胎兒超聲軟指標(biāo)異常的染色體微陣列分析

1、胎兒超聲軟指標(biāo)異常的染色體微陣列分析【摘要】目的 探討染色體微陣列分析技術(shù)(chromosomal microarryanalysis, CMA汪超聲軟指標(biāo)異常胎兒產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法選取2015年10月至2017年12月于浙江省湖州婦幼保健院產(chǎn)前診斷 中心就診，超聲檢查發(fā)現(xiàn)軟指標(biāo)異常但未合并明確結(jié)構(gòu)畸形的125例患者，包括多項(xiàng)軟指標(biāo)異常孕婦 35例，單項(xiàng)軟指標(biāo)異常孕婦90例。入選病例已排除常見(jiàn)染色體非整倍體異常。對(duì)上述病例羊水行CMA檢測(cè)，并分析結(jié)果。結(jié)果CMA共檢出致病性拷貝數(shù)變異(pathogenic copy number variation, pCNV)6例,檢出率為 4.80

2、%。其中 35 例多項(xiàng) 軟指標(biāo)異常胎兒中檢出pCNVs涮，檢出率為8.57% ; 90例單項(xiàng)軟指 標(biāo)異常胎兒中檢出pCNVs涮，檢出率為3.33%;結(jié)論 與傳統(tǒng)染色 體核型分析相比，CMA可以提高超聲軟指標(biāo)異常胎兒染色體異常的 檢出率，有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值?！娟P(guān)鍵詞】染色體微陣列分析； 產(chǎn)前診斷；超聲軟指標(biāo)異常Chromosomal Microarray Analysis of Abnormal Fetal Ultrasonographic Soft Markers【Abstract Objective: To explore the application value of chromoso

3、mal microarray analysis (CMA) in prenatal diagnosis of abnormal ultrasonographic soft markers. Methods : Choose in October 2015 to December 2017 in our hospital prenatal diagnosis center visits and abnormal ultrasonographic soft markers of 125 cases of fetus. There were 35 cases with multiterm soft

4、markers, 90 cases with single soft基金項(xiàng)目：染色體微陣列分析技術(shù)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)異常胎兒遺傳學(xué)病因中的應(yīng)用研究 (2017GYB45)markers.Abnormal chromosome aneuploidy was excluded in selected cases.CMA test was performed on the above cases, and the results were analyzed. Results: A total of 6 cases of pathogenic copy number variants (pCNVs)w

5、ere detected by CMA, and the detection rate was 4.80%.Among them, PCNVs were detected in 3 of 35 abnormal fetuses with multiterm soft markers, the detection rate was 8.57%.PCNVs were detected in 3 of 90 abnormal fetuses with single soft markers, and the detection rate was 3.33%Conclusion : Compared

6、with traditional karyotype analysis, CMA can improve the detection rate of fetal ultrasonographic soft markers chromosomal abnormality and can be used as an effective prenatal diagnosis method.【Key words Chromosome microarray analysis; Prenatal diagnosis; Abnormal ultrasonographic soft markers染色體微陣列

7、分析技術(shù)(chromosomal microarry analysis CMA升目 對(duì)于染色體核型分析檢出率更高，能夠檢測(cè)出lkb的拷貝數(shù)變異(CNVs ,對(duì)超聲提示胎兒結(jié)構(gòu)異常者額外檢出率可達(dá)6.0%9.0%1。超聲軟指標(biāo)異常為非特異性聲像圖表現(xiàn)，大部分為正常胎兒，但在染色體異常的胎兒中發(fā)生率更高。我們對(duì)125例已排除染色體核型非整 倍體異常的超聲軟指標(biāo)異常胎兒進(jìn)行了CMA分析，以探討CMA在超聲軟指標(biāo)異常胎兒產(chǎn)前診斷中的價(jià)值。1對(duì)象與方法1.1 對(duì)象2015年10月至2017年12月到浙江省湖州市婦幼保健院產(chǎn)前診斷中心超聲檢查發(fā)現(xiàn)軟指標(biāo)異常但未合并結(jié)構(gòu)畸形的孕婦125例行羊水CMA檢查。超

