衛(wèi)生化學(xué)實(shí)驗(yàn)總結(jié)預(yù)防醫(yī)學(xué)

1、ICP發(fā)射光譜測(cè)頭發(fā)樣品中的元素【試劑和儀器】中性洗發(fā)液、丙酮、無水乙醇、混合酸、去離子水，鈣鐵鋅標(biāo)準(zhǔn)品。100ml燒杯2只，10ml比色管1個(gè)，玻璃棒，剪刀，電子天平，烘箱，濾紙。日本島津公司ICPS-7000型電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀，高純氬氣，通風(fēng)裝置，循環(huán)水系統(tǒng)，容量瓶，移液管?！緦?shí)驗(yàn)步驟】1、消化處理 采樣：后枕部頭發(fā)距頭皮13cm（為了反映近期金屬元素蓄積的情況）樣品量約為0.05g。洗滌：中性洗發(fā)液洗滌蒸餾水洗凈（約3-5遍）去離子水洗至無泡沫淋干后放在丙酮中浸泡2min（去除有機(jī)污染物） 無水乙醇中浸泡1min 濾干110干燥箱中干燥0.5h 消化：精稱取樣品0.025g

2、左右混合酸5ml（10min）電爐上徐徐加熱（120左右）溶液由棕褐色變至淡黃色，加大火，200左右趕酸（小于1ml為宜）。若為較深的黃色，則繼續(xù)加數(shù)滴混合酸（完全冷卻后）電爐上加熱直至殘?jiān)鼮榘咨珪r(shí)消化完成。注：混合酸是為了增加氧化性（硝酸：高氯酸=4:1，適用于含鈣較高的材料）；所有試劑為優(yōu)級(jí)純 稀釋：1%HNO3溶解后去離子水少量多次（至少3次）將樣品轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中定容，搖勻。貼簽備用（注：吸取硝酸和攪拌的吸管用兩根，避免損失及污染）2、儀器基本操作方法（1）打開主機(jī)電源，預(yù)熱3h以上。（2）打開循環(huán)水裝置，接通氬氣，打開通風(fēng)罩。（3）打開電腦，進(jìn)入ICPS操作系統(tǒng)，首先觀察儀器狀

3、態(tài)是否正常，點(diǎn)燃距焰，（此時(shí)毛細(xì)管不能空吸）吸入空白溶液，進(jìn)行波長(zhǎng)校正（通常使用O/C/Ar）。S50,應(yīng)重復(fù)校正一次。（4）然后建立新文件（make new card命名定性or定量設(shè)一些參數(shù),如測(cè)量次數(shù)，為3次，最后取平均值選要測(cè)的元素選波長(zhǎng)設(shè)置測(cè)量條件，采用人工方法進(jìn)樣，將樣品提升時(shí)間設(shè)為0設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)系列樣品濃度），根據(jù)測(cè)量需要設(shè)定條件。（5）測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列和樣品。（6）測(cè)定結(jié)束后，應(yīng)先關(guān)閉氬氣閥門，待距焰熄滅后，再關(guān)閉電源。3、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制（1） 首先用濃度最高的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定ATT值（告訴儀器最高濃度是多少，測(cè)完之后用純水洗一下），然后依次測(cè)定不同濃度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中各元素的發(fā)射強(qiáng)度

4、，測(cè)量結(jié)束后，儀器自動(dòng)繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。4、 發(fā)樣的測(cè)定 用與標(biāo)準(zhǔn)系列同樣方法測(cè)定光強(qiáng)度，然后從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出發(fā)樣中各元素含量。若某種元素濃度超過最高濃度限值，要進(jìn)行稀釋?！窘Y(jié)果及公式】以c為橫坐標(biāo)，原子發(fā)射譜線強(qiáng)度（）為縱坐標(biāo)，根據(jù)樣品中各元素的從標(biāo)曲中得到其濃度cx【注意事項(xiàng)】器皿等玻璃器材不要隨意放置，以免污染。進(jìn)樣：樣品毛細(xì)管霧化器霧化霧化室進(jìn)一步霧化炬管光學(xué)系統(tǒng)紫外分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)的含量【實(shí)驗(yàn)原理】 蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)中的酪氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵，具有吸收紫外光的性質(zhì)，其最大吸收波長(zhǎng)為280nm左右。在一定實(shí)驗(yàn)條件下，蛋白質(zhì)溶液的吸光度與其濃度符合LambertBeer定律，

