檢驗方法性能驗證

1、檢測系統(tǒng)的方法學(xué)性能驗證檢測系統(tǒng)的方法學(xué)性能驗證濱州市沾化區(qū)人民醫(yī)院濱州市沾化區(qū)人民醫(yī)院丁良臣丁良臣定性試驗和定量試驗方法學(xué)評價定性試驗和定量試驗方法學(xué)評價的主要指標(biāo)，定量試驗的性能驗證方法。的主要指標(biāo)，定量試驗的性能驗證方法。定性試驗評價的內(nèi)容和方法定性試驗評價的內(nèi)容和方法檢測系統(tǒng)評價的基本步驟檢測系統(tǒng)評價的基本步驟1.1.測量誤差：測量誤差：測量結(jié)果測量結(jié)果減去被測量的減去被測量的真值真值的差，簡稱誤差。的差，簡稱誤差。2.2.隨機誤差：隨機誤差：測量結(jié)果與在重復(fù)條件下，對同一被測量進測量結(jié)果與在重復(fù)條件下，對同一被測量進行無限多次測量所得結(jié)果的平均值之差。行無限多次測量所得結(jié)果的平均值之

2、差。3.3.系統(tǒng)誤差：在重復(fù)性條件下，對同一被測量進行無限多系統(tǒng)誤差：在重復(fù)性條件下，對同一被測量進行無限多次測量所得結(jié)果的平均值與被測量的真值之差稱為系統(tǒng)次測量所得結(jié)果的平均值與被測量的真值之差稱為系統(tǒng)誤差。亦稱為誤差。亦稱為正確度正確度復(fù)習(xí)基礎(chǔ)知識復(fù)習(xí)基礎(chǔ)知識4 4、正確度：檢測結(jié)果離真值的偏移程度、正確度：檢測結(jié)果離真值的偏移程度5 5、精密度：、精密度：表示測量結(jié)果中隨機誤差大小的程表示測量結(jié)果中隨機誤差大小的程度。度。6 6、準(zhǔn)確度：、準(zhǔn)確度： 準(zhǔn)確度是測量結(jié)果中準(zhǔn)確度是測量結(jié)果中系統(tǒng)誤差（正確度）系統(tǒng)誤差（正確度）與與隨機誤差（精密度）隨機誤差（精密度）的綜合的綜合。定量試驗方法的

3、驗證和確認試驗定量試驗方法的驗證和確認試驗二二. .更改檢測系統(tǒng)的確認試驗更改檢測系統(tǒng)的確認試驗 準(zhǔn)確度（準(zhǔn)確度（EP9EP9） 精密度（精密度（EP5EP5） 可報告范圍（可報告范圍（EP6-P2EP6-P2） 參考區(qū)間（參考區(qū)間（C28-A2C28-A2） 分析靈敏度（分析靈敏度（ EP17-AEP17-A） 線性范圍（線性范圍（EP6-AEP6-A） 分析特異性分析特異性( (包括干擾物質(zhì)）（包括干擾物質(zhì)）（ EP7-PEP7-P）未更改檢測系統(tǒng)的驗證未更改檢測系統(tǒng)的驗證1 1、精密度（批內(nèi)、批間）、精密度（批內(nèi)、批間）2 2、準(zhǔn)確度（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)方法、方法、準(zhǔn)確度（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)方法

4、、方法學(xué)比對）學(xué)比對）3 3、可報告范圍（驗證最大稀釋倍數(shù)）、可報告范圍（驗證最大稀釋倍數(shù)）4 4、參考區(qū)間（檢測、參考區(qū)間（檢測2020個正常樣本驗證）個正常樣本驗證）定量試驗方法的驗證和確認試驗定量試驗方法的驗證和確認試驗精密度評價精密度評價 一一 二二 三三定量檢測系統(tǒng)的性能評價 正確度評價正確度評價線性范圍和可報告范圍的評價線性范圍和可報告范圍的評價第8頁測定系統(tǒng)測定系統(tǒng)方法學(xué)方法學(xué)操作程序操作程序校準(zhǔn)品校準(zhǔn)品儀器儀器試劑配方試劑配方和來源和來源一、測定系統(tǒng)的關(guān)鍵要素一、測定系統(tǒng)的關(guān)鍵要素二二、評價的基本步驟評價的基本步驟 1. 確定方法的質(zhì)量目標(biāo)，總允許誤差確定方法的質(zhì)量目標(biāo)，總允許

