中標(biāo)的國家自然基金標(biāo)書

1、申報學(xué)科代碼1科學(xué)部編號項目類別C010704國家自然科學(xué)基金申請書項目名稱迷走反射調(diào)節(jié)胰腺分泌的神經(jīng)傳遞機制研究申請者所在單位郵政編 碼通訊地 址電話傳真電子信箱(Email):申請日 期：2002年3月10日國家自然科學(xué)基金委員會1997年制填報說明一、填寫申請書前，請先查閱國家自然科學(xué)基金有關(guān)項目申請辦法及規(guī) 定。申請書各項內(nèi)容，要實事求是，逐條認(rèn)真填寫。表達要明確、嚴(yán)謹(jǐn)，字跡 要清晰易辨。外來語要同時用原文和中文表達。第一次出現(xiàn)的縮寫詞，須注出 全稱。二、申請書為十六開本，復(fù)印時用 B5復(fù)印紙，于左側(cè)裝訂成冊。第三頁起 各欄空格不夠時，請自行加頁。一式六份（至少一份為原件），由所在單位

2、審查 簽署意見后，按申報學(xué)科投送國家自然科學(xué)基金委員會對口科學(xué)部。地區(qū)科學(xué) 基金項目，申請書另報送省（自治區(qū)）科委一份原件。三、封面右上角“科學(xué)部編號”由對口科學(xué)部填寫，項目類別和申報學(xué)科 代碼 1由申請者填寫。四、下列人員不得作為申請項目的負責(zé)人提出申請，但可作為項目組成員 參加研究：在讀（含在職）研究生已離退休的科研人員申請單位的兼職科研人員五、申請者和項目組中具有高級專業(yè)技術(shù)職務(wù)的主要成員申請（含參加）的 項目數(shù)，連同在研的國家自然科學(xué)基金項目數(shù)（不含重點項目、重大項目），不 得超過兩項。六、同一項目組研究內(nèi)容相近的項目，只允許報送一個學(xué)科。七、申請者可因同類項目競爭等原因，提出不宜評議

3、本項目的專家名單（姓 名與單位， 3人以內(nèi)） ，密封于信封中，釘在申請書原件封面，或另專函相關(guān)學(xué) 科，供科學(xué)部選擇同行評議人時參考?？茖W(xué)部將對此信息保密。八、國家自然科學(xué)基金委員會地址：北京市海淀區(qū)雙清路83 號，通訊地址：北京 8610 信箱。郵政編碼： 100085、簡表研 究 項 目名 稱中 文迷;走反射'調(diào)節(jié)胰腺分泌必的神經(jīng)傳遞I機制研究英 文The mechanism of the vago-vagal reflex circuit in mediating pancreatic secretion evoked by luminal factors類別A.自由申請B.高技術(shù)

4、探索C.青年D.咼技術(shù)探索 項目主題號E.重大F.重點H.專項A申報 學(xué)科名稱1消化生理學(xué)名稱2消化系內(nèi)科學(xué)A.基礎(chǔ)研 究A代碼1C010704代碼2C03030204申請金24.00萬起止年月2003年1月至200胖用|基12月所用實驗室A.國家重點B.兀部門 開放頭驗至編號1-研 究 內(nèi) 容 和 意 義摘要通過細FI胞內(nèi)標(biāo)記逆向追迷走感覺細FI胞由生通Q理過記細錄丿胞內(nèi)結(jié)標(biāo)合記胰逆 腺向 分蹤、 功能迷走證頭腸細 道丿胞受電 刺生激后迷錄7走神結(jié) 經(jīng)合 通刀胰過腺Gl丿J u泌和功SP日能 將信kLL息頭上傳A道 至孤刺束激核/I1迷走I T背核誦過NPYJ 1 LISP1 U及1 口SS