5、據(jù)此可對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量分析。結(jié)構(gòu)：光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示系統(tǒng)注：此次試驗(yàn)用紫外光，所以選用石英比色杯。Q或者S表示石英的意思，放置時(shí)字母要朝同一個(gè)方向。比色杯為成對(duì)的，不能混用?！緦?shí)驗(yàn)步驟】1.吸收光譜曲線的繪制：以生理鹽水作參比，以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，從200400nm掃描任一牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液的吸收曲線并找出最大吸收波長(zhǎng)（max）。2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制： 移取5.00mg/ml牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液0.00、0.50、1.00、1.50和2.00ml，分別置于10ml比色管中，用生理鹽水稀釋至刻度，搖勻。以生理鹽水作參比，在max波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，以溶液濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱

6、坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 3.未知蛋白質(zhì)溶液的測(cè)定：準(zhǔn)確移取血清樣本0.1ml，置于10ml比色管中，定容至刻度。以生理鹽水作參比，在max波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度?！緦?shí)驗(yàn)結(jié)果】Cx=C稀釋倍數(shù)其中Cx為待測(cè)蛋白質(zhì)溶液的質(zhì)量濃度；C為由標(biāo)準(zhǔn)曲線確定的被測(cè)溶液蛋白質(zhì)的質(zhì)量濃度【注意事項(xiàng)】1.由于蛋白質(zhì)的紫外吸收峰常因溶液pH的改變而改變，測(cè)定時(shí)未知溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液的pH要一致。2.紫外分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)的準(zhǔn)確度較差，其主要原因?yàn)椴煌鞍踪|(zhì)中酪氨酸和色氨酸的含量不同，使得不同蛋白質(zhì)溶液在280nm的吸光系數(shù)也不同。樣品中若含有核酸，可分別測(cè)定在280nm和260nm的吸光度值，用經(jīng)驗(yàn)校正公式計(jì)算蛋白質(zhì)的濃度。

7、蛋白質(zhì)濃度=1.45A280 0.74A260 (mg/mL)【儀器電腦操作】?jī)x器連接自檢光譜掃描（設(shè)置200400nm高速掃描）方法設(shè)置（選擇max，多點(diǎn)，固定波長(zhǎng)，改單位）進(jìn)行測(cè)定（輸入號(hào)碼和濃度，記錄吸光度值）熒光分析法測(cè)定尿中核黃素（VB2）含量【實(shí)驗(yàn)原理】 核黃素（VB2）在一定波長(zhǎng)的光波照射下發(fā)熒光。在PH67的溶液中熒光最強(qiáng)，在其他條件恒定時(shí)，熒光強(qiáng)度F與VB2濃度C成正比，即F=KC；當(dāng)PH11時(shí)熒光消失。尿中共存物質(zhì)干擾VB2的測(cè)定，需要將尿液通過硅鎂吸附柱，使其中VB2被硅鎂吸附柱吸附，再用洗脫液洗脫，測(cè)定洗脫液中VB2的熒光強(qiáng)度。采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行測(cè)量。光源（氙弧燈200

8、800nm；高壓汞燈鹵鎢燈一般用于熒光計(jì)）分光系統(tǒng)（兩個(gè)單色器，第一單色器在光柵和樣品池之間用于選擇發(fā)射波長(zhǎng)；第二單色器位于樣品池和檢測(cè)器之間與激發(fā)光源成90以消除透過光影響，選擇熒光波長(zhǎng)）樣品池檢測(cè)器顯示系統(tǒng)注：比色皿四面光滑【實(shí)驗(yàn)步驟】1、 裝柱 脫脂棉塞住吸附柱下端硅鎂吸附劑與蒸餾水混合裝柱（約占柱長(zhǎng)的2/3左右）用雙蒸水測(cè)試流速，控制流速在6080滴/分，柱內(nèi)應(yīng)無氣泡。2、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的的繪制 標(biāo)準(zhǔn)液配制（0.5mg/L）：取25mg/L的標(biāo)儲(chǔ)液1ml于50ml棕色容量瓶，定容混勻。（1） 吸附：取VB2標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液0.00,0.50,1.00,1.50,2.00,2.50ml，分別過柱，