5、誤差 2. 選定評價指標(biāo)選定評價指標(biāo)有量值溯源的配套檢測系統(tǒng)有量值溯源的配套檢測系統(tǒng)，正確度、精正確度、精密度、可報告范圍、參考區(qū)間驗證。密度、可報告范圍、參考區(qū)間驗證。 不配套的檢測系統(tǒng)：不配套的檢測系統(tǒng)：線性范圍、回收和干線性范圍、回收和干擾試驗擾試驗 3. 收集評價的實驗數(shù)據(jù)收集評價的實驗數(shù)據(jù) 4. 判斷方法的臨床可接收性判斷方法的臨床可接收性熟悉熟悉三、評價文件（三、評價文件（1 1）EP5-AEP5-A：臨床化學(xué)設(shè)備操作精密度評價：臨床化學(xué)設(shè)備操作精密度評價 核準(zhǔn)指南核準(zhǔn)指南EP6-AEP6-A：定量分析方法的線性評價：定量分析方法的線性評價：EP7-PEP7-P：臨床化學(xué)實驗干擾：

6、臨床化學(xué)實驗干擾 ，用于干擾物對檢測結(jié)果，用于干擾物對檢測結(jié)果影響的定性。影響的定性。 EP9-AEP9-A：用病人標(biāo)本進行方法學(xué)比較和偏倚評估：用病人標(biāo)本進行方法學(xué)比較和偏倚評估 ，主主要用于檢測兩種臨床方法或設(shè)備間的偏倚。要用于檢測兩種臨床方法或設(shè)備間的偏倚。評價文件（評價文件（2）EP10-AEP10-A：定量實驗室方法的初步評價：定量實驗室方法的初步評價EP14-AEP14-A：基質(zhì)效應(yīng)的評價：基質(zhì)效應(yīng)的評價 EP15-AEP15-A：精密度和準(zhǔn)確度性能的應(yīng)用：精密度和準(zhǔn)確度性能的應(yīng)用EP21-PEP21-P（NEWNEW）：臨床實驗方法總分析誤差的評估）：臨床實驗方法總分析誤差的評估

7、1.1.批內(nèi)方案批內(nèi)方案2.2.批間方案批間方案3.EP3.EP方案（方案（EP5-EP5-，EP15EP15A A）四、評價方法四、評價方法（一）精密度評價試驗（一）精密度評價試驗5 5方案方案1.1.試驗樣品試驗樣品 一般選擇一般選擇2 2個，一個在參考區(qū)間附近，另一個為異常值個，一個在參考區(qū)間附近，另一個為異常值2. 2. 批內(nèi)精密度評價：即一個樣品重復(fù)測定批內(nèi)精密度評價：即一個樣品重復(fù)測定2020次，計算出均值，標(biāo)準(zhǔn)次，計算出均值，標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。差和變異系數(shù)。 3.3.總精密度評價：用總精密度評價：用2 2個樣品每天測定個樣品每天測定2 2批，批間測定間隔不得少于批，批間測定間隔不

