《微生物考試總結》word版

1、.巴斯德效應：在有氧條件下。兼性厭氧微生物終止發(fā)酵，進行有氧呼吸，這種呼吸抑制發(fā)酵的現象稱為巴斯德效應。即呼吸抑制作用。巴斯德的貢獻：1.證實了微生物活動和否定了微生物自然發(fā)生學說；2開創(chuàng)了免疫學預防接種。3.發(fā)酵的研究 ；4.巴斯德消毒法，觀察丁醇發(fā)酵時發(fā)現厭氧生命，提出好氧厭氧屬于。柯赫的貢獻：1設計了分離和純化細菌的方法：劃線法、混合平板法。2.設計了培養(yǎng)細菌用的肉汁胨培養(yǎng)液和營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。3.設計了細菌染色技術。4.提出柯赫法則：（證明某種生物是否為某種疾病的病原的基本原則）i.病原體微生物一定伴隨著病害而存在; ii; 必須能自原寄主分理處這種微生物，并培養(yǎng)成為純培養(yǎng); iii.

2、分離培養(yǎng)出的病原體比能在實驗動物身上產生相同的癥狀 iiii 必須自人工接種發(fā)病的寄主內，能重新分離出同一病原微生物并培養(yǎng)成純培養(yǎng)。3試述染色法的機制并說明此法的重要性。 答：革蘭氏染色的機制為：通過結晶紫初染和碘液媒染后，在細菌的細胞膜內可形成不溶于水的結晶紫與碘的復合物。G+由于其細胞壁較厚、肽聚糖網層次多和交聯致密，故遇脫色劑乙醇處理時，因失水而使網孔縮小，在加上它不含類脂，故乙醇的處理不會溶出縫隙，因此能把結晶紫與碘的復合物牢牢留在壁內，使其保持紫色。反之，G-細菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄和交聯度差，遇脫色劑乙醇后，以類脂為主的外膜迅速溶解，這時薄而松散的肽聚糖網不能

3、阻擋結晶紫與碘復合物的溶出，因此細胞退成無色。這時，在經沙黃等紅色染料復染，就使 G-細菌呈紅色，而 G+細菌則仍保留最初的紫色。 此法證明了 G+和 G-主要由于起細胞壁化學成分的差異而引起了物理特性的不同而使染色反應不同，是一種積極重要的鑒別染色法，不僅可以用與鑒別真細菌，也可鑒別古生菌。5.試述幾種細菌細胞壁缺損型的形成，特點和實際意義。自發(fā)缺壁突變：L型細菌實驗室中形成徹底除盡：原生質體人工方法去壁部分去除：原生質球自然界長期進化中形成：支原體L型細菌原生質體原生質球支原體低濃度青霉素等環(huán)境下基因突變有些可通過濾器溶菌酶或青霉素阻止其細胞壁的正常合成溶菌酶或青霉素處理長期進化菌，多形態(tài)

4、G+可得，球形G-可得，球形無完整的細胞壁無細胞壁無完整的細胞壁（一定抗性）無細胞壁對滲透壓敏感，需高濃度鹽類才能存活不敏感生長緩慢，在固體培養(yǎng)基上形成油煎荷包蛋狀菌落有鞭毛，但不運動，可生長，可形成芽孢，可繁殖，不能分裂，形成菌落，生物活性不變甾醇 有較高的機械強度實際意義：原生質體和原生質球比正常有細胞壁的細菌更易導入外源遺傳物質，故是遺傳規(guī)律和進行原生質體育種的良好實驗材料。L型細菌：細菌在某種環(huán)境條件下（如低濃度青霉素）因基因突變而產生的缺乏細胞壁的遺傳性能穩(wěn)定的變異類型。原生質體：在+菌培養(yǎng)物中加入溶菌酶或通過青霉素阻止其細胞壁的正常合成而獲得的完全缺壁細胞即為原生質體。原生質球：指

