天然藥物分析方法

1、最新資料推薦天然藥物分析方法二、水蒸汽蒸儲(chǔ)法：揮發(fā)油、小分子化合物 三、升華法：樟腦、香豆素四、壓榨法：龍舌蘭中?？略砀试?、酶解法：甘元六、化學(xué)法：內(nèi)酯 七、超聲波萃取 八、超臨界流體萃取SFE九、膜 別離技術(shù)大類成分樣品制備一、生物堿強(qiáng)堿非極性有機(jī)溶劑 萃取極性有機(jī)溶劑萃取水提或酸水提弱堿有機(jī)溶劑直接提取水溶性生物堿或季鏤堿：雷氏鹽、磷鴇酸揮發(fā)性生物堿：水蒸氣蒸儲(chǔ)、 升華法 二、黃酮 醇提 鉛鹽沉淀法 三、皂 甘：醇提 精制方法 醇-醍沉淀法 鉛鹽沉淀法 膽苗醇沉淀法 氧化鎂吸附法 四、強(qiáng)心昔：醇提五、揮發(fā)油水蒸汽蒸儲(chǔ)浸取法：石油醍吸收法：豚脂、牛脂冷壓法第三節(jié)供試品溶液的精制溶劑別離法：

2、多糖提取、去蛋白液液萃取：石油醍除脂溶性色素沉淀法：1 / 12醋酸鉛除酸性物質(zhì)和鞍質(zhì)鹽析法:丹皮酚-氯化鈉色譜法: 柱色譜、薄層色譜、氣相色譜、高效液相色譜等常見雜質(zhì)的處理 1、鞍質(zhì)：明膠沉淀、生物堿沉淀、醋酸鉛、氨水沉淀2、葉綠素：苯、氯仿、鉛鹽 3、油脂、蠟和樹脂:石油醍、苯 4、蛋白質(zhì)：乙醇、甲醇、鉛鹽 5、無(wú)機(jī)鹽:醇提、透析 6、糖和淀粉：有機(jī)溶劑提取水分檢查法烘干法不含或少含揮發(fā)性成分甲苯法含揮發(fā)性成分減壓枯燥法含揮發(fā)性成分貴重藥GC法氣相色譜法古蔡法檢查碑的原理為金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫, 與藥物中微量碎鹽反響生成具揮發(fā) 性的碎化氫, 遇澳 化汞試紙, 產(chǎn)生黃色至棕色 的碑斑

3、,與一定量標(biāo)準(zhǔn)碑溶液所生成 的碑班比 較,判定藥物中碎鹽的含量.醋酸鉛棉花、 澳化汞試紙、 標(biāo)準(zhǔn)碎溶液、 鹽 酸、碘化鉀 試液、酸性氯化亞錫試液、鋅粒常用的理化鑒定方法 顯微鑒 別 定性反響顏色或沉淀反響 色譜法 波譜法2顏 色或沉淀反響各類成分因結(jié)構(gòu)或功能團(tuán)的不同, 常與某些特定試劑發(fā)生反響, 產(chǎn)生不同的顏色或沉 淀.生物堿與碘化韌鉀生成橙色沉淀;慈釀?lì)惻c堿液反響生成最新資料推薦橙、紅、藍(lán)色； 黃酮類與鹽酸鎂粉的反響 內(nèi)酯類的異羥肪酸 鐵反響皂苴類的Liebermann Burchard反響酚類的三氯化鐵反 應(yīng) 鞍質(zhì)的明膠沉淀反響 氨基酸的苗三酮反響 糖類的苯酚-硫 酸反響等.對(duì)照藥材法陽(yáng)性

4、對(duì)照：將要鑒別的藥材按制劑工藝處理,再按鑒別方法提取的溶液陰性對(duì)照：把制劑中要鑒別的藥材除去,用剩 下的各味藥按制劑工藝處理,再按鑒別方法提 取的溶液分析實(shí)例萬(wàn)氏牛黃清心丸牛黃清熱解毒藥,主含膽酸類成分.黃連清熱燥濕藥,主要為小集堿.黃苓清熱燥濕藥,主要為黃酮類.桅子清熱瀉火藥,主含桅子苴.朱砂安神藥,主含硫化汞Hg0 .郁金活血去瘀藥, 主含揮發(fā)油.化學(xué)鑒別1.朱砂的鑒別 取本品3g,加水適量, 研勻, 反復(fù) 洗去懸浮物, 可得少量朱紅色沉淀,取 出,參加鹽酸1ml及銅片少量, 加熱煮 沸,銅片由黃色變?yōu)殂y白色.十211cli Cu CuC12- Hg 1112s在酸性條件下,朱砂與 銅片發(fā)