5、調(diào)節(jié)1 S 胰I.腺分丿1J泌闡明米冃-走彳運X動神經(jīng)2兀接受特定刺激丿人后丿興tXr奮0有ITJ 特神經(jīng)遞質(zhì)It 的胰腺內(nèi)神經(jīng)調(diào)節(jié)丿口特/ 、的胰腺內(nèi)1 T外»分沁功口 J 臺F,從r J，而F屮一 確»從迷-走咸1覺神經(jīng)內(nèi)空|、:M外擊分 1炫泌功能巳1從炫1 而空II確1從米走:感4®覺覺1 神1A »丿兀主題詞1.主題詞數(shù)量不多于三個；2.主題詞之間空一格（英文用 /分隔）。|中文后Zk英文NeurochemTcal' transmiss Vago-vagaireflex7 Jcircuit/Pa ncreatic secreti on簡

6、表填寫要求一、簡表內(nèi)容將輸入計算機，必須逐項認(rèn)真填寫，采用國家公布的標(biāo)準(zhǔn)簡化漢字。簡表中所有代碼以最新發(fā)布的國家自然科學(xué)基金申請項目分類目錄及代碼 為準(zhǔn)填寫。高技術(shù)探索課題主題號按高技術(shù)新概念新構(gòu)思探索課題項目指南中主題號填寫，申請其重點項目時項目類別也填寫B(tài),并在申請書封面右上角加注“高技術(shù)探索課題重點項目”。二、 凡選擇性欄目，將相應(yīng)提示符A B等之一填入該欄的右下角。三、部分欄目填寫要求：項目名稱一一應(yīng)確切反映研究內(nèi)容和范圍，最多不超過25個漢字（包括標(biāo)點符號）。基礎(chǔ)研究一一指以認(rèn)識自然現(xiàn)象、探索自然規(guī)律為目的，不直接考慮應(yīng)用目標(biāo)的研究活動。應(yīng)用基礎(chǔ)研究一一指有廣泛應(yīng)用前景，但以獲取新原

7、理、新技術(shù)、新方法為主要目的的研究。申報學(xué)科一一申請項目所屬的最基礎(chǔ)學(xué)科。如涉及多學(xué)科可填寫兩個，先填為主學(xué)科。申請金額一一以萬元為單位，用阿拉伯?dāng)?shù)字表示，注意小數(shù)點。起止年月一一起始時間從申請的次年1月算起。終止時間為完成年度的 12月。所用實驗室一一系指研究項目將利用的實驗室，僅填寫國家計委批準(zhǔn)的國家重點實驗室或部門批準(zhǔn)的開放實驗室。所在單位名稱及代碼一一按單位公章填寫全稱。例如“中國科學(xué)院西安光學(xué)精密機械研究所”不得填“中科院西安光機所”或“西安光機所”。全稱中的數(shù)字，一律寫中文，例如：中國航天工業(yè)總公司第七O所。首次申請國家自然科學(xué)基金的單位，尚未編入單位代碼，其代碼暫不填寫。參加單位

8、數(shù)指研究項目組主要成員所在單位數(shù)，包括主持單位和合作單位(合作者所在單位)，以阿拉伯?dāng)?shù)字表示。項目組主要成員指在項目組內(nèi)對學(xué)術(shù)思想、技術(shù)路線的制訂與理論分析及對項目的完成起重要作用的人員，本人 應(yīng)在申請書上親自簽名。本欄雙線右側(cè)內(nèi)容不輸入計算機。研究內(nèi)容和意義一一摘要與主題詞均錄入軟盤。2-二、立論依據(jù)(包括項目的研究意義、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀分析，并附主要參考文獻及出處)對基礎(chǔ)研究，著重結(jié)合國際科學(xué)發(fā)展趨勢，論述項目的科學(xué)意義； 對應(yīng)用基礎(chǔ)研究，著重結(jié)合學(xué)科前沿、圍繞國民經(jīng)濟和社會發(fā)展中的重要科 技問題，論述其應(yīng)用情景。餐后胰腺分泌是食物消化吸收過程中的重要組成部分，目前認(rèn)為這一過程 主要由內(nèi)分泌

