利用CAPS標(biāo)記轉(zhuǎn)育野生番茄的高產(chǎn)基因

1、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué) 2007,40(8):1738-1745 Scientia Agricultura Sinica利用CAPS標(biāo)記轉(zhuǎn)育野生番茄的高產(chǎn)基因李 紅1,2，杜永臣，王孝宣，宋 明，高建昌，國(guó)艷梅，朱德蔚，戴善書(shū) 1121111（1西南大學(xué)園藝園林學(xué)院，重慶 400716； 2中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所，北京 100081）摘要：【目的】將野生多毛番茄中的高產(chǎn)基因滲入到普通番茄骨干親本以創(chuàng)造高產(chǎn)番茄育種材料?！痉椒ā縏A1229是野生多毛番茄（Lycopersicon hirsutum acc.）LA1777的一個(gè)近等基因系，帶有來(lái)源于LA1777的高產(chǎn)基因（QTL）。通過(guò)雜交、回交和分

2、子標(biāo)記輔助選擇方法對(duì)TA1229×9706的BC1群體進(jìn)行遺傳分析。【結(jié)果】獲得23個(gè)比TA1229含有的外源染色體片段更短的漸滲系，其中16個(gè)漸滲系為高產(chǎn)番茄材料，并檢測(cè)到了一個(gè)影響番茄成熟果實(shí)平均重量的QTL，將其定位于標(biāo)記TG53和TG158之間。【結(jié)論】16份漸參系可用作為高產(chǎn)番茄新種質(zhì)。關(guān)鍵詞:CAPS; QTL;分子標(biāo)記輔助選擇; 高產(chǎn); 番茄Introgression of High Yield Genes from Lycopersicon.hirsutumacc.LA1777 Using CAPS MarkerLI Hong1,2, DU Yong-chen 1,

3、WANG Xiao-xuan 1, SONG Ming2, GAO Jian-chang1, GUO Yan-mei1,ZHU De-wei1, DAI Shan-shu1( 1Horticulture and Landscape College, Southwest University, Chongqing 400716; 2Institute of Vegetables and Flowers, ChineseAcademy of Agricultural Sciences, Beijing 100081)Abstract: 【Objective】Using high yield gen

4、es from wild tomato can enrich tomato breeding resources and accelerate tomato breeding programs.【Method】In this study, the near-isogenic line TA1229, containing a 24-cM introgression at the bottom of chromosome 1 from Lycopersicon hirsutum acc.LA1777, affected several high yield traits. The TA1229&

5、#215;9706 BC1 population was analyzed by marker-assisted selection and the traits of the population were evaluated.【Result】Twenty-three recombinant individuals carrying a shorter segment than TA1229 were obtained. Among them,16 lines with the chromosome 1 recombinant segment increased tomato yield.

6、QTL affecting yield was found between TG53 and TG158.【Conclusion】Sixteen recombinant lines are useful for improvement of tomato varieties.Key words: CAPS; QTL; Marker assisted selection; High yield; Tomato(Lycopersicon esculentem Mill)0 引言【研究意義】番茄（Lycopersicon esculentem Mill）的豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)是其育種研究及生產(chǎn)實(shí)踐中的重要目標(biāo)之

7、一1,2。近20年來(lái)，傳統(tǒng)的產(chǎn)量育種已取得了長(zhǎng)足的進(jìn)展，育成的番茄品種比對(duì)照增產(chǎn)20%30%1。但是，長(zhǎng)期以來(lái)利用較高的選擇壓，導(dǎo)致目前番茄育種利用常規(guī)育種技術(shù)和現(xiàn)有依賴(lài)于很窄的遺傳背景3,4，的資源很難育成超過(guò)當(dāng)前最好栽培品種產(chǎn)量10%的新品種?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】有研究表明58，在多毛番茄（L.hirsutum）、潘那利番茄（L.pennellii）、醋栗番茄（L.pimpinellifolium）、小花番茄（L.parviflorum）、奇美留斯基番茄（L.chmielewskii）等果實(shí)小、產(chǎn)量低的野生和未馴化的番茄中存在增加產(chǎn)量的QTL（quantitative trait loci）。

