卷柏提取物改善高脂血癥大鼠肝臟脂肪變及肝臟保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究

1、ChineseJournalofNewDrugs2010,19(14)·重大新藥創(chuàng)制專項(xiàng)巡禮·卷柏提取物改善高脂血癥大鼠肝臟脂肪變及肝臟保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究鄭曉珂1,2,張?chǎng)?王小蘭21,2,侯慶偉,陳克宇,王彥志221,2(1河南中醫(yī)學(xué)院,鄭州450008;2河南省中藥開(kāi)發(fā)工程技術(shù)研究中心,鄭州450008)摘要目的:采用高脂飼料喂養(yǎng)法建立大鼠高脂血癥模型,研究卷柏提取部位(A,B,C,D)對(duì)此大鼠模型肝臟的影響。方法:健康雄性Wistar大鼠70只,除正常對(duì)照組10只大鼠給予基礎(chǔ)飼料外,其余均給予高脂飼料喂養(yǎng),4周后尾部采血,測(cè)量血液中總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)的

2、含量。根據(jù)TC值將大鼠隨機(jī)分為模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、卷柏A組、卷柏B組、卷柏C組和卷柏D組(n=10)。連續(xù)給藥16周后處死,給藥的同時(shí)給予高脂飼料。計(jì)算大鼠的體重增長(zhǎng)情況和肝臟指數(shù),檢測(cè)血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)和肝臟中TC,TG,高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、脂聯(lián)素(APN)、腫瘤壞死因子-(TNF-)、極低密度脂蛋白(VLDL)的水平。結(jié)果:給藥16周后,卷柏A組和D組的ALT,AST,TC,TG,TNF-水平均顯著低于模型組(P<0.05,P<0.01),APN,VLDL水平均顯著高于模型組(P<0.

3、05,P<0.01),并且D組用藥量明顯低于A組,相當(dāng)于A組用藥量的1/4。結(jié)論:卷柏提取物對(duì)高脂血癥大鼠肝臟有一定的調(diào)節(jié)作用,能降低脂肪在肝臟中積聚,有保護(hù)肝臟的作用。卷柏提取物減少脂肪在肝臟中積聚、改善肝臟脂肪變的作用可能與其提高肝臟中VLDL水平有關(guān);卷柏提取部位D可能是其主要活性部位。關(guān)鍵詞卷柏提取物;高脂血癥;肝臟脂肪變;肝臟保護(hù)中圖分類號(hào)R282.71文獻(xiàn)標(biāo)志碼A文章編號(hào)1003-3734(2010)14-1216-06EffectofSelaginellatamariscina(Beauv.)Springextractonhepaticsteatosisanditshepa

4、toprotectiveeffectinratswithhyperlipemiaZHENGXiao-ke,ZHANGXin,WANGXiao-lan,HOUQing-wei,CHENKe-yu,WANGYan-zhi(1HenanUniversityofTraditionalChineseMedicine,Zhengzhou450008,China;2HenanEngineeringResearchCenterofDevelopmentofTraditionalChineseMedicine,Zhengzhou450008,China)1,221,2221,2AbstractObjective

5、:ToevaluatetheeffectofSelaginellatamariscina(Beauv.)Springextract(A,B,C,D)onliverfunctionsinratswithhyperlipemiainducedbyhigh-fatdiet.Methods:SeventymaleWistarratswerefedwithnormalorhigh-fatdietsfor4weeks.Fourweekslater,serumTCandTGwereassayed.AccordingtotheTC,hyperlipemicratswererandomlydividedinto

6、6groups:hyperlipidemiacontrol,positivecontroland4Sela-ginellaextract(A,B,C,D)groups(n=10ineachgroup).Ratsweresacrificedaftertreatmentfor16weeks.Weightgain,liverindex,serumALTandASTlevels,andliverTC,TG,HDL-C,LDL-C,APN,TNF-andVLDLlevelswereassayed.Results:After16-weekadministrationofSelaginellaextract

7、s,ALT,AST,TC,TG,TNF-levelswerereducedinSelaginellaextractgroupsAandD(P<0.05and<0.01);andAPNandVLDLlevelswereincreasedinSelaginellaextractgroupsAandD(P<0.05,P<0.01)incomparisontothehyperlipi-demiacontrolgroup.TheeffectivedosewassignificantlyloweringroupDthaningroupA,whichwasonly1/4ofthedo