9、激素膽囊收縮素(CCK及迷走一迷走反射作用于胰腺的迷走神經(jīng) 膽堿能節(jié)后神經(jīng)調(diào)節(jié)1-3。但餐后迷走神經(jīng)信號的上傳、中樞整合后控制胰腺分 泌信號的下傳神經(jīng)通路及在這一通路中參與的神經(jīng)遞質(zhì)還未闡明，病理研究證 實迷走神經(jīng)初級傳入纖維位于腸上皮以下粘膜固有層內(nèi)，提示腸道接受刺激后 并不直接作用于迷走神經(jīng)傳入纖維，而通過間接途徑起作用。5羥色胺(5-HT)為傳遞內(nèi)臟感覺的神經(jīng)遞質(zhì)，美國 Michigan大學(xué)胃腸肽研究中心報道迷走神經(jīng) 初級傳入纖維含有大量CCK-A及5-HT3受體，腸道內(nèi)的刺激，如碳水化合物、高 滲鹽水及粘膜磨擦等，可導(dǎo)致腸粘膜嗜鉻細胞(EC)釋放5-HT，繼而作用于迷 走傳入神經(jīng)末梢的

10、5- HT3受體，引起迷走反射主導(dǎo)的胰腺分泌4-6。迷走感覺神經(jīng)元細胞內(nèi)電生理記錄進一步發(fā)現(xiàn)5-HT與CCK可能協(xié)同作用刺激迷走神經(jīng)傳入纖維。然而這種信號如何上傳以及參與其傳遞過程的神經(jīng)遞 質(zhì)仍不清楚。迷走神經(jīng)節(jié) (vagal no dose gan glia ) 及孤束核 (nu cleus tractus solitarius, NTS為迷走傳入的重要部位。迷走神經(jīng)節(jié)及孤束核內(nèi)均有多種神 經(jīng)遞質(zhì)，研究發(fā)現(xiàn)谷氨酸鹽(glutamate，Glu)及P物質(zhì)(substanee P, SP ) 在迷走神經(jīng)節(jié)內(nèi)合成并釋放至孤束核 ，而起興奮性神經(jīng)遞質(zhì)作用。Glu及SP 是否參與腸道刺激后迷走神經(jīng)的信

11、號傳入尚未見報道。我們推測腸道刺激后， 腸道EC細胞釋放5-HT，5-HT作用于迷走初級傳入神經(jīng)末梢的5HT受體，興奮迷走傳入神經(jīng)，將信號傳至迷走神經(jīng)節(jié)，迷走神經(jīng)節(jié)利用Glu及SP作為興奮性神經(jīng)遞質(zhì)將信號傳至孤束核。因此，在本研究的前半部分，我們將通過腸腔刺 激觀察迷走神經(jīng)節(jié)內(nèi)興奮性神經(jīng)元神經(jīng)遞質(zhì)Glu及SP的表達，并通過神經(jīng)元細胞內(nèi)電生理記錄證實Glu及SP作為興奮性神經(jīng)遞質(zhì)參與信號上傳。同時孤束核 內(nèi)Glu及SP受體表達增加，電生理記錄確定興奮性神經(jīng)元，通過神經(jīng)元染色證 實迷走傳入神經(jīng)將Glu主SP作為興奮性遞質(zhì)將外因刺激的信號傳至中樞。中樞對胰腺分泌功能的調(diào)節(jié)主要是通過迷走運動背核(do

12、rsal motor nucleus, DMN )發(fā)出的副交感運動神經(jīng)起作用。以往零星的研究發(fā)現(xiàn)DMN微量注射甲狀腺素激素(thyrotropin-releasinghormone, TRH能刺激胰腺分泌，而胰多肽(pancreatic polypeptide, PP )則能抑制胰腺分泌何。腦內(nèi)注射生 長抑素(somatostatin, SS)、鈣調(diào)基因相關(guān)肽(calcitonin gene-regulated peptide, CGRP 及胰高血糖素類似肽(Glucagon-like-peptide-1, GLP-1 )亦 對胰腺分泌有抑制作用11-13。但各種中樞神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)節(jié)胰腺分泌的作用