8、國(guó)內(nèi)外為了利用這些QTL進(jìn)行了系統(tǒng)研究，共鑒定了40多個(gè)與番茄產(chǎn)量有關(guān)的QTL，建立了其近等基因系（QTL-NILs）913，并克隆了一個(gè)具有負(fù)作用的QTL：fw2.214,15，這些QTL分布于番茄的12條染色體上，主要集中在染色體1、2、3、4、8上?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前存在的問(wèn)題是收稿日期：2006-03-06；接受日期：2006-10-24基金項(xiàng)目：北京市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（6042023），農(nóng)業(yè)部蔬菜遺傳與生理重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室資助項(xiàng)目作者簡(jiǎn)介：李 紅（1981-）女，山西大同人，碩士研究生，研究方向?yàn)榉逊肿佑N。通訊作者杜永臣（1955-），男，河北昌黎人，教授，博士，研究方向?yàn)槭?/p>

9、菜遺傳育種。TelE-mail：yongchen.du8期 李 紅等：利用CAPS標(biāo)記轉(zhuǎn)育野生番茄的高產(chǎn)基因 1739QTL近等基因系中含有的野生番茄的染色體片段長(zhǎng)度較長(zhǎng)，QTLs與小果實(shí)等不良基因間連鎖累贅的影響比較大，在育種中直接利用難度較大3,5。因此，打破連鎖累贅，將野生資源中的高產(chǎn)QTL導(dǎo)入到優(yōu)良的栽培骨干親本中，實(shí)現(xiàn)高產(chǎn)基因的聚合，將極大地推動(dòng)產(chǎn)量育種?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】本課題組通過(guò)國(guó)際合作獲得了一系列近等基因系材料，其中TA1229是多毛番茄的1個(gè)近等基因系5，含有來(lái)自多毛番茄第1染色體底端的長(zhǎng)24 cM的DNA片段。已經(jīng)證明，該片段含有增加產(chǎn)量的Q

10、TL，能增加植株重量和果實(shí)重量，在植株生長(zhǎng)的晚期階段仍能維持其生長(zhǎng)率，維持營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)與生殖生長(zhǎng)之間的轉(zhuǎn)化5。本研究旨在結(jié)合常規(guī)育種技術(shù)和分子標(biāo)記輔助選擇手段，將TA1229中的高產(chǎn)QTL滲入到本課題組優(yōu)良骨干親本9706中，以期獲得高產(chǎn)番茄育種種質(zhì)。TA1229、9706及其F1代于2004年1月種植于日光溫室中，2005年春季將BC1代種植于露地，平均每0.7 m2種植1株，共160株。分單株對(duì)各個(gè)指標(biāo)進(jìn)行調(diào)查。產(chǎn)量從第1穗果實(shí)轉(zhuǎn)色期開(kāi)始調(diào)查，每隔510 d調(diào)查1次，共調(diào)查5次。其中第14次只調(diào)查各單株的成熟果實(shí)數(shù)量和重量，第5次將每株上的所有果實(shí)摘下，分別調(diào)查成熟果實(shí)和綠果的數(shù)量和重量。在第

11、2次和第3次調(diào)查時(shí)，取每株上能代表該植株果實(shí)大小的3個(gè)果實(shí)，分別測(cè)量其橫徑、縱徑和心室數(shù)。在植株拉秧時(shí)，分別測(cè)定各株的葉重、莖重。最后統(tǒng)計(jì)各個(gè)單株的成熟果實(shí)平均重、青果平均重、果實(shí)平均重、坐果率（果實(shí)總個(gè)數(shù)÷總花數(shù)）以及果型指數(shù)（果實(shí)平均直徑÷果實(shí)平均縱徑）等。 1.2 CAPS分析待幼苗長(zhǎng)到八葉期，采用CTAB法提取嫩葉DNA。對(duì)Cornell大學(xué)網(wǎng)址（www. sgn. cornell. edu /maps /tomato-arabidopsis）公布的潘那利番茄第1染色體末端的8個(gè)RFLP標(biāo)記TG17、TG27、TG53、TG158、TG269、TG476、TG580

12、和TG617標(biāo)記進(jìn)行酶切擴(kuò)增多態(tài)性序列（cleaved amplified polymorphic secquence，CAPS）標(biāo)記的轉(zhuǎn)化。引物由Primer3 程序（/cgi-bin/primer/ primer3.cgi）設(shè)計(jì)，標(biāo)記名稱(chēng)仍用原來(lái)RFLP標(biāo)記的名稱(chēng)，引物由上海生工生物技術(shù)服務(wù)有限公司合成（表1）。1 材料與方法1.1 材料及性狀調(diào)查（1）TA1229，來(lái)源于美國(guó)番茄遺傳資源中心（tomato genetics resource center，TGRC），是野生多毛番茄（L. hirsutum）LA1777的一個(gè)亞近等基因