9、用1520ml熱水（6070）淋洗柱子（去除共存雜質(zhì)）。（2） 洗脫：將10ml比色管接在柱子下方，每個(gè)吸附柱中加入5ml洗脫液（洗脫VB2），待流盡后再用不足5ml的蒸餾水淋洗柱子，流出液一并盛入比色管中，雙蒸水定容至10ml。混勻，避光保存。（3） 測(cè)定：取任意標(biāo)準(zhǔn)管溶液，固定熒光波長(zhǎng)535nm，在350500nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)，測(cè)定不同激發(fā)光波長(zhǎng)下的熒光強(qiáng)度，以激發(fā)光的波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，繪制激發(fā)光譜，選擇激發(fā)光波長(zhǎng)（ex）。固定激發(fā)波長(zhǎng)ex，在450600nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)，測(cè)定不同熒光波長(zhǎng)下的熒光強(qiáng)度，以熒光波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，繪制熒光光譜，選擇熒光光波長(zhǎng)（em）

10、。在固定ex和em的條件下，分別測(cè)定不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液洗脫液中VB2的熒光強(qiáng)度，以VB2的濃度C為橫坐標(biāo)，相對(duì)熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，揮之標(biāo)準(zhǔn)曲線。注：洗脫液（丙酮：冰醋酸：超純水=5:2:9）3、 測(cè)定樣品 取尿樣5ml，通過吸附柱進(jìn)行吸附（VB2和雜質(zhì)都會(huì)被吸附，熱水將雜質(zhì)洗脫，VB2易溶于有機(jī)溶劑，被保留在吸附柱上）、洗脫（洗脫液洗脫VB2）和熒光測(cè)定?！倦娔X操作】打開熒光光度計(jì)電源預(yù)熱30min打開操作軟件采集模式選光譜模式ex(激發(fā)波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo))em（以熒光波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)）改為定量模式輸入ex，em測(cè)定【實(shí)驗(yàn)結(jié)果及處理】公式：尿中VB2含量（mg/L）=樣品

11、管中VB2濃度10取尿量 【注意事項(xiàng)】1、 操作應(yīng)在避光下進(jìn)行。2、 裝住時(shí)要與水混裝，以免柱內(nèi)形成氣泡和空隙。3、 測(cè)定前用洗脫液通過硅鎂吸附柱，檢查是否有熒光物質(zhì)，有則用丙酮清洗烘干待用石墨爐原子吸收法測(cè)定樣品中鉛的含量【實(shí)驗(yàn)原理】樣品用基體改進(jìn)劑稀釋后直接注入石墨管中，通過程序升溫將樣品灰化及原子化。在=283.3nm條件下測(cè)定鉛基態(tài)原子蒸汽的吸光度，在一定實(shí)驗(yàn)條件下，其吸光度與溶液中鉛的濃度呈正比，即A=Kc，據(jù)此進(jìn)行定量分析。組成：鉛元素?zé)艄舱窬€石墨爐中原子分光系統(tǒng) 水循環(huán)系統(tǒng)防止石墨管氧化，高純氬氣保護(hù)石墨管原子化過程：干燥、灰化、原子化、凈化【實(shí)驗(yàn)步驟】1、 血清樣品處理 用微量

12、移液管吸取血清100g置于1.5ml的塑料離心管中，加入0.9ml的純水（稀釋10倍），在漩渦混合器上充分震搖均勻。2、 儀器工作條件 =283.3nm，燈電流為13mA，狹縫寬度為0.4nm，氘燈背景矯正，氬氣流量0.6L/min。石墨爐工作條件使用儀器推薦條件（因本次試驗(yàn)不使用基體改進(jìn)劑，灰化溫度應(yīng)改為550）。進(jìn)樣體積20l，讀數(shù)方式為峰面積。3、 工作曲線的繪制 將100g/ml的鉛儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋1000倍至100g/L的鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液放入自動(dòng)進(jìn)樣器，用稀釋液稀釋（機(jī)器自動(dòng)稀釋）到10、20、30、40g/L，以稀釋液為標(biāo)準(zhǔn)空白，依次進(jìn)樣測(cè)定，得到工作曲線。4、 樣品測(cè)定 按儀器測(cè)定條件測(cè)