8、聲軟指標(biāo)異常主要包括：頸項(xiàng)軟組織增厚、側(cè)腦室增寬、輕度腎盂擴(kuò)張、腸管強(qiáng)回聲、心室強(qiáng)光點(diǎn)、長(zhǎng)骨偏短、鼻骨缺失或發(fā)育不全、脈絡(luò)膜囊腫、頸部水囊瘤等軟指標(biāo)異常以及羊水量異常和胎兒生長(zhǎng)受限。入選病例已排除常見(jiàn)染色體非整倍體異常。 125 例中單項(xiàng)軟指標(biāo)異常者90 例，多項(xiàng)軟指標(biāo)異常者35 例。所有胎兒父母均進(jìn)行產(chǎn)前遺傳咨詢并簽署知情同意書(shū)。1.2 方法1 2 1 樣本采集在超聲引導(dǎo)定位下行羊膜腔穿刺術(shù)后留取羊水2管，各 8 mI， 1 管用于 CMA 檢測(cè)，另1 管備用。抽取胎兒父母外周血各2管，每管4 mL, 1管用于CMA檢測(cè)，另1管備用。1. 2. 2染色體微陣列分析檢測(cè) 將提取的全基因組 DN

9、A經(jīng)過(guò)擴(kuò)增、標(biāo)記、雜交、洗滌染色后掃描，獲取數(shù)據(jù)并加載于配套ChAS v3 0軟件進(jìn)行結(jié)果判讀。1 2 3CNV 致病性判讀具體判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：(1)包含有已知微缺失/微重復(fù)綜合癥的關(guān)鍵區(qū)域，帶有 OMIM 致病基因，或遺傳自表型異常的親屬在多個(gè)文獻(xiàn)或數(shù)據(jù)庫(kù)中報(bào)道有臨床意義，則定義為致病性CNVs (pathogenic CNV， spCNVs；) (2) 在多個(gè)文獻(xiàn)或數(shù)據(jù)庫(kù)均提示良性變異，存在于正常個(gè)體中，或遺傳自表型正常的父母，并且片段大小一樣定義為正常多態(tài)性 CNVs(benign CNVs bCNVs) (3)該CNVs在數(shù)據(jù)庫(kù)中偶有描述，但致病性有爭(zhēng)議定義為臨床意義不明的CNVs(va

10、riants of unknown significance， VOUS)2。2結(jié)果2. 1超聲軟指標(biāo)異常胎兒的 CMA檢測(cè)結(jié)果125份孕婦羊水CMA樣本全部檢測(cè)成功，成功率為100%。檢出pCNV群本6例，異常率為3. 80%; VOUS樣本 3 例，占 2.40%; bCNVs及未檢出 300 kb CNVs樣本共116例，占92.80%。（見(jiàn)表1）表1 CMA檢測(cè)為CNVs的具體情況B超表現(xiàn)染色體區(qū)段片段 大小變異查詢結(jié)果雙親 驗(yàn)證妊娠 結(jié)局1心室強(qiáng)光點(diǎn)，8q13.3906.8Kb缺失致病與引產(chǎn)羊水少耳-面-頸綜合征母(Otofaciocervical syndrome 1)和鰥-耳綜

11、合征(Branchiootic syndrome 1)等同2FGR腸道回Xp11.4p11.236.8Mb缺失致病新發(fā)引產(chǎn)聲增強(qiáng)3頸部水囊瘤Xp22.311.6MB缺失致病新發(fā)引產(chǎn)X-連鎖的魚(yú)鱗癥4心室強(qiáng)光點(diǎn)、4q35.1q35.2715KB重復(fù)致病新發(fā)新生羊水少兒無(wú)異常5側(cè)腦室增寬20P12.1575KB重復(fù)致病新發(fā)引產(chǎn)6NT增厚22q11.22262KB缺失致病新發(fā)新生兒無(wú)異常7心室強(qiáng)光點(diǎn)、Xp22.33646kb重復(fù)臨床意義不明新發(fā)新生NF增厚兒無(wú)異常8脈絡(luò)膜小囊9q33.3344KB缺失臨床意義不明新發(fā)新生腫兒無(wú)異常9心室強(qiáng)光點(diǎn)5p15.33344KB缺失臨床意義不明與母新生同兒無(wú)異常

12、2. 2 CMA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CNVs的驗(yàn)證結(jié)果6例pCNVs中5例為新發(fā)的突變，1例與母相同。其母表現(xiàn)為面部異常，聽(tīng)力障礙，考慮為腮 -耳-腎綜合征（表1中1）。具體染色體微缺失情況見(jiàn)圖1。3例VOUS中2例為新發(fā)變異，1例與表型正常的母親相同（表1中9） , 3例新生 兒均未見(jiàn)明顯異常。圖1:表2區(qū)1驗(yàn)證結(jié)果：8號(hào)染色體缺失詳圖.內(nèi)含EYA1S因。A胎兒檢測(cè)結(jié)果.B孕婦檢測(cè)結(jié)果2. 3單項(xiàng)及多項(xiàng)非結(jié)構(gòu)異常胎兒的 CNVs檢測(cè)結(jié)果比較 在125例胎 兒超聲軟指標(biāo)異常中，多項(xiàng)異常 35例，CMA檢出pCNVs 3例，檢出 率為8.57%;單項(xiàng)超聲非結(jié)構(gòu)異常90例，CMA檢出pCNVs 3例，檢 出率

