 期診 斷 應(yīng) 是 針對(duì) 在臨 床 上 觸 及不 到 腫塊 的 乳 腺 癌 病 人 而言 ， 即亞 臨床 狀 態(tài)。 乳 腺 X 線 檢 查是 早期 發(fā)現(xiàn) 乳 腺 癌 的 重 要方法 。 某些臨 床觸及 不 到 的 病 變， 在 X 線 片上 可表現(xiàn)為 小結(jié)節(jié) 、 微小 鈣化或局 限致 密 區(qū)， 結(jié) 合 病理 學(xué) 檢 查可在 這些 病變 中 發(fā)現(xiàn) 早期 乳 腺癌 。 乳 腺 X 線 立體定

3、 位 穿刺 活 檢 是 90 年 代開(kāi)展 起 來(lái)的 新 技術(shù)。 它是 在常 規(guī)乳 腺 X 線片 的 基礎(chǔ)上 ，通 過(guò)在電 子 計(jì)算 機(jī)立體定 位 儀的 導(dǎo) 引下，將 乳 腺 穿刺針 直 接刺 入可 疑病 變 區(qū)，取 得 活 體組 織標(biāo) 本，進(jìn) 行 組織病 理 學(xué) 檢 查。 該 技術(shù)具 有 先進(jìn)、 定 位 準(zhǔn)確、 操 作簡(jiǎn) 單、 安全可 靠、 病 人 痛 苦小，準(zhǔn) 確率 高 的 優(yōu)點(diǎn) 。應(yīng) 用此 技術(shù)為 常規(guī) 檢查 無(wú) 法確診的 某些乳 腺 微小 病 變的 早期 診斷開(kāi) 辟了 廣闊 的 前景 。對(duì) 病 理 醫(yī)師 來(lái) 說(shuō)，該 技 術(shù) 的 優(yōu)勢(shì) 在于 彌 補(bǔ)了 外科 切 取活 檢 和針 吸細(xì) 胞 學(xué)

4、 檢 查 定位 困難 的 不 足。由 于 所取標(biāo) 本有 一 定體 積，組 織 量多 ，可 進(jìn) 行組織病 理學(xué) 檢 查，所 以價(jià) 值頗大 ，既 可為 臨床 基礎(chǔ)研 究提 供 更多的 資 料，又 可望 提高 乳 腺 微小 病 變 的 早期 診斷 水平 。立 體 定向 進(jìn)行乳 腺活 檢的 方法 也在日 益更新 ，如由傳統(tǒng) 的傳統(tǒng) 針 芯 活 檢 (conventional core biopsy， CCB)， 真 空 輔 助 針 芯 活 檢 (vacuum-assi sted core biopsy , VA CB)發(fā)展到今 日 的高級(jí)乳腺活檢 (adva n ced breast biopsy i

5、n st rum e ntati on，A B BI) 1 。A B B I 具有 一次性 取 材，組 織塊大 且結(jié)構(gòu) 完整 的 特 點(diǎn) ，可 使 病 理 診斷的 準(zhǔn)確性 大大提 高 。相 比較而言 ，傳 統(tǒng)的 細(xì)針穿 刺活 檢只 能 依據(jù)細(xì)胞 學(xué) 特征 做診斷 。但 需 要注意的 是，這 些 檢 查不 適用 于判 斷 腫瘤邊緣 是否切 除干凈 以 及不 典 型 增 生 、 放射 狀疤 痕 的 診 斷。病理學(xué)上，導(dǎo)管上皮不典型增生(ADH )與導(dǎo)管內(nèi)癌(DCIS )、小 葉 不 典 型 增 生（ A LH ） 與 小 葉 原 位 癌 （ LC I S） 的 鑒 別 一 直 是 一 個(gè) 難 題

6、。 嚴(yán) 格 來(lái) 說(shuō) ， A D H 增 生 的 單 形 性 圓 形 細(xì) 胞 累 及 的 導(dǎo) 管 或 聚 集 的 小 導(dǎo) 管 橫 切 面 不 應(yīng) 超 過(guò) 2 mm， 有 時(shí) 肌 上 皮 也 參 與 增 生 。 當(dāng) 增 生 時(shí) 導(dǎo) 管 內(nèi) 有 少 量 癌 細(xì) 胞 特 征 出 現(xiàn) ，而 整 個(gè) 結(jié) 構(gòu) 仍 象 典 型 的 導(dǎo) 管 內(nèi) 上 皮 增 生 時(shí) ， 仍 應(yīng) 診 斷 為 A D H。 按 Page 等 的 標(biāo) 準(zhǔn) 2 ， D CIS 應(yīng) 至 少 在 2 個(gè) 導(dǎo) 管 腔 內(nèi) 具 有 下 列 特 點(diǎn) ： （1）細(xì) 胞 一 致 性 ； （2）細(xì) 胞 之 間 腔 隙圓而規(guī)則或形成微乳頭的細(xì)胞形態(tài)一致；

