脾虛濕盛型異位性皮炎和支氣管哮喘患者的細(xì)胞因子IFNγ和IL4的mRNA的表達(dá)

1、脾虛濕盛型異位性皮炎和支氣管哮喘患者的細(xì)胞因子IFN-和IL-4的mRNA的表達(dá) 作者：張玉環(huán)，陳保疆，焦振山【摘要】 目的 探討脾虛濕盛型異位性皮炎(AD)和支氣管哮喘(AS)患者外周血細(xì)胞因子IFN-和IL-4的mRNA表達(dá)的臨床意義。方法 對(duì)102例(AD 61例， AS 41例)患者的外周血5ml應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)試劑盒及核酸測(cè)定儀進(jìn)行吸光度測(cè)定。結(jié)果 兩組患者IFN- mRNA陽(yáng)性表達(dá)顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，但I(xiàn)L-4 mRNA與正常對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性(P>0.05)。AD和AS IFN- mRNA陽(yáng)性表達(dá)率，IL -4 mRNA陽(yáng)性表達(dá)率比較兩組

2、之間差異無(wú)顯著性(P>0.05)。結(jié)論 異病同證指幾種不同疾病，在疾病過(guò)程中出現(xiàn)了大致相同的病理，大致相同的證，脾虛濕盛型的AD與AS均顯示免疫失衡狀態(tài)。 【關(guān)鍵詞】 異位性皮炎 支氣管哮喘 干擾素 白細(xì)胞介素4 mRNA expression of IFN- and IL-4 in patients with atopic dermatitis and asthma 【Abstract】 Objective To investigate the significance of the mRNA expression of IFN- and IL-4 in the atopic

3、dermatitis(AD) and asthma(AS) patients who were diagnosed deffciency of spleen with overabundance of damp according to the traditional Chinese medicine theory.Methods The peripheral blood was collected in 102 cases(AD 61 cases，AS 41 cases)， analyzed the mRNA expression of these cytokine using RT-PCR

4、 system kit.Results Compared with the control group， the mRNA expression of IFN- in AD and AS patients were both significantly decreased (P<0.01)，and IL-4 had no statistical significance(P>0.05) .However， the expression of IL-4 and IFN- had no significant difference between AD and AS (

5、P>0.05).Conclusion There are both immune imbalance in AD and AS， the abnormal mRNA expression of IL-4 and IFN- are part of immune pro AD and AS patients who were diagnosed deficiency of spleen with overabundance of damp. 【Key words】 atopic dermatitis asthma IFN- IL-4 異位性皮炎(atopic dermatitis，A

6、D)和支氣管哮喘(asthma，AS)均屬于型變態(tài)反應(yīng)性疾病，脾虛濕盛是兩種疾病臨床常見(jiàn)的中醫(yī)證型，臨床表現(xiàn)的“證候”大多相同，中醫(yī)病機(jī)一致。本文對(duì)102例(AD 61例，AS 41例)患者的外周血細(xì)胞因子IFN-和IL-4的mRNA表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，探討中醫(yī)脾虛濕盛型AD與AS mRNA在細(xì)胞因子表達(dá)的臨床意義。 1 資料與方法 1.1 臨床資料 102例患者來(lái)自2002年1月2004年2月天津市長(zhǎng)征醫(yī)院變態(tài)反應(yīng)科門診，AD患者61例，其中男35例，女26例，年齡424歲，平均(13.6±9.8)歲，病程(1.5 11.5)年，平均(5.4±3.7)年；AS患者41例，其中男

7、24例，女17例，年齡1238歲，平均(16.4±8.3)歲，病程110.5年，平均(6.5±3.6)年。對(duì)照組20例，為志愿獻(xiàn)血者，其中男12例，女8例，年齡1823歲，平均(20.7±4.3)歲。 1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) AD診斷標(biāo)準(zhǔn)參照1994年美國(guó)Williams等提出的AD診斷標(biāo)準(zhǔn)1。AS診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)1997年支氣管哮喘防治指南2。脾虛濕盛證參照中醫(yī)診斷學(xué)標(biāo)準(zhǔn)3。 1.3 主要儀器與試劑 1.3.1 主要儀器 PCR儀(PTC-200型MJ Research公司，美國(guó))；超凈工作臺(tái)(蘇凈公司，蘇州)；臺(tái)式高速離心機(jī)(Eppendorf公司

8、，德國(guó))；核酸自動(dòng)測(cè)定儀(Eppendorf公司，德國(guó))；電泳儀(北京六一儀器廠)；凝膠自動(dòng)成像系統(tǒng)(UVP，美國(guó))。 1.3.2 主要試劑 反轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)試劑盒(美國(guó)PROMEGA公司)；DEPC液(Sigma公司)；氯仿，異丙醇(天津化學(xué)試劑廠)；引物序列來(lái)源于文獻(xiàn)3。 1.4 實(shí)驗(yàn)方法 單個(gè)核細(xì)胞總RNA提?。喝』颊吆驼?duì)照組空腹靜脈血5ml，肝素抗凝，在5ml淋巴細(xì)胞分離液面上加入等量處理后的血液樣本，離心，分離單個(gè)核細(xì)胞。采用核酸測(cè)定儀在260nm和280nm波長(zhǎng)下對(duì)樣品進(jìn)行吸光度測(cè)定，以確定RNA提取的質(zhì)量，OD260280在1.82.0視為提取的RNA純度較高。 2 結(jié)果 2.1