5、細胞壁未全部去除的細菌細胞，呈圓球形，可人為地通過溶菌酶或青霉素處理革藍氏陰性菌而獲得。 支原體：在長期進化過程中形成的，適應自然生活條件的無細胞壁的原核生物。細菌的基本形態(tài)：球狀，桿狀，螺旋狀，分支絲狀。（桿菌形態(tài)種類最多）G+菌細胞壁獨有的化學成分是：磷壁酸；G-菌的為脂多糖（G-病原內毒素的物質基礎）細菌的主要繁殖方式是：二分裂。細菌的特殊構造：鞭毛、菌毛、性菌毛，糖被，芽孢芽孢：某些細菌在其生長發(fā)育后期 ， 在細胞內形成一個圓形或橢圓形、厚壁、含水量極低、抗逆性極強的休眠結構，稱為芽孢。（無繁殖能力，皮層的抗性成分：含有芽孢特有的肽聚糖及DPA）芽孢耐熱機制：滲透調節(jié)皮層膨脹學說：芽孢

6、衣對多價陽離子和水分的透性很差，皮層的離子強度很高，產生極高的滲透壓奪取芽孢核心的水分，結果造成皮層的充分膨脹和高度失水，因此，具極強的耐熱性。另一種學說認為：芽孢皮層中含有營養(yǎng)細胞所沒有的吡啶2，6二羧酸（DPA-Ca），他能穩(wěn)定芽孢中的生物大分子，從而增強其耐熱性。菌落：單個微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內部生長、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結構的子細胞群體，稱為菌落。菌苔：當固體培養(yǎng)基表面眾多菌落連成一片時，便成為菌苔。質粒：某些細菌具有的染色體外的可以獨立復制的小分子環(huán)狀DNA稱作質粒。青霉素（Penicillin）與溶菌酶（lysozyme）殺菌機理青霉素作用于肽聚糖

7、肽橋的聯結，即抑制肽聚糖的合成，故僅對生長著的菌有效，主要是G+菌。溶菌酶的作用：切斷肽聚糖的-1，4糖苷鍵。立克次體：是大小介于通常的細菌與病毒之間，在許多方面類似細菌，專性細胞內寄生的原核微生物。（專性寄生）衣原體：介于立克次體與病毒之間，能通過細菌濾器，專性活細胞內寄生的一類原核微生物。（專性寄生）異染顆粒：是以無機偏磷酸鹽為主要成分的一種無機磷儲備物，嗜堿性或嗜中性，用蘭色染料如甲苯胺藍或甲烯藍染色時不呈蘭色而呈紫紅色，故稱異染顆粒。培養(yǎng)基：人工配制的適合微生物生長繁殖、積累代謝產物的營養(yǎng)基質。9.霉菌可形成哪幾種無性孢子以及有性孢子，它們的主要特征始什么？1）無性孢子 4種孢囊孢子：

8、形成于菌絲的特化結構孢子囊內。分生孢子：由分生孢子梗頂端特化而成的。單個或成簇。節(jié)孢子：菌絲（橫膈膜）斷裂而成。厚垣孢子：部分菌絲細胞質濃縮變圓，周圍生出厚壁而成。（霉菌休眠體，抵抗力強）2）有性孢子 3種卵孢子：2n，由大小不同的配子囊結喉夠發(fā)育而成（藏卵器，雄器）接合孢子：2n，由菌絲生出的結構哦大小相似，形態(tài)相同或略有不同的兩個配子囊接合厚發(fā)育而成（同宗，異宗）子囊孢子：n，在子囊（兩性細胞接觸厚形成的囊狀結構）內形成的。 *擔孢子：2n，擔子菌特有，經兩性細胞核配合后產生的外生孢子。因著生在擔子上而得名。比較四大類微生物細菌放線菌酵母霉菌形態(tài)構造個體形態(tài)單細胞球狀，桿狀，螺旋狀單細胞分

9、絲桿狀無隔菌絲單細胞圓形或橢圓形比細菌大十倍左右絲絨狀 、粗而分化繁殖方式主要時二分裂無性繁殖：分生孢子。菌絲斷裂有性繁殖：產子囊孢子 無性繁殖：芽殖，裂殖，產無性孢子菌絲片段，產多種有性孢子和無性孢子培養(yǎng)特征液體培養(yǎng)均一的混濁液、絮狀沉淀、表面生長菌環(huán)、菌膜菌絲團表面生長：菌膜，沉淀；均一的混濁液振蕩培養(yǎng)形成菌絲球固體培養(yǎng)菌 菌落圓形，光滑濕潤、，無色透明質地均勻，有臭味圓形，表面呈干粉狀，有泥腥味菌落圓形、大而厚表面光滑、濕潤，粘稠、易挑起常有酒香味。霉菌的菌落大、疏松、干燥、不透明，多呈絨毛狀、絮狀或網狀等常有霉味培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨高氏一號培養(yǎng)基查氏培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基麥芽汁培養(yǎng)基10.