7、（3）細(xì)胞核深染。ALH 與 LC I S 相 比 細(xì) 胞 較 粘 著 。 A LH 往 往 只 是 部 分 小 葉 單 元 被 累 及 ， 而 LC I S 常 累 及 1 個(gè) 或 多 個(gè) 小 葉 單 元 的 大 部 分 。 A LH 腺 泡 腔 不 完 全 消 失 ， 仍 清 晰 可 見(jiàn) ， 而 LC IS 腺 泡 腔 常 完 全 消 失 。 不 典 型 增 生 與 原 位 癌 在 形 態(tài) 上 有 許 多 相 似 之 處 ， 且 有 報(bào) 道 在 A DH 中 發(fā) 現(xiàn) 部 分 上 皮 細(xì) 胞 的 克 隆 性 增 殖 ，因 此 從 形 態(tài) 上 鑒 別 不 典 型 增 生 與 原 位 癌 往 往

8、 帶 有 一 定 的 主 觀 性 。乳 腺 癌 的 早 期 診 斷 依 賴 分 子 生 物 學(xué) 和 分 子 流 行 病 學(xué) 新 技 術(shù) ：通 過(guò) 傳 統(tǒng) 病 理 形 態(tài) 來(lái) 早 期 診 斷 乳 腺 癌 的 概 念 已 逐 步 發(fā) 生 了 改 變 。隨 著 科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，乳腺癌的研究由細(xì)胞病理學(xué)進(jìn)入分子病理學(xué)領(lǐng) 域 ：乳 腺 癌 中 越 來(lái) 越 多 的 分 子 缺 陷 被 揭 示 ，許 多 分 子 生 物 學(xué) 技 術(shù) 被 用 于 乳 腺 癌 的 早 期 診 斷 ，分 子 病 理 診 斷 已 逐 步 成 為 乳 腺 癌 診 斷 的 一 個(gè) 重 要 內(nèi) 容 。國(guó) 外 已 有 報(bào) 道 ，通 過(guò) 針

9、吸 活 檢 組 織 或 細(xì) 胞 學(xué) 穿 刺 進(jìn) 行 乳 腺 可 疑 病 變 中 微 量 D NA 或 RNA 的 提 取 ，并 從 分 子 水 平 檢 測(cè) 基 因 異 常 ，可 早 期 發(fā) 現(xiàn) 乳 腺 癌 。較 多 的 報(bào) 道 還 包 括 對(duì) 有 家 族 性 乳 腺 癌 病 史 的 特 定 人 群 進(jìn) 行 B RCA 1、 B RCA 2 基 因 異 常 的 檢 測(cè) 3 ， 對(duì) 高 危 人 群 進(jìn) 行 端 粒 酶 活 性 、 8q 染 色 體 短 臂 缺 失 的 檢 測(cè) 4 等 。 有 家 族 性 乳 腺 癌 病 史 的 女 性 ，如 果 攜 帶 BRCA 1 基 因 突 變 ，在 40 歲

10、左 右 約 20%發(fā) 生 乳 腺 癌 ， 到 50 歲 左 右 達(dá) 51%， 70 歲 左 右 達(dá) 87%。 檢 測(cè) BRCA 1 基 因 的 胚 系 突 變 ，有 利 于 高 危 人 群 的 早 期 發(fā) 現(xiàn) 和 早 期 治 療 ， 降低乳腺癌的死亡率。但從我國(guó)國(guó)情來(lái)看，大規(guī)模普查費(fèi)用昂貴， 且 有 家 族 史 的 乳 腺 癌 病 人 B RCA 1、 B RCA 2 基 因 突 變 率 報(bào) 道 不 一 ， 因此某些檢測(cè)的實(shí)用價(jià)值還需探討。對(duì)普查陽(yáng)性者如何進(jìn)一步處 理 、對(duì) 這 些 人 由 此 產(chǎn) 生 的 心 理 壓 力 及 某 些 倫 理 問(wèn) 題 該 如 何 解 決 等 還 需進(jìn)行大量深入的

11、工作。二、乳腺癌的預(yù)后指標(biāo)白 陽(yáng) 高 白淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移仍是目前判斷預(yù)后和制定治療方案的主要參考指 標(biāo) 。然 而 單 靠 淋 巴 結(jié) 轉(zhuǎn) 移 狀 況 來(lái) 評(píng) 估 病 人 的 預(yù) 后 ，將 影 響 對(duì) 相 當(dāng) 數(shù) 量 病 人 的 正 確 判 斷 。目 前 已 經(jīng) 明 確 ，不 利 于 乳 腺 癌 預(yù) 后 的 因 素 包 括 K i -67、 增 殖 細(xì) 胞 核 抗 原 （ PC N A ） 等 增 殖 指 數(shù) 增 高 ， c-erbB -2 蛋 的 過(guò) 度 表 達(dá) 、 p53 基 因 突 變 、 癌 胚 抗 原 （ CEA ） 、 組 織 蛋 白 酶 D 性 等 ； 有 利 于 預(yù) 后 的 因 素 有

