植物組織培養(yǎng)試驗(yàn)報告

1、院系、部化學(xué)與生物工程學(xué)院專業(yè)生物技術(shù)師范年級13a學(xué)號17130208姓名組別第二組課程名稱植物細(xì)胞工程學(xué)實(shí)驗(yàn)日期2022.3-6指導(dǎo)老師實(shí)驗(yàn)名稱植物組織培養(yǎng)綜合實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? .熟悉MS培養(yǎng)基的組成,掌握貯備液的配制方法2 .學(xué)習(xí)、掌握植物組織固體培養(yǎng)基的配制和滅菌方法；3 .掌握超凈工作臺上的接種方法與考前須知,了解接種室的滅菌方法；4 .了解組織培養(yǎng)的根本程序；5 .掌握接種的方法和材料的培養(yǎng)過程；6 .掌握無菌操作技術(shù),包括外植體除菌和接種技術(shù)；7 .觀察外植體的生長狀況、染菌狀況,剔除染菌外植體；8 .了解MS培養(yǎng)基和1/2MS培養(yǎng)基的區(qū)別二、實(shí)驗(yàn)原理1.植物細(xì)胞的全能性一切植

2、物都由細(xì)胞構(gòu)成,細(xì)胞是構(gòu)成植物體的根本結(jié)構(gòu)與功能單位.植物細(xì)胞含有全套遺傳信息,具有形成完整植物的潛能.2.植物細(xì)胞表現(xiàn)出全能性的條件1 .離體狀態(tài)；2 .有一定的營養(yǎng)物質(zhì),激素和其他外界條件無菌、溫度、pH;3.選擇性能優(yōu)良、細(xì)胞全能性表達(dá)充分的基因型3 .無菌條件把植物的組織、器官等,使其在人工限制的無菌條件下,使植物在人工培養(yǎng)基上繁殖.用于進(jìn)行組織培養(yǎng)的組織、器官和細(xì)胞稱為外植體.在組培中外植體都死帶菌的,在接種前必須進(jìn)行外表消毒,這時取得培養(yǎng)成功的最根本和重要的前體.組織培養(yǎng)的主要過程都是在無菌條件下進(jìn)行的,所以所有的器材、植物體、接種室都應(yīng)是無菌的.4 .脫分化與愈傷組織已有特定結(jié)構(gòu)

3、與功能的植物組織,在一定條件下,其細(xì)胞被誘導(dǎo)改變原來的發(fā)育途徑,逐步逆轉(zhuǎn)其原有的分化形態(tài),轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂蟹稚降呐呒?xì)胞的過程稱為脫分化.脫分化所用的化學(xué)物質(zhì)與MS培養(yǎng)基的區(qū)別是需要激素誘導(dǎo).所以脫分化培養(yǎng)需在MS培養(yǎng)基上添加激素進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo).5 .培養(yǎng)基植物組織培養(yǎng)常用的培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基.常用的凝固劑是瓊脂,它的主要作用是使液體培養(yǎng)基凝固,瓊脂本身并不提供任何營養(yǎng),它只是一種高分予的碳水物從海藻中提取出來,僅溶解于熱水,成為溶膠,冷卻后40C以下即凝固為固體狀凝膠.瓊脂的用量一般在410克/升之間.瓊脂的凝固水平除與原料、廠家的加工方式等有關(guān)外,還與高壓滅菌時的溫度、時間、pH值等因素有關(guān)

4、,長時間的高溫會使凝固水平下降,過酸過堿加之高溫會使瓊脂發(fā)生水解而喪失凝固水平,存放時間過久,瓊脂變褐,也會逐失去凝固水平.MS培養(yǎng)基屬于富鹽平衡培養(yǎng)基,特點(diǎn)是： 無機(jī)鹽濃度較高,元素間的比例適當(dāng),離子平衡性好,具有較強(qiáng)的緩沖性,因而在培養(yǎng)的過程中可維持較好的穩(wěn)定性； 營養(yǎng)豐富,在一般培養(yǎng)中無須額外參加復(fù)雜的有機(jī)成分； 微量元素種類全,濃度高.這類培養(yǎng)基是目前使用最廣泛的培養(yǎng)基.6 .生長調(diào)節(jié)物質(zhì)包括天然植物激素額人工激素類似物.植物激素是一類植物自身合成、同時對其生長發(fā)育具有重要調(diào)節(jié)作用的有機(jī)化合物.生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對于離題培養(yǎng)中的細(xì)胞分裂分化、 器官形成和個體再生等均起著重要而明顯的調(diào)節(jié)作用.