13、系，含有來(lái)源于LA1777長(zhǎng)約24 cM的染色體片段；栽培番茄骨干材料9706，來(lái)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所鮮食番茄組，果實(shí)粉紅色，無(wú)限生長(zhǎng)類(lèi)型，產(chǎn)量高，抗病毒病、葉霉病和枯萎?。唬?）216，TA1229與9706的F1代；（3）261，用9706為輪回親本的BC1代。表1 根據(jù)RFLP標(biāo)記序列設(shè)計(jì)的CAPS引物Table 1 The designed primers of CAPS from RFLP markers標(biāo)記Primer左側(cè)引物 Left primer右側(cè)引物 Right primer5´-AAATCAATTGAACCGGCTGT-3´5´-C

14、TTTTTAAACGCCCAACTGC-3´ 5´-CAGAGGGTTGATCACAAACAA-3´ 5´-TGGTCCGTTTCACAATGTCT-3´ 5´-GTTCCCAATTTTGCTTGCAC-3´ 5´-AGGCGAAGGGACCAAGTTAT-3´ 5´-AGACTTTCTGGCAGCTGGAC-3´ 5´-AGCATCCGTCTGCGTATTAAA-3´TG17 5´-CGGCTGTGTACGTATCTGGA-3´ TG27 5&

15、#180;-ACCAATTTTGTCGGTGTCAA-3´ TG53 5´-TTCCCTGCTAGGAGGGATGA-3´TG158 5´-TGTTTTTCTTTTAGAATGAAGTAACCT-3´ TG269 5´-CGAAGCCAAATTCTTCCTCA-3´ TG476 5´-AAATCTGATGCTCGGCTGAT-3´ TG580 5´-ATCGTGGGGCTGATGTATTT-3´ TG617 5´-GTTGGTCCAAAAGGATTTGC-3´在對(duì)R

16、FLP引物進(jìn)行轉(zhuǎn)化分析時(shí)，主要對(duì)CAPS-PCR反應(yīng)體系中的模板DNA濃度、Mg2+濃度和PCR循環(huán)體系中的退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。優(yōu)化的PCR擴(kuò)增體系包括：50 ng模板DNA、2.5µl 10×PCR buffer、250 µmol·L-1 dNTPs（Promage）、1.25U Taq DNA聚合酶（Promage）、Mg2+濃度1.52.0 mmol·L-1（最終濃度）、每個(gè) 引物的濃度為0.2 µmol·L-1（最終濃度），最終體積為25 µl，覆蓋20 µl1740 中 國(guó) 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 40卷

17、環(huán)體系為：先92 3 min，然后40個(gè)擴(kuò)增循環(huán)：92 1 min，62 1.5 min，72 2 min，最后一個(gè)加尾步驟72 8 min。不同引物的退火溫度在5761之間。利用1%瓊脂糖凝膠（0.5×TBE緩沖液）電泳PCR產(chǎn)物，每個(gè)樣品加5 µl PCR產(chǎn)物，3 µl上樣緩沖液，溴化乙錠染色，利用凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)多態(tài)性。在PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與預(yù)期結(jié)果一致的情況下，對(duì)PCR產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶消化。限制性內(nèi)切酶反應(yīng)體系為：1.5 µl限制性內(nèi)切酶緩沖液，0.2 µl限制性內(nèi)切酶（10 U·µl-1，TaKaRa），3.3 &#

18、181;l超純水。其中TaqI消化反應(yīng)溫度為65，HinfI消化發(fā)應(yīng)溫度為37，水浴中反應(yīng)36 h。利用2%瓊脂糖凝膠電泳酶切產(chǎn)物，每個(gè)樣品加15 µl酶切產(chǎn)物，3 µl上樣緩沖液，溴化乙錠染色。在凝膠成像系統(tǒng)下檢測(cè)酶切產(chǎn)物的多態(tài)性。mmol·L-1的條件，經(jīng)PCR擴(kuò)增后獲得1條分子量為2.4 kb的譜帶，在各種基因型之間沒(méi)有多態(tài)性。PCR產(chǎn)物經(jīng)過(guò)限制性內(nèi)切酶TaqI消化后，在9706和TA1229之間出現(xiàn)多態(tài)性。TA1229消化后得到2條譜帶，其特征譜帶的分子量為1 400 bp和1 000 bp；9706沒(méi)有酶切位點(diǎn)不能被消化；雜交后代中具有兩親本的所有特征譜