8、seofgroupA.Conclusion:Selaginellaextractsprotectstheliverinhyperlipidemicratsthroughregulating基金項(xiàng)目國(guó)家重大新藥創(chuàng)制科技重大專項(xiàng)(2009ZX09103-440);河南省重大公益性科研招標(biāo)項(xiàng)目(081100910800)2010卷第ChineseJournalofNewDrugs2010,19(14)liverfunctionandreducingtheaccumulationoffatintheliver.ThemechanismmayrelatetoelevationofliverVLDLlev

9、elbytheSelaginellaextracts.ThegroupDmaybetheactivepart.KeywordsSelaginellatamariscina(Beauv.)Springextract;hyperlipemia;hepaticsteatosis;hepatopro-tection高脂血癥(hyperlipidemia)是脂肪肝、動(dòng)脈粥樣硬化等多種心血管疾病的病理基礎(chǔ)。隨著人們生活水平的提高,高脂血癥的發(fā)病率呈現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì),成為危害人類健康的常見(jiàn)疾病之一。卷柏(Selaginellatamariscina(Beauv.)Spring)為蕨類卷柏科(Selagine

10、llaceae)卷柏屬(Selaginella)植物卷柏的全草,又名九死還魂草、長(zhǎng)生不死草等。2005年版中華人民共和國(guó)藥典收載了卷柏和墊狀卷柏(Selaginellapulvinata(HooketGrev.)Max-1im.),將其列為臨床規(guī)范藥材。本實(shí)驗(yàn)室前期對(duì)卷柏化學(xué)成分進(jìn)行了全面系統(tǒng)的研究,從中分離出大量的黃酮類、木脂素類、核苷類和其他多酚類化合物2-7學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心);辛伐他汀(江蘇黃河藥業(yè)股份有限公司);丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)試劑盒、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)試劑盒、總膽固醇(TC)試劑盒、三酰甘油(TG)試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇(LD

11、L-C)試劑盒(上海復(fù)星長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司);脂聯(lián)素(APN)試劑盒(RD公司);腫瘤壞死因子-(TNF-)放免試劑盒(北京解放軍總醫(yī)院科技開(kāi)發(fā)中心放免研究所);極低密度脂蛋白(VLDL)試劑盒(Uscnlife公司)。主要儀器奧林巴斯AU400全自動(dòng)生化分析儀(日本O-LYMPUS光學(xué)股份有限公司);可見(jiàn)-紫外分光光度計(jì)(島津U2201);KD160HR高速低溫冷凍離心機(jī)(科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司);電熱恒溫水浴箱(北京長(zhǎng)源實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠);超低溫冰箱(美國(guó)REVCO公司);電子天平、電子讀數(shù)分析天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司產(chǎn)品)。,并初步研究了其藥理活性。采用去卵巢大鼠模型研究

12、卷柏雌激素的作用時(shí),發(fā)現(xiàn)卷柏有降低大鼠血液中TC,TG,LDL-C,升高血液中HDL-C以8及降低肝臟中TC,TG水平的作用。本實(shí)驗(yàn)旨在前期工作的基礎(chǔ)上,選用飲食誘導(dǎo)的高脂血癥大鼠模型,探討卷柏不同提取部位對(duì)肝臟的影響。方法制備高脂血癥大鼠模型70只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3d,按體重均衡原則隨機(jī)選取10只做為正常對(duì)照組,給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng);其余60只給予高脂飼料喂養(yǎng)。4周后,大鼠禁食12h,尾部采血,測(cè)量血液中的TC,TG含量。根據(jù)TC值將其隨機(jī)分為模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、卷柏A,B,C和D組,每組各10只。給藥-1mg·kg,qd;正常對(duì)照組和模型組灌胃蒸餾水,灌胃體積為3mL,qd。連續(xù)給藥1