9、外周血單個(gè)核細(xì)胞總RNA提取結(jié)果 瓊脂糖凝膠電泳后可以清楚地看到所提取的總RNA的28S和18S兩條清晰的 rRNA條帶，這說(shuō)明提取的總RNA完整，無(wú)明顯降解，見(jiàn)圖1。 圖1 提取RNA電泳圖 2.2 RT-PCR結(jié)果 用圖像分析儀對(duì)膠片上每一泳帶進(jìn)行光密度掃描，結(jié)果用各細(xì)胞因子檢出陽(yáng)性率表示。見(jiàn)圖2，圖3。 圖2 IL-4 mRNA RT-PCR產(chǎn)物電泳圖電泳從左到右依次為DNA-Marker、-actin和IL-4 圖3 IFN- mRNA表達(dá)電泳圖電泳從左到右依次是DNA-Marker、-actin和IFN- 2.3 3組人群IFN-和IL-4 mRNA RT-PCR 產(chǎn)物檢出情況 見(jiàn)表

10、1。 表1 3組人群IFN-和IL-4 mRNA RT-PCR產(chǎn)物檢出情況 例() 注：3組人群IFN-和IL-4 mRNA陽(yáng)性表達(dá)率間比較，*P<0.01 兩組患者IFN- mRNA陽(yáng)性表達(dá)率均顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，3組IL- 4 mRNA陽(yáng)性表達(dá)率間比較差異無(wú)顯著性(P>0.05)。 AD組與AS組IFN- mRNA陽(yáng)性表達(dá)率之間比較差異無(wú)顯著性(P>0.05)；并且AD組與AS組IL-4 mRNA陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無(wú)顯著性(P>0.05)，結(jié)果提示 AD、AS患者IL-4 mRNA表達(dá)水平低于正常人。 2.4

11、 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，各組間進(jìn)行率的2檢驗(yàn)。 3 討論 異病同證是指幾種不同的疾病，在疾病過(guò)程出現(xiàn)了大致相同的病機(jī)，大致相同的證，疾病在其自身發(fā)展過(guò)程中出現(xiàn)了病因同源，病機(jī)吻合，它以一組相關(guān)的癥狀和體征，不同程度地揭示病因、病機(jī)、病位、病性、病勢(shì)。AD與AS同屬型變態(tài)反應(yīng)性疾病，免疫功能的失衡是AD和AS發(fā)生的主要原因，均屬TH2優(yōu)勢(shì)疾病，兩病均存在著T細(xì)胞亞群，體液免疫血清總IgE值升高，CD4+T細(xì)胞分泌的IL-4和IFN-的表現(xiàn)異常。本文對(duì)脾虛濕盛證的102例AD和AS患者進(jìn)行了IFN-和IL-4 mRNA表達(dá)的檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果顯示：61例AD患者外周血單一核細(xì)

12、胞IFN- 17例(27.9%)，IL-4 37例(60.6%)；41例AS患者外周血單一核細(xì)胞IFN- 11例(26.8%)，IL-4 24例(58.5%)；而20例對(duì)照組IFN- 18例(90.0%)，IL-4 10例(50.0%)，AD和AS的IFN-均低于正常對(duì)照組(P0.05)，差異有顯著性；而IL-4 AD與AS組均高于正常對(duì)照組，但差異無(wú)顯著性(P均>0.05)。 本文AD和AS兩組患者外周血IFN- CD4+細(xì)胞比率均低于正常組，而外周血 IL-4 CD4+細(xì)胞比率明顯高于正常組。IFN-是一種由TH1產(chǎn)生的重要的CD4+CD8+平衡調(diào)節(jié)因子，可抑制IL-4和IL

13、-4介導(dǎo)的IgE生成。TH1細(xì)胞和TH2細(xì)胞在體內(nèi)通過(guò)分泌不同的細(xì)胞因子促進(jìn)自身的發(fā)展，抑制對(duì)方的發(fā)展。TH1細(xì)胞分泌IFN-可抑制TH2的增殖4，促進(jìn)自身的增殖，TH2細(xì)胞分泌IL-4，稱為TH2型細(xì)胞因子，介導(dǎo)體液免疫，如激活細(xì)胞和嗜酸粒細(xì)胞5。這些細(xì)胞因子積極參與各種生理及病理過(guò)程，在正常情況下TH1TH2網(wǎng)絡(luò)維護(hù)著動(dòng)態(tài)平衡。目前判斷TH1TH2細(xì)胞水平主要是通過(guò)分別測(cè)定IFN -和IL-4來(lái)間接反映其體內(nèi)水平和功能。本文對(duì)102例AD與AS分別測(cè)定后發(fā)現(xiàn)， IFN-低于正常對(duì)照組，經(jīng)比較差異有顯著性(P<0.05)，而IL-4高于正常對(duì)照組，經(jīng)比較差異無(wú)顯著性(P&

14、;gt;0.05)。本文研究進(jìn)一步證明了脾虛濕盛型的AD和AS細(xì)胞因子表達(dá)的一致性，從分子生物學(xué)基礎(chǔ)進(jìn)一步證實(shí)兩病異病同證的理論依據(jù)。 【參考文獻(xiàn)】 1 顧恒，陳祥生，陳崑.特應(yīng)性皮炎診斷標(biāo)準(zhǔn)的評(píng)價(jià)中.華皮膚科雜志，2000，33(4)：222-226. 2 第二屆全國(guó)支氣管哮喘學(xué)術(shù)會(huì)議紀(jì)要.中華結(jié)核和呼吸雜志，1997，20(5)：265. 3 朱文鋒.中醫(yī)診斷學(xué).北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社，1997，167. 4 Gajew Skit，F(xiàn)itch F.Anti Protiferative effect of IFN-C in immune regulation，IFN-gama inhibits the proliferation of TH2 but