19、帶（圖1）。TG53在退火溫度58、Mg2+濃度為1.5 mmol·L-1的條件下，經(jīng)PCR擴(kuò)增后獲得1條分子量為500 bp的譜帶，在各種基因型之間沒(méi)有多態(tài)性。PCR產(chǎn)物經(jīng)過(guò)限制性內(nèi)切酶TaqI消化后，在9706和TA1229之間出現(xiàn)多態(tài)性。TA1229消化后得到2條譜帶，其特征譜帶的分子量為210 bp、180 bp；9706消化后得到2條譜帶，其特征分子量為300 bp、110 bp；雜交后代中具有兩親本的所有特征譜帶（圖1）。TG158、TG476和TG580也得到了類(lèi)似的結(jié)果，其電泳圖譜和特征分子量如圖1和表2所示。利用新建立的5個(gè)CAPS標(biāo)記對(duì)TA1229與9706的BC

20、1群體的160個(gè)單株進(jìn)行分析（圖2為部分單株的結(jié)果）。TG17的分析結(jié)果表明，含有TA1229特征基因型的陽(yáng)性雜和單株有89株，不含的有69株，缺失2株，符合BC1群體11的性狀分離規(guī)律；TG158的分析結(jié)果表明，含有TA1229特征基因型的陽(yáng)性雜合單株有82株，不含的有73株，缺失5株，符合BC1群體11性狀分離規(guī)律；TG53、TG476和TG580標(biāo)記的結(jié)果也均符合BC1代11的分離規(guī)律。在利用2 結(jié)果與分析2.1 CAPS分析CAPS分析結(jié)果表明，標(biāo)記TG27無(wú)論改變退火溫度，還是改變Mg2+濃度，都得不到理想的PCR產(chǎn)物，而標(biāo)記TG269和TG617得到了預(yù)期的PCR產(chǎn)物，但經(jīng)限制性內(nèi)

21、切酶消化后多態(tài)性和預(yù)期結(jié)果不一致，這兩個(gè)標(biāo)記需要利用更多的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行消化分析。標(biāo)記TG17在退火溫度60、Mg2+濃度為2.0M：Marker; 211：TA1229; 212： 9706; 216：TA1229與9706的雜交一代 M:Marker; 211:TA1229; 212: 9706; 216: F1 generation of TA1229 and 9706圖1 標(biāo)記TG17、TG53、TG158、TG476和TG580的CAPS分析結(jié)果Fig. 1 The results of analysis by using CAPS primers TG17, TG53, TG15

22、8, TG476 and TG5808期 李 紅等：利用CAPS標(biāo)記轉(zhuǎn)育野生番茄的高產(chǎn)基因1741M：Marker；211：TA1229；212：9706；216：TA1229與9706的雜交一代；114, 1629：212和216的回交一代M: Marker; 211: TA1229; 212: 9706; 216: F1 generation of TA1229 and 9706; 1-14, 16-29: BC1 generation of 212 and 216圖2 利用標(biāo)記TG17、TG53、TG158、TG476、TG580對(duì)BC1代的分析結(jié)果Fig. 2 The CAPS ana

23、lysis on BC1 by using marks TG17, TG53, TG158, TG476, TG5801742 中 國(guó) 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 40卷表2 5個(gè)RFLP轉(zhuǎn)化為CAPS標(biāo)記后的多態(tài)性Table 2 The polymorphism of 5 RFLP marks after converting to CAPS標(biāo)記 退火溫度 Mg2+濃度 PCR產(chǎn)物分子量限制性內(nèi)切酶Markers Annealing temperarure Mg2+ MW of PCR Enzyme-1() (mmol·L) (bp) TG17 60TG53 58 TG158 57 TG476

24、 58 TG580 612.0 1.5 1.5 1.5 1.52400 400 2350 1400 1450TaqI TaqI HinfI TaqI TaqI消化后的分子量 MW after digestion (bp) 9706 TA1229 F1 2400 300+110750+290+280+220+180450+310+200 880+5401400+1000 2400+1400+1000 210+180 300+210+180+110 650+290+220+180 750+650+290+220+180550+330+210+200 550+450+330+210+20014001

