熒光和磷光的產(chǎn)生過程

1、1.熒光和磷光的產(chǎn)生過程熒光：處于基態(tài)的分子吸收光子能量，躍遷至電子激發(fā)態(tài)， 然后通過內(nèi)轉(zhuǎn)換和振動弛豫回到第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動能級，最后躍遷回基態(tài)時發(fā)射的光S0 一*激發(fā)態(tài)振動弛豫 7內(nèi)轉(zhuǎn)換振動弛豫發(fā)射熒光磷光：處于基態(tài)的分子吸收光子能量，躍遷至電子激發(fā)態(tài)， 然后通過內(nèi)轉(zhuǎn)換和振動弛豫和系間竄越到了第一激發(fā)三重態(tài)，最后回到基態(tài)時發(fā)射的光S0 >激發(fā)態(tài) '振動弛豫> 內(nèi)轉(zhuǎn)換 > 系間跨越：> 振動弛豫發(fā)射熒光2激發(fā)光譜和發(fā)射光譜概念，有何異同（1）激發(fā)光譜：固定發(fā)射光的波長，測量激發(fā)光的波長與發(fā)射光強(qiáng)度之間的 關(guān)系（選擇最佳激發(fā)波長）（2） 發(fā)射光譜：固定激發(fā)波

2、的波長，測定發(fā)射光強(qiáng)度與發(fā)射光波長的關(guān)系（選 擇最佳發(fā)射波長）同：都是給樣品能量使之發(fā)光 測量發(fā)光強(qiáng)度異：控制的變量不同。3化合物熒光與結(jié)構(gòu)的關(guān)系a. 具有一定的熒光量子產(chǎn)率b. 具有合適的結(jié)構(gòu)女口：大的共軛n鍵、剛性平面結(jié)構(gòu)、最低的單重電子激發(fā)態(tài)為 S1為求* n型、取代基為給電子基團(tuán)4熒光量子產(chǎn)率、熒光猝滅、系間跨越、振動弛豫A. 熒光量子產(chǎn)率 Q:量子產(chǎn)率表示物質(zhì)將吸收的光能轉(zhuǎn)化為熒光的本領(lǐng)，是熒光物質(zhì)發(fā)出光子數(shù)與吸收光子數(shù)的比值。B. 熒光猝滅：指熒光物質(zhì)分子與溶劑分子之間相互作用，導(dǎo)致熒光強(qiáng)度下降的現(xiàn)象， 熒光猝滅分為靜態(tài)猝滅、動態(tài)猝滅等。C. 系間跨越：處于激發(fā)態(tài)分子的電子發(fā)生自旋

3、反轉(zhuǎn)而使分子的多重性發(fā)生變化的過程；分子由激發(fā)單重態(tài)跨越到激發(fā)三重態(tài)。D. 振動弛豫：同一電子能級內(nèi)異熱交換形式由高振動能級至地振動能級間的躍遷。時間為10-12s5實時定量PCR與普通PCR的區(qū)別所謂實時熒光定量 PCR技術(shù)1，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR技術(shù)是起點檢測，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。具有重現(xiàn)性，誤差小的特點。傳統(tǒng)PCR技術(shù)是終點檢測，即 PCR到達(dá)平臺期后進(jìn)行檢測，而PCR經(jīng)過

4、對數(shù)期擴(kuò)增到達(dá)平臺期時，檢測重現(xiàn)性 極差。同一個模板在96孔PCR儀上做96次重復(fù)實驗，所得結(jié)果有 很大差異，因此無法直接從終點產(chǎn)物量推算出起始模板量。加入內(nèi)標(biāo)后，可部分消除終產(chǎn)物定量所造成的不準(zhǔn)確性。但即使如此，傳統(tǒng)的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法。6.簡述影響熒光效率的主要因素答：（1）分子結(jié)枸的影響：發(fā)熒光的物質(zhì)中都舍有共覘雙鍵的強(qiáng)吸收基團(tuán)，共鞭體系越大， 熒光敷率越高，分子的刖性平直結(jié)構(gòu)利干熒光的產(chǎn)生*取代基對熒光物胡的熒光特征和強(qiáng)度 有很夫影響：給電子取代基可使熒光增強(qiáng)，吸電子取代基使熒光誠弱；重原子兢應(yīng)使關(guān)光減 騎。（2）環(huán)境因素的影響I溶劑的極性對熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)庫產(chǎn)注影響，濬刑的極性越強(qiáng). 熒光肖度越大逞度對潛液熒光強(qiáng)度影響明區(qū)，對于大多數(shù)靈光務(wù)質(zhì)，升高淳度會使非®I扌 躍辻引起的熒光的就率降檢溶液pH值跖含有酸性或減