13、通路， 它們對迷走傳出神經(jīng)功能的調(diào)節(jié)、對胰腺內(nèi)神經(jīng)元的調(diào)控，以及特定神經(jīng)遞質(zhì) 對胰腺分泌的特異性調(diào)節(jié)作用尚未見報道。DMN勺迷走傳出神經(jīng)對胰腺分泌的 調(diào)控是非常復(fù)雜的，其 方面接受 NTS的傳入信 息，另 方面也接受高級中樞 3a 節(jié)是眾多興奮性神經(jīng)遞質(zhì)與抑制性神經(jīng)遞質(zhì)綜合作用的結(jié)果，迷走神經(jīng)傳出纖 維作用于胰腺內(nèi)神經(jīng)，后者綜合各種中樞信息，調(diào)節(jié)胰腺功能。研究發(fā)現(xiàn)DMN迷走傳出神經(jīng)有多種神經(jīng)遞質(zhì)，如乙酰膽堿、NOS及各種神經(jīng)肽(VIP、NPYGRP等16，因此，我們推測特定的刺激可以作用于某一組迷走運動神經(jīng)元，它 們有特定的神經(jīng)遞質(zhì)，這些傳出纖維作用于具有不同的特有神經(jīng)遞質(zhì)的胰腺內(nèi) 神經(jīng)元，從

14、而調(diào)控不同的胰腺功能。綜上所述，雖然以往的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)腸道刺激后，腸粘膜 EC釋放5-HT, 作用于迷走傳入神經(jīng)末梢5-HT3受體最終引起胰腺的分泌，但這種刺激上傳通 路及參與的神經(jīng)遞質(zhì)均不明確。DMN內(nèi)微量注射某些神經(jīng)遞質(zhì)已證實對胰腺的 分泌功能有興奮或抑制作用，但中樞傳出對胰腺分泌的調(diào)控通路及其相關(guān)的神 經(jīng)遞質(zhì)尚不清楚。因此，我們設(shè)計了本研究，希望能初步確定腸道刺激引起胰 腺分泌的一個完整的神經(jīng)通路，即腸道刺激激發(fā)迷走傳入沖動到NTS DM1傳出沖動到胰腺調(diào)節(jié)胰腺分泌功能。這一研究將證實存在腦-胰通路(Brai n-Pa ncreas In teraction )的假說，豐富對胰腺分泌調(diào)節(jié)

15、機制的認(rèn)識， 對胰腺疾病的救治具有重要的意義。參考文獻1. Li Ying, Owyang C. Endogenous cholecystokinin stimulated pancreatic enzyme secretion viaa vagal afferent pathway. Gastroenterology, 1994;107(2) :525-5312. Li Ying, Hao Y, Owyang C. High-affinity CCK-A receptors on the vagus nerve mediatesCCK-stimulated pancreatic secret

16、ion in rats. Am J Physiol, 1997;273(3Pt1):G679-G6853. Li Ying, Owyang C. Pancreatic secretion evoked by cholecystokinin andnon-cholecystokinin-dependent duodenal stimuli via vagal afferent fibers in rat. J Physiol, 1996;491(3):773-7824. Li Ying, Hao YB. Zhu JX, OwyangC. Serotonin released from intes

17、tinal ECcells mediate luminal non-CCK stimulated pancreatic secretion in rats. Gastroenterology, 2000;118(6):1197-12075. Li Ying, Hao YB, Zhu JX, Owyang C. Intestinal serotonin acts as a paracrine substance tomediate pancreatic secretion stimulated by non-CCK dependent luminal factors. AmJ Physiol,

18、2001;281(4):G916-G9236. Zhu JX, Wu XY, Owyang C, Li Ying. Electrophysiological evidence that intestinal 5-HT actsas a paracrine to mediate vagal signal transmission evoked by luminal factors in the rat.J of Physiol, 2001;530(3):431-4427. Li Ying., WuYX, OwyangC. Serotonin and cholecystokinin synergi

19、stically stimulate at vagal primary afferent neurons. Gastroente ogy, 2001;120(5):A38328. Granata AR, Sved AF, Reis DJ. In vivo release by vagal stimulation of L-(3H) glutamic acidin the nucleous tractus solitarius preloaded with L-(3H) glutamine. Brain Res Bull,1984;12(1):5-9.9. Okumura T, Taylor I

20、L, Pappas TN. Microinjection of TRHanalogue into the dorsal vagal complex 3b 10. Okumura T, Pallas TN, Taylor IL. Pancreatic polypeptide microinjection into the dosal motor nucleus inhibits pancreatic secrtion in rats. Gastroenterology, 1995;108(5): 1517-2511. Li Ying, Jiang YC, OwyangC. Calcitonin