5、一般來說,根本培養(yǎng)基只能保證培養(yǎng)物的生存,維持其最低的生理活動,而只有植物激素的配合使用,才能完成離體培養(yǎng)物中根據(jù)需要設(shè)計(jì)的各個調(diào)節(jié)環(huán)節(jié).常用的植物組培激素種類主要有生長素類、細(xì)胞分裂素類、赤霉素.1）生長素的生理作用主要是促進(jìn)細(xì)胞分裂和生長,有利于外植體脫分化并啟動細(xì)胞分裂,有利于形成愈傷組織.同時生長素和細(xì)胞分裂素的協(xié)調(diào)作用,對于培養(yǎng)物的形態(tài)建立十分必要.在離體培養(yǎng)的分化調(diào)節(jié)中,生長素促進(jìn)不定根的形成而抑制不定芽的發(fā)生.在液體培養(yǎng)中,生長素還有利于體細(xì)胞胚胎發(fā)生.常用的生長素有呻喙乙酸IAA、奈乙酸NAA、二氯苯氧乙酸2,4-D和呻喙丁酸舊A等.在使用2,4-D時,必須嚴(yán)格限制使用濃度和培

6、養(yǎng)時期,由于高濃度的2,4-D常常抑制器官的發(fā)生,在分化培養(yǎng)時不能使用2,4-D代替其他生長素.2）細(xì)胞分裂素的主要作用是促進(jìn)細(xì)胞的分裂,調(diào)節(jié)器官分化,延遲組織衰老,增強(qiáng)蛋白質(zhì)合成等.止匕外,它還能顯著改善其他激素.離體培養(yǎng)中,細(xì)胞分裂素能夠促進(jìn)不定芽的發(fā)生,與生長素協(xié)調(diào)使用能有效調(diào)控培養(yǎng)物的生長與分化.常用的細(xì)胞分裂素包括6-卞基喋吟6-BA、沖動素KT、異戊烯氨基喋吟2ip、玉米素ZT等.3）赤霉素GA是一類廣泛存在于植物體內(nèi)的激素,目前已發(fā)現(xiàn)的天然赤霉素有20多種.自然界植物體內(nèi)的赤霉素具有促進(jìn)細(xì)胞伸長生長、誘導(dǎo)花芽形成、打破種子休眠及誘導(dǎo)單性結(jié)實(shí)等生理功能.在離體培養(yǎng)條件下,赤霉素的主

7、要作用時促進(jìn)細(xì)胞伸長生長,與生長素協(xié)同作用對形成層的分化具有一定影響,同時還能刺激體細(xì)胞胚進(jìn)一步發(fā)育成植株.三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器設(shè)備1 .植物材料：馬齒范、番茄種子誘導(dǎo)的無菌苗、外植體盤龍參、波斯菊、金葉女貞、黃花苜蓿、菊花、香樟、杜鵑、月季2 .實(shí)驗(yàn)藥品試劑：甲醛、MS培養(yǎng)基母液見表1、蔗糖、瓊脂、1%升汞、,W精75%和90%、NaOH、HCl、6-BA、NNA、無菌水；3 .儀器設(shè)備和實(shí)驗(yàn)用具：高壓滅菌鍋、天平、pH計(jì)、超凈工作臺、電爐、酒精燈、鐐子、解剖刀、剪刀、燒杯、培養(yǎng)瓶、量筒、燒杯、玻璃棒、廣口試劑瓶、牛皮紙、濾紙、培養(yǎng)皿、藥勺、支架、打火機(jī)等.四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）培養(yǎng)基母液的

8、配制2022/3/42022/3/41.MS培養(yǎng)基貯備液配制貯備液I(g)(20X)貯備液III(mg)(100X)MgSO417H2O3.70500mLFeSO47H2O278100mLNH4NO316.50NazEDTA-2H2O373CaCl2.2H2O4.40生長調(diào)節(jié)劑KNO319.006-BA50mg50mLKH2PO41.70NAA50mg貯備液II(mg)(100 x)貯備液IV(mg)(100 x)KI8.3100mL肌醇1000100mLH3BO362煙酸5MnSO44H2O223鹽酸硫胺素1ZnSO47H2O86鹽酸口比哆醇5Na2MoO412Hq2.5甘氨酸20CuSO4