10、根霉，毛霉，青霉，曲霉四種常見霉菌的主要生物學特征。菌種根霉毛霉曲霉青霉菌絲無隔多核單細胞無隔多核單細胞有隔多核多細胞有隔多核多細胞特化結構假根，匍匐枝，足細胞，產孢結構孢子囊梗，囊軸，囊托孢子囊梗 ，囊軸，囊領 分生孢子梗頂囊（兩圈輻射小梗，分生孢子頭）分生孢子梗，分生孢子頭無性繁殖孢囊孢子孢囊孢子分生孢子分生孢子有性繁殖接合孢子接合孢子不明（少數子囊）不明（少數子囊）什么是鑒別培養(yǎng)基？試以EMB 為例，分析其鑒別作用原理。 鑒別培養(yǎng)基是一類在成分中加有能與目的菌的無色代謝產物發(fā)生顯色反應的指示劑，從而達到只須用肉眼鑒別顏色就能方便地從近似菌落中找到目的菌菌落的培養(yǎng)基。EMB 培養(yǎng)基中的伊紅

11、和美藍可抑制革蘭氏陽性菌和一些難養(yǎng)的革蘭氏陰性菌。產酸菌由于產酸能力不同，菌體表面帶質子，與伊紅美藍結合從而有不同的顏色反應，可用肉眼直接判斷。選擇培養(yǎng)基：用來將某種或某類微生物營養(yǎng)從混雜的微生物群體中分離出來的培養(yǎng)基。（1、依據某些微生物的特殊營養(yǎng)需求設計“投其所好”， 2、依據不同類微生物對某種化學物質的敏感性不同設計“取其所抗”。可用來從環(huán)境中分離細菌。.簡述G+與G-在細胞壁的結構和化學組成上的異同點，并指出與此相關的主要特性。性質GG-結構厚度（nm）20801015層次單層（肽聚糖層）兩層：肽聚糖內壁23nm 脂多糖脂蛋白外壁層（810nm）肽聚糖結構多層（約40層）75%肽聚糖亞

12、單位交聯肽聚糖網格緊密牢固12層30%肽聚糖亞單位交聯肽聚糖網格疏稀、機械強度弱與細胞膜關系不緊密緊密化學組成肽聚糖含量很高（40-90）含量很低（10-20）磷壁酸含量較高（<50）無類脂質一般無（<2）含量較高（20）脂多糖蛋白質無含量較高 脂蛋白增殖過程中的基因表達烈性噬菌體：感染細胞后,能在寄主細胞內增殖，產生大量子代噬菌體并引起細菌裂解的噬菌體。一步生長曲線：描述烈性噬菌體生長規(guī)律的實驗曲線。利用烈性噬菌體的生活周期測定噬菌體侵染和成熟病毒體釋放的時間間隔，用于估計每個被侵染的細胞釋放出來的新的噬菌體粒子數量的生長曲線，稱為一步生長曲線原噬菌體（prophage）（或前噬

13、菌體）： 即整合在宿主核DNA上的噬菌體的核酸。病毒的形態(tài)構造：形態(tài)：球狀、桿狀（絲狀）、磚塊狀、彈狀、蝌蚪狀構造：核衣殼，包膜，核酸。病毒粒子（virion）：成熟的具有侵染力的單個病毒顆粒。又稱病毒顆粒一種病毒只含有一種核酸（DNA或RNA）。植物病毒絕大多數含DNA;少數含RNA；動物病毒一部分含DNA，一部分含RNA；細菌病毒普遍含DNA，含RNA的極少。病毒增殖的5個過程：吸附，侵入，生物合成，裝配，裂解微生物的六大類營養(yǎng)要素：碳源，氮源，能源，水，無機鹽，生長因子 實驗過程: 高濃度敏感菌 Phage稀懸液 （1：10） 混勻，使之吸附 用抗phage血清處理, 中和尚未吸附的ph

