標(biāo)準(zhǔn)菌種管理規(guī)程

1、標(biāo)準(zhǔn)菌種管理規(guī)程目的：規(guī)范藥品微生物學(xué)檢定用菌的管理， 最大限度降低變異率，確保菌 種 的溯源性與穩(wěn)定性，從而確保微生物學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。職責(zé)：Q3管負(fù)責(zé)菌種的申購、接受、保存、分發(fā)，微生物檢驗(yàn)員負(fù)責(zé)菌 種 的確認(rèn)、傳代、使用及銷毀。范圍：本規(guī)程適用于檢定用菌種的管理，包括菌種的申購、保存、傳代、使 用及銷毀等。內(nèi)容：1術(shù)語標(biāo)準(zhǔn)菌種是指由中國藥品生物制品檢定所醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心提供的冷凍干燥菌。傳代用菌種是指用標(biāo)準(zhǔn)菌種制備的采用特定保存方法長期固定保存的菌種，用于傳代及制備工作用菌種。工作用菌種是指用標(biāo)準(zhǔn)菌種或傳代用菌種接種至普通瓊脂斜面培養(yǎng)后，作為日常工作使用的菌種。菌種的代是指

2、將其接種至一新鮮培養(yǎng)基上或培養(yǎng)基內(nèi)，每萌發(fā)一次即稱為一代，從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥菌種為第 0代。2.標(biāo)準(zhǔn)：檢定菌的申購QC主管每年根據(jù)檢定菌種的使用情況（包括臨時(shí)檢驗(yàn)需要），提出購買計(jì)劃，交由質(zhì)量管理部部長審批后，向中檢所菌種保藏中心或?。ㄊ校┧帣z所購買凍干菌種（標(biāo)準(zhǔn)菌種）；也可以直接向?。ㄊ校┧帣z所購買傳代用菌種，購買時(shí)，需詢問與確定菌種的代數(shù)，以便傳代時(shí)控制代數(shù)。檢定菌的接收菌種到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后，由 QC主管接收菌種，檢查其名稱和數(shù)量，以及每一支 的完整性，同時(shí)將菌種的所有信息，填寫在檢定菌接收記錄（附表1）上， 內(nèi)容包括：名稱、數(shù)量、編號（無編號者按檢定菌種的編號原則編號）、代數(shù)、來源

3、、接收日期、接收人等，貼好標(biāo)簽并儲存于2-8C直到需要使用時(shí)。 儲存期最長不超過5年。檢定菌的保存工作用菌種的保存工作用菌種采用斜面低溫保存法。將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上， 待菌生長充分以后，轉(zhuǎn)移至28c冰箱中保存。此法僅用于工作用菌種的短 期保存，并應(yīng)隨時(shí)檢查其污染雜菌和變異等情況，發(fā)現(xiàn)異常情況，經(jīng)應(yīng)滅活 處理后銷毀。保存時(shí)間根據(jù)菌種種類而不同，細(xì)菌： 1個(gè)月；酵母菌：2個(gè) 月；霉菌及芽胞：3個(gè)月。采用甘油冷凍管保藏法或液體石蠟保存法。用無菌接種環(huán)輕輕刮取經(jīng)冷凍復(fù)溶增菌后并接種至平板或瓊脂斜面的菌苔， 并通過接種環(huán)與試管壁之間的輕輕摩擦而使細(xì)菌充分?jǐn)U散到預(yù)先裝入試管 中的無菌純化水中