9、5H2O0.25稱量溶解混合定容CoCl2.6H2O0.25表11）每種母液中的幾種成分稱量完畢后,分別用少量的蒸播水徹底溶解,然后再將它們混溶,定容.2）貯備液III需加熱溶解.混合后調(diào)至pH5.5,定容,保存在棕色玻璃瓶內(nèi).3）6-BA:1mg/mL溶于少量1N鹽酸后以蒸儲水定容.NAA:1mg/mL先用少量95%乙醇溶解后以蒸儲水定容.4）各種母液配制完成后,分別用玻璃瓶貯存,貼上標(biāo)簽,注明母液號、配制倍數(shù)、日期等,放入冰箱冷藏室保存.一般無機(jī)物質(zhì)的母液在冰箱中可保存半年以上,有機(jī)物質(zhì)的母液保存時間在半年以內(nèi),但假設(shè)發(fā)現(xiàn)有沉淀或霉變,應(yīng)立即需重新配制.2.其他試劑的配置1）1mol/L的

10、NaOH:1瓶2）1mol/LHCL:1瓶3）0.1%的升汞或2%次氯酸鈉：每個超凈工作臺一瓶用時處理5-30min4）7075%酒精：每個超凈工作臺一瓶5）95%酒精：每個超凈工作臺一瓶6）75%酒精棉球：每個超凈工作臺一瓶（二）培養(yǎng)基的配制與滅菌1.培養(yǎng)基配制1）配制培養(yǎng)液MS培養(yǎng)液：按每次配制500mL培養(yǎng)基計(jì),用量筒或者移液管從各種母液中分別取出貯備液I25mL、貯備液II、田、IV各5mL;2）溶化瓊脂：用粗天平分別稱取5g瓊脂、15g蔗糖放入500mL搪瓷缸中,參加蒸播水400mL,用用電爐加熱,邊加熱邊用玻璃棒攪拌,直到液體呈半透明狀.然后再將配好的混合培養(yǎng)液參加到煮沸的瓊脂中,

11、最后加蒸儲水定容至500mL,攪拌均勻.3調(diào)pH:用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1mol/L的NaOH溶液,逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中,邊滴邊攪拌,并隨時用精密的pH試紙5.47.0測培養(yǎng)基的pH,一直到培養(yǎng)基的pH為5.8為止培養(yǎng)基的pH必須嚴(yán)格限制在5.8.4）培養(yǎng)基的分裝？溶化的培養(yǎng)基應(yīng)該趁熱分裝.分裝時,先將培養(yǎng)基倒入燒杯中,然后將燒杯中的培養(yǎng)基倒入組培瓶50mL或100mL中.注意不要讓培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上.組培瓶中培養(yǎng)基的量約50mL.每500mL培養(yǎng)基,可分裝1015瓶.5）培養(yǎng)基分裝完畢后,應(yīng)及時封蓋瓶口.最后在組培瓶外壁貼上標(biāo)簽.2.培養(yǎng)基滅菌高壓滅菌1）放培養(yǎng)瓶.將裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)

12、瓶直立于金屬小筐中,再放入高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi).如果沒有金屬小筐,可以在兩層錐形瓶之間放一塊玻璃板隔開.2）放置其他需要滅菌的物品.將其他需要滅菌的物品也放入高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi),如裝有蒸鐳水的錐形瓶、 帶螺口蓋的玻璃瓶、燒杯、廣口瓶以上物品都要用牛皮紙封口,用牛皮紙包裹的培養(yǎng)皿、剪刀、解剖刀、鐐子、濾紙、鉛筆等.3）待需要滅菌的物品碼放完畢,蓋上鍋蓋.在98kPa、121.3C下,滅菌20min.滅菌后取出培養(yǎng)瓶,讓其中的培養(yǎng)基自然冷卻凝固.最好放置1d后再使用.3.其他滅菌1）不耐熱的物質(zhì)將采用過濾滅菌如赤霉素、玉米素、脫落酸、尿素和某些維生素等.過濾滅菌的原理：溶液通過濾膜后,細(xì)菌的細(xì)胞和胞子等

