中藥化學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)—實(shí)驗(yàn)六八角茴香油的提取分離與檢識(shí)

1、實(shí)驗(yàn)六 八角茴香油的提取分離與檢識(shí)（一）目的要求學(xué)習(xí)揮發(fā)油的提取和各類組成成分的檢識(shí)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)要求：1掌握揮發(fā)油的水蒸氣蒸餾提取法。2學(xué)習(xí)揮發(fā)油的一般檢識(shí)及揮發(fā)油中固體成分的分離。3掌握揮發(fā)油中化學(xué)成分的薄層點(diǎn)滴定性檢識(shí)。4了解揮發(fā)油單向二次薄層色譜檢識(shí)。（二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)八角茴香為木蘭科植物八角茴香Illicium verum Hook.f.的干燥成熟果實(shí)。分布于福建、廣東、廣西、貴州、云南等省區(qū)。含揮發(fā)油49，一般約5（果皮中較多）、脂肪油約22（主要存在于種子中）及蛋白質(zhì)、樹(shù)膠、樹(shù)脂等。揮發(fā)油中主要成分是茴香醚，約為總揮發(fā)油的8090，冷時(shí)常自油中析出，故稱茴香腦。此外，尚含

2、莽草酸及少量甲基胡椒酚、茴香醛、茴香酸等。 茴香醚（腦） 甲基胡椒酚 茴香醛 莽草酸 茴香酸1茴香腦(anethole) 又稱大茴香醚、茴香烯、茴香醚。分子式C10H12，bp.235。與乙醚、氯仿混溶，溶于苯、醋酸乙酯、丙酮、二硫化碳及石油醚，幾不溶于水。2莽草酸(shikimic acid) 又稱毒八角酸。分子式C7H10O5,分子量174.15。無(wú)色針狀結(jié)晶（甲醇醋酸乙酯），mp.190191。在100ml水中可溶解18g，100ml無(wú)水乙醇中可溶解2.5g，幾乎不溶于氯仿、苯、石油醚。3甲基胡椒酚(methylchavicol) 分子式C10H12O，為無(wú)色液體，bp.215216。4

3、茴香醛 (anisaldehyde) 分子式C8H8O2，bp.236；液體，mp.0，bp.248。5.茴香酸 (anisic acid) 分子式C8H8O3，為針狀結(jié)晶，mp.184，bp.275280。（三）實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)是水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油的通法。揮發(fā)油的組成成分較復(fù)雜，常含有烷烴、烯烴、醇、酚、醛、酮、酸、醚等官能團(tuán)。因此可以用一些檢出試劑在薄層板上進(jìn)行點(diǎn)滴試驗(yàn)，從而了解組成揮發(fā)油的成分類型。揮發(fā)油中各類成分的極性互不相同，一般不含氧的烴類和萜類化合物極性較小，在薄層色譜板上可被石油醚較好的展開(kāi)；而含氧的烴類和萜類化合物極性較大，不易被石油醚展開(kāi)，但可被石油醚與醋酸乙酯的混合溶劑

4、較好的展開(kāi)。為了使揮發(fā)油中各成分能在一塊薄層色譜板上進(jìn)行分離，常采用單向二次色譜法展開(kāi)。（四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1茴香腦的提取分離取八角茴香50g，搗碎，置圓底燒瓶中，加適量水浸泡濕潤(rùn)，按一般水蒸氣蒸餾法進(jìn)行蒸餾提取。也可將搗碎的八角茴香置于揮發(fā)油測(cè)定器的燒瓶中，加蒸餾水500ml與數(shù)粒玻璃珠，連接揮發(fā)油測(cè)定器與回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測(cè)定器的刻度部分，并使溢流入燒瓶時(shí)為止。緩緩加熱至沸，至測(cè)定器中油量不再增加，停止加熱，放冷，分取油層（見(jiàn)圖）。實(shí)圖-1 揮發(fā)油測(cè)定器將所得的八角茴香油置冰箱中冷卻1小時(shí)，即有白色結(jié)晶析出，趁冷濾過(guò)，用濾紙壓干。結(jié)晶為茴香腦，濾液為析出茴香腦后的八角茴香油