13、為3.33%。3討論傳統(tǒng)的染色體G顯帶核型分析被稱為產(chǎn)前診斷的 金標(biāo)準(zhǔn)” 3。它 的局限性表現(xiàn)在分辨率較低、需要進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)、耗時(shí)長(zhǎng)等。產(chǎn)前超 聲篩查孕周多集中于孕2224周，甚至可能到晚孕才會(huì)發(fā)現(xiàn)一些超 聲異常，此時(shí)染色體核型分析已錯(cuò)過(guò)了檢查時(shí)機(jī)。而染色體微陣列分 析無(wú)需進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，適宜孕周范圍更大，分辨率高，在產(chǎn)前診斷中 的價(jià)值已得到了充分的肯定4。2013年美國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)會(huì)（AmericanCollege of Obstetrics and Gynecology ACOG建議當(dāng)胎兒存在一個(gè)或多 個(gè)超聲異常并需要進(jìn)行侵入性產(chǎn)前診斷時(shí)，推薦染色體微陣列分析技 術(shù)，且可以替代染色體核型分析5。

14、但是CMA檢測(cè)也有一定局限性，如不能檢測(cè)染色體平衡易位、倒位及復(fù)雜性重排，不能檢測(cè)出點(diǎn)突變和小片段插入，可能檢出臨床意義不明的 CNV等。同時(shí)因CMA檢查 費(fèi)用較高，臨床醫(yī)生應(yīng)掌握合理的適用范圍。總結(jié)本次研究結(jié)果，排除常見(jiàn)染色體核型非整倍體異常的125 例樣本中pCNV瀚出率為4.80%屋然比例不高，但是因我國(guó)孕產(chǎn)婦基數(shù)大， 軟指標(biāo)異常并不少見(jiàn)，其中涵蓋的微缺失微重復(fù)綜合征的數(shù)量不容小覷。由于CMA技術(shù)僅在為數(shù)不多的產(chǎn)前診斷中心可以開(kāi)展，且費(fèi)用較高，而且這些介入性產(chǎn)前診斷據(jù)國(guó)內(nèi)外報(bào)道造成的胎兒丟失率為0. 5%2%,如果對(duì)所有超聲軟指標(biāo)異常者都進(jìn)行介入性產(chǎn)前診斷， 顯然會(huì)增加不必要的資源浪費(fèi)以

15、及胎兒的丟失率。本組資料中單項(xiàng)軟指標(biāo)異常pCNVs檢出率為3.33%,而對(duì)于兩項(xiàng)以上超聲軟指標(biāo)異常者，檢出率明顯升高（8.57），但由于例數(shù)較少，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義不明顯。對(duì)于合并有多個(gè)軟指標(biāo)異常的胎兒可以考慮行介入性產(chǎn)前診斷及CMA檢測(cè)以提高檢出率。隨著芯片分辨率的提高，pCNVs及VOUS的檢出率也隨之提高。 當(dāng)CMA檢測(cè)提示為pCNVs時(shí)，需提供專業(yè)的遺傳咨詢。如果為明確 的染色體微缺失或微重復(fù)綜合征，應(yīng)建議父母行CMA檢測(cè)以明確該CNVs是否為新發(fā)，并對(duì)再次生育進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。總之，CMA技術(shù)可以彌補(bǔ)傳統(tǒng)染色體核型分析技術(shù)的不足，減少部分出生缺陷的發(fā)生，有較高的臨床使用價(jià)值6.對(duì)于超聲軟指標(biāo)異常

16、的胎兒，應(yīng)結(jié)合孕婦年齡、唐篩結(jié)果、既往孕產(chǎn)史等綜合評(píng)估介入性診斷的利弊，并把CMA技術(shù)作為一種可提高染色體異常檢出率的方法。參考文獻(xiàn)1廖燦.染色體微陣列分析技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用J.中華圍產(chǎn)醫(yī) 學(xué) 雜 志 ，2014,17(12):804-808.DOI:10.3760/cma.j.issn.1007-9408.2014.12.004.2Riggs Erin Rooney, Church Deanna M, Hanson Karen, et al. Towards an evidence-based process for the clinical interpretation of copy

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