25、400+880+540上述標(biāo)記對(duì)BC1群體進(jìn)行分析后，得到標(biāo)記間發(fā)生交換的單株23株，分別為2617、13、14、15、52、54、65、79、80、82、85、86、132、133、134、135、139、142、143、144、145、149、150。 2.2 QTL分析和高產(chǎn)番茄材料的獲得2.2.1 QTL分析 采用軟件MAPQTL4.0對(duì)5個(gè)CAPS標(biāo)記進(jìn)行連鎖分析并對(duì)影響番茄產(chǎn)量的各個(gè)分量進(jìn)行QTL分析。通過(guò)連鎖分析將5個(gè)標(biāo)記定位于第1染色體上，其在染色體上的順序?yàn)椋篢G53、TG158、TG476、TG850和TG17，其遺傳距離分別為7.5、1.8、0.6和1.3 cM，共覆蓋長(zhǎng)

26、為11.3 cM的染色體片段。（圖3）。通過(guò)對(duì)影響番茄產(chǎn)量的各個(gè)分量進(jìn)行QTL分析，在Permutation Test命令下，成熟果實(shí)平均重量所得到的LOD閾值為12.5，對(duì)此性狀進(jìn)行多模型QTL作圖（multiple QTL model）得圖3。由圖3可知，圖中的2個(gè)峰值（1和2）所對(duì)應(yīng)的LOD值分別為15.5和14.5，均大于LOD閾值12.5，因此可將控制成熟果實(shí)平均重的QTL粗略定位在TG53和TG158之間約7.5 cM的位置。2.2.2 高產(chǎn)番茄材料的獲得 從BC1代的160株番茄材料中篩選出了16個(gè)在TG53和TG158之間發(fā)生單交換的單株。其中2617、13、14、15、79、

27、85、86、132、133、134、142、144、145、150的基因型為（0，1）型；26154，65的基因型為（1，0）型。其成熟果平均單果重位于前3位的有8株（圖4），分別為261144（0.14 kg）、261133（0.12 kg）、261150（0.12 kg）、26154（0.11 kg）、26165、261132（0.11 kg）、（0.11 kg）、26179（0.11 kg）261142（0.11kg）。以基因型為（0，0）和基因型為（1，1）的材料為對(duì)照，經(jīng)方差分析結(jié)果表明，這16份材料的成熟果實(shí)平均重量顯著高于對(duì)照，因此初步判定控制成熟果實(shí)平均重量的QTL對(duì)產(chǎn)量的影響

28、為正效應(yīng)，而這16份材料可作為高產(chǎn)番茄的新種質(zhì)。橫軸為T(mén)G17、TG53、TG158、TG476、TG580在染色體上的位置?？v軸為L(zhǎng)OD值，峰值為QTL在染色體上的位點(diǎn)，水平的虛線代表QTL閾值The abscissas correspond to the positions of TG17, TG53, TG158, TG476, TG580 in chromosome 1, the y-axis corresponds to LOD and the peak value corresponds to the QTL site on the chromosome, the site of

29、dashed line is the threshoud value of QTL圖3 成熟果平均重多模型QTL圖Fig. 3 The multiple QTL model of the average weight ofripeness fruit3 討論3.1 本試驗(yàn)獲得的5個(gè)標(biāo)記在染色體上的位置TG53、TG158、TG476、TG580和TG17和康奈爾大學(xué)網(wǎng)址（/maps/tomato_ arabidopsis/chr1c.pl）公布的潘那利番茄圖譜上的標(biāo)記順序（TG17、TG53、TG158、TG476和TG580）有差異。本研究中

30、針對(duì)多毛番茄長(zhǎng)為24 cM的染色體片段利用160個(gè)單株構(gòu)成的BC1群體進(jìn)行了遺傳分析，相當(dāng)于用1萬(wàn)多個(gè)單株構(gòu)成的群體對(duì)整個(gè)基因組進(jìn)行的分析。利用5個(gè)標(biāo)記對(duì)23個(gè)重組單株進(jìn)行多次重復(fù)分析的結(jié)果均一致。因此，本研究中得到的5個(gè)CAPS標(biāo)記在染色體上的順序結(jié)果是可靠的。發(fā)生在該染色體片段上的標(biāo)記順序的差別可能是引起多毛番茄和潘那利番茄形態(tài)特征差異的重要的遺傳原因之一，因此，8期 李 紅等：利用CAPS標(biāo)記轉(zhuǎn)育野生番茄的高產(chǎn)基因 1743圖4 番茄第1染色體末端長(zhǎng)11.3 cM片段的分子遺傳圖譜Fig. 4 The molecular genetic map of the 11.3 cM fragme