21、gene-regulated peptide inhibits pancreatic exocrine secretion by modulation of vagal parasympathetic outflow. Am J Physiol, 1998;275(5Pt1):G957-G96312. Li Ying, Owyang C. Somotostatin inhibits pancreatic enzyme secretion by a central vagal site of action. Am J Physiol, 1993;265(28): G251-G25713. Li

22、Ying, Zhu JX, Rillamas E, Nozu F, OwyangC. Glucagon-like-peptide-l acts via dorsal vagal complex to inhibit pancreatic enzyme secreation. Gastroenterology, 1998;114 (4): G474114. Li Ying, Wu XY, Owyang C. Hypothalamic regulation of pancreatic secretion is mediated bycentral cholinergic pathway. Gast

23、roenterology, 2000;118(4): A13115. Rogers RC, McTigue DM, Hermann GE. Vagal control of digestion: modulation by central neural and pheripheral endocrine factors. Neuroscience and Biobehavioral Reviews,1996;20(1):57-6616. Wang J, Zheng H, Berthoud H. Functional vagal input to chemically identified ne

24、urons inpancreatic ganglia as revealed by fos expression. Am J Physiol, 1999;277(5Pt1):E958-E9643c -三、研究方案1. 研究目標(biāo)、研究內(nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問題研究目標(biāo)腸道接受刺激后，迷走感覺神經(jīng)利用谷氨酸鹽(Glu)、P物質(zhì)(SP)作為神經(jīng)遞質(zhì)腸道接受刺激后，迷走感覺神經(jīng)通過 Glu、SP將信息傳遞到孤束核，孤束核 內(nèi)Glu受體及SP受體增加，亦參與這一迷走傳入通路腸道接受刺激后，迷走運動背核通過 SP神經(jīng)肽(neropeptide, NPY)興奮 有特定神經(jīng)遞質(zhì)的胰腺內(nèi)神經(jīng)元，刺激胰腺分泌；并通過

25、生長抑素(SS)作用于有特定神經(jīng)遞質(zhì)的胰腺內(nèi)神經(jīng)元，抑制胰腺分泌研究內(nèi)容腸道刺激后，迷走感覺神經(jīng)神經(jīng)遞質(zhì)傳遞機制 利用c-Fos的表達確定腸道接受各種刺激(碳水化合物、高滲鹽水、5-HT)后，迷走神經(jīng)節(jié)(vagal no dose gan glia)內(nèi)的迷走感覺神經(jīng)元 通過免疫組化雙重染色，觀察 c-Fos陽性神經(jīng)元Glu及SP的表達，說明腸 道刺激后迷走感覺神經(jīng)Glu及SP表達增加 通過迷走感覺細胞的電生理記錄及細胞內(nèi)神經(jīng)微粒(neurobiotin)標(biāo)記，確定腸道刺激后被興奮的迷走感覺神經(jīng)元，聯(lián)合細胞內(nèi)神經(jīng)微粒標(biāo)記及免 疫組化雙重染色確定這些迷走感覺神經(jīng)元利用Glu及SP作為神經(jīng)遞質(zhì)孤束核

26、對腸道刺激的反應(yīng) 利用c-Fos的表達確定腸道接受各種刺激(碳水化合物、高滲鹽水、5-HT)后，孤束核(nucleus tractus solitarius, NTS)內(nèi)的迷走感覺神經(jīng)元 通過免疫組化雙重染色，觀察 c-Fos陽性神經(jīng)元Glu受體及SP受體的表 達，說明腸道刺激后NTS迷走感覺神經(jīng)Glu受體及SP受體表達增加 通過NTS內(nèi)迷走感覺細胞的電生理記錄及細胞內(nèi)神經(jīng)微粒標(biāo)記，確定腸道 刺激后被興奮的迷走感覺神經(jīng)元，聯(lián)合細胞內(nèi)神經(jīng)微粒標(biāo)記及免疫組化雙4a NTS內(nèi)微量注射Glu受體阻斷劑或SP受體阻斷劑后，觀察胰腺分泌功能， 說明阻斷這一上傳通路，中樞對胰腺分泌的調(diào)節(jié)不能下傳腸道刺激后迷