13、6周,每周稱重1次,根據(jù)體重調(diào)整給藥劑量。卷柏各部位提取物均按臨床用藥的20倍換算,給藥的同時(shí)繼續(xù)給予高脂飼料,所有大鼠給藥期間均自由進(jìn)食進(jìn)水。樣本的收集和測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)束前1d禁食,稱重,眼球取血后脫頸處死,迅速取出肝臟稱重。血液以3500r·min離心20min,分離血清。取相同部位肝臟組織。肝臟組織與-1材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及高脂飼料雄性Wistar大鼠70只,體重為(210±30)g,購(gòu)自鄭州大學(xué)河南省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。大鼠被隨機(jī)分為7組,分別為正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(辛伐他汀)、卷柏A,B,C和D組,每組各10只。實(shí)驗(yàn)期間在二級(jí)動(dòng)物房喂養(yǎng),環(huán)境溫度為(25±1)

14、。大鼠自由進(jìn)食進(jìn)水。高脂飼料(配方:78.8%基礎(chǔ)飼料、10%豬油、10%蛋黃粉、1%膽固醇、0.2%豬膽鹽)由鄭州大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心加工制成。藥品和主要試劑卷柏購(gòu)自本草國(guó)藥堂責(zé)任有限公司。卷柏干燥全草8.98kg,用乙醇回流提取得卷柏A(總部位),然后上聚酰胺柱用不同溶劑洗脫,得卷柏B(水部位)、卷柏C(50%乙醇部位)、卷柏D(80%乙醇部位),4個(gè)部位分別為350.1,100.8,66.34,86.06g。豬膽鹽、膽固醇(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);自制蛋黃粉(將熟雞蛋的蛋黃晾干成粉制備而成);自制豬油(由豬肥肉提煉而成);基礎(chǔ)飼料粉(鄭州大ChineseJournalofNewDrugs

15、2010,19(14)血清均于-80凍存待用。應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中ALT,AST和肝臟中TC,TG,HDL-C,LDL-C的含量,放射免疫法檢測(cè)肝臟中TNF-的水平,酶聯(lián)免疫法檢測(cè)肝臟中APN,VLDL的水平。體重增長(zhǎng)和肝臟指數(shù)的測(cè)定體重增長(zhǎng)=給藥第16周體重-造模最后1周體重。肝臟指數(shù)/%=肝臟濕重÷給藥第16周體重×100%。5肝臟中TC,TG,HDL-C,LDL-C水平的測(cè)定5.1樣本制備精密稱取肝臟0.1g,加入1mL0.9%生理鹽水,制成勻漿液。加入氯仿-甲醇(12)3.75mL,漩渦混懸15min。再加入氯仿1.25mL,混合1min。離心(500r&

16、#183;min)10min。棄上層液,收集下層液體,過(guò)濾雜質(zhì),真空干燥。揮干氯仿后,加入200L甲醇定容。5.2樣本測(cè)定分別用TC,TG,HDL-C,LDL-C試劑盒在奧林巴斯AU400全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定TC,TG,HDL-C,LDL-C的含量。6肝臟中APN水平的測(cè)定6.1樣本制備精密稱取肝臟0.1g,加入1mL0.9%生理鹽水,制成勻漿液。20,3000r·min-1-18.2樣品測(cè)定利用競(jìng)爭(zhēng)原理,用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔板中加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,再加入酶標(biāo)抗原,標(biāo)準(zhǔn)品或樣品與酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)性地與微孔板中的抗體結(jié)合,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加入顯色劑顯色。用酶標(biāo)

17、儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度。數(shù)據(jù)分析數(shù)據(jù)以 x±s表示,SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,各組間比較采用單因素方差分析。P<0.05為差異有顯著性意義。結(jié)果大鼠一般情況觀察造模前大鼠情況良好,毛色光滑,反應(yīng)靈敏;高脂飼料喂養(yǎng)后,大鼠出現(xiàn)反應(yīng)不靈敏現(xiàn)象;給藥16周后,各組大鼠活動(dòng)量有所增加,反應(yīng)較靈敏,其中以陽(yáng)性對(duì)照組及卷柏D組改善較為明顯。給藥期間共有5只大鼠死亡,解剖發(fā)現(xiàn)肺部水腫、充血,此為灌胃操作失誤導(dǎo)致藥物誤吸入氣管所致。卷柏對(duì)大鼠體重和肝臟指數(shù)的影響模型組大鼠體重增長(zhǎng)低于正常對(duì)照組,但無(wú)顯著性差異。陽(yáng)性對(duì)照組及4個(gè)卷柏給藥組體重增長(zhǎng)均高于模型組