12、 雌 激 素 受 體 （ER）、 PS2 陽(yáng) 性 、 nm23 表 達(dá) 、 p 2 7 高 表 達(dá) 等 。 國(guó) 際 上 最 新 報(bào) 道 抗 細(xì) 胞 凋 亡 的 多 功 能 蛋BAG-1 5:、纖維蛋白溶酶原激活抑制劑-1（PAI-1） 6:、血漿血 小板反應(yīng)蛋白（PTS P）也是與乳腺癌預(yù)后獨(dú)立相關(guān)的因素。但是 直到目前為止，即使某些出現(xiàn)頻率較高的染色體、基因結(jié)構(gòu)改變或 蛋白表達(dá)的異常， 也還沒(méi)完全成為適合于臨床常規(guī)應(yīng)用的檢測(cè)指 標(biāo)。 其原因有如下幾方面：（1） 乳腺癌的組織學(xué)類型較多， 而各 種報(bào)道中分析的腫瘤類型不盡相同。 （2） 檢測(cè)的預(yù)后指標(biāo)種類廣 泛， 包括蛋白 或其他抗原、 染色體

13、、 mRNA、 DNA 等。 （3） 各種 檢測(cè)技術(shù)的規(guī)范性還欠佳。 （4） 研究標(biāo)本來(lái)自新鮮組織還是細(xì)胞 系， 是否甲醛固定、 石蠟包埋組織， 也可能造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的差異。 預(yù)后因素研究的種種復(fù)雜性，要求我們立足于大樣本材料，用統(tǒng)一 的診斷標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范化的技術(shù)進(jìn)行分析，必要時(shí)可開(kāi)展多單位、多部 門的 協(xié)作。 我們認(rèn)為 c-erbB-2、 ER、 Ki-67、 DNA 倍體數(shù)這幾個(gè) 指 標(biāo)的臨床意義明確，檢測(cè)方法穩(wěn)定可靠、簡(jiǎn)便易行，一般病理醫(yī)師 均能掌握， 應(yīng)加以開(kāi)展普及。三、乳腺癌的淋巴結(jié)清掃 前哨淋巴結(jié)的組織病理學(xué)檢測(cè)早期診斷手段的提高使得 大量早期乳腺癌病人被 發(fā)現(xiàn)。對(duì)于早 期乳腺癌，腋 窩

14、淋巴結(jié)檢查雖然可以了解乳腺癌的預(yù)后情況，但意 義不大，尤其是對(duì)于那 些體檢未捫及腋窩淋 巴結(jié)者需要尋找新的預(yù) 后判斷方法。前哨淋巴結(jié)活檢是應(yīng)運(yùn)而生的一種新方 法7，8。 所謂前哨淋巴結(jié)即引流某一原發(fā)性腫瘤的第一站淋巴 結(jié)（乳腺癌 中 包括腋窩淋巴結(jié)或內(nèi)側(cè)象限乳腺癌病人的乳內(nèi)淋巴結(jié) ）。它 接受 淋 巴液的引流量最大，最 容易含有轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞。由 于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 是一個(gè)逐步的過(guò)程，因此前哨淋巴結(jié)的情況 可以反映整個(gè)腋窩淋 巴 結(jié)的狀態(tài)。如 果前哨淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移，則 應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行腋窩淋巴結(jié)清 掃，如果前哨淋巴結(jié)陰 性 ，則不進(jìn)行清掃。具體 操 作步驟如下：向 腫瘤四周注射一種放 射性物質(zhì)或藍(lán)色染料,

15、一定時(shí)間后在腫 瘤同側(cè) 腋窩下部作一切口，切除攝取了藍(lán)色染料或放射性物質(zhì)的淋巴結(jié) （即前哨淋巴 結(jié)），進(jìn)行石蠟切片判 斷有無(wú)轉(zhuǎn)移9。前哨淋 巴 結(jié)的狀態(tài)與整個(gè)腋窩淋巴結(jié)是否有轉(zhuǎn)移高度一致，兩者的吻合率 可 達(dá)95%98%。而且在某些情況下，對(duì)前哨淋巴結(jié)進(jìn)行連續(xù)切片、 免疫組織化學(xué)檢測(cè)和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)，可在 常規(guī)腋窩淋巴結(jié)清掃沒(méi)有發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中找到轉(zhuǎn)移。不過(guò)在應(yīng) 用前哨淋巴結(jié)活檢進(jìn)行冷凍切片診斷時(shí)可出現(xiàn)一定的假陰性，因?yàn)?一些微小的轉(zhuǎn)移癌可能會(huì)被忽略。國(guó)際上對(duì)該項(xiàng)工作的開(kāi)展已較為廣泛，但在國(guó)內(nèi)僅少數(shù)醫(yī)療單 位剛起步。 我們倡議用前哨淋巴結(jié)切除來(lái)代替常規(guī)的淋巴結(jié)清掃

16、術(shù)。這樣可以使某些不必要進(jìn)行淋巴結(jié)清掃的病人避免因此而帶來(lái) 的一些并發(fā)癥，使腋窩淋巴結(jié)切除由原來(lái)的治療性切除轉(zhuǎn)變?yōu)樵\斷 性取材。四、乳腺癌骨髓微轉(zhuǎn)移的檢測(cè)骨髓是乳腺癌轉(zhuǎn)移的常見(jiàn)部位，而且常常是乳腺癌發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn) 移首先累及的器官。目前常規(guī)的骨髓細(xì)胞學(xué)檢查往往不能發(fā)現(xiàn)早期 病人骨髓中的微轉(zhuǎn)移， 骨掃描、 骨骼的 X 線檢查等對(duì)早期骨髓微 轉(zhuǎn)移的檢測(cè)意義也不大。如何提高骨髓微轉(zhuǎn)移的檢出率具有重要意 義。1應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)乳腺癌骨髓微轉(zhuǎn)移：乳腺癌為 上皮性腫瘤，而 骨髓屬間葉來(lái)源，本 身無(wú)上皮性抗原的表達(dá)，故 可 應(yīng)用針對(duì)上皮抗原如細(xì)胞角蛋白、上皮膜抗原(EM A )等單克隆抗 體進(jìn)行染色。