14、age 用培養(yǎng)液高倍稀釋吸附phage的菌懸液(洗去抗血清) 37培養(yǎng),定時取樣，并作噬菌體效價測定噬菌斑（plaque） ：噬菌斑是指在宿主細菌的菌苔上，噬菌體使菌體裂解而形成的空斑。噬菌體效價（titer）：單位體積懸浮液中可產生噬菌斑的噬菌體數量。即噬菌斑形成單位。（雙層平板法）病毒的重要性益處：生命科學研究，基因治療 生產疫苗 生物防治危害：人和動物、植物的病原體溫和噬菌體：噬菌體感染細胞后，將其核酸整合（插入）到宿主的核DNA上，并且可以隨宿主DNA的復制而進行同步復制，在一般情況下，不引起寄主細胞裂解的噬菌體。一步生長曲線的三個周期：潛伏期，裂解期，平穩(wěn)期溫和噬菌體的生活周期（簡圖

15、）吸附侵入增殖成熟整合同步復制自發(fā)或誘導多次循環(huán)裂解性循環(huán)溶原性循環(huán)15.試述微生物營養(yǎng)中6大要素物質以及生理功能，并舉例。1）碳源：凡可被用來構成細胞物質或代謝產物中碳素來源的營養(yǎng)物質。提供合成細胞物質及代謝物的原料;并為整個生理活動提供所需要能源（異養(yǎng)微生物）。無機碳源：如CO2和碳酸鹽等。有機碳源：糖與糖的衍生物（多糖：如淀粉、麩皮、米糠等；飴糖；雙糖；單糖）,脂類、醇類。有機酸、烴類、芳香族化合物以及各種含碳的化合物。2）氮源：凡用來構成菌體物質或代謝產物中氮素來源的營養(yǎng)源。提供合成細胞中含氮物，如蛋白質、核酸，以及含氮代謝物等的原料；少數細菌可以銨鹽、硝酸鹽等氮源為能源。無機氮：銨鹽

16、、硝酸鹽、亞硝酸鹽、氨、N2等； 有機氮：尿素，蛋白質及其降解產物（如胨、肽、氨基酸等）、牛肉膏、魚粉、花生餅粉、黃豆餅粉、玉米漿、酵母膏等3）無機鹽：為微生物細胞生長提供碳、氮源以外的多種重要元素（包括大量元素和微量元素）的物質，多以無機鹽的形式共給。4）生長因子：是一類對微生物正常生活所不可缺少而需要量又不大，但微生物自身不能用簡單的碳源或氮源合成，或合成量不足以滿足機體生長需要的有機營養(yǎng)物質。嘌呤和嘧啶；氨基酸；維生素；其他6）能源：指能為微生物的生命活動提供最初能量來源的營養(yǎng)物或輻射能?；瘜W物質有機物（化能異養(yǎng)，同碳源）；無機物（化能自養(yǎng)，不同于碳源）輻射能：光能自養(yǎng)和光能異養(yǎng)微生物的

17、能源16.根據碳源，能源和電子供體的不同可將微生物劃分為幾個類型？試各舉一例營養(yǎng)類型碳源能源氫供體代表光能自養(yǎng)CO2日光H2S硫代硫酸鈉等無機硫化物藍細菌，綠硫細菌紫硫細菌光能異養(yǎng)CO2日光有機物（異丙醇）紅螺菌化能自養(yǎng)CO2或碳酸鹽還原態(tài)無機物H2，H2S, Fe2+,亞硝酸鹽硝化/硫化細菌，氧化亞鐵硫桿菌氫細菌，化能異養(yǎng)有機物有機物有機物大多異養(yǎng)菌：大腸桿菌光能自養(yǎng)型：以CO2作為唯一碳源或主要碳源，并利用光能，以無機物如H2S，硫代硫酸鈉等無機硫化物作為供氫體將CO2還原成細胞物質，同時產生元素硫的一類微生物。光能異氧型：以CO2作為唯一碳源或主要碳源，并利用光能，以有機物如異丙醇作為供