13、定血清樣品和試劑空白。【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】【注意事項(xiàng)】1、 鉛標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制應(yīng)采用逐級(jí)稀釋法，以減小誤差。（1ml10ml1ml10ml1ml10ml）2、 鉛是高溫下易揮發(fā)元素，在不使用基體改進(jìn)劑時(shí)，灰化溫度不能超過600。【儀器操作】1、開機(jī)預(yù)熱光源開關(guān)打開接通氬氣打開電腦系統(tǒng)（xxx32xxA？）將元素?zé)酎c(diǎn)亮（預(yù)熱15min30min）背景校正（看AA，BG值是否正常）建立方法（new method）設(shè)置（settings）測(cè)量次數(shù)、溫度自動(dòng)采樣量、設(shè)置采樣位置標(biāo)準(zhǔn)系列（方程選擇回歸線性過零點(diǎn)，看單位，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)系列稀釋濃度及儲(chǔ)備液位置）2、設(shè)置樣品信息設(shè)置樣品位置、樣品身份（血清）、體積3、看

14、看燈的穩(wěn)定性（預(yù)熱時(shí)間不夠，壽命等影響穩(wěn)定性）4、石墨爐設(shè)置手動(dòng)校準(zhǔn)自動(dòng)進(jìn)樣器自動(dòng)檢查清潔石墨爐5、檢測(cè)稀釋劑的純水放在1號(hào)位鉛的標(biāo)準(zhǔn)品2號(hào)血清樣品3號(hào)電化學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一 溶出伏安法測(cè)定水中鉛含量【實(shí)驗(yàn)原理】當(dāng)在工作電極上加上一定電位進(jìn)行預(yù)電解時(shí)，待測(cè)樣品中的鉛還原富集在電極上并與電極上的汞生成汞齊，然后施加反向掃描電壓，此時(shí)汞齊中的鉛便氧化溶出，其氧化電流與待測(cè)樣品中的鉛濃度成正比，因此可作定量分析。【實(shí)驗(yàn)步驟】1.打開LK2006A型電化學(xué)分析系統(tǒng)，選擇“線性掃描溶出伏安法”，設(shè)置鍍汞實(shí)驗(yàn)。參數(shù):靈敏度10A/ V ；起始電位 0.000 V；濾波參數(shù)10 Hz ；電沉積電位 -1.000

15、V；放大倍率1 ；掃描速度100 mV/ s；平衡時(shí)間10 s；電沉積時(shí)間30 s電位增量1 mV；終止點(diǎn)位 0.00V2.將玻璃電極作工作電極，飽和甘汞電極作為參比電極，鉑電極作對(duì)極，連接到LK2006A型電化學(xué)系統(tǒng)，并確認(rèn)電化學(xué)主機(jī)與微機(jī)系統(tǒng)的連接正常。3.取30.0ml鍍汞液與50ml燒杯中，插入三電極系統(tǒng)，接鍍汞實(shí)驗(yàn)參數(shù)設(shè)定，鍍汞，檢查汞膜完好，即可測(cè)定樣品，記錄峰電流值h1 。4.取30ml 待測(cè)樣品于燒杯中。選擇“方波溶出伏安法”，設(shè)定樣品測(cè)定的實(shí)驗(yàn)條件參數(shù):靈敏度10A/ V ；起始電位 - 0.100 V ； 方波周期40 ms濾波參數(shù)10 Hz ； 電沉積電位 - 1.000

16、 V ；方波幅度20 mV放大倍率1 ； 電位增量4 mV ；平衡時(shí)間10 s；電沉積時(shí)間30 s終止電位0.00V5.在待測(cè)樣品中加入5ml鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液按上述步驟進(jìn)行測(cè)定，記下峰電流值h2?！窘Y(jié)果計(jì)算】根據(jù)公式：Cx=h1CsVs/h2（Vx+Vs）-h1Vx5、 討論本次實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)了一個(gè)錯(cuò)誤： 待測(cè)液和鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液的加樣順序搞混了，即在30ml的鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液中加入了5ml的待測(cè)溶液，故我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能存在誤差。實(shí)驗(yàn)二酸度計(jì)測(cè)水溶液PH【實(shí)驗(yàn)原理】酸度計(jì)主要是由參比電極（銀-氯化銀電極）、測(cè)量電極（玻璃電極）和精密電位計(jì)三部分組成。銀-氯化銀電極由金屬銀、氯化銀和飽和氯化鉀溶液組成，電極電位