8、得少于2 2h h，每批平行測定，每批平行測定2 2份，至少共測定份，至少共測定2020天，天，8080個數(shù)據(jù)。每對結(jié)果間的個數(shù)據(jù)。每對結(jié)果間的差（共差（共4040個）代表批內(nèi)差；個）代表批內(nèi)差；2 2批均值之間的差（共批均值之間的差（共2020個）代表批間差；個）代表批間差；每天每天4 4個結(jié)果的均值（共個結(jié)果的均值（共2020個）代表日間差。每批測定至少做一個質(zhì)個）代表日間差。每批測定至少做一個質(zhì)控?？亍?1.1.用有量值溯源的參考物質(zhì)進行測定用有量值溯源的參考物質(zhì)進行測定2.2.使用決定性方法或參考方法使用決定性方法或參考方法3.3.與具有量值溯源檢測系統(tǒng)進行比對與具有量值溯源檢測系統(tǒng)進

9、行比對（1 1）EPEP方案（方案（EP9-EP9-，EP15EP15A A） （2 2）簡易比對方案）簡易比對方案（二）正確度評價試驗（二）正確度評價試驗(1) EP15(1) EP15A A方案方案應(yīng)來源于健康人或患者，無明應(yīng)來源于健康人或患者，無明顯干擾因素。顯干擾因素。全部標(biāo)本在整個線性范圍內(nèi)均全部標(biāo)本在整個線性范圍內(nèi)均勻分布，標(biāo)本至少勻分布，標(biāo)本至少20例。例。 標(biāo)本要求標(biāo)本要求注意：注意：1 1，可一天，但不超過，可一天，但不超過4 4小時內(nèi)。小時內(nèi)。2.2.可可3-43-4天（但盡可能短）。天（但盡可能短）。3.3.每個標(biāo)本只需測定每個標(biāo)本只需測定1 1。4.二種方法都有室內(nèi)質(zhì)控

10、二種方法都有室內(nèi)質(zhì)控計算偏移計算偏移1.1.偏移偏移 2.2.相對偏移相對偏移 3.3.平均偏移平均偏移 4.4.相對平均偏移相對平均偏移 5.5.與質(zhì)量要求比較與質(zhì)量要求比較 1. 1.選擇高、中、低濃度五份樣本同時用各選擇高、中、低濃度五份樣本同時用各臺儀器按常規(guī)樣本測定的方法，測定其臺儀器按常規(guī)樣本測定的方法，測定其各項參數(shù)，每份樣本測定各項參數(shù)，每份樣本測定2 2次，求其均次，求其均值。值。(2) 簡易比對方法簡易比對方法 3.3.計算與核對標(biāo)準(zhǔn)計算與核對標(biāo)準(zhǔn) 1 1 計算：按計算：按PTPT計算方法計算偏倚。計算方法計算偏倚。 PTPT計算公式：（確定儀器測定值計算公式：（確定儀器測

11、定值- -比對儀器測比對儀器測定值）定值）/ /確定儀器測定值確定儀器測定值100100 2 2 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)： 偏移偏倚保持所有標(biāo)本結(jié)果差異在偏移偏倚保持所有標(biāo)本結(jié)果差異在CLIA88CLIA88允允許誤差的許誤差的1/41/4內(nèi)內(nèi)檢驗科比對記錄檢驗科比對記錄1.1.確定測量的線性范圍和臨床上可能出現(xiàn)確定測量的線性范圍和臨床上可能出現(xiàn)的范圍。的范圍。2.2.取線性范圍內(nèi)的高值標(biāo)本，用稀釋液稀取線性范圍內(nèi)的高值標(biāo)本，用稀釋液稀釋，最低預(yù)期值在線性低限。釋，最低預(yù)期值在線性低限。3.3.計算回收率：在可接受范。計算回收率：在可接受范。（三）臨床可報告范圍（三）臨床可報告范圍4.4.可報告范圍計算：