18、,但與模型組和正常對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異。模型組大鼠肝臟指數(shù)明顯升高,與正常對(duì)照組比較有極顯著性差異(P<0.01)。陽(yáng)性對(duì)照組大鼠肝臟指數(shù)低于模型組,有顯著性差異(P<0.05),4個(gè)卷柏給藥組大鼠肝臟指數(shù)降低,但與模型組比較均無(wú)顯著性差異。見(jiàn)表1。表1卷柏不同部位對(duì)飲食誘導(dǎo)高脂血癥大鼠體重和肝臟指數(shù)的影響x ±s組別正常對(duì)照組模型組陽(yáng)性對(duì)照組卷柏A組卷柏B組卷柏C組卷柏D組動(dòng)物數(shù)1099981010離心15min,取上清。6.2樣本測(cè)定采用雙抗體夾心法測(cè)定樣品。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔板中加入樣品,再加入酶標(biāo)抗體,使之結(jié)合形成抗體-抗原

19、-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加入顯色劑顯色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度。7肝臟中TNF-水平的測(cè)定7.1樣本制備精密稱取肝臟0.1g,加入1mL0.9%生理鹽水,制成勻漿液。4,3000r·min離心15min,取上清。7.2樣本測(cè)定利用液相競(jìng)爭(zhēng)抑制原理,采用平衡法測(cè)定樣品。待測(cè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品與限量抗原和標(biāo)記抗原加在一起,進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合反應(yīng)。反應(yīng)完全后,加入免疫分離劑,分離出抗原-抗體復(fù)合物,測(cè)定復(fù)合物的放射性(B),計(jì)算各標(biāo)準(zhǔn)管的結(jié)合率(B/B0)。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣品濃度。8肝臟中VLDL水平的測(cè)定8.1樣本制備精密稱取肝臟0.1g,加入1m

20、L-10.9%生理鹽水,制成勻漿液。20,5000r·min離心10min,取上清。2010卷第-1與正常對(duì)照組比較,a:P<0.01;與模型組比較,b:P<0.053卷柏對(duì)大鼠血清ALT和AST水平的影響給藥16周后,模型組血清ALT和AST水平均顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)。陽(yáng)性對(duì)照組血清ChineseJournalofNewDrugs2010,19(14)ALT水平呈下降趨勢(shì),但與模型組比較無(wú)顯著性差異;卷柏A,D組血清ALT水平顯著低于模型組(P<0.05,P<0.01);B,C組血清ALT水平降低,但與模型組比較均無(wú)顯著性差異。陽(yáng)性對(duì)照組

21、血清AST水平呈下降趨勢(shì),但與模型組比較無(wú)顯著性差異;卷柏A,C,D組血清AST水平顯著低于模型組(P<0.05,P<0.01);B組血清AST水平有所降低,但與模型組比較無(wú)顯著性差異。見(jiàn)表2。表2卷柏不同部位對(duì)飲食誘導(dǎo)高脂血癥大鼠血清ALT和AST水平的影響x ±s組別正常對(duì)照組模型組陽(yáng)性對(duì)照組卷柏A組卷柏B組卷柏C組卷柏D組動(dòng)物數(shù)1099981010-1ALT/u·L-1AST/u·L4卷柏對(duì)大鼠肝臟TC,TG,HDL-C,LDL-C水平的影響給藥16周后,模型組肝臟中TC和TG水平均顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05,P<0.01);模

22、型組肝臟中HDL-C和LDL-C水平與正常對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。陽(yáng)性對(duì)照組肝臟中TC水平顯著低于模型組(P<0.05);卷柏A,D組肝臟TC水平均顯著低于模型組(P<0.05,P<0.01);B,C組TC水平有所降低,但與模型組比較均無(wú)顯著性差異。陽(yáng)性對(duì)照組、卷柏A,D組肝臟TG水平顯著低于模型組(P<0.05,P<0.01);B,C組肝臟TG水平有所降低,但與模型組比較均無(wú)顯著性差異。陽(yáng)性對(duì)照組、A組、D組肝臟HDL-C水平與模型組及正常對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異;B組、C組HDL-C水平顯著低于模型組及正常對(duì)照組(P<0.05)。陽(yáng)性對(duì)照組、A組、B組、