18、氫體將CO2還原成細胞物質的一類微生物，紅螺菌屬中的一些細菌。化能自養(yǎng)型：以CO2或碳酸鹽作為唯一碳源或主要碳源，以無機物氧化釋放的化學能為能源，利用電子供體如H2，H2S, Fe2+,亞硝酸鹽等使CO2還原成細胞物質的一類微生物?；墚愷B(yǎng)型：以有機物作為碳源和能源的一類微生物?？煞譃楦?，寄生，兼性。培養(yǎng)基：應科研或生產的需要，由人工配制的、適合于不同微生物生長繁殖或積累代謝產物用的營養(yǎng)基質（混合養(yǎng)料）。培養(yǎng)基的配制四大原則（一）培養(yǎng)基組分應適合微生物的營養(yǎng)特點（目的明確）（二）營養(yǎng)物的濃度與比例應恰當（營養(yǎng)協調）（三）物理化學條件適宜（條件適宜）（四）根據培養(yǎng)目的選擇原料及其來源（經濟節(jié)約

19、）培養(yǎng)基配制的四大方法：1.生態(tài)模擬（調查所培養(yǎng)菌的生態(tài)條件，查看“嗜好”，對“癥”下料初級天然培養(yǎng)基.）2.查閱文獻：（查閱、分析文獻，調查前人的工作資料，借鑒人家的經驗，以便從中得到啟發(fā)設計有自己特色的培養(yǎng)基配方.）3.精心設計（借助優(yōu)選法或正交試驗設計法等方法.）4、實驗比 較：（不同培養(yǎng)基配方的選擇比較， 單種成分來源和數量的比較， 幾種成分濃度比例調配的比較，小型試驗放大到大型生產條件的比較， pH和溫度試驗。）野生型(原養(yǎng)型): 不需要生長因子而能在基礎培養(yǎng)基上生長的菌株營養(yǎng)缺陷型:由于自發(fā)或誘發(fā)突變等原因從野生型菌株產生的需要提供特定生長素物質才能生長的菌株.20.如果要從自然界

20、中選育不同微生物類群或具有不同特性的微生物菌株，你如何根據學到的知識去選用以及制備不同的培養(yǎng)基？菌落計數法：稀釋澆注平板法、稀釋涂布分離法，原菌液的含菌量 = 菌落數×稀釋度。22.什么是純培養(yǎng)？獲得純培養(yǎng)的方法有哪些?適應的范圍是什么？1）純培養(yǎng)：微生物學中把從一個細胞或一群相同的細胞經過培養(yǎng)繁殖而得到的后代,稱純培養(yǎng).2）用固體培養(yǎng)基分離：稀釋倒平板法（包括簡單易行，但易造成熱敏感菌死亡）稀釋涂布平板法（簡單易行，但易造成機械損傷）平皿劃線分離法（分區(qū)劃線適用于濃度較大的樣品；連續(xù)劃線適用于濃度較小的樣品?？焖佟⒎奖悖├眠x擇培養(yǎng)基分離法（從混雜的微生物群體中分離出某種微生物用液

21、體培養(yǎng)基分離：稀釋法（適合于細胞較大的微生物如原生動物和藻類）單細胞挑取法：用顯微操作器直接分離單個細胞或單個個體進行培養(yǎng)。24.試述同型乳酸發(fā)酵與異型乳酸發(fā)酵之間的不同點。同型乳酸發(fā)酵異型乳酸發(fā)酵途徑EMP糖酵解PK途徑產物乳酸 2ATP乳酸，乙醇，CO2、ATP各1分子菌種乳鏈球菌、植物乳桿菌短乳桿菌、腸膜明串珠菌同型乳酸發(fā)酵：在糖的發(fā)酵中，產物只有乳酸并產生2ATP的發(fā)酵。異型乳酸發(fā)酵：產物除乳酸外還有乙醇與CO2并產生1ATP的發(fā)酵。31.試就青霉素，鏈霉素，磺胺類藥物的作用機制說明為什么這些藥只作用于細菌而對人體沒有毒害作用？ 青霉素藥理作用是干擾細菌細胞壁的合成。青霉素的結構與細胞