31、nt from the bottom of chromosome1進(jìn)一步對(duì)潘那利番茄和多毛番茄該染色體片段進(jìn)行序列分析和遺傳研究，可探索番茄的進(jìn)化過(guò)程。 3.2 關(guān)于控制果重的基因，前人的研究結(jié)果表明平均單果重以特殊配合力為主，占60.1%，而一般配合力占39.9%，果重的狹義遺傳力較小，受環(huán)境的影響較大，分別為17.65%24.9%和46.67%18。1999年Grandillo6和Tanksley12總結(jié)了自1982到1998對(duì)番茄果重QTL研究結(jié)果，根據(jù)分子圖譜上標(biāo)出的果重QTL位置來(lái)看，已遍及番茄的全部12條染色體，其中通過(guò)至少兩個(gè)以上相互獨(dú)立的研究所確定的同一果重QTL已有28個(gè)，在

32、第1染色體上有3個(gè)。2000年在多毛番茄第1染色體末端長(zhǎng)40 cM的染色體片段上CT70A和TG375之間也檢測(cè)到一個(gè)控制番茄平均果重的QTL5。在第1染色體末端的果重基因都存在一個(gè)普遍的特點(diǎn)，就是和可溶性固形物、果實(shí)顏色等重要的農(nóng)藝性狀緊密連鎖。例如余誕年根據(jù)對(duì)皮色、封頂性和橙色果肉與果重的關(guān)系的分析，指出果重基因分別與Y、y基因，Sp、sp基因和T、t基因連鎖18。已有的研究結(jié)果表明5，在多毛番茄第1染色體末端長(zhǎng)24 cM的染色體片段上，在TG158和TG27之間存在影響單株總產(chǎn)量的QTL。但在本試驗(yàn)中未檢測(cè)出該QTL，其原因有：（1）未利用在該染色體片段上飽和的分子標(biāo)記；但本試驗(yàn)只利用了

33、5個(gè)CAPS標(biāo)記，這對(duì)該染色體片段上控制產(chǎn)量的QTL進(jìn)行精細(xì)定位是不夠的；（2）由于產(chǎn)量性狀受環(huán)境影響較大，而現(xiàn)有的BC1世代較低，受外因影響更大，若能將其延續(xù)到BC2，BC3代，將會(huì)增加QTL定位的精確度。 3.3 試驗(yàn)得到的16份高產(chǎn)QTL材料，除產(chǎn)量較高外，其長(zhǎng)勢(shì)、葉重、莖重等指標(biāo)都顯著高于對(duì)照，可應(yīng)用于番茄育種和分布于該染色體片段上的基因或QTL的克隆中。特別是近等基因系26154和26165的外源染色體片段比較短，這兩份材料對(duì)減少連鎖累贅，建立完全以普通材料作為遺傳背景的亞近等基因系，控制番茄產(chǎn)量平均重QTL進(jìn)行更進(jìn)一步的定位將有更為重要的作用。3.4 下一步的工作將建立該染色體片段

34、更為飽和的擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性（amplified fragment length polymorphism，AFLP）、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA（random1744 中 國(guó) 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 40卷amplified polymorphic DNA，RAPD）等分子標(biāo)記。對(duì)16份材料建立高代回交QTL分析（advanced backcross-QTL analysis，AB-QTL）分析策略6,12，在對(duì)果重QTL進(jìn)行分析的同時(shí)，減少連鎖累贅，得到超高產(chǎn)量的番茄新種質(zhì)，更好地指導(dǎo)番茄育種實(shí)踐。Lopez J, Beck-Bunn T. Advanced backcross QTL analysis

35、 in cross between an elite processing line of tomato and its wild relative L. pimpinellifolium. Theoretical Genetics, 1996, 92: 213-224.7 Fulton T M, Grandillo S, beck-Bunn T, Fridman E, Frampton A,Lopez J, Petiard V, Uhlig J, Zamir D, Tanksley S D. Advanced backcross QTL analysis of a Lycopersicon