13、因大于濾膜孔徑而被阻.2）玻璃器皿及耐熱用具等可采用干熱滅菌即利用烘箱加熱到160-180C的溫度來殺滅微生物.3用于無菌操作的器械采用灼燒滅菌三接種室和超凈工作臺的滅菌處理1.接種室熏蒸滅菌長期不用的培養(yǎng)室或接種室要進(jìn)行熏蒸.方法：甲醛、高鎰酸鉀熏蒸.甲醛的用量通常按每立方米空間2-6毫升計(jì)算,高鎰酸鉀的用量是甲醛的一半.室內(nèi)準(zhǔn)備妥當(dāng)后,把稱好的高鎰酸鉀放在瓷碗或燒杯內(nèi)最好在碗或杯下面鋪一弓K報紙,以利清洗,然后將甲醛也倒入碗或杯內(nèi),立即出屋關(guān)門.幾秒鐘后,甲醛溶液即沸騰揮發(fā).高鎰酸鉀是一種氧化劑,當(dāng)它與一局部甲醛作用時,由氧化反響產(chǎn)生的熱可使其余的甲醛揮發(fā)為氣體.甲醛熏蒸接種室應(yīng)至少在使用

14、前24小時進(jìn)行,熏蒸后密閉保持4小時以上再進(jìn)入室內(nèi)工作.甲醛對人的眼、 鼻有強(qiáng)烈刺激作用.因此,可在使用前用氨進(jìn)行中和.取與甲醛等量的氨水,倒在另一個燒杯里,迅速放入熏蒸室內(nèi),使甲醛和氨水發(fā)生中和反響,以消除甲醛味,減少對人體的刺激作用.使用氨水應(yīng)在工作前2小時進(jìn)行.對有材料的培養(yǎng)室,也可以采用乙二醇加熱熏蒸2.準(zhǔn)備組培室將組培室清掃干凈,調(diào)至適宜溫度3.超凈工作臺處理1）材料準(zhǔn)備用75%酒精擦拭,準(zhǔn)備好超凈工作臺內(nèi)物品,包括酒精棉球、75%和90%酒精、廢液缸、打火機(jī)、酒精燈、支架、銀子、解剖刀、解剖剪等2）滅菌處理實(shí)驗(yàn)開始前先用75%酒精擦拭工作臺面,然后開啟紫外燈,紫外照射20min-3

15、0min.關(guān)閉紫外燈,開啟風(fēng)機(jī)10min后翻開日光燈.用7075%的酒精拭擦臺面并消毒雙手.試驗(yàn)用具也應(yīng)該用酒精消毒.點(diǎn)燃酒精燈,將金屬器械在其火焰上灼燒,冷卻待用.注意：所有操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過灼燒進(jìn)行.金屬器械不能過度灼燒,以防退火.移液管不能灼燒,培養(yǎng)瓶口、塑料材料、橡膠材料過火焰不能時間太長.四無菌苗的培養(yǎng)2022/3/112022/3/111.培養(yǎng)基配制方法同二培養(yǎng)基的配制與滅菌種子的萌發(fā)采用1/2MS培養(yǎng)基1/2MS培養(yǎng)基貯備液I貯備液n貯備液田貯備液IV蔗糖瓊脂12.5mL2.5mL2.5mL2.5mL15g5g2.馬齒范番茄種子處理1）洗去浮塵和上漂的種子,挑選飽滿種子,置于

16、培養(yǎng)瓶中流水沖洗30min后倒掉水備用；2）將種子置于培養(yǎng)瓶中,用75%酒精消毒滅菌3060s,用無菌水沖洗干凈；3用1%升汞處理810min,然后用無菌水沖洗34次,放入無菌培養(yǎng)皿中,置于酒精燈火焰下方,用無菌接種器械進(jìn)行別離接種.3.接種及培養(yǎng)1用酒精擦洗工作臺和手,對接種器具進(jìn)行灼燒滅菌；2）翻開培養(yǎng)瓶,瓶口在燈焰處旋轉(zhuǎn)灼燒,用鐐子90%酒精浸泡并灼燒將培養(yǎng)材料置于培養(yǎng)基上,灼燒瓶口,蓋上瓶塞.3）培養(yǎng)瓶貼上標(biāo)簽,做好標(biāo)記,然后放到光照培養(yǎng)箱中或培養(yǎng)室培養(yǎng)架上進(jìn)行培養(yǎng),條件為2000-3000LX,261C,培養(yǎng)一周.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：所有馬齒范無菌苗均染菌未拍照實(shí)驗(yàn)分析：馬齒范種子消毒、滅菌時