17、不隨溶液的PH變化而變化，在一定溫度下和濃度下是一個(gè)定值。在25時(shí)為0.2V。玻璃電極：電極電位會(huì)隨溶液的PH變化而變化。主要部分頭部的玻璃球泡，是由特殊的敏感玻璃膜構(gòu)成。玻璃膜對(duì)氫離子敏感，浸入被測(cè)溶液時(shí)，被測(cè)溶液的氫離子與電極玻璃球泡表面水化層進(jìn)行離子交換，玻璃球泡內(nèi)層也同樣產(chǎn)生電極電勢(shì)。由于內(nèi)層氫離子濃度不變，外層氫離子濃度變化，因此內(nèi)外層的電勢(shì)差在變化，所以該電極電勢(shì)隨待測(cè)液的PH值不同而改變。離子選擇性電極電位與待測(cè)離子呈能斯特響應(yīng)。K值包括內(nèi)參比電極電位和難于測(cè)量和計(jì)算的液接電位，因此要用已知PH的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液（與被測(cè)溶液PH接近）進(jìn)行校正，減小由液接電位和不對(duì)稱電位帶來的誤差?！咀?/p>

18、意事項(xiàng)】1. 使用前浸泡于蒸餾水或緩沖溶液中活化玻璃膜表面2. 玻璃電極的使用范圍：pH =193. 避免碰碎或擦傷玻璃膜4不能測(cè)含 F- 的溶液和具有脫水性的溶液5復(fù)合pH電極需浸泡在KCl溶液中6電極浸入溶液需足夠的平衡穩(wěn)定時(shí)間7間隔中用蒸餾水浸泡，以穩(wěn)定其不對(duì)稱電位，用已知pH值的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液進(jìn)行定位校正可消除不對(duì)稱電位的影響 8、讀取PH時(shí)，還要讀取溫度！離子選擇性電極電位有兩部分組成，一個(gè)是內(nèi)參比電極電位，一個(gè)是膜電位。當(dāng)玻璃膜與待測(cè)溶液接觸之后，就會(huì)由于玻璃膜相和待測(cè)溶液相的氫離子濃度的不同進(jìn)行離子交換，經(jīng)過一段時(shí)間達(dá)到平衡，就產(chǎn)生了兩個(gè)相間電位，其差值就是膜電位。電極電位與待測(cè)溶

19、液中氫離子離子呈能斯特響應(yīng)。實(shí)驗(yàn)三電導(dǎo)率的測(cè)定【實(shí)驗(yàn)原理】電解質(zhì)具有導(dǎo)電能力，并遵循歐姆定律在一定條件下，一定濃度的電解質(zhì)溶液的電阻與電極間的距離成正比，與電極截面積成反比電導(dǎo)是衡量電解質(zhì)溶液導(dǎo)電能力的物理量，是電阻的倒數(shù) （其中k為電導(dǎo)率：兩電極板為1，距離1m的平行電極板之間電解質(zhì)溶液的電導(dǎo)）與電解質(zhì)溶液的濃度有關(guān)。【注意事項(xiàng)】1、 電導(dǎo)率儀要預(yù)熱30min才能進(jìn)行電導(dǎo)率的測(cè)定。2、 測(cè)定前用純水清洗電導(dǎo)電極。高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定飲料中山梨酸和苯甲酸【實(shí)驗(yàn)方法與原理】苯甲酸和山梨酸廣泛用于食品防腐劑，能夠引起人的再生障礙性貧血，粒狀白細(xì)胞缺乏等。因此國(guó)家嚴(yán)格限制其使用量。在本實(shí)驗(yàn)