23、C組、D組肝臟LDL-C水平均呈下降趨勢(shì),但與模型組比較均無(wú)顯著性差異。見(jiàn)表3。x ±sd119.00±5.54c與正常對(duì)照組比較,a:P<0.05;與模型組比較,b:P<0.05,c:P<0.01;與陽(yáng)性對(duì)照組比較,d:P<0.05表3卷柏不同部位對(duì)飲食誘導(dǎo)高脂血癥大鼠肝臟TC,TG,HDL-C,LDL-C水平的影響組別正常對(duì)照組模型組陽(yáng)性對(duì)照組卷柏A組卷柏B組卷柏C組卷柏D組動(dòng)物數(shù)1099981010-1TC/mmo·Ll-1TG/mmo·Ll-1HDL-C/mmo·Ll-1LDL-C/mmol·Lec0.

24、82±0.18d0.107±0.033與正常對(duì)照組比較,a:P<0.05,b:P<0.01;與模型組比較,c:P<0.05,d:P<0.01;與陽(yáng)性對(duì)照組比較,e:P<0.055卷柏對(duì)大鼠肝臟APN和TNF-水平的影響給藥16周后,模型組APN水平顯著低于正常對(duì)照組(P<0.05),模型組TNF-水平明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01)。陽(yáng)性對(duì)照組、卷柏A,D組肝臟APN水平顯著高于模型組(P<0.05,P<0.01);B,C組APN水平有升高趨勢(shì),但與模型組比較均無(wú)顯著性差異。陽(yáng)性對(duì)照組、卷柏A,D組肝臟TNF-水平均明

25、顯低于模型組(P<0.01);B組肝臟TNF-水平明顯低于模型組(P<0.01),但明顯高于正常對(duì)照組(P<0.05);C組肝臟TNF-水平較模型組有降低趨勢(shì),但無(wú)顯著性差異,并且明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01)。見(jiàn)表4。表4卷柏不同部位對(duì)飲食誘導(dǎo)高脂血癥大鼠肝臟APN和TNF-水平的影響組別正常對(duì)照組模型組陽(yáng)性對(duì)照組卷柏A組卷柏B組卷柏C組卷柏D組動(dòng)物數(shù)1099981010-1APN/g·mgx ±s-1TNF-/ng·mg0.25±0.008d與正常對(duì)照組比較,a:P<0.05,b:P<0.01;與模型組比較,c

26、:P<0.05,d:P<0.01;與陽(yáng)性對(duì)照組比較,e:P<0.01ChineseJournalofNewDrugs2010,19(14)6卷柏對(duì)大鼠肝臟VLDL水平的影響給藥16周后,模型組肝臟VLDL水平明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01)。陽(yáng)性對(duì)照組VLDL水平與模型組比較無(wú)顯著性差異,但顯著高于正常對(duì)照組(P<0.01);卷柏A,D組VLDL水平顯著高于模型組(P<0.05,P<0.01);B,C組VLDL水平與模型組比較無(wú)顯著性差異,但明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01)。見(jiàn)表5。表5卷柏不同部位對(duì)飲食誘導(dǎo)高脂血癥大鼠肝臟VLDL的影響組別

27、正常對(duì)照組模型組陽(yáng)性對(duì)照組卷柏A組卷柏B組卷柏C組卷柏D組動(dòng)物數(shù)1099981010平均顯著低于模型組,表明卷柏提取物可減少TC,TG在肝臟內(nèi)的積聚。APN是一種新發(fā)現(xiàn)的脂肪源性物質(zhì),僅由脂肪細(xì)胞分泌硬化、降血脂等作用15-1815-16,具有抗動(dòng)脈粥樣。APN改善脂肪代謝的機(jī)制可能與APN降低參與脂肪酸向肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)的相16,19關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)、促進(jìn)肝內(nèi)脂肪酸氧化有關(guān)。APN還可改善非酒精性脂肪肝病,其機(jī)制可能與影響肝臟脂肪代謝、周圍組織對(duì)胰島素的敏感性以及16,20炎癥因子的產(chǎn)生有關(guān)。炎癥是脂肪肝進(jìn)展為肝炎和肝硬化的主要病因,TNF-可促進(jìn)肝臟炎癥、纖維化的發(fā)生和發(fā)展。APN與TNF-的結(jié)構(gòu)十

