流式細(xì)胞分析和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)試驗(yàn)中小鼠脾臟的摘取圖文解說(shuō)_第1頁(yè)
流式細(xì)胞分析和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)試驗(yàn)中小鼠脾臟的摘取圖文解說(shuō)_第2頁(yè)
流式細(xì)胞分析和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)試驗(yàn)中小鼠脾臟的摘取圖文解說(shuō)_第3頁(yè)
流式細(xì)胞分析和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)試驗(yàn)中小鼠脾臟的摘取圖文解說(shuō)_第4頁(yè)
流式細(xì)胞分析和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)試驗(yàn)中小鼠脾臟的摘取圖文解說(shuō)_第5頁(yè)
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1、流式細(xì)胞分析和混合淋巴細(xì)胞反響實(shí)驗(yàn)中小鼠脾臟的摘取最近老婆要提取脾臟細(xì)胞做流式,我就做個(gè)簡(jiǎn)單的解說(shuō),也順便傳到網(wǎng)上供菜鳥理解,如果有大神看到這篇文章,也歡送指導(dǎo).大家一起討論,把實(shí)驗(yàn)做得更好.無(wú)論是做混合淋巴細(xì)胞反響或者流式細(xì)胞分析都要用到脾臟.小鼠的脾臟摘取頗為簡(jiǎn)單,但有很多同學(xué)是第一次接觸,所以在此做一個(gè)簡(jiǎn)單的圖文講解.在此講解不甚詳細(xì),具體步驟請(qǐng)同學(xué)參照網(wǎng)上已有各種protocol,本文重點(diǎn)在于圖文解說(shuō),讓大家對(duì)照?qǐng)D片和其他protocol更好的理解脾臟的摘取.一,小鼠處死后泡酒精2-3分鐘,泡久了細(xì)胞會(huì)縮水,泡的時(shí)間短了起不到消毒殺菌的作用三,沿著小鼠左側(cè)肋骨走行方向做切口.準(zhǔn)備眼科鐐

2、和眼科剪假設(shè)3把,眼科剪2把文中筆者使用眼科直鑲,擺好小鼠體位,取右側(cè)臥位.四,向小鼠左后背方探查,在皮下很淺的地方可見深紅色脾臟.脾臟走行向與肋骨方向近似平行五,用鐐子輕輕提起脾臟.脾臟下會(huì)連著許多結(jié)締組織,輕輕把它們撕掉.六,完整摘下脾臟,放于培養(yǎng)皿中【事先在培養(yǎng)皿中放入PBS混淋或紅裂流式和200目的鐵絲網(wǎng)】如下右圖所示,銀色的為本步驟中使用的鐵絲網(wǎng),白色的為后面要用到的過(guò)濾膜七,一把新的眼科剪和一把新的眼科鐐新消毒過(guò)的.本文所用的為新高壓的,把脾臟在培養(yǎng)皿里剪成小塊.然后用2.5ml或5ml注射器柄,把脾臟研磨成細(xì)胞.研磨過(guò)程要輕柔,否那么會(huì)損傷脾臟中的細(xì)胞.八,研磨至培養(yǎng)皿中不見整塊脾臟,只剩一些不能磨碎的結(jié)締組織為止.九,再參加4ml紅細(xì)胞裂解液,沖洗鐵絲網(wǎng),注射器內(nèi)芯,并用槍頭吹打混勻,裂解5min十,將液體一并轉(zhuǎn)入15ml離心管中,400g,5min,離心H一,棄去上清,參加5ml含10%FBSW1640,重懸,用裝有200目的尼龍濾膜過(guò)濾(可過(guò)濾兩次)；尼龍濾膜就是第六步中右圖的白色濾膜.十二,濾液離心400g,5min,棄上清,參加1ml含10%FBS勺1640,重懸混勻,稀釋50(20+980)倍計(jì)數(shù),；至此,

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