Skp2在大腸癌中的表達(dá)及其與p27kip1表達(dá)的相關(guān)性研究

1、Skp2在大腸癌中的表達(dá)及其與p27kip1表達(dá)的相關(guān)性研究 作者：許雙塔，賀雅莉，許建華，黃旭，許東坡【關(guān)鍵詞】 大腸癌摘要：目的：為探討大腸癌手術(shù)標(biāo)本中Skp2的表達(dá)及其與p27kip1表達(dá)的相關(guān)性。方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)STREPT-AVIDIN-BIOTIN-COMPLEX法，檢測(cè)大腸癌手術(shù)標(biāo)本中Skp2、p27kip1的表達(dá)。結(jié)果：Skp2的表達(dá)的陽(yáng)性率：浸潤(rùn)于粘膜以及粘膜下層為0（0/4），浸潤(rùn)達(dá)肌層者為40（2/5）。浸潤(rùn)達(dá)漿膜層者為61（43/71）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性者陽(yáng)性率為77（36/47）；臨床病理分期第、期陽(yáng)性率分別為22（2/9），29（7/24）和77（36/47）。

2、Skp2在大腸癌中的表達(dá)與p27kip1的表達(dá)呈現(xiàn)明顯負(fù)相關(guān)；統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)有顯著性（P<0.01）。結(jié)論：大腸癌組織中， Skp2的過(guò)度表達(dá)和p27kip1的表達(dá)缺失有明顯的相關(guān)性，可能通過(guò)降低p27kip1的表達(dá)而促進(jìn)腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。檢測(cè)癌組織中Skp2、p27kip1的表達(dá)情況，有助于評(píng)估腫瘤的生物學(xué)行為，對(duì)患者的預(yù)后判斷具有重要意義。關(guān)鍵詞： 大腸癌； Skp2； p27kip1； 免疫組織化學(xué)Expression of Skp2 in Colorectal Carcinomas and its Relation with p27kip1Abstract： Objectiv

3、e： To analyze the expression of skp2 and p27kip1 in a series of human tissue sample representing different stages of colorectal carcinomas. Method： Paraffin embedded materials from 80 samples of colorectal carcinomas were analyzed by immunohistochemistry for skp2 and p27kip1 expression. Result： Of 8

4、0 cases, 45(56.3%) were positive for skp2. The expression of skp2 was significantly related to the lymphatic metastasis77%(36/47) and the rate of skp2 expression in different TNM stage of the colorectal carcinomas. It also has significant relation with the expression of p27kip1 (p<0.01).Concl

5、usion： The skp2 expression are related to the invasion and metastasis of the colorectal carcinomas and the expression of p27kip1.It promotes the invasion and metastasis of colorectal carcinomas .Key words： Colorectal cancer; Skp2； p27kip1; ImmunohistochemistrySkp2是F-box蛋白家庭成員之一，在細(xì)胞的增殖調(diào)節(jié)中起到重要作用。其作為泛素

6、蛋白酶體路徑的底物識(shí)別序列，因能泛素化降解p27kip1而與腫瘤關(guān)系密切。目前，Skp2與惡性腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后方面的研究正在不斷深入，已經(jīng)成為腫瘤學(xué)研究中的一大熱點(diǎn)，具有潛在的診斷和治療價(jià)值。1 資料與方法1.1 一般資料：我院1990年至1996年大腸癌根治手術(shù)切除標(biāo)本80例，其中男48例，女32例，年齡4078歲，平均年齡57.6歲。所有標(biāo)本都經(jīng)過(guò)病理證實(shí)為大腸癌。所有病例術(shù)前未經(jīng)過(guò)放射治療或化學(xué)治療。病例的臨床病理分期：Dukes A期9例，B期24例，C期47例。隨訪(fǎng)資料完整。標(biāo)本經(jīng)過(guò)福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，制成連續(xù)5um切片備用。每例取原發(fā)灶癌組織。1.2 試劑：主要試