28、分相似,它們可與對(duì)方受體結(jié)合,而且共用1個(gè)信號(hào)通道,二者互相抑制對(duì)方的產(chǎn)生、互相拮抗對(duì)方的功能。APN可能通過(guò)抑制TNF-的表達(dá)來(lái)干預(yù)肝臟炎癥與纖維化的發(fā)生、發(fā)展16x ±s-1VLDL/g·mgaabd。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模ce28.82±3.14a型組APN水平較正常對(duì)照組顯著下降,TNF-水平較正常對(duì)照組明顯升高。卷柏提取物連續(xù)灌胃16周后,大鼠肝臟APN水平較模型組顯著升高,TNF-水平顯著降低,表明卷柏提取物有升高APN和降低TNF-水平的作用。結(jié)合TC和TG的結(jié)果,提示卷柏有改善脂肪肝及肝臟炎癥與纖維化的發(fā)生、發(fā)展的作用。ALT,AST存在于肝細(xì)胞內(nèi)。正常

29、情況下,由于細(xì)胞膜的包裹,肝細(xì)胞中的ALT和AST不會(huì)進(jìn)入血液,但如果肝細(xì)胞受損,細(xì)胞變性、壞死,細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能受到損害,肝細(xì)胞中所含的ALT和AST進(jìn)入血液,血液中ALT,AST活性增加。ALT,AST是肝細(xì)胞損傷的敏感指標(biāo),血液中ALT和AST的活性可反映肝細(xì)胞的受損程度以及肝細(xì)胞的修復(fù)情況21與正常對(duì)照組比較,a:P<0.01;與模型組比較,b:P<0.05,c:P<0.01;與陽(yáng)性對(duì)照組比較,d:P<0.05,e:P<0.01討論肝細(xì)胞是機(jī)體物質(zhì)代謝最活躍的場(chǎng)所之一,肝臟在脂類的消化、吸收、分解、合成、及運(yùn)輸?shù)却x過(guò)程中均起重要作用,但其不具有儲(chǔ)存脂肪的

30、功能。過(guò)量的脂肪在肝臟內(nèi)持久積聚可導(dǎo)致脂肪肝。目前高脂血癥動(dòng)物模型大致分為兩種:一種是采用去勢(shì)大鼠,因卵巢摘除導(dǎo)致雌激素分泌減少造成內(nèi)源性脂代謝紊亂所引起的高脂血癥模型;另一種是高脂飼料喂養(yǎng)導(dǎo)致高脂血癥動(dòng)物模型。在高脂飲食誘導(dǎo)的脂肪肝模型中,以高脂飼料(基礎(chǔ)飼料+1%2%膽固醇、10%豬油或5%蛋黃粉)喂養(yǎng)812周后,肝臟可出現(xiàn)中至重度大泡性脂肪變,伴轉(zhuǎn)氨酶增高,提示高脂對(duì)肝臟的損傷較13-14大。本研究探討了卷柏提取物對(duì)高脂血癥大鼠肝臟的影響。模型組大鼠體重增加低于正常對(duì)照組,是各組中體重增加最少的分組,而肝臟指數(shù)明顯高于正常對(duì)照組,是各組中增加最多的分組。而且,模型組大鼠肝臟TC,TG水平