4、，調(diào)整菌液濃度，使其等同于10號比濁管，向已制備好的菌懸液中加入等體積的無菌甘油（濃度 20%,即為10%T油菌懸液，輕輕 振搖，使內(nèi)容物充分混合，分裝于無菌小試管，在 -20 C冷凍條件下保存。 此甘油冷凍管為第2代（G2）,保存期限為5年。使用時(shí)，取出一支放至室 溫，轉(zhuǎn)種增菌培養(yǎng)或接種至瓊脂斜面復(fù)蘇，挑取純菌落傳代或工作用。此種方法主要適用于需氧細(xì)菌和酵母菌的保藏（如大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、 乙型副傷寒沙門菌）。C滅菌30分鐘，置40 c恒溫箱中蒸發(fā)水分，經(jīng)無菌檢查后備用。C冷凍冰箱中保存。此法主要適用于 霉菌、厭氧菌、放線菌、芽抱桿菌的保 存（如枯草芽抱桿菌、白色念珠菌、黑曲霉菌等）

5、。.檢定菌的傳代檢定菌菌種的傳代因凍干菌（標(biāo)準(zhǔn)菌種）與傳代用菌種而不完全相同。C, 45分鐘）。C, 45分鐘）。C下培養(yǎng)3天（細(xì)菌）；2328c下培養(yǎng)5天（真菌和酵母菌）。培養(yǎng)后，首 先觀察其是否具有典型的菌落形態(tài)，然后挑取生長旺盛的單一的純菌落，劃 線于平皿培養(yǎng)基，每種菌劃4個(gè)平皿，以便收集較多的生長旺盛的典型單菌 落，進(jìn)行保存和鑒定。鑒定時(shí)作革蘭氏染色、鏡檢，觀察其染色特性及形態(tài) 特征。最后再做生化實(shí)驗(yàn)以進(jìn)一步鑒定該菌種。若在該平板上發(fā)現(xiàn)有其它菌 落生長，則說明操作有污染或菌種不純，應(yīng)將此被污染了的培養(yǎng)物滅活處理， 并尋找原因。應(yīng)根據(jù)其原因采取措施重新分離挑選純菌落。當(dāng)無標(biāo)準(zhǔn)用菌種時(shí)，可

6、從?。ㄊ校┧帣z所購買菌種作為傳代用菌種，不需經(jīng) 過復(fù)溶增菌，但應(yīng)劃線接種確認(rèn)。將購回?zé)o異常的傳代用菌種（一般為第3代），根據(jù)日常檢驗(yàn)工作的需要量，挑取純菌落轉(zhuǎn)接斜面菌種數(shù)支，作為工 作用菌種（為第4代），同時(shí)，結(jié)合菌種的代數(shù)和最長保存期限，挑取純菌落 制成濃菌懸液按“”的方法制備甘油冷凍管或液體石蠟管數(shù)支，作為傳代用 菌種（仍為第3代） 當(dāng)工作用菌種代數(shù)小于5時(shí)，可直接用上一代工作用菌種轉(zhuǎn)接下一代工作用 菌種。取在冰箱28c保存的工作用菌種用普通瓊脂斜面?zhèn)鞔?，并將新?代的培養(yǎng)物替代原有的菌種，作為工作用菌種。也可取用“甘油冷凍管保藏 法或液體石蠟覆蓋保藏法”保存的菌種，進(jìn)行復(fù)蘇，直接作為工作

7、用菌種。細(xì)菌每1個(gè)月傳代一次；酵母菌每2個(gè)月傳代一次；霉菌及芽胞每3個(gè)月傳 代一次。當(dāng)超過5代，須用傳代用菌種傳代。,檢定菌種的編號采用字母加數(shù)字表示：英文縮寫字母一代次一傳代日期一順序號菌種的英文縮寫字母：大腸埃希菌（）、金黃色葡萄球菌（）、枯草芽抱桿菌（）、白 色念珠菌（）、黑曲霉菌（）、乙型副傷寒沙門菌（）代數(shù)用一位帶有下標(biāo)數(shù) 字的字母表示：傳代用菌種用 G表示；工作用菌種用 W表示；如G3表示傳 代用菌種第3代；W減示工作用菌種第3代。傳代日期用6位數(shù)字表示：年 份取最后兩位數(shù)，月、日分別用兩位數(shù)。如 2012年1月12日傳代的第一支 大腸埃希菌作為傳代用菌種的編號為：。.檢定菌種的保