17、Osborne 等10以乳腺癌細(xì)胞系( MCF-7) 按不同 細(xì)胞濃度與正常骨髓細(xì)胞相混合，然 后進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，能 檢測(cè)出2 X105骨髓細(xì)胞中的一個(gè)癌細(xì)胞。利用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢 測(cè)乳腺癌微轉(zhuǎn)移有一定的局限性，如某些正常骨髓細(xì)胞可能會(huì)出 現(xiàn) 不同程度的交叉反應(yīng)，腫瘤細(xì)胞表面抗原表達(dá)的不均一性也可能影 響對(duì)轉(zhuǎn)移細(xì)胞的正確評(píng)判。故 在實(shí)際應(yīng)用 中，目 前用多種抗體組成 所 謂 的 “雞 尾 酒 方 法 ”， 既 可 降 低 假 陰 性 率 ， 又 可 減 少 假 陽(yáng) 性 。2利 用 RT-PCR 技術(shù) 檢 測(cè)乳腺癌 骨髓微轉(zhuǎn)移 ：RT-PCR 在檢 測(cè) 腫瘤隱匿性微小轉(zhuǎn)移灶方面，無(wú)論是敏

18、感性還是特異性均優(yōu)于以往 的方法。與免疫組織化學(xué)染色相比，敏感性可增加1 0100倍。 Datta 等11運(yùn)用 RT-PCR 檢測(cè)外周血和骨髓中細(xì)胞角蛋白 19 (CK19)的mRNA ,結(jié)果6例淋巴結(jié)陰性的W期乳腺癌病人中5 例發(fā)現(xiàn)骨髓微轉(zhuǎn)移。 Schoenfeld 等12將 MCF-7 細(xì)胞與正常骨 髓細(xì)胞按不同濃度混合， 結(jié)果 免 疫組織 化學(xué) 能檢測(cè)出 1/105 的 MCF-7細(xì)胞，而 RT-PCR方法能測(cè)出1/106的 MC F-7細(xì)胞，其檢 測(cè)敏感性比免疫組織化學(xué)提高 10 倍。 當(dāng)然， RT-PCR 檢測(cè)最好能 與免疫組織化學(xué)相結(jié)合，這 樣可以給腫瘤細(xì)胞以正確的定位，排 除 上

19、皮細(xì)胞污染所導(dǎo)致的假陽(yáng)性。骨髓微轉(zhuǎn)移與乳腺癌的預(yù)后、復(fù)發(fā)、 轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性。確 定具有早期復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn) 移危險(xiǎn)的高危人群，在 其發(fā)展為臨床轉(zhuǎn)移之前，給 予積極輔助治療，可 以降低乳腺癌病人 的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn) 移率。此 外，骨 髓微轉(zhuǎn)移檢測(cè)還可作為判定治療療效的 指標(biāo)和 預(yù) 測(cè)復(fù) 發(fā)、 轉(zhuǎn)移的 依據(jù) 。五、乳腺癌治療的新方法抗HER2/neu單克隆抗體除 傳統(tǒng) 治 療 方 式 外 ， 目前 國(guó) 際 上最 新 的 治 療 方 式 是針 對(duì) HER2/neu 基因(即 c-erbB2 基因) 位點(diǎn)的生物治療。 2030乳腺癌病人有HER2/neu基因的過(guò)度表達(dá)，此類腫瘤更具浸潤(rùn)性， 對(duì)化療較不敏感且容易轉(zhuǎn)移

20、12:。美國(guó)已推出經(jīng)FDA批準(zhǔn)的新 藥Herce ptin，這是第一個(gè)已在臨床應(yīng)用的人抗HER2/neu單克隆抗 體13:。臨床研究顯示它能有效抑制體內(nèi)HER2/neu高表達(dá)乳腺 癌細(xì)胞納祀宀啓饗匝映憧ER2/neu陽(yáng)性乳腺癌病人的生存期。每周 注射抗細(xì)胞外 HER2/neu蛋白的單克隆抗體，對(duì)于13 % HER2/neu 過(guò)度表達(dá)的乳腺癌有效。若同時(shí)給予H ER2/neu抗體和順鉑治療， 總有效率提高至25%，且部分療效將保持一年以上。Burri s總結(jié)了 Herce ptin與 Docetaxel聯(lián)合應(yīng)用的效果，總有效率可達(dá)85.7%。HER2/neu單克隆抗體新治療方式的出現(xiàn)既給乳腺癌病