12、可報告范圍計算：（1 1）上限為線性范圍上線）上限為線性范圍上線稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)（2 2）下限為線性范圍低限）下限為線性范圍低限第第二二節(jié)節(jié) 定性定性檢測系統(tǒng)的性能檢測系統(tǒng)的性能驗證驗證 一、驗證的內(nèi)容一、驗證的內(nèi)容（掌握）（掌握）: : （1 1）敏感性敏感性 （2 2）特異性特異性 （3 3）正確度）正確度 （4 4）符合性）符合性 （5 5）精密度）精密度(Precision)(Precision) （6 6）CUTOFFCUTOFF值驗證值驗證二、定性臨床應(yīng)用與分類二、定性臨床應(yīng)用與分類1 1、定性測定的臨床應(yīng)用、定性測定的臨床應(yīng)用免疫學(xué)測定：感染性疾病、腫瘤標(biāo)志物免疫學(xué)測定：感染性疾

13、病、腫瘤標(biāo)志物核酸和基因檢測核酸和基因檢測微生物檢驗微生物檢驗細胞學(xué)檢驗細胞學(xué)檢驗寄生蟲檢驗驗寄生蟲檢驗驗2 2、定性實驗的臨床分類、定性實驗的臨床分類篩查實驗：如便潛血、篩查實驗：如便潛血、TPTP診斷實驗：如微生物學(xué)培養(yǎng)與細菌鑒定診斷實驗：如微生物學(xué)培養(yǎng)與細菌鑒定確認實驗：對以上已做出的檢驗結(jié)果進行驗證和確認實驗：對以上已做出的檢驗結(jié)果進行驗證和確認確認三、驗證目的和時機（熟悉）三、驗證目的和時機（熟悉）: :1.1.目的：目的：（1 1）評價各定性檢測參數(shù)是否滿足臨床檢測和認可）評價各定性檢測參數(shù)是否滿足臨床檢測和認可組織的要求組織的要求. . （2 2）驗證廠家提供的試劑參數(shù)能在本實驗

14、室得到重）驗證廠家提供的試劑參數(shù)能在本實驗室得到重現(xiàn)現(xiàn). .幾個重要概念及計算公式的回顧幾個重要概念及計算公式的回顧: :1.1.敏感性敏感性: :將實際患病者將實際患病者正確診斷為陽性的百分率。正確診斷為陽性的百分率。 計算公式為：真陽性計算公式為：真陽性/ /（真陽性（真陽性+ +假陰性）假陰性）X X 100% .100% .2.2.特異性特異性 : :指將實際指將實際無病者檢測為陰性的百分率無病者檢測為陰性的百分率。 計算公式為：真陰性計算公式為：真陰性/( /( 真陰性真陰性+ +假陽性）假陽性） X 100% . X 100% . 陽性結(jié)果的可靠性（預(yù)示值）：陽性結(jié)果的可靠性（預(yù)示

15、值）：即測定為陽性的標(biāo)即測定為陽性的標(biāo)本實際上為陽性的可能性。本實際上為陽性的可能性。=真陽性真陽性/ /（真陽性（真陽性+ +假陽性）假陽性） 100%100% 陰性結(jié)果的可靠性（預(yù)示值）：陰性結(jié)果的可靠性（預(yù)示值）： 則為一份給出陰則為一份給出陰性結(jié)果的樣本實際上為陰性的可靠性。性結(jié)果的樣本實際上為陰性的可靠性。= = 真陰性真陰性/ /（真陰性（真陰性+ +假陰性）假陰性） 100%100%（一）準(zhǔn)確度驗證（一）準(zhǔn)確度驗證: :1 .1 .樣本的臨床診斷已知（敏感性、特異性）樣本的臨床診斷已知（敏感性、特異性） 室間質(zhì)評材料室間質(zhì)評材料 ( (衛(wèi)生部衛(wèi)生部) ) 廠商提供的已賦值的參考材