22、壁的成分粘肽結構中的D-丙氨酰-D-丙氨酸近似，可與后者競爭轉肽酶，阻礙粘肽的形成，造成細胞壁的缺損，使細菌失去細胞壁的滲透屏障，對細菌起到殺滅作用。 哺乳動物無細胞壁，不受-內酰胺類藥物的影響，因而本類藥具有對細菌的選擇性殺菌作用，對宿主毒性小。對革蘭陽性球菌及革蘭陽性桿菌、螺旋體、梭狀芽孢桿菌、放線菌以及部分擬桿菌有抗菌作用?；前奉惻c甲氧芐啶（TMP）可分別抑制二氫葉酸合成酶與二氫葉酸還原酶，妨礙葉酸代謝，最終影響核酸合成，從而抑制細菌的生長和繁殖硝酸鹽呼吸/反硝化作用：硝酸鹽還原菌將硝酸鹽還原成亞硝酸鹽，并進一步還原成NO、N2O、N2的過程。（反硝化細菌：地衣芽孢桿菌）硝化作用：在好氧

23、條件下，無機化能硝化細菌將氨氧化成硝酸鹽的過程。硫酸鹽呼吸：在厭氧條件下，硫酸鹽還原細菌（脫硫弧菌）以外源硫酸鹽（SO42 - ）作為最終電子受體的呼吸?；蛑亟M：把兩個性狀不同的個體內的遺傳基因轉移在一起，經過遺傳分子間的重新組合，形成新遺傳型個體的方式。ED途徑是少數缺乏完整EMP途徑的微生物的一種替代途徑，未發(fā)現存在于其它生物中。是微生物特有的代謝途徑：ED途徑可不依賴于EMP與HMP而單獨存在化能異養(yǎng)三種產能方式：有氧呼吸，無氧呼吸（反硝化作用，反硫化作用），發(fā)酵（不經呼吸鏈）鹽生鹽桿菌細胞膜含細菌視紫紅質。32.什么叫生長曲線？單細胞微生物的典型生長曲線可以分為幾個時期？劃分根據？1

24、）將少量單細胞的純培養(yǎng)，接種到一恒定容積的新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜條件下培養(yǎng)，每隔一定時間取樣，測菌細胞數目。以培養(yǎng)時間為橫坐標，以細菌增長數目的對數為縱坐標，繪制所得的曲線。是反映細菌生長繁殖規(guī)律的曲線。2）遲緩期：細菌數量維持恒定，或增加很少，基本平行于橫軸。對數生長期：細菌生長和分裂速率最大，平衡生長。其對數與時間呈直線關系。穩(wěn)定生長期：活菌數最高并維持穩(wěn)定。衰亡期：細菌代謝活性降低，細菌衰老并出現自溶。死亡細菌以對數方式增加。50.簡介機體對病原微生物的防御機制。機體固有的抵抗內外致病因子侵害的功能。機體經常處于各種致病因子的威脅下,如生物性因子(細菌、病毒、真菌、寄生蟲等)、物理性因

25、子(如過冷、過熱、電、放射等)、化學性因子(如強酸、強堿、藥物等),以及機體本身免疫反應引起的損傷等，都可能引起機體的損害。同時，機體本身也具有完整的防御體系，以保護機體免遭致病因子的損害。機體防御功能被破壞，則疾病發(fā)生。疾病發(fā)生后,機體的防御功能又能盡量消除致病因子,減少損害，使病變愈合，使受損害組織的功能盡可能恢復。但有時損傷。滅菌：采用強烈的理化因素殺滅任何物體內外部的一切微生物的措施，稱為滅菌。常用的化學方法：消毒劑與防腐劑，化學治療劑常用的物理方法：高溫和低溫，輻射作用，干燥和滲透壓，過濾，超聲波 焚燒法：簡單徹底，破壞極大；鑷子 接種環(huán) 試管等無經濟價值物品干熱 干燥熱空氣滅菌法：

26、空氣傳熱穿透力差故溫度高時間長；玻璃，陶瓷，金屬 高壓蒸汽滅菌法：耐高溫物品，玻璃儀器，含水或不含水物品；注意要排凈冷空氣，滅菌終了要緩慢降壓，完畢后趁熱取出物品。 煮沸消毒法：殺死所有營養(yǎng)細胞和部分芽孢；注射器，解剖用具 巴斯德消毒法：較低溫度，保持食品的營養(yǎng)風味。牛奶（實驗室不用） 間歇滅菌法：長亞蒸汽反覆幾次。不耐熱的培養(yǎng)基和藥物等。大題：實驗室常用的5種滅菌方法：焚燒法，干燥熱空氣滅菌法，高壓蒸汽滅菌法，煮沸消毒法，過濾（血清，酶，維生素）。灼燒滅菌法（焚燒法）（incineration）方法：是將被滅菌物品在火焰中燃燒，使所有的生物質碳化。簡單、徹底，但對被滅菌物品的破壞極大。適用范