5、生置換反響析出金屬汞,在銅片外表形成銀白色汞齊色譜 鑒別2.人工牛黃的鑒別取本品,剪碎,加硅藻± 0. 6g, 研3 / 12 勻,加氯仿10ml、冰醋酸0. 5ml , 加熱回流30min,放冷, 濾 過(guò),濾液蒸 干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,濾過(guò), 濾液作為供試 品溶液.膽酸和豬去氧膽酸加乙醇制成1ml含1mg的混合溶液, 作為 對(duì)照品溶液.TLC 法CMC-Na硅月& G展開劑 醋酸乙酯-正己烷-醋酸-甲醇 32: 6: 1: 1 顯色劑10%磷鋁酸乙醇液,1100C, 10min 黃苓 的鑒別供試品溶液的制備：取本品3g ,剪碎, 加硅藻土 0. 5g ,研勻, 加甲醇

6、20ml, 加熱回流1hr,放冷, 濾過(guò),濾液作為供試品溶液.對(duì)照品溶液的制備：黃苓昔對(duì) 照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品 溶液.TLC 法CMC-Na硅月G 4%昔酸鈉使斑點(diǎn)更為集中 展開劑 醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水5:3:1:1 顯色劑2%E氯化鐵乙醇液-OH 與Fe+3絡(luò)合5. 黃連的鑒別 供試品溶液的制備：取含量測(cè)定項(xiàng)下剩余的 鹽酸-甲醇提取液4ml,水浴蒸干,殘 渣加 甲醇溶解,使成1ml作為供試品溶液.對(duì)照藥材溶液的制備：黃連對(duì)照藥材50mg 加甲醇10ml,回流加熱15min ,濾過(guò), 濾液 蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為對(duì)照藥 材溶液.對(duì)照品溶液的制備：最新

7、資料推薦再取鹽酸小聚堿對(duì)照 品,加甲醇制成每1ml含0. 5mg的溶液, 作 為對(duì)照品溶液TLC法 硅月G CMC-N共開劑 苯-醋酸乙酯-甲醇- 異丙醇-濃 氨試液12： 6： 3： 3： 1 顯色方式UV365nm 硅 膠：微酸性極性固定相,適用于 酸性、中性物質(zhì)別離可以制備成酸度不 同或堿性硅膠擴(kuò)大使用范圍氧化鋁：堿性極性固定相,適用于 堿性、中性物質(zhì)別離可以制備成中性或 酸性氧化鋁擴(kuò)大使用范圍聚酰胺：含有酰胺基極性固定相,適用于酚類、醇類化合物的別離纖維素：含有羥基的極性固定相,適用于別離親水性物質(zhì).薄層掃描儀中國(guó)藥典采用雙波長(zhǎng)薄層掃描儀實(shí)例 2用氣相色譜法同時(shí)測(cè)定石 菖蒲揮發(fā)油中-細(xì)

8、辛醍和-細(xì)辛醍的含量 色譜條件HP-35 二苯 基-65%-二甲基硅氧烷共聚物毛細(xì)管氣相色譜柱；程序升溫：起始 溫度為30 C ,升至220C ,保持5m進(jìn)樣口溫度:250 C;檢測(cè)器溫 度:320 C;進(jìn)樣量:2. 0 l ;無(wú)分流進(jìn)樣；溶劑：甲醇；載氣：氨氣； 柱頭壓:5. 5 04Pa ;內(nèi)標(biāo)物:-蔡酚.樣品溶液的制備用水蒸汽蒸儲(chǔ)法提取石菖蒲中的揮發(fā)油,稱 取適量,以-蔡酚,以甲醇溶解,進(jìn)樣.對(duì)照品溶液的制備稱取-細(xì)辛醍、-細(xì)辛醍對(duì)照品適量,加 0.2mgml 1 -蔡酚的甲醇溶液制成含-細(xì)辛醍的對(duì)照品溶液1和5 / 12 含-細(xì)辛醍的對(duì)照品溶液.靈敏度 分析方法的靈敏度是指單位濃度或量

9、與響應(yīng)值的比 值.檢測(cè)限：以信噪比來(lái)確定檢測(cè)限的 最低水平.回收率.加樣回收率 即于被測(cè)成分含量的成藥中再精 密參加一定量的被測(cè)成分純品2.以成藥空白所做的加樣回收率 在 成藥空白9即除去欲測(cè)成分的藥材后 制成的成藥中參加一定 量的被測(cè)純品, 依 法測(cè)定.例如治傷軟膏中苦參堿的含量測(cè)定色譜條件的選擇2.1固定相的選擇曾采用苯基柱、C8、ODS硅膠柱、DIOL和富基柱,苦參堿、槐定堿和槐果堿均不能到達(dá)良好的別離；考慮到用反相色譜柱時(shí), 軟膏基質(zhì)影響色譜柱壽命最終參考苦參國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中苦參堿、 氧化苦參堿的含量測(cè) 定方法,選用氨基鍵合硅膠為固 定相,本試驗(yàn)采用L色譜柱.2.2流動(dòng)相的選擇采用氨基柱,

10、試驗(yàn)了如下幾種流動(dòng)相系統(tǒng),見表1.最終采用 苦參國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中苦參堿、氧化苦參堿含量測(cè)定用流動(dòng)相：乙 睛-無(wú)水乙醇-3%磷酸,結(jié)合本藥實(shí)際情況, 將比例調(diào)整為 表1流動(dòng)相系統(tǒng)的選擇 乙睛-無(wú)水乙醇-3海酸84:9:7苦參堿出 峰時(shí)間適宜, 無(wú)干擾,苦參堿出峰太慢 乙睛-無(wú)水乙醇-0.1%磷最新資料推薦酸(調(diào)節(jié)PH至2.5) , (80:10:10)乙睛-無(wú)水乙醇-3海酸(80:10:10)苦參堿出峰太早,有干擾 結(jié)果 流動(dòng)相組成2.3檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇采用苦參國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中苦參堿、氧化苦參 堿的含量測(cè)定用波長(zhǎng)220 nm前處理方法的選擇先后采用甲醇水浴提取法,乙醇水浴提取法,氯仿放置過(guò)夜 提取法,氯仿振搖

11、提取法,氯仿回流法,氯仿超聲提取法.甲醇、乙醇水浴提取方法簡(jiǎn)單,但提取出的成分復(fù)雜,干擾苦參堿的測(cè)定.以氯仿作為提取溶劑提取率高且雜質(zhì)干擾少,我們比擬了以下幾種提取方法：氯仿放置過(guò)夜提取法、氯仿振搖提取法、氯仿回流法、 氯仿超聲提取法.氯仿放置過(guò)夜提取和氯仿振搖提取法提取率均不高且操作不便,費(fèi)時(shí).通過(guò)比擬, 超聲 提取和回流提取測(cè)得的含量接近,因超聲提取操作步驟簡(jiǎn) 單,所以選擇此方法處理供試品.3.1超聲時(shí)間的考察 表2超聲時(shí)間的考察0.056 0.060 0.0600.065 0.065苦參堿含量(%)超聲時(shí)間(min) 3.2冰浴時(shí)間的考察為了預(yù)防軟膏中脂溶性基質(zhì)影響色譜柱壽命,采取冰浴的

12、方式使脂溶性基質(zhì)盡可能析 出,再離心除去.表3冰浴時(shí)間的考察 測(cè)得含量()冰浴時(shí)間(min) 207 / 1240 50 60 70 試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明:冰浴1小時(shí)以內(nèi)不會(huì)造成樣品含量降低 考慮時(shí)間長(zhǎng)有利于基質(zhì) 析出,最終確定為60 min.復(fù)溶溶劑的選擇曾選用甲醇作測(cè)定法色譜條件及系統(tǒng)適用性以氨基鍵合硅膠為填充劑；以乙睛-無(wú)水乙醇-3%磷酸溶液84:9:7為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm.理論板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于1500.對(duì)照品溶液的制備精密稱取苦參堿對(duì)照品適量,加流動(dòng)相溶解,制成每1ml含苦參堿80 g的溶液,即得.供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物約 2.5 g,精密稱定,置 具塞錐形瓶中,盡可

13、能平鋪于底部,加氨水1 ml,充分浸潤(rùn)膏體后,精密參加氯仿50 ml,密塞,稱定重量,60 c超聲處理 功率250W 頻率40kHz 1小 時(shí),放冷, 再稱定重量, 用氯 仿補(bǔ)足減失的重量, 搖勻,轉(zhuǎn)移至分液漏斗 中,分取氯仿層,濾 過(guò),精密量取續(xù)濾液25 ml置100 ml燒杯中,80c水 浴蒸干,殘 渣精密參加流動(dòng)相10 ml,密閉,超聲3分鐘,并時(shí)時(shí)振搖,所得溶液轉(zhuǎn)移至10ml具塞玻璃離心管中, 密塞,置冰浴中靜置1小 時(shí),離心20分鐘4000轉(zhuǎn)/分,取上清液作為供試品溶液.測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各201 ,注入液相色譜 儀,測(cè)定,即得.本品每支含苦參堿C15H24N2

14、O 不得少于10 mg.為復(fù)溶溶劑,圖譜顯示對(duì)苦參 堿峰有干擾, 采用流動(dòng)相復(fù)溶最新資料推薦沒有干擾,所 以選擇流動(dòng)相為溶劑.5 方法學(xué)驗(yàn)證5.1專屬性試驗(yàn)空白溶劑的制備流動(dòng)相作為空白溶劑：乙睛-無(wú)水乙醇-3%磷 酸84:9:7 ;苦參堿對(duì)照品溶液的制備取苦參堿對(duì)照品約10 mg,精密稱定, 置50 ml容量瓶中,流動(dòng)相溶解并 稀釋至刻度, 搖勻,精密量取20 ml置50 ml 容量瓶中, 流動(dòng)相稀釋至刻 度,搖勻,作為對(duì)照品溶液,精密量取20 1 ,注入液相色譜儀, 測(cè)定, 即得；苦參堿、氧化苦參堿、槐定堿、槐果堿、氧化槐果堿混合對(duì)照溶液的制備 分別取上述對(duì)照品適量,流動(dòng)相溶解, 搖勻,即得

15、； 不含苦參的陰性對(duì)照供試品溶液的制備取不含苦參的陰性對(duì)照軟膏內(nèi)容物約2.5 g,依測(cè)定法中供試品溶液的 制備方法操作,即 得；軟膏供試品溶液的制備定量限苦參堿對(duì)照溶液稀釋濃度為每1 ml含245 ng的溶 液時(shí),色譜圖中苦參堿的信噪比約為 10 見附圖6,所以苦參堿的最低定量限為245 ng/ml線性試驗(yàn)精密稱取苦參堿對(duì)照品12.25 mg ,置50 ml量瓶中, 加流動(dòng)相 溶解并稀釋制成每1 ml含245 g的溶液,作為貯備液；分別精密量取貯備液2、5、10、12.5和20 ml于25 ml量瓶中,用 流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,得稀釋液1、2、3、4和5.分別精密量取各稀釋液20 l ,注入

16、液相色譜儀, 記錄 色譜圖,測(cè)定結(jié)果見表.9 / 12Y=9943.8X-8472.9回歸方程 187387 481722 961907 12068291941545 2428906 平均峰面積 A C g/ml 19.6 49 98 122.5 196 2455.4精密度試驗(yàn)重復(fù)性 取2批供試品,照測(cè)定法項(xiàng)下方法操 作,一天內(nèi)共分析6次,計(jì)算含量202271101批治傷 軟膏重復(fù)性試驗(yàn)考察 RSD% 1.80平均值mg支 含量mg/ 18. 支分析次數(shù)1 2中間精密度 進(jìn)樣精密度試驗(yàn) 6回收率試驗(yàn) 取苦參堿對(duì)照品約21 mg,精密稱定, 置50 ml量瓶中,用純水溶 解并稀釋到刻度, 制成4

17、22.9 g/ml的對(duì)照品儲(chǔ)藏液.取20221101批供試品的內(nèi)容物約1.25 g,精密稱定,置具 塞 錐形瓶中,制備9份；分別精密參加苦參堿對(duì)照品儲(chǔ)藏 液各1、2、 3 ml ,制成75%、100 %和125%三個(gè)濃度水平的供試品每個(gè)濃 度水平3份,按測(cè)定法項(xiàng)下測(cè)定,由重復(fù)性試驗(yàn)知道本批供試品苦參堿含量為0.06 % ,按下式計(jì)算回收率：回收率% =測(cè)得總量?jī)?nèi)容物含苦參堿量/對(duì)照品參加量m0 100 %回收率試驗(yàn)說(shuō)明,三個(gè)濃度水平測(cè)定的回收率均在95.0%-105.0位間溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)?zāi)陀眯栽囼?yàn)三批供試品的含 量測(cè)定：每支軟膏中含苦參堿約為18mg規(guī)定本品每支軟膏含苦參堿C15H24N2O不

18、得少于黃楊寧片 中黃楊寧的含量測(cè)定 本品為黃楊寧經(jīng)加工制成的片劑.每片含環(huán)維黃楊星 D 0. 5mg或1 mg.對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)1 05c枯燥至恒重的環(huán)維黃楊星最新資料推薦D對(duì)照品25mg,置250ml量瓶中, 加甲醇70ml使溶解,用0. 05mol /L磷酸二氫鈉緩沖液稀釋至刻度,搖勻,精密量取1 0ml ,置1 00ml量瓶中,用0. 05mol /L 磷酸二氫鈉緩沖液稀釋至刻度, 搖勻,即得每1 ml含環(huán)維黃楊星D1 0 g .環(huán)維黃楊星D1 0mg供試品溶液的制備取本品20片每片含環(huán)維黃楊星D0.5mg , 精密稱定2. 050g ,研細(xì),精密稱取0. 1 020g 約相當(dāng)于黃 楊0.5m g, 置50ml量瓶中,力口 0. 05mol /L 磷酸二氫鈉緩沖 液至近刻度,80c