21、人帶來(lái)了希 望，同時(shí)也對(duì)病理醫(yī)師提出了嚴(yán)峻的要求。該項(xiàng)治療費(fèi)用昂貴，病 理醫(yī)師應(yīng)盡可能提供準(zhǔn)確的HER2/neu基因狀態(tài)，以指導(dǎo)選用最佳 的治療方案。目前常用的HER2/neu基因檢測(cè)方法有免疫組織化學(xué)、 熒光原位雜交（FISH）和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA） 14:。FISH能 直接和準(zhǔn)確地判斷HER2/neu基因是否存在擴(kuò)增，但較為昂貴和繁 瑣。免疫組織化學(xué)因其簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)，已成為最常規(guī)的檢測(cè)方 法，但其中有許多問(wèn)題應(yīng)該引起注意：首先免疫組化的判斷標(biāo)準(zhǔn)不 一，使HER2/neu基因蛋白表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果不一致，而且是否蛋白 表達(dá)陽(yáng)性就可進(jìn)行Herceptin治療，還是需達(dá)到一定的陽(yáng)性程度

22、后 再進(jìn)行，目前尚無(wú)一致的結(jié)論。其次石蠟包埋，甲醛固定可能會(huì)對(duì) 免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生一定的影響，造成假陰性。第三，采用 不同公司的HER2/neu抗體，檢測(cè)結(jié)果也不完全相同。因此，要作 出準(zhǔn)確的HER2/neu基因狀態(tài)判斷，首先要對(duì)上述問(wèn)題進(jìn)行統(tǒng)一。 Herce ptin治療具有一定的心臟毒性，而且就我國(guó)研究現(xiàn)狀來(lái)看， 要開(kāi)展此項(xiàng)治療在人力、物力和財(cái)力上消耗較大，有待進(jìn)一步的研 究。參考文獻(xiàn)1 Wo ng stereotactic pathologi st.AY, Sa l i sbu ry E, B i l ous M. Rece nt devel opments in breast b

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31、-11-22 14:19:00 來(lái)源：作者：姜乃光李秋霞 單景軍 張玉英 石青嶺vascular endothelial growth factor ，VEGF ) 采用S-P免疫組化法，檢測(cè)54例乳腺癌 miscrovessel density ， MVD )。 結(jié)果 癌關(guān)鍵詞】 免疫組織化學(xué)【摘要】 目的 探討血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子 與乳腺癌血管生成及臨床病理參數(shù)的關(guān)系。 方法 石蠟標(biāo)本中 VEGF 蛋白的表達(dá)及平均微血管密度（ 組織中VEGF表達(dá)陽(yáng)性率為 75.93%。VEGF表達(dá)及MVD值與組織學(xué)分級(jí) （P<0.05）和淋巴 結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)（P<0.01）,而與組織學(xué)分型無(wú)關(guān)

32、（P>0.05） ;VEGF陽(yáng)性組MVD值明顯高 于 VEGF 陰性組（ t=2.220， P<0.05）。 結(jié)論 VEGF 與乳腺癌血管生成密切相關(guān)，并能促進(jìn) 其生長(zhǎng)、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移。檢測(cè) VEGF 和 MVD 可作為反映乳腺癌生物學(xué)行為的指標(biāo)之一。關(guān)鍵詞 乳腺腫瘤 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子 血管生成 免疫組織化學(xué)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟的復(fù)雜過(guò)程, 在很大程度上依賴于腫瘤血管生成。 目前 的研究認(rèn)為 ：血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（ vascular endothelial growth factor , VEGF ）是腫瘤血管 生成過(guò)程中作用最強(qiáng)、特異性最高的促血管生長(zhǎng)因子 1 。筆者應(yīng)

33、用免疫組化法檢測(cè)乳 腺癌組織中 VEGF 和 MVD 的表達(dá)情況,分析 VEGF 及微血管密度（ miscroressel density , MVD ）與乳腺癌各臨床病理參數(shù)的關(guān)系, 并為臨床預(yù)后判定和治療提供進(jìn)一步的理論根據(jù)。1 材料與方法1.1標(biāo)本來(lái)源 選取我院普外科 19962003年乳腺癌根治術(shù)或改良根治術(shù)切除標(biāo)本54例。病理及臨床資料分析結(jié)果：浸潤(rùn)性癌40例，其他特殊類型癌 14例。組織學(xué)分級(jí)：1級(jí)9例，n級(jí)32例，川級(jí)13例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者 30例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者24例?；颊呔鶠榕?， 年齡 23 68 歲（平均 52 歲）,術(shù)前均未經(jīng)任何治療。1.2主要試劑 所用VEGF、CD

34、34單克隆抗體及超敏（鼠） S-P試劑盒，均購(gòu)自福州邁 新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。PBS 緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照,以已知 VEGF 陽(yáng)性的切片作為1.3 S-P免疫組化染色 操作步驟從略。其中鼠抗人 VEGF單克隆抗體采用高溫高壓進(jìn)行 抗原修復(fù)。每次試驗(yàn)以 陽(yáng)性對(duì)照。1.4 結(jié)果判定1.4.1 VEGF 表達(dá) 胞膜呈棕黃色染色者為5%以上細(xì)胞漿或細(xì)根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及染色強(qiáng)度進(jìn)行綜合判定，即按VEGF 蛋白表達(dá)陽(yáng)性。1.4.2 MVD計(jì)數(shù) 參照Maeda等報(bào)道 2:的方法，即低倍鏡下，全面觀察CD34染色陽(yáng)性的血管，選取腫瘤微血管密度最高區(qū)域，然后在高倍鏡下（X200）選取5個(gè)不重復(fù)視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，求