7、劑包括：鼠抗人Skp2、p27kip1單克隆抗體；STREPT-AVIDIN-BIOTIN-COMPLEX免疫組織化學(xué)試劑盒。1.3 方法：采用免疫組織化學(xué)STREPT-AVIDIN-BIOTIN-COMPLEX法，按照STREPT-AVIDIN-BIOTIN-COMPLEX試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。每份標(biāo)本行蘇木素伊紅染色對(duì)照。用緩沖液替代一抗作為陰性對(duì)照。1.4 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：Skp2、p27kip1陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性顯色為棕黃色顆粒，著色以細(xì)胞核為主，少數(shù)細(xì)胞有胞漿顯色，并且顯色的細(xì)胞占全部細(xì)胞數(shù)的10以上者。：Skp2、p27kip1陰性標(biāo)準(zhǔn)：切片中細(xì)胞核不顯色，或顯色的細(xì)胞總數(shù)占全部粘膜細(xì)胞的10

8、以下者。1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包SPSS進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。方法上應(yīng)用卡方檢驗(yàn)。2 結(jié)果Skp2的表達(dá)的陽(yáng)性率為：浸潤(rùn)于粘膜以及粘膜下層0（0/4），浸潤(rùn)達(dá)肌層者為40（2/5）。浸潤(rùn)達(dá)漿膜層者為61（43/71）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性者陽(yáng)性率為77（36/47）；Dukes 分期第A、B、C期陽(yáng)性率分別為22（2/9），29（7/24）和77（36/47）。統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)有顯著性；（P<0.01）由此可見(jiàn)， Skp2的表達(dá)與腫瘤的浸潤(rùn)深度、淋巴轉(zhuǎn)移和臨床病理分期顯著相關(guān)。同時(shí)，Skp2的表達(dá)和p27Kip1的表達(dá)呈現(xiàn)明顯的負(fù)相關(guān)（P<0.01）。3 討論不可控制的細(xì)

9、胞增殖是癌癥的特征。腫瘤的惡性增殖從生物學(xué)角度看主要表現(xiàn)在兩個(gè)方面：一方面是腫瘤細(xì)胞的“不滅性”，即凋亡障礙；另一方面是細(xì)胞分裂的失控，即細(xì)胞周期網(wǎng)絡(luò)調(diào)控系統(tǒng)的障礙。參與細(xì)胞周期調(diào)控的分子有：細(xì)胞周期蛋白（Cyclins），細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶（Cyclin-dependent kinase，CDK），磷酸化酶以及細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶抑制蛋白（Cyclin-dependent kinase inhibitor，CKI）。Cyclin-CDK復(fù)合物對(duì)細(xì)胞周期有正調(diào)節(jié)作用，CKI則起到負(fù)調(diào)節(jié)作用，并且能夠通過(guò)和Cyclin-CDK形成穩(wěn)定的復(fù)合物，抑制CDK催化活性。 p27kip1是新型候選

10、抑癌基因，其能夠阻止細(xì)胞通過(guò)G1-S期轉(zhuǎn)換關(guān)卡而抑制細(xì)胞增殖。其低表達(dá)被認(rèn)為與腫瘤的預(yù)后不良及高度的侵襲性密切相關(guān)1，2。細(xì)胞S期激酶相關(guān)蛋白Skp2，作為泛素蛋白酶體路徑的底物識(shí)別序列，因能泛素化降解主要的CKIp27kip1而與腫瘤關(guān)系密切，目前在已經(jīng)成為腫瘤學(xué)研究中的一大熱點(diǎn)，具有潛在的診斷和治療價(jià)值。Masuda小組應(yīng)用RT-PCR方法和免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)了98例胃癌患肢標(biāo)本及鄰近正常組織中Skp2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)等腫瘤生物學(xué)行為相關(guān)，并且與胃癌的預(yù)后相關(guān)3。Kudo小組應(yīng)用免疫組化的方法檢測(cè)了15例口腔癌標(biāo)本中Skp2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)Skp2高表達(dá)組的累計(jì)生存率顯著降低

11、，并且闡明了以Skp2和p27kip1在口腔癌中聯(lián)合判斷預(yù)后的臨床價(jià)值4。Signoretti等在乳腺癌中檢測(cè)到Skp2的高表達(dá)，通過(guò)Cox回歸模型，提示Skp2高表達(dá)是預(yù)后不良的一個(gè)明顯的相關(guān)因素5； Yang等研究了Skp2在前列腺癌細(xì)胞中的Skp2表達(dá)情況，提出Skp2的表達(dá)可以作為前列腺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的強(qiáng)有力預(yù)測(cè)指標(biāo)6；Dong等在喉癌標(biāo)本中檢測(cè)出Skp2的高表達(dá)和p27kip1的低表達(dá)，并且認(rèn)為，二者是判斷喉癌進(jìn)展程度的有效指標(biāo)7。近來(lái)一些研究表明，在惡性腫瘤中Skp2的表達(dá)有不同程度的增高，同時(shí)伴隨有p27kip1表達(dá)的降低。因此一些學(xué)者認(rèn)為，這是由于其造成腫瘤細(xì)胞中的p27kip