27、走運動背核對胰腺分泌的調(diào)節(jié) 腸道接受刺激后，胰腺內(nèi)注射熒光標(biāo)記霍亂毒素B(CTB)，逆向追蹤迷走運動背核(dorsal motor nucleus, DMN) 內(nèi)CTB陽性神經(jīng)元(支配胰腺神經(jīng) 元)。利用雙重免疫熒光標(biāo)記觀察 CTB陽性神經(jīng)元c-Fos、乙酰膽鹼轉(zhuǎn)移酶 (ChAT)、Glu受體及SP受體的表達，說明DMF內(nèi)支配胰腺的神經(jīng)元可被腸 道刺激激活 通過微量注射法，腦室內(nèi)或 DMF內(nèi)注射NPY受體拮抗劑、SP受體阻斷劑、 NPY SP SS,通過迷走神經(jīng)胰腺枝的電生理記錄，確定上述神經(jīng)遞質(zhì)可 作用于DMN調(diào)節(jié)迷走神經(jīng)到胰腺的傳出信號，調(diào)節(jié)胰腺的分泌功能 腸道接受刺激后，DMh內(nèi)微量注射

28、SP NPY SS,觀察胰腺內(nèi)迷走神經(jīng)元(c-Fos陽性)，利用雙重免疫熒光標(biāo)記，觀察 c-Fos陽性神經(jīng)元ChAT胃 擬解決的關(guān)鍵問題迷走神經(jīng)節(jié)迷走感覺神經(jīng)元內(nèi)電生理記錄迷走神經(jīng)節(jié)迷走感覺神經(jīng)元內(nèi)神經(jīng)微粒注射孤束核內(nèi)迷走感覺神經(jīng)元內(nèi)電生理記錄孤束核內(nèi)迷走感覺神經(jīng)元內(nèi)神經(jīng)微粒注射迷走運動背核內(nèi)微量注射法迷走神經(jīng)胰腺枝電生理記錄雙重免疫熒光標(biāo)記4b 2. 擬采取的研究方法、技術(shù)路線、實驗方案及可行性分析 研究方法利用c-Fos表達陽性確定迷走神經(jīng)節(jié)、孤束核、迷走運動背核及胰腺內(nèi)迷走 感覺神經(jīng)利用免疫組化雙重染色研究迷走神經(jīng)節(jié)內(nèi) c-Fos陽性神經(jīng)元Glu、SP等神經(jīng) 遞質(zhì)表達利用熒光免疫組化雙重

29、染色研究孤束核內(nèi)c-Fos陽性神經(jīng)元Glu受體及SP受體表達通過迷走感覺細胞的電生理記錄，確定腸道刺激后被興奮的迷走感覺神經(jīng) 元，免疫組化雙重染色確定這些迷走感覺神經(jīng)元利用Glu及SP作為神經(jīng)遞質(zhì)。熒光免疫組化雙重染色研究孤束核內(nèi)被興奮神經(jīng)元Glu受體及SP受體表達胰腺內(nèi)注射熒光標(biāo)記霍亂毒素 B（CTB），逆向追蹤迷走運動背核內(nèi)CTB陽性 神經(jīng)元（支配胰腺神經(jīng)元）。利用雙重免疫熒光標(biāo)記觀察 CTB陽性神經(jīng)元c-Fos、乙酰膽鹼轉(zhuǎn)移酶（ChAT）、Glu受體及SP受體的表達通過微量注射法，腦室內(nèi)或 DMF內(nèi)注射NPY受體拮抗劑、SP受體阻斷劑、 NPY SP SS,通過迷走神經(jīng)胰腺枝的電生理記錄