35、其平均數(shù)即作為該病例的 MVD 值。統(tǒng)計(jì)的微血管標(biāo)準(zhǔn) :單個(gè)的棕黃色內(nèi)皮 細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞團(tuán)均計(jì)數(shù)為一個(gè)血管 ;肌層較厚及管腔紅細(xì)胞數(shù) >8 個(gè)的血管不被計(jì)數(shù)。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 米用X 2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)、F檢驗(yàn)及q檢驗(yàn)。2 結(jié)果2.1 VEGF 蛋白表達(dá) VEGF 蛋白定位于腫瘤細(xì)胞胞漿及胞膜， 陽(yáng)性表達(dá)為胞漿或胞膜染 為棕黃色， 呈彌漫或散在的顆粒狀。 在 54例乳腺癌組織中， VEGF 表達(dá)陽(yáng)性 41 例（75.93%）， 癌間質(zhì)內(nèi)皮細(xì)胞不表達(dá)或呈弱陽(yáng)性表達(dá)，癌旁組織幾乎不表達(dá)。2.2 MVD 檢測(cè) CD34 定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿，呈棕黃色。所有的病例的血管內(nèi)皮細(xì) 胞均為CD34染色陽(yáng)

36、性。癌組織 MVD值11106個(gè)不等，平均為（49.5 ± 25.4）個(gè)。2.3 VEGF 蛋白表達(dá)及 MVD 與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系VEGFP 均<0.05）。單因素方差分析顯示，兩組間比較：i級(jí)與n級(jí)、I級(jí)與川級(jí)VEGF 表達(dá)陽(yáng)性率及 MVD 值差異均2.3.1 組織學(xué)分級(jí) VEGF 表達(dá)陽(yáng)性率及 MVD 值隨組織學(xué)分級(jí)增高而逐漸增加。 表達(dá)在I級(jí)與n級(jí)、I級(jí)與川級(jí)間，差異具有顯著性（ 三組間 MVD 值比較差異具有非常顯著性（ P<0.01）。間差異有顯著性（P<0.05和P<0.01）。而n級(jí)與川級(jí)間 無(wú)顯著性（ P>0.05）。2.3.2 淋巴

37、結(jié)轉(zhuǎn)移 VEGF 表達(dá)陽(yáng)性率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組P<0.01）。 MVD 值在兩組間差異也具有非常顯著性（ P<0.01）。2.3.3 組織學(xué)類型 VEGF 表達(dá)陽(yáng)性率和 MVD 值在兩個(gè)不同組織學(xué)類型間差異無(wú)顯著性P>0.05）。2.4 VEGF 表達(dá)與 MVD 值的關(guān)系 VEGF 表達(dá)陽(yáng)性組的 MVD 值明顯高于 VEGF 表達(dá)陰 性組（ P<0.05）。3 討論VEGF 是目前研究較為深入的促血管生成因子， 對(duì)腫瘤基質(zhì)血管形成及腫瘤生物學(xué)行為 均有重要影響。 VEGF 也稱血管滲透因子（ VPF） ，是特異性的血管內(nèi)皮細(xì)胞刺激因子，它 與血管內(nèi)皮

38、細(xì)胞的相應(yīng)受體結(jié)合， 刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖， 同時(shí)還可促進(jìn)血管內(nèi)物質(zhì)的泄 露，導(dǎo)致血管形成和新的基質(zhì)形成， 為腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移提供了合適的基礎(chǔ)。 大量的實(shí)驗(yàn)研 究證實(shí) 35 ，幾乎所有的惡性腫瘤都表達(dá)較高水平的 VEGF ，而在周圍正常組織中無(wú) 或僅有極低水平的表達(dá) 6 ，因此可以說(shuō) VEGF 對(duì)腫瘤組織具有良好的特異性。本試驗(yàn) 結(jié)果顯示，在 54 例乳腺癌中， VEGF 表達(dá)陽(yáng)性率占 75.93%，而癌旁組織陰性，提示腫瘤細(xì)我們發(fā)現(xiàn)VEGF 主Wei-dner等的研究發(fā)現(xiàn)胞可分泌VEGF，通過(guò)VEGF刺激微血管形成，腫瘤增殖速度加快，反映了惡性腫瘤的特征。 Toi等的研究也證實(shí)了 VEGF

39、表達(dá)與血管生成過(guò)程及乳腺癌預(yù)后不良有關(guān)。另外， 血管內(nèi)皮細(xì)胞不表達(dá)或個(gè)別呈弱陽(yáng)性表達(dá)，與文獻(xiàn)一些報(bào)道相似，進(jìn)一步證實(shí)了 要以旁分泌途徑作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的推測(cè)。:乳腺浸潤(rùn)性癌 本研究顯示VEGF表達(dá)和MVD值均隨組織 反映了 VEGF、MVD 已有研究MVD值明 VEGF 可 這不僅為腫瘤細(xì)胞的微血管數(shù)量是患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素。 間質(zhì)中，具有突出的血管成分者更具有侵襲性。 學(xué)分級(jí)的增高和淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移而明顯增加，與多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致，與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系極為密切，提示血管形成是乳腺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要條件。表明VEGF與MVD值呈正相關(guān)。本研究中 46例乳腺癌組織 VEGF陽(yáng)性表達(dá)組 顯高于陰性表