12、1表達(dá)降低造成的。上述研究揭示了在一些惡性腫瘤中，Skp2的表達(dá)增高不同程度影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為，但是在Skp2和p27kip1的相關(guān)關(guān)系的研究中，仍然存在一些爭(zhēng)議。國(guó)外一些學(xué)者認(rèn)為這種相關(guān)關(guān)系僅僅表現(xiàn)在某些特定的腫瘤中，并且也僅僅在這些特定的腫瘤中具有明顯的預(yù)后判斷價(jià)值。Dowen等在宮頸癌中Skp2表達(dá)和p27kip1表達(dá)的相關(guān)研究中，發(fā)現(xiàn)Skp2的高表達(dá)確實(shí)與腫瘤的惡性程度相關(guān)，但是在高表達(dá)的Skp2標(biāo)本中，并未檢測(cè)到其與p27表達(dá)的相關(guān)性8； Oliveira等在軟組織肉瘤中的Skp2表達(dá)研究中，同樣沒(méi)有發(fā)現(xiàn)二者的表達(dá)相關(guān)9。目前Skp2在大腸中的表達(dá)的研究在國(guó)內(nèi)外尚處于空白，國(guó)內(nèi)

13、更無(wú)大腸癌中Skp2與抑癌基因p27kip1表達(dá)的相關(guān)性研究報(bào)道。本研究的結(jié)果表明在浸潤(rùn)程度高、有淋巴轉(zhuǎn)移和臨床病理分期晚的腫瘤組織中Skp2的表達(dá)明顯增高，與上述研究報(bào)道相符。研究結(jié)果表明，隨著大腸癌疾病的進(jìn)展，Skp2的表達(dá)呈現(xiàn)一種增高的趨勢(shì)。并且，Skp2的高表達(dá)常伴隨p27kip1的低表達(dá)狀態(tài)，二者具有顯著相關(guān)性。因此，我們可以推測(cè)，Skp2通過(guò)泛素化降解主要的CKIp27kip1而在大腸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到重要的作用。目前，Skp2的研究尚局限于少數(shù)一些惡性腫瘤中間，對(duì)Skp2的表達(dá)和其與p27kip1的相關(guān)機(jī)制的研究才剛剛開(kāi)始，現(xiàn)有的研究已經(jīng)為我們提供了一個(gè)較好的研究預(yù)期，并且揭

14、示了二者聯(lián)合在預(yù)后判斷中的重要臨床價(jià)值。參考文獻(xiàn)：1 許雙塔，許東坡新型候選腫瘤抑制基因p27Kip1研究進(jìn)展福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，34：2 許雙塔，許東坡p27Kip1在結(jié)腸癌中的表達(dá)及臨床意義福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，4：3 Masuda TA, Inoue H, Sonoda H, et al. Clinical and biological significance of S-phase kinase-asscoiated protein 2(skp2) gene expression in gastric carcinoma: modulation of malignant

15、phenotype by skp2 overexpression , possibly via p27 protcolysis. Cancer Res, 2002, 62(13):3819-3825.4 Kudo Y, Kitajima S, Sato S, et al. High expression of S-phase kinase-interacting protein 2, human F-box protein, correlates with poor prognosis in oral squamous cell carcinomas Cancer Res, 2001, 61(

16、19):7044-7047.5 Signoretti S, Di Marcotullio L, Richardson A, et al. Oncogenic role of the ubiquitin ligase subunit Skp2 in human breast cancer. Clin Invest, 2002, 110(5):633-6416 Yang G, Ayala G, Marzo AD, et al. Elevated Skp2 protein expression in human protrate cancer: association with loss of th

17、e cyclin-dependernt kinase inhibitor p27 ad PTEN and with reduce recurrence-free survival. Clin Cancer Res, 2002,8(11):3419-3426.7 Dong Y, Sui L, Watanabe Y,et al. S-phase kinase-associated protein 2 expression in laryngeal aquamous cell carcinomas and its prognostic implications. Oncol Rep,2003,10(2):321-3258 Shigemasa K, gu L, O Brien TJ,et al. Skp2 over expression is a progn