5、。2檢識(shí)（1）油斑試驗(yàn) 取八角茴香油適量，滴于濾紙片上，常溫下（或加熱烘烤），觀察油斑是否消失。（2）薄層色譜板點(diǎn)滴反應(yīng) 取硅膠G薄層色譜板1塊，用鉛筆按表畫(huà)線。將揮發(fā)油試樣用510倍量乙醇稀釋后，用毛細(xì)管分別滴加于每排小方格中，再將各種檢識(shí)試劑用滴管分別滴于各揮發(fā)油試樣斑點(diǎn)上，觀察顏色變化。初步推測(cè)每種揮發(fā)油中可能含有化學(xué)成分的類型。實(shí)-表1 揮發(fā)油薄層板點(diǎn)滴反應(yīng) 試劑試樣試劑1三氯化鐵試劑22,4-二硝基苯肼試劑3堿性高錳酸鉀試劑4香草醛-濃硫酸試劑50.05溴酚藍(lán)試劑6硝酸鈰銨試劑1 2 3 4 5 6八角茴香油檸檬油丁香油薄荷油樟腦油桉葉油松節(jié)油空白對(duì)照（3）揮發(fā)油薄層色譜單向二次展開(kāi)

6、檢識(shí) 取硅膠G-CMC-Na薄層板（6cm×15cm）一塊，在距底邊1.5cm及8cm處分別用鉛筆畫(huà)起始線和中線。將八角茴香油溶于丙酮，用毛細(xì)管點(diǎn)于起始線上呈一長(zhǎng)條形，先用石油醚（3060）-醋酸乙酯（8515）為展開(kāi)劑展開(kāi)至薄層板中線處取出，揮去展開(kāi)劑，再放入石油醚（3060）中展開(kāi)至接近薄層板頂端時(shí)取出，揮去展開(kāi)劑后，分別用下列幾種顯色劑噴霧顯色。1香草醛-硫酸試劑：可與揮發(fā)油產(chǎn)生紫色、紅色等。熒光素-溴試劑：如產(chǎn)生黃色斑點(diǎn)，表明含有不飽和化合物。2,4-二硝基苯肼試劑：如產(chǎn)生黃色斑點(diǎn)，表明含有醛或酮類化合物。0.05溴甲酚綠乙醇試劑：如產(chǎn)生黃色斑點(diǎn)，表明含有酸性化合物。觀察斑點(diǎn)

7、的數(shù)量、位置及顏色，推測(cè)每種揮發(fā)油中可能含有化學(xué)成分的種類及數(shù)量。（五）實(shí)驗(yàn)說(shuō)明及注意事項(xiàng)1通過(guò)觀察餾出液的混濁程度來(lái)判斷揮發(fā)油是否提取完全。最初的餾出液中含油量較多，明顯混濁，隨著餾出液中油量的減少，混濁度也隨著降低，至餾出液變?yōu)槌吻迳踔翢o(wú)揮發(fā)油氣味時(shí)，停止蒸餾。2提取完畢，須放冷，待油水完全分層后，再將油層放出，盡量不帶出水分。3進(jìn)行單向二次展開(kāi)時(shí)，先用極性較大的展開(kāi)劑展開(kāi)至中線，然后再用極性較小的展開(kāi)劑展開(kāi)。在第一次展開(kāi)后，應(yīng)將展開(kāi)劑完全揮干，再進(jìn)行第二次展開(kāi)，否則將影響第二次展開(kāi)劑的極性，從而影響分離效果。4揮發(fā)油易揮發(fā)逸失，因此進(jìn)行層析檢識(shí)時(shí)，操作應(yīng)迅速及時(shí)，不宜久放。5噴灑香草醛-濃硫酸顯色劑時(shí)，應(yīng)于通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行；用溴甲酚綠試劑顯色時(shí)，應(yīng)避免在酸性條件下進(jìn)行。（六）思考題1從八角