40、達(dá)組，顯示了腫瘤組織中VEGF狀態(tài)與MVD值的密切關(guān)系，說(shuō)明以通過(guò)促進(jìn)乳腺癌血管形成，從而在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用， 我們進(jìn)一步認(rèn)識(shí)腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)提供了理論依據(jù)，對(duì)進(jìn)一步探討腫瘤的預(yù)后及治療也具有重 要的意義。VEGF和MVD可以更好地為臨綜上所述，VEGF可促進(jìn)乳腺癌血管形成，進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。VEGF、 MVD可作為反映乳腺癌生物學(xué)行為的指標(biāo)之一。聯(lián)合檢測(cè) 床判斷預(yù)后及治療提供參考依據(jù)。參考文獻(xiàn)1 Deroanne CF， Hajiton A， Calberg CM，et al.Angiogenesis by fibroblast growth facter

41、4is mediated through an autocri n up-regulati on of vascu-lar en dothelial growth factor expression.Cancer Res， 1997， 57 （ 24） :5590-5597.2 Maedak，Chung YS，Orana Y，et al.Prognostic value of vascular en-dothelial growth factorexp eressi on in gastric carci no ma.Ca ncer， 1996， 77:858-863.3 Taka nami

42、I， Tan aka F， Hashizume T， et al.Vascular en dothelial growth factor and its receptor with angiogenesis and survova in pulmonary ade-nocarcionma.Anti Cancer Res ， 1997， 17（ 4A）:2811-2814.4 Suzuki K， Hagashy N， Miyamoto Y， et al.Expression of vascular perme-ability factor vascular en dothelial growth

43、 factor in huma n hep atocellular carci no ma.Ca ncer Res， 1996， 56 （13）:3004-3009.5 Da Silva ID，De Lime GR，Gerbrim LH，et al.l nvasive ductal carci noma fibroade noma and adjace nt breast stroma-a ngioge nesis:a n immun ohis-tochemical and morp hometricoal study.BullVEGF、CD34在乳腺癌中的表達(dá)研究作者： 時(shí)間：2007-11

44、-22 14:19:00來(lái)源：論文天下論文網(wǎng)VEGF與乳腺癌血管生成密切相關(guān)，并能促 可作為反映乳腺癌生物學(xué)行為的指標(biāo)之一。關(guān)鍵詞 乳腺腫瘤 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子血管生成免疫組織化學(xué)I釦$ RTiryil 5 I割Google提供的廣告四年腦萎縮老年癡呆治好了國(guó)內(nèi)首個(gè)治療腦萎縮老年癡呆專用藥益智康腦丸原名腦萎縮丸成功問(wèn)世心腦血管檢測(cè)儀 一利康醫(yī)電心腦血管檢測(cè)儀一亞健康檢測(cè)專家 全科亞健康檢測(cè)儀，各類亞健康檢測(cè)儀化學(xué)定量 www.watson-全球大型蠕動(dòng)泵和軟管泵廠商擁有專業(yè)的知識(shí)、服務(wù)和產(chǎn)品作者：姜乃光 李秋霞 單景軍 張玉英 石青嶺【關(guān)鍵詞】 免疫組織化學(xué)【摘要】目的 探討血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)

45、因子(vascular endothelial growth factor , VEGF )與乳腺癌血管生成及 臨床病理參數(shù)的關(guān)系。方法 采用S-P免疫組化法，檢測(cè) 54例乳腺癌石蠟標(biāo)本中VEGF蛋白的表達(dá)及平均微血管密度(miscrovessel density, MVD )。結(jié)果 癌組織中VEGF表達(dá)陽(yáng)性率為75.93%。VEGF表達(dá)及MVD值與組織學(xué)分級(jí) (P<0.05)和淋巴 結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.01)，而與組織學(xué)分型無(wú)關(guān)(P>0.05) ;VEGF陽(yáng)性組MVD值明顯高 于 VEGF 陰性組(t=2.220, P<0.05)。 結(jié)論 進(jìn)其生長(zhǎng)、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移。檢

46、測(cè)VEGF和MVD在很大程度上依賴于腫瘤血管生成。目前腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟的復(fù)雜過(guò)程，的研究認(rèn)為：血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascularendothelial growth factor，VEGF )是腫瘤血管 生成過(guò)程中作用最強(qiáng)、特異性最高的促血管生長(zhǎng)因子1:。筆者應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)乳腺癌組織中 VEGF和MVD的表達(dá)情況，分析 VEGF及微血管密度(miscroressel density, MVD )與乳腺癌各臨床病理參數(shù)的關(guān)系，并為臨床預(yù)后判定和治療提供進(jìn)一步的理論根據(jù)。1材料與方法1.1標(biāo)本來(lái)源 選取我院普外科19962003年乳腺癌根治術(shù)或改良根治術(shù)切除標(biāo)本54例。病理及臨