36、esculentem ×Lycopersicon parviflorum cross. Theoretical and Appllied Genetics, 2000, 100: 1025-1042.8 Chen F Q, Foolad M R, Hyman J, St. Clair D A, Beelman R B.Mapping of QTLs for lycopene and other fruit traits in a Lycopersicon esculentum× L. pimpinellifolium cross and comparison of QTLs

37、 across tomato species. Molecular Breeding, 1999, 5: 283-299. 9 余誕年. 番茄基因的分子標(biāo)記與遺傳作圖. 園藝學(xué)報(bào), 1998, 25(4),361-366.Yu D N. The molecular markers and genetic mapping in tomato. Acta Horticulturae Sinica, 1998, 25(4): 361-366. (in Chinese)10 王 雷, 王 鳴, 石 英, 田淑萍, 余慶輝. 加工番茄主要數(shù)量性狀遺傳相關(guān)的研究. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 1998, 7(1):

38、32-37.Wang L, Wang M, Shi Y, Tian S P, Yu Q H. Genetic and correlation studues on quantitative characters in processing tomato. Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica, 1998, 7(1): 32-37. (in Chinese)11 Monforte A J, Friedman E, Zamir D, Tanksley S D. Comparison of aset allelic QTL-NILs for ch

39、romosome 4 of tomato: Deductions about natural variation and implications for germplasm utilization. Theoretical and Appllied Genetics, 2001, 102: 572-590.12 Tanksley S D, Nelson J C. Advanced backcross QTL analysis:amethod for the simultaneous discovery and transfer of valuable QTLs from unadapted

40、germplasm into elite breeding lines. Theoretical and Applied Genetics, 1996, 92: 191-203.13 Grandillo S, Tanksley S D. QTL analysis of horticultural traitsdifferentiating the cultivated tomato from the closely related species Lycopersicon pimepinefollium. Theoretical and Appllied Genetics, 1996, 92:

41、 935-951.14 余誕年. 番茄果重QTL-fw2.2研究進(jìn)展及其遺傳學(xué)和育種學(xué)意義.見(jiàn): 中國(guó)蔬菜遺傳育種學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集, 2002: 158-163.Yu D N. The development of the QTL- fw2.2 affecting fruit weight. In: Dissertation for the Conference of the Vegetable Breeding in China, 2002: 158-163. (in Chinese)15 Anne Frary, Clitent Nesbitt T, Amy Frary, Silvana G

42、randillo, Knapp E,Cong B, Liu J, Muller J, Elber R, Alpert K B, Tanksley S D. fw-2.2. A quantitative trait locus key to the evolution of tomato fruit size. Science, 2000, 289: 85-88.4 結(jié)論將潘那利番茄第1染色體末端的5個(gè)RFLP標(biāo)記TG17、TG53、TG158、TG476和TG580轉(zhuǎn)化為CAPS標(biāo)記。該結(jié)果對(duì)于提高番茄遺傳圖譜中的分子標(biāo)記利用率，提高分子標(biāo)記輔助選擇效率和降低分析成本有重要意義。檢測(cè)到了控制番

43、茄成熟果實(shí)重量的QTL，并定位于TG53和TG158之間，QTL的效應(yīng)為正效應(yīng)。研究還獲得了16株含高產(chǎn)番茄新種質(zhì)，拓寬了番茄產(chǎn)量育種的資源。References1 陳世儒主編. 蔬菜育種學(xué)(第二版). 重慶: 西南農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,1993.Che S R. Vegetable Breeding. Chongqing: Southwest Agriculture University Press. 1993. (in Chinese)2 梅德圣, 李云昌, 王漢中. 作物產(chǎn)量性狀QTL定位的研究現(xiàn)狀及應(yīng)用前景. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào), 2003, 19(5): 83-88.Mei D S, Li Y

44、C, Wang H Z . The present situation and prospects of mapping QTL controlling yield traits in crops. Chinese Agriculture Science Bulletin, 2003, 19(5): 83-88. (in Chinese)3 王孝宣. 增強(qiáng)番茄果實(shí)顏色基因的精細(xì)定位及相關(guān)基因的差異表達(dá). 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所博士論文, 2004.Wang X X. The fine mapping of genes increasing fruit color and differential expression of genes related to fruit color in tomato. Dissertation for Ph.D of Ch