16、料廠商提供的已賦值的參考材料 用參考方法或決定方法定值的材料（或用參考方法或決定方法定值的材料（或金標(biāo)準(zhǔn)診斷的標(biāo)本）。金標(biāo)準(zhǔn)診斷的標(biāo)本）。 選取選取4040份（份（2020份）樣本份）樣本, ,最好陰陽性各半最好陰陽性各半隨機盲法重新分號隨機盲法重新分號檢測樣本檢測樣本將所有檢測結(jié)果匯總填表將所有檢測結(jié)果匯總填表計算評價性能指標(biāo)計算評價性能指標(biāo)臨床診斷臨床診斷總計總計陽性陽性陰性陰性驗證方法驗證方法陽性陽性A AB BA+BA+B陰性陰性C CD DC+DC+D總計總計A+CA+CB+DB+DN N敏感度敏感度 = 100% = 100% A A/ /（A+CA+C） 特異性特異性 = 100

17、% = 100% D D/ /（B+DB+D） 相關(guān)樣本的患病率相關(guān)樣本的患病率 = 100% = 100% （A+CA+C）/N/N陽性結(jié)果預(yù)測值（陽性結(jié)果預(yù)測值（PVPPVP） = 100% = 100% A A/ /（A+BA+B） 陰性結(jié)果預(yù)測值陰性結(jié)果預(yù)測值 （PVNPVN）= 100%= 100% D D/ /（C+DC+D） 方法效率（正確率）方法效率（正確率） = 100% = 100% （A+DA+D）/N/N2 .2 .樣本的臨床診斷未知（符合性）樣本的臨床診斷未知（符合性）同一項目不同檢測方法或儀器的比對同一項目不同檢測方法或儀器的比對適用范圍適用范圍: :一個項目有兩種

18、以上的方法或者兩臺一個項目有兩種以上的方法或者兩臺以上的儀器以上的儀器( (包括同一型號的儀器包括同一型號的儀器) )同時檢測同時檢測, ,需要進行一致性比對需要進行一致性比對. .選取選取4040份（份（2020份）樣本份）樣本, ,最好陰陽性各半最好陰陽性各半隨機每隨機每8 8（4 4）份分成一組）份分成一組兩種方法兩種方法( (或兩臺儀器或兩臺儀器) )每天平行檢測一組樣本每天平行檢測一組樣本將所有檢測結(jié)果匯總將所有檢測結(jié)果匯總評價符合率評價符合率對比方法對比方法總計總計陽性陽性陰性陰性實驗方法實驗方法陽性陽性a ab ba+ba+b陰性陰性c cd dc+dc+d總計總計a+ca+cb

19、+db+dn n陽性符合率陽性符合率 = 100% = 100% a a/(a+c)/(a+c)陰性符合率陰性符合率 = 100% = 100% d d/(b+d)/(b+d)總符合率總符合率 = 100% (a+d)/n更換批號的簡易比對：更換批號的簡易比對： 新鮮患者血清陰性新鮮患者血清陰性2 2例，陽性例，陽性3 3例，陽性包含有例，陽性包含有S/COS/CO高、中、低值，用新舊批號試劑檢測。高、中、低值，用新舊批號試劑檢測。低值避開低值避開“灰區(qū)灰區(qū)”夾心法：夾心法：S/COS/CO低值低值1.21.23 3競爭法：競爭法：S/COS/CO低值低值0.40.40.60.6判斷標(biāo)準(zhǔn)：符合率為判斷標(biāo)準(zhǔn)：符合率為100%100%為可接受。為可接受。二二. .精密度驗證精密度驗證: :1.1.批內(nèi)精密度批內(nèi)精密度: :同一份樣本在同一批次內(nèi)平行重復(fù)檢同一份樣本在同一批次內(nèi)平行重復(fù)檢測測2020次次. .然后計算均值然后計算均值,SD,SD和和CV.CV.2.2.批間精密度批間精密度: :同一份樣本連續(xù)檢測同一份樣本連續(xù)檢測2020天天, ,每天平行每天平行檢測雙孔檢測雙孔. .然后計算均值然后計算均值,SD,SD和和CV.CV.注意注意:1