30、，確定上述神經(jīng)遞質(zhì)可作用 于DMN調(diào)節(jié)迷走神經(jīng)到胰腺的傳出信號，調(diào)節(jié)胰腺的分泌功能通過迷走運動背核內(nèi)微量注射 SP NPY SS,利用雙重免疫熒光標(biāo)記，觀察 胰腺內(nèi)迷走神經(jīng)元ChAT胃泌素釋放肽等神經(jīng)遞質(zhì)的表達技術(shù)路線腸道刺激后迷走感覺神經(jīng)的神經(jīng)遞質(zhì)傳遞機制奮時伴SP Glu表-5a 孤束核對腸道刺激的反應(yīng)腸腔內(nèi)灌注各種刺激液（高滲鹽水、5-HT或碳水化合物）孤束核（nucleus tractus solitarius.NTS迷走感覺神 經(jīng)元電生理記確定被興奮 的感覺神經(jīng)神經(jīng)元內(nèi)神 經(jīng)微粒注射 免疫組化染NTS內(nèi)微量注射Glu受體阻斷劑SP受體免疫組化Glu受體免疫胰腺分泌功能-5b 腸道刺激

31、后迷走運動背核對胰腺分泌的調(diào)節(jié)腸腔內(nèi)灌注各種刺激液（高滲鹽水、5-HT或碳水化合物）胰腺內(nèi) 注射熒 光標(biāo)記1，IB逆向追1CTB陽性 確定DMN支配胰 腺神經(jīng)元腦室注射NPY SP受體拮抗劑DM儆量注射NPY SPDMNt 量 注射SS迷走神經(jīng)胰腺枝電生理記錄雙重免疫熒光觀察放電情CTB陽性 C-Fos表達 ChAT表達SP受體表達Glu受體表 ST胰腺分說明DMN神經(jīng)元可 被腸道刺激證明DMN 通過NPYSP SS調(diào)節(jié)胰腺分5c DM 注射SP微量 fL"NP1、SSF觀察胰 腺內(nèi)神理雙重免 疫熒光C-Fos陽性神經(jīng)元ChAT表 達GRP表 達說明特定 的刺激通 過特定的 神經(jīng)遞質(zhì)

32、，作用 于特定的 胰腺內(nèi)神 經(jīng)元，發(fā)揮調(diào)節(jié)可行性分析課題組已取得本研究初步預(yù)實驗結(jié)果： 腸腔灌注后，迷走神經(jīng)節(jié)c-Fos表達增加，免疫組化雙重染色提示 c-Fos陽性神經(jīng)元內(nèi)Glu表達增加（圖1） 已建立迷走神經(jīng)節(jié)電生理記錄方法 （圖2）,腸腔灌注5-HT后迷走神經(jīng) 節(jié)內(nèi)神經(jīng)元放電增加（圖3） 已完成迷走感覺神經(jīng)元內(nèi)神經(jīng)微粒注射方法，雙重免疫組化染色顯示 迷走神經(jīng)元中富含SP （圖4） 腸道灌注刺激后，孤束核內(nèi)神經(jīng)元 c-Fos表達增加，免疫組化雙重染色 提示c-Fos陽性神經(jīng)元Glu受體表達明顯增加（圖5） 孤束核內(nèi)微量注射Glu受體阻斷劑可減少腸腔灌注5-HT后胰腺分泌（圖 6） 胰腺內(nèi)注

33、射熒光標(biāo)記CTB逆向追蹤至迷走運動指核，見 CTB免疫熒光 陽性神經(jīng)元，神經(jīng)元內(nèi) ChAT c-Fos、NK1受體表達增加（圖79） 建立迷走神經(jīng)胰腺枝電生理記錄方法，迷走運動指核內(nèi)注射NPYf電活動明顯增加（圖10） 迷走運動背核內(nèi)微量注射 SP,胰腺內(nèi)神經(jīng)元c-Fos表達增加，c-Fos陽 性神經(jīng)元內(nèi)ChAT表達增加（圖11）上述預(yù)試驗結(jié)果表明，課題組已掌握了完成本研究的關(guān)鍵技術(shù)，能夠成功解決 關(guān)鍵冋題。-5d 3. 本項目的特色和創(chuàng)新之處本研究使用的免疫組化雙重染色及多重染色技術(shù)、活體內(nèi)電生理記錄技術(shù) 均為當(dāng)今世界先進的技術(shù)，結(jié)合胰腺分泌功能的研究將確定一個完整的神經(jīng)通 路，即腸道刺激激

