生化實驗報告1

1、生物化學實驗報告姓 名： 王澤鑫 學 號： 3130060024 專業(yè)年級： 2013級中藥學 組 別： 第三實驗室 生物化學與分子生物學實驗教學中心實驗名稱 氨基酸的薄層層析實驗日期2014-12-6實驗地點第三實驗室合作者謝俊偉指導老師冀開元評分91教師簽名冀開元批改日期2015/1/12一、實驗目的 掌握薄層層析法的一般原理。 掌握氨基酸薄層層析法的基本操作技術。 掌握如何根據(jù)移動速率（Rf值）來鑒定被分離的物質(zhì)（即氨基酸混合液）。二、實驗原理 1.薄層層析法是色譜分析技術的一種。硅膠吸附薄層層析是使用層析用硅膠作為吸附劑，它的硅氧環(huán)交鏈結構表面上密布極性硅醇基（SiOH），這種極性的硅

2、醇基能和許多化合物形成氫鍵而產(chǎn)生吸附.2. 氨基酸與茚三酮的顯色反應 茚三酮水化后生成水化茚三酮，它與氨基酸的羧基反應生成還原茚三酮、氨及醛，與此同時，還原茚三酮又與氨及茚三酮縮合生成紫紅化合物而使氨基酸斑點顯色。3.混合氨基酸被分離后在薄層層析圖譜上的位置用相對遷移率Rf值來表示。 層析中，物質(zhì)沿溶劑運動方向遷移的距離與溶液前沿的距離之比為Rf值。由于物質(zhì)在一定溶劑中的分配系數(shù)是一定的，故移動速率（Rf值）也是恒定的，因此可以根據(jù)Rf值來鑒定被分離的物質(zhì)。三、材料與方法：以流程圖示意材料： 層析板、尺子、鉛筆、燒杯、玻棒、量筒、吹風機、毛細管、層析缸、藥匙、烘箱 甘氨酸溶液、丙氨酸溶液、精氨

3、酸溶液、混合氨基酸溶液、0.5%羥甲基纖維素鈉、硅膠、展開-顯色劑方法：制備層析板：調(diào)漿：稱取硅膠3克于燒杯中，加入0.5%的羧甲基纖維素鈉8ml，調(diào) 成均勻的糊狀。涂布：取潔凈干燥玻璃板用玻璃棒均勻涂層干燥：將玻璃板水平放置，在室溫下自然干燥活化：70烘干30min。切斷電源，待玻璃板不燙手取出。點樣：取點：在玻板上，用鉛筆距底邊2cm水平線上均勻確定4個點。每個樣品間相距約1cm。取樣：用毛細管分別吸取氨基酸溶液，取樣量為毛細管柱高5cm。點樣：點樣毛細管輕輕接觸薄層表面點樣，輕觸疾起。加樣后原點擴散直徑不超過2mm。展層、顯色：將薄層板點樣端浸入展層-顯色劑，展層-顯色劑液面應低于點樣線

4、。蓋好層析缸蓋，上行展層。當展層劑前沿離薄板頂端2cm時，停止展層，取出薄板，用鉛筆描出溶劑前沿界線，用熱風吹干或在85下烘干，即可顯出各層斑點。計算結果：Rf=氨基酸斑點至原點距離溶劑前緣至原點距離小心量出斑點中心至原點中心距離，再量出原點中心至溶劑前沿的距離，計算出它們的 值。 根據(jù)值，鑒定出混合樣品中氨基酸的種類。四、結果與討論：結果：實驗數(shù)據(jù)、現(xiàn)象、圖譜；討論：以結果為基礎的邏輯推論，并得出結論。結果：實驗數(shù)據(jù)（單位cm）：樣品 斑點-原點 溶劑前緣-原點 Rf值Arg 2.70 5.30 0.509Gly 1.50 5.30 0.283Ala 2.30 5.30 0.434混合液 1

5、.50、2.40、2.80 5.30 0.283、0.452、0.528實驗現(xiàn)象：1.制備層析板，如圖1：圖12.點樣如圖2：圖 13.層析如圖3：圖34.顯色如圖4：討論：根據(jù)各顯色點Rf值比較，可得下表：顯色點 Rf值 對應氨基酸丙氨酸 0.509 精氨酸 0.283 甘氨酸 0.434 混合點1 0.283 精氨酸混合點2 0.452 甘氨酸混合點3 0.528 丙氨酸在實驗結果中，混合液出現(xiàn)三個顯色點，分別對應精氨酸、甘氨酸、丙氨酸。實驗數(shù)據(jù)可以看出混合液中三種氨基酸Rf值不等于實驗測定值，其原因有： 實驗制備的層析板涂布不均勻，表面粘合劑有凹凸，導致層析時展開顯色劑在層析板展開不均勻，一定程度上影響實驗數(shù)據(jù)的測定，造成實驗誤差； 層析