20、中，樣品首先經(jīng)過超聲和加熱除去二氧化碳和乙醇，然后過濾注入高效液相色譜儀，經(jīng)反相C18液相色譜柱分離后，紫外檢測(cè)器230 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)。以色譜峰的保留時(shí)間定性，色譜峰面積在一定范圍內(nèi)與濃度呈線性關(guān)系進(jìn)行定量分析。 【實(shí)驗(yàn)步驟】1、 樣品處理 碳酸飲料（雪碧）：吸取10 ml碳酸溶液超聲5 min（脫氣），然后用微孔濾膜（0.22 m）過濾，濾液備用。吸取100 l濾液于離心管中，并加入900 l超純水（稀釋了10倍），混合均勻標(biāo)記為樣品。 2、 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液 （1） 取一定量的苯甲酸儲(chǔ)備液，經(jīng)濾膜過濾于離心管中。吸取濾液50 l于另一離心管并加入950 l超純水，得到50 g/ml的苯甲酸標(biāo)

21、準(zhǔn)品，做好標(biāo)記。 （2） 同理得到50 g/ml的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)品，做好標(biāo)記。 （3） 混合標(biāo)準(zhǔn)品配制：分別吸取500 l過濾后的苯甲酸和山梨酸儲(chǔ)備液于離心管中混合均勻，得到500 g/ml的混合標(biāo)準(zhǔn)品。吸取50 l混合標(biāo)準(zhǔn)品（500 g/ml）于離心管中并加入950 l超純水，得到25 g/ml的混合樣，標(biāo)記為混標(biāo)。 3、 色譜條件： 色譜柱：C18反相鍵合色譜柱 流動(dòng)相：甲醇-0.02 mol/L醋酸銨溶液（5 : 95） 流速：1 ml/min 檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm 進(jìn)樣量10 l 4、 標(biāo)準(zhǔn)品和樣品測(cè)定 （1） 分別進(jìn)苯甲酸（50 g/ml）、山梨酸（50 g/ml）標(biāo)準(zhǔn)品，確定保留時(shí)間

22、。 （2） 記錄混合標(biāo)準(zhǔn)品（25 g/ml）的峰面積并按下式計(jì)算樣品中苯甲酸和山梨酸含量： （3）測(cè)樣品中的待測(cè)物質(zhì)，根據(jù)保留時(shí)間確定苯甲酸，山梨酸的峰面積。計(jì)算方法：Cx=FCsAxAs式中：Cx為樣品中被測(cè)物的含量（g/ml）；Cs為苯甲酸或山梨酸標(biāo)準(zhǔn)品的含量（g/ml）。F為稀釋倍數(shù)；Ax樣品的峰面積；As標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積。 【儀器操作】 平衡柱子標(biāo)準(zhǔn)樣測(cè)試（樣品名、進(jìn)樣模式-標(biāo)準(zhǔn)樣、方法-建立好的方法、位置-樣品放置的位置、進(jìn)樣量、時(shí)間）inject進(jìn)樣【注意事項(xiàng)】1、如果被測(cè)溶液含有氣泡，對(duì)測(cè)定和儀器的使用均有影響，因此需要將被測(cè)溶液超聲加熱除去二氧化碳。 同時(shí)試驗(yàn)中所用的所有試劑均需

23、脫氣處理。2 、苯甲酸的靈敏波長(zhǎng)為230 nm，山梨酸的靈敏波長(zhǎng)為254 nm，在此波長(zhǎng)測(cè)定時(shí)苯甲酸的靈敏度較低。因此波長(zhǎng)選擇230 nm。 3、平衡前用甲醇：水（5:95）沖洗柱子15 min，再用甲醇-0.02 mol/L醋酸銨溶液（5:95）進(jìn)行平衡。 4、開機(jī)順序：高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、柱溫箱、檢測(cè)器、電腦軟件。 5 、使用鹽做流動(dòng)相的時(shí)候：水：甲醇=95: 5沖洗柱子20 min以上；然后用甲醇沖洗色譜柱20 min以上，保存色譜柱。 6 、關(guān)機(jī)：清洗結(jié)束后，點(diǎn)擊并將泵流量輸入為0，等壓力降為0時(shí)，關(guān)掉泵電源，退出Breeze工作站，再關(guān)閉儀器各部分電源及計(jì)算機(jī)。 GC-MS（氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用儀）法測(cè)定N-亞硝胺類化合物【實(shí)驗(yàn)原理】 利用色譜對(duì)混合物的高分離能力和質(zhì)譜對(duì)化合物的而準(zhǔn)確鑒定能力，可以對(duì)N-亞硝胺類化合物進(jìn)行定性定量分析。氣相色譜的