31、均高于正常對(duì)照組,表明其肝臟內(nèi)出現(xiàn)脂肪積聚現(xiàn)象。本研究結(jié)果顯示,卷柏提取物連續(xù)灌胃16周后,大鼠肝臟指數(shù)降低,TC,TG水2010卷第1210-119。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組大鼠血清中ALT和AST水平顯著高于正常對(duì)照組,卷柏提取物連續(xù)灌胃16周后,大鼠血清中ALT,AST水平較模型組顯著降低,表明卷柏提取物可降低血清中ALT,AST水平,具有保肝、防止肝細(xì)胞損傷的作用。陽(yáng)性對(duì)照組大鼠血清中ALT,AST水平與模型組無(wú)顯著性差異,表明辛伐他汀可使體內(nèi)肝臟酶升高,這與他汀類藥物在臨床應(yīng)用時(shí)要求監(jiān)測(cè)肝功能相符。肝臟是脂蛋白代謝的關(guān)鍵部位:肝細(xì)胞合成HDL將肝外的膽固醇轉(zhuǎn)移到肝內(nèi)代謝;肝臟是LDL降

32、解的重要器官;生物體內(nèi)肝臟合成的TG自身不能隨血液運(yùn)輸,必須先在肝臟內(nèi)組裝成VLDL-TG顆10,23粒后,才能到達(dá)肝外組織而被利用。肝脂肪變性的一個(gè)重要誘因是肝臟中脂蛋白的合成與分泌受21-22ChineseJournalofNewDrugs2010,19(14)阻,從而抑制肝內(nèi)TG的輸出,肝臟中TG水平升高。23目前認(rèn)為分泌VLDL可抑制肝臟脂肪變性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組HDL-C、LDL-C水平與正常對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異,模型組VLDL水平較正常對(duì)照組有明顯上升。卷柏提取物連續(xù)灌胃16周后,卷柏A,D組HDL-C,LDL-C水平與模型組比較無(wú)顯著性差異,VLDL水平均較模型組顯著升高,

33、表明本實(shí)驗(yàn)中本模型肝臟HDL-C,LDL-C水平變化不明顯。結(jié)合模型組肝臟內(nèi)VLDL和TG的水平,推測(cè)模型組大鼠肝臟中VLDL有應(yīng)激性的增加,但不足以對(duì)抗肝臟中TG的合成量的增加。卷柏可升高肝臟中VLDL的水平,結(jié)合卷柏組肝臟內(nèi)TG的水平,推測(cè)卷柏減少脂肪在肝臟中積聚改善脂肪肝的作用可能與其升高肝臟中VLDL的水平有關(guān)。綜上所述,卷柏提取物可降低高脂血癥大鼠肝臟中TC和TG的水平,改善肝臟炎癥和纖維化,具有保肝作用。卷柏提取物減少脂肪在肝臟中積聚、改善脂肪肝的作用可能與其升高肝臟中VLDL水平的作用有關(guān)。卷柏A組和卷柏D組作用較為明顯,而D組用藥量?jī)H為A組用藥量的1/4,提示卷柏提取部位D可能

34、是其主要活性部位。參考文獻(xiàn)與鑒定J.藥學(xué)學(xué)報(bào),2004,39(9):719-721.3鄭曉珂,史社坡,畢躍峰,等.卷柏中黃酮類成分研究J.中草藥,2004,35(7):742-743.4鄭曉珂,史社坡,馮衛(wèi)生,等.卷柏化學(xué)成分研究J.藥學(xué)學(xué)報(bào),2004,39(4):266-268.5畢躍峰,鄭曉珂,馮衛(wèi)生,等.卷柏中化學(xué)成分的分離與結(jié)構(gòu)鑒定J.藥學(xué)學(xué)報(bào),2004,39(1):41-45.6ZHENGXK,LIKK,WANGYZ,etal.Anewdihydrobenzofu-ranlignanosidefromSelaginellamoellendorffiiHieronJ.ChinChemL

35、ett,2008,19(1):79-81.7WANGYZ,CHENH,ZHENGXK,etal.AnewsesquilignanfromSelaginellasinensis(Desv.)SpringJ.ChinChemLett,2007,18(10):1224-1226.8鄭曉珂.卷柏化學(xué)成分及雌激素樣作用機(jī)理研究D.北京中醫(yī)藥大學(xué)博士研究生學(xué)位論文,2006.9賈弘褆,屈伸.生物化學(xué)M.北京:人民衛(wèi)生出版社,2005.10CALAMITAG,PORTINCASAP.Presentandfuturetherapeuticstrategiesinnon-alcoholicfattyliverdiseaseJ.ExpertOpinT-herTargets,2007,11(9):1231-1249.11吳