17、間缺乏接種室和培養(yǎng)實(shí)滅菌不徹底,環(huán)境較臟實(shí)驗(yàn)操作不正確超凈工作臺不干凈（五）愈傷組織誘導(dǎo)2022/3/252022/3/251.培養(yǎng)基的配制方法同二培養(yǎng)基的配制與滅菌愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基組別6-BANNA貯備液I貯備液n貯備液m貯備液IV蔗糖瓊脂一0.5%0.5%25mL5mL5mL5mL15g5g二0.5%1%三0.5%0.5%四1%1%2.無菌苗和外植體的處理1)無菌苗處理從培養(yǎng)瓶中取出無菌苗,用無菌水洗凈培養(yǎng)基,切成0.5cm大小,葉片較大的進(jìn)行裁剪,置于無菌培養(yǎng)皿備用；2)外植體處理a將野外植物洗干凈塵土并用洗衣粉刷干凈；b將洗凈植物切去葉柄,將葉片從葉脈處剪開,再切成34mm2的小塊；

18、嫩莖需切取兩個節(jié)之間的節(jié)間局部,長約1cm,流水沖洗30min；c將外植體置于培養(yǎng)瓶中,用75%酒精持續(xù)消毒滅菌18s,然后用無菌水沖洗d用1%升汞處理1215min,然后用無菌水沖洗34次,放入無菌培養(yǎng)皿中,置于酒精燈火焰下方,用無菌解剖刀切去兩端后進(jìn)行接種.3.接種及培養(yǎng)(同無菌苗的建立)4.剔除長菌嚴(yán)重的培養(yǎng)瓶,其余繼續(xù)培養(yǎng)5.觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象實(shí)驗(yàn)結(jié)果：材料馬齒覽盤龍參根結(jié)果材料 盤龍參葉盤龍參葉基部結(jié)果材料肯蓿花+葉波斯菊葉結(jié)果第二周(2022/4/15)(2022/4/15)材苜?；?葉波斯菊葉料組別材料染菌率枯死率存活率二馬齒覽100%(2)所有葉柄基部沒有散開,一起消毒75%酒精15

19、s升汞：15min盤龍參根00100%(2)盤龍參-葉綠色0100%盤龍參-葉基部050%(1)50%(1)肯蓿(花+葉)0花-0葉-50%花：100%葉：50%波斯菊葉00100%第一周(2022/4/8)(2022/4/8)1、僅有無菌苗染菌：無菌苗本身染菌,但未被發(fā)現(xiàn)；實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基凝固不徹底,粘到瓶子壁上；培養(yǎng)基pH未調(diào)好；操作時,動作不正確無菌苗僅用無菌水洗滌,未用酒精和升汞2、外植體有局部枯死：滅菌過度,時間過長3、盤龍參組織無變化：可能由于培養(yǎng)基中植物激素不適宜,培養(yǎng)室溫度、光照等不恰當(dāng)4、波斯菊長愈傷組織明顯,此培養(yǎng)基較適宜波斯菊5、不同植物對植物激素的要求不同,所以在同一濃度下出

20、現(xiàn)不同的結(jié)果（六）生根實(shí)驗(yàn)類似桿插2022/4/152022/4/151.生根培養(yǎng)基配制方法同二培養(yǎng)基的配制與滅菌生根培養(yǎng)基1/2MS組別6-BANNA貯備液I貯備液n貯備液田貯備液IV蔗糖瓊脂二00.2%12.5mL2.5mL2.5mL2.5mL15g5g三0.4%四0.6%2.無菌苗和外植體的處理1）無菌苗處理從培養(yǎng)瓶中取出無菌苗,用無菌水洗凈培養(yǎng)基,保存局部幼嫩葉片,切成0.5cm大小材料盡量幼嫩,置于無菌培養(yǎng)皿備用；2外植體處理a將野外植物洗干凈塵土并用洗衣粉刷干凈；果愈傷組織長勢良好實(shí)驗(yàn)分析:b將洗凈植物切去老葉,保存頂端嫩葉、嫩莖,切成長約2cm莖段,流水沖洗30min；c將外植體