34、發(fā)迷走傳入沖動到孤束核，迷走運動背核傳出沖動到胰腺調(diào) 節(jié)胰腺分泌功能。這一研究將證實存在腦胰通路(Brai n-Pa ncreasIn teraction)的假說，豐富對胰腺分泌調(diào)節(jié)機制的認(rèn)識。5f 4. 年度研究計劃及預(yù)測進展2003年1月2003年12月（第一年度） 腸道刺激后迷走神經(jīng)節(jié)c-Fos表達 c-Fos陽性神經(jīng)元Glu、SP表達 腸道刺激后迷走神經(jīng)節(jié)電生理記錄 迷走神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元神經(jīng)微粒標(biāo)記及 Glu、SP表達 腸道刺激后孤束核c-Fos表達 c-Fos陽性神經(jīng)元Glu、SP表達2004年1月2004年12月（第二年度） 腸道刺激孤束核神經(jīng)電生理記錄 孤束核內(nèi)神經(jīng)元微粒標(biāo)記及 Gl

35、u受體、SP受體表達 孤束核內(nèi)微量注射Glu受體阻斷劑對胰腺分泌的調(diào)節(jié) 胰腺內(nèi)注射，逆向追蹤，迷走運動背核 c-Fos表達 c-Fos陽性神經(jīng)元ChAT Glu受體及SP受體的表達2005年1月2005年12月（第三年度） 迷走運動背核微量注射對迷走神經(jīng)胰腺枝電生理作用及胰腺分泌功能的 影響 迷走運動背核微量注射對胰腺內(nèi)迷走感覺神經(jīng)元的影響 課題總結(jié)，發(fā)表論文，申報成果5. 預(yù)期研究成果 初步確定腦胰軸（Brain-Pancreas Interaction）的神經(jīng)通路，即腸道刺激激發(fā)迷走傳入至孤束核，迷走運動背核傳出沖動到胰腺，調(diào)節(jié)胰腺分泌。 本研究完成后，將申報國家科技成果獎。 SCI收錄期

36、刊上發(fā)表論文數(shù)篇。四、研究基礎(chǔ)61.與本項目有關(guān)的研究工作積累和已取得的研究工作成績2.已具備的實驗條件，尚缺少的實驗條件和擬解決的途徑（包括利用國家重 點實驗室和部門開放實驗室的計劃與落實情況）7-6. 申請者和項目組主要成員的學(xué)歷和研究工作簡歷，近期已發(fā)表與本項目有關(guān)的主要論著目錄*和獲得學(xué)術(shù)獎勵情況及在本項目中承擔(dān)的任務(wù)； 青年科學(xué)基金申請者還應(yīng)注明學(xué)位論文名稱及導(dǎo)師姓名與工作單位論文：作者題目刊名年份卷（期）頁碼 專著：作者書名出版者年份8a 論文：作者題目刊名年份卷（期）頁碼 專著：作者書名出版者年份8c 五、經(jīng)費預(yù)算支出科目金額 （萬元）計算根據(jù)及理由1.合計2.科研業(yè)務(wù)費3.科研業(yè)務(wù)費4.儀器設(shè)備費5.實驗室改裝費6.協(xié)作費7.管理費注：預(yù)算支岀科目按下列順序填寫：1.科研業(yè)務(wù)費2.實驗材料費3.儀器設(shè)備費4.實驗室改裝費5.協(xié)作費6.項目組織實施費。開支范圍詳見國家自然科學(xué)基金資助項目財務(wù)管理辦法第二章。9-六、申請者正在承擔(dān)的其它研究項目（攀登計劃、863計劃、攻關(guān)任務(wù)和各部委、省市任務(wù)等項目的名稱及編號、任務(wù)來源、 起止年月、負責(zé)或參加以及與本申請項目的關(guān)系等情況）七、申請者承擔(dān)（負責(zé)或參加）國家自然科學(xué)基金資助項目的情況批準(zhǔn)號項目名稱起止年月負責(zé)或參進展或完成情況加-10-對申請者負責(zé)的前一個已結(jié)題科學(xué)基金資助項目（項目名稱及批