47、床資料分析結(jié)果：浸潤(rùn)性癌40例，其他特殊類型癌 14例。組織學(xué)分級(jí)：1級(jí)9例，n級(jí)32例，川級(jí)13例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者30例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者24例。患者均為女性， 年齡2368歲(平均52歲)，術(shù)前均未經(jīng)任何治療。1.2主要試劑 所用VEGF、CD34單克隆抗體及超敏(鼠)S-P試劑盒，均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。1.3 S-P免疫組化染色 操作步驟從略。其中鼠抗人VEGF單克隆抗體采用高溫高壓進(jìn)行 抗原修復(fù)。每次試驗(yàn)以 PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照，以已知 VEGF陽(yáng)性的切片作為 陽(yáng)性對(duì)照。1.4 結(jié)果判定1.4.1 VEGF 表達(dá)胞膜呈棕黃色染色者為根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及染色強(qiáng)度進(jìn)行綜合判

48、定，即按VEGF 蛋白表達(dá)陽(yáng)性。5%以上細(xì)胞漿或細(xì)1.4.2 MVD 計(jì)數(shù)參照Maeda等報(bào)道 2:的方法，即低倍鏡下，全面觀察CD34染色陽(yáng)性的血管，選取腫瘤微血管密度最高區(qū)域，然后在高倍鏡下（X200）選取5個(gè)不重復(fù)視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，求其平均數(shù)即作為該病例的 MVD 值。 統(tǒng)計(jì) 的微血管標(biāo)準(zhǔn) :單個(gè)的棕黃色內(nèi)皮 細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞團(tuán)均計(jì)數(shù)為一個(gè)血管;肌層較厚及管腔紅細(xì)胞數(shù) >8 個(gè)的血管不被計(jì)數(shù)。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用X 2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)、F檢驗(yàn)及q檢驗(yàn)。2 結(jié)果2.1 VEGF 蛋白表達(dá) VEGF 蛋白定位于腫瘤細(xì)胞胞漿及胞膜， 陽(yáng)性表達(dá)為胞漿或胞膜染 為棕黃色， 呈彌漫或散在的顆粒狀。 在

49、 54 例乳腺癌組織中， VEGF 表達(dá)陽(yáng)性 41 例（ 75.93%）， 癌間質(zhì)內(nèi)皮細(xì)胞不表達(dá)或呈弱陽(yáng)性表達(dá)，癌旁組織幾乎不表達(dá)。2.2 MVD 檢測(cè) CD34 定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿，呈棕黃色。所有的病例的血管內(nèi)皮細(xì) 胞均為CD34染色陽(yáng)性。癌組織 MVD值11106個(gè)不等，平均為（49.5 ±5.4）個(gè)。2.3 VEGF 蛋白表達(dá)及 MVD 與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系2.3.1 組織學(xué)分級(jí) VEGF 表達(dá)陽(yáng)性率及 MVD 值隨組織學(xué)分級(jí)增高而逐漸增加。 VEGF 表達(dá)在I級(jí)與n級(jí)、I級(jí)與川級(jí)間，差異具有顯著性（P均<0.05）。單因素方差分析顯示，三組間MVD值比較差異具有非

50、常顯著性（P<0.01）。兩組間比較：I級(jí)與n級(jí)、I級(jí)與川級(jí) 間差異有顯著性（P<0.05和P<0.01 ）。而n級(jí)與川級(jí)間 VEGF表達(dá)陽(yáng)性率及 MVD值差異 均無(wú)顯著性（ P>0.05）。2.3.2 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 VEGF 表達(dá)陽(yáng)性率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組P<0.01）。 MVD 值在兩組間差異也具有非常顯著性（ P<0.01）。2.3.3 組織學(xué)類型 VEGF 表達(dá)陽(yáng)性率和 MVD 值在兩個(gè)不同組織學(xué)類型間差異無(wú)顯著性P>0.05）。2.4 VEGF 表達(dá)與 MVD 值的關(guān)系 VEGF 表達(dá)陽(yáng)性組的 MVD 值明顯高于 VEGF 表達(dá)陰 性組（ P<0.05）。3 討論VEGF 是目前研究較為深入的促血管生成因子， 對(duì)腫瘤基質(zhì)血管形成及腫瘤生物學(xué)行為 均有重要影響。 VEGF 也稱血管滲透因子（ VPF ），是特異性的血管內(nèi)皮細(xì)胞刺激因子，它 與血管內(nèi)皮細(xì)胞的相應(yīng)受體結(jié)合， 刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖， 同時(shí)還可促進(jìn)血管內(nèi)物質(zhì)的泄 露，導(dǎo)致血管形成和新的基質(zhì)形成， 為腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移提供了合適的基礎(chǔ)。 大量的實(shí)驗(yàn)研 究證實(shí) 35:，幾乎所有的惡性腫瘤都表達(dá)較高水平的VEGF，而在周圍正常組織中無(wú)或僅有極低水平的表達(dá)6 ，因此可以說(shuō) VEGF 對(duì)腫瘤組織具有良好的特異性。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在 54 例乳腺癌中，