21、置于培養(yǎng)瓶中,用75%酒精持續(xù)消毒滅菌18s,然后用無菌水沖洗d用1%升汞處理13min,然后用無菌水沖洗34次,放入無菌培養(yǎng)皿中,置于酒精燈火焰下方,用無菌解剖刀切去兩端后約1.5cm進(jìn)行接種.材料月季花月季莖結(jié)果綻開,無根花苞長真菌,無根長真菌,無根葉稍長,無根,未染菌材料菊花莖香樟結(jié)果1%1無根興7-褐化,無根有白色菌點(diǎn)？or愈傷組織？材料杜鵑波斯菊莖結(jié)果無根,幾乎無變化長勢旺盛,略微生根材料女貞莖結(jié)無變化,無根組別材料染菌率枯死率存活率一菊花莖10100%075%酒精15s升汞：15min月季莖2100%(2)月季花2第一周50%(1)第二周100%(2)女貞莖40100%1長愈傷組織

22、、3無變化香樟1100%有愈傷杜鵑1100%波斯菊莖1100%略長根,第二周長菌(206/4/2(206/4/29)9)3.4.5.接種及培養(yǎng)同無菌苗的建立一瓶接種23個莖段,直接插入培養(yǎng)基中,形態(tài)學(xué)上端朝上;剔除長菌嚴(yán)重的培養(yǎng)瓶,其余繼續(xù)培養(yǎng)觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象(2022/5/6)綜合比照不同濃度NAA對波斯菊生根的影響果第二周2022/5/62022/5/6其余材料均無明顯變化NAA濃度實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：較高濃度NAA誘導(dǎo)長根效果更好.如下圖,隨NAA濃度的增加,波斯菊生根越多,長勢越好（七）生芽實(shí)驗(yàn)2022/5/62022/5/61.生芽培養(yǎng)基配制方法同二培養(yǎng)基的配制與滅菌生芽培養(yǎng)基MS組別6-BA

23、NNA貯備液I貯備液n貯備液田貯備液IV蔗糖瓊脂一5%0.4%12.5mL2.5mL2.5mL2.5mL15g5g二5%0.2%三4%0.4%四4%0.2%2.無菌苗和外植體的處理同上1.無菌苗處理從培養(yǎng)瓶中取出無菌苗,用無菌水洗凈培養(yǎng)基,切成0.5cm大小,葉片較大的進(jìn)行裁剪,置于無菌培養(yǎng)皿備用；2外植體處理a將野外植物洗干凈塵土并用洗衣粉刷干凈；b將洗凈植物除葉留芽,切成長約2cm,流水沖洗30min；c將外植體置于培養(yǎng)瓶中,用75%酒精持續(xù)消毒滅菌18s,然后用無菌水沖洗d用1%升汞處理1215min,然后用無菌水沖洗34次,放入無菌培養(yǎng)皿中,置于酒精燈火焰下方,用無菌解剖刀切去兩端后進(jìn)

24、行接種.3 .接種及培養(yǎng)同無菌苗的建立4 .剔除長菌嚴(yán)重的培養(yǎng)瓶,其余繼續(xù)培養(yǎng)5.觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象實(shí)驗(yàn)結(jié)果：有 部分死亡未 死亡的 均已生 芽長勢好該 培養(yǎng)基 適宜用 于誘導(dǎo) 波斯組別材料染菌率枯死率存活率長芽率二75%酒精15s升汞：15min波斯菊第三周有染菌12.5%87.5%100%番茄100%材波斯菊(2022/5/20(2022/5/20) )菊匕L芽材料番茄結(jié)無生芽果趨勢,但是可能要長愈傷組織該培養(yǎng)基濃度不適宜誘導(dǎo)番茄生芽第二周(2022/5/27)(2022/5/27)波斯菊段生長勢好,始形愈傷材料結(jié)果組織番茄番勢斯慢茄長較波菊緩,第周生芽腋芽較多,也形成愈傷組織第三周2022/6/32022/6/3材料結(jié)果波斯菊材料結(jié)果局部長勢良好,愈傷組織和芽軍生長旺盛；波斯菊局部死亡,局部開始長菌,多數(shù)為真菌：1、可能是植物本身含有的菌,培養(yǎng)一段時間后開始生長；2、培養(yǎng)瓶蓋子上部的通氣孔有破損3、培養(yǎng)室內(nèi)不干凈番茄番茄是無菌苗,未出現(xiàn)染菌情況.芽和其遇上組織的生