27、圍：無經濟價值的物品滅菌，及不怕燒的實驗器具，如接種環(huán)、鑷子、試管或三角瓶的滅菌等。效果：最徹底的滅菌，包括芽孢。干燥熱空氣滅菌法(hot-air oven) 操作： 將物品放入電熱恒溫干燥箱（烘箱）內，然后升溫至160170 ，維持12小時。適用范圍：適合玻璃、陶瓷和金屬物品的滅菌，不適合液體樣品及棉花、紙張、纖維和橡膠類物質的滅菌。效果：最徹底的滅菌，包括芽孢。高壓蒸汽滅菌法方法：121（1kg/cm2或15磅/英寸2）維持20min。 112（0.5kg/cm2或8磅/英寸2）20-30min。 115（0.75kg/cm2或11磅/英寸2）20-30min。 根據滅菌物品的性質或成分選

28、擇滅菌溫度例如：生理鹽水、營養(yǎng)瓊脂等培養(yǎng)基用121 。 含葡萄糖、乳糖、氨基酸等培養(yǎng)基用112 。適用范圍：耐高溫物品，玻璃儀器、含水或不含水的物品。效果：相同時間和溫度比干熱滅菌法更有效。煮沸消毒法物品在水中煮沸 15min，可殺死所有營養(yǎng)細胞和一部分芽孢。在水中加入的 a2CO3或的石碳酸效果更好。此法適合注射器和解剖用具的消毒。巴斯德消毒法（Pasteurization）：用較低的溫度來殺死其中的病源微生物，這樣既保持食品的營養(yǎng)風味，又進行了消毒該法一般是將待消毒的液體食品置于61.762.8º處理30min或71.6º度處理15-30min，然后迅速冷卻。即可達到消

29、毒目的。 低溫長時法：62.930min處理牛奶 高溫瞬時法:71.615s處理牛奶 超高溫巴斯德滅菌法讓液體食品停留在140左右3-4s，急劇冷卻至75，經勻質化后冷卻至20。實驗室好氧微生物的液體培養(yǎng)方法（操作程序，特點）：試管培養(yǎng)，三角瓶（搖瓶）培養(yǎng)，臺式發(fā)酵罐培養(yǎng)44.微生物菌種保藏的原理是什么，基于這些原理菌種保藏可分為哪些方法？其主要優(yōu)缺點？原理：低溫，干燥，缺氧選用優(yōu)良的純種（最好是休眠體，如分生孢子、芽胞等）創(chuàng)造降低微生物代謝活動強度，生長繁殖受抑制，難以發(fā)生突變的環(huán)境條件方法：斜面低溫保藏法：菌種管置4冰箱、超低溫冰箱（-80 ）保藏，定時傳代 。低溫下，微生物代謝強度明顯下

30、降 。（保存2到4個月。優(yōu)點：簡單方便，可隨時檢查狀態(tài)；缺點：時間短，易變異要定期轉接）石蠟油封藏法（隔絕空氣保藏法）：橡皮塞取代棉塞、加石蠟油。適用各大類菌種、1-2年砂土管保藏法：干燥無營養(yǎng),保藏時間110年。適用于產孢子種類真空冷凍干燥法：加有保護劑的菌懸液在凍結狀態(tài)下予以真空干燥。適用于各種微生物，便于大量保藏，菌種存活時間長，515年，是目前最好的保藏方法。液氮超低溫保藏法：將菌種置于保護劑中，預凍后保存在液氮超低溫冰箱中（ -196）。20年。適用于各種微生物的較理想的保藏方法。缺點：價格太貴。v 菌種保藏機構 中國微生物菌種保藏委員會(CCCCM) 美國的典型菌種保藏中心(ATC

31、C) 英國國家典型菌種保藏所（NCTC） 法國里昂巴斯德研究所（IPL）選擇題：遺傳學的三個經典實驗：肺炎雙球菌的轉化實驗，噬菌體的感染實驗，煙草花葉病毒的重建實驗。證明了核酸是遺傳變異的物質基礎?；