神經(jīng)通路追蹤技術(shù)ppt課件

1、 神經(jīng)通路神經(jīng)通路是從感受器到大腦皮質(zhì)或從大腦皮是從感受器到大腦皮質(zhì)或從大腦皮質(zhì)至效應(yīng)器的神經(jīng)元鏈，作為神經(jīng)沖動(dòng)傳導(dǎo)的通質(zhì)至效應(yīng)器的神經(jīng)元鏈，作為神經(jīng)沖動(dòng)傳導(dǎo)的通路，稱神經(jīng)通路。路，稱神經(jīng)通路。神經(jīng)傳神經(jīng)傳 感覺傳導(dǎo)通路（上行傳導(dǎo)通路）：從感受感覺傳導(dǎo)通路（上行傳導(dǎo)通路）：從感受導(dǎo)通路導(dǎo)通路 器到大腦皮質(zhì)的神經(jīng)元鏈。器到大腦皮質(zhì)的神經(jīng)元鏈。 運(yùn)動(dòng)傳導(dǎo)道（下行傳導(dǎo)通路）：從大腦皮運(yùn)動(dòng)傳導(dǎo)道（下行傳導(dǎo)通路）：從大腦皮 皮質(zhì)到效應(yīng)器的神經(jīng)元鏈。皮質(zhì)到效應(yīng)器的神經(jīng)元鏈。熒光色素逆行標(biāo)志法熒光色素逆行標(biāo)志法放射性核素示蹤法放射性核素示蹤法細(xì)胞毒植物凝集素追蹤法細(xì)胞毒植物凝集素追蹤法.氨化、酸性堅(jiān)膜氨化、

2、酸性堅(jiān)膜定影液反應(yīng)、蒸定影液反應(yīng)、蒸餾水再洗滌餾水再洗滌,然然后切片，采用后切片，采用100微米厚的震微米厚的震動(dòng)切片。經(jīng)上升動(dòng)切片。經(jīng)上升梯度酒精脫水、梯度酒精脫水、透明透明,裱片后觀裱片后觀察。察。目的目的：研究：研究神經(jīng)元之間的鄰神經(jīng)元之間的鄰近關(guān)系以及樹突、近關(guān)系以及樹突、軸突的配布。軸突的配布。 HRP方法的主要方法的主要步驟：步驟：HRP的引入的引入存活期存活期神經(jīng)材料的固定、取材神經(jīng)材料的固定、取材切片及組織化學(xué)反應(yīng)切片及組織化學(xué)反應(yīng)切片的觀察切片的觀察射區(qū)的神經(jīng)元胞體攝取示蹤劑并經(jīng)軸索順行輸送到突觸終末。神經(jīng)元的神經(jīng)元的Golgi樣染色樣染色。Methods rely on a

3、 substances incorporation into the neuron, its transport, and its subsequent localization in other part of the neuron;Histochemical methods.1%多聚甲醛于1.5戊二醛，一般為冰凍切片。HRP的選擇的選擇游離HRP; 結(jié)合HRP(氨基酸、凝集素、某些細(xì)菌毒素等可提高其靈敏度數(shù)十倍）。成色劑成色劑：二鹽酸聯(lián)苯胺四鹽酸（二鹽酸聯(lián)苯胺四鹽酸（DAB）；）；聯(lián)苯胺二鹽酸（聯(lián)苯胺二鹽酸（BDHA）；）；四甲基聯(lián)苯胺（四甲基聯(lián)苯胺（TMB）；）；鄰聯(lián)茴香胺（鄰聯(lián)茴香胺（o-D）；）；。常用的熒光素有常用的熒光素有：FITC(綠色綠色),TRITC(紅色紅色)正是辣根過氧化物酶軸突逆行追蹤正是辣根過氧化物酶軸突逆行追蹤法所難以避免的。法所難以避免的。曝光（密閉的暗盒中進(jìn)行）曝光（