8、管.檢定菌種的領(lǐng)用與使用.檢定菌種（廢棄）的銷毀C、45分鐘濕熱滅活處理：新一代菌種制備成功后的上一代菌種； 使用完后 的菌種和帶有標(biāo)準(zhǔn)菌種的器具和培養(yǎng)物；超過有效期的菌種；凡被污染、變 異、可疑等異常情況菌種；其他應(yīng)廢棄的菌種。銷毀處理記錄（附表7）。3 .記錄歸檔本標(biāo)準(zhǔn)涉及的記錄由質(zhì)量管理部保存，保存期 5年。4 .附則：本標(biāo)準(zhǔn)附件二份，附表六份：附件1:傳代用菌種保存方法、保存溫度、保存期限 附件2:菌種復(fù)活、劃線用培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件附表1:檢定菌接收記錄附表2:檢定菌種傳代、分離記錄附表3:檢定菌種保存、領(lǐng)用登記臺賬附表4:檢定菌種觀察記錄附表5:檢定菌種鑒定記錄附表6:檢定菌種使用登記

9、臺賬附表7:廢棄菌種(物品)銷毀處理記錄附件1:傳代用菌種保存方法、保存溫度、保存期限菌種名稱保存方法保存溫度保存期限大腸埃希菌CMCC(B) 44 102甘油冷凍管-20 C5年金黃色葡萄球菌CMCC(B) 26 003甘油冷凍管-20 C5年枯草芽抱桿菌CMCC(B) 63 501液體石蠟管-20 C5年白色念珠菌CMCC(F) 98 001液體石蠟管-20 C5年黑曲霉菌CMCC(F) 98 003液體石蠟管-20 C5年乙型副傷寒沙門菌CMC® 50 094甘油冷凍管-20 C5年附件2:菌種復(fù)活、劃線用培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件菌種名稱復(fù)活培養(yǎng)基劃線用培養(yǎng)基溫度時(shí)間大腸埃希菌TSB或

10、營養(yǎng)肉湯TSA或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平皿32C24h金黃色葡萄球菌枯草芽抱桿菌乙型副傷寒沙門菌白色念珠菌TSB或改良馬丁SDA或玫現(xiàn)紅鈉培養(yǎng)基平皿24C48h黑曲霉7d附表1:檢定菌接收記錄記錄名稱檢定菌種接收記錄代碼頁次1共1頁名稱及編號數(shù)量代數(shù)來源接收日期接收人檢查情況保存條件附表2:檢定菌種傳代、分離、保存記錄記錄名稱檢定菌種傳代、分離記錄代碼頁次1共1頁名稱及編號購進(jìn)（領(lǐng)?。┤掌谀?月曰來源傳代前菌種保存方法傳代用培養(yǎng)基傳代日期傳代用國種編號總數(shù)量傳代用菌種工作用菌種操作人數(shù)量編P后效期保存方法數(shù)量編P后效期保存方法分離與純 化過程純度檢查 結(jié)果操作人：復(fù)核人：附表3:檢定菌種使用登記臺賬記錄名稱檢定菌種保存、領(lǐng)用登記臺賬代碼頁次1共1頁收到日期名稱及編號數(shù)量接收人移交人領(lǐng)用日期用途數(shù)量發(fā)放人領(lǐng)用人附表4:檢定菌種觀察記錄記錄名稱檢定菌種觀察記錄代碼頁次1共1頁日期冰箱溫度(C)塞子是否松動是否霉父處理措施觀察人附表5:檢定菌種鑒定記錄記錄名稱檢定菌種鑒定記錄代碼頁次1共1頁國種名稱及編P鑒定原因開始鑒定日期鑒定人復(fù)核人年 月 日鑒定 項(xiàng)目菌落形態(tài)革蘭染色顯微鏡卜形態(tài)典型生化反應(yīng)特征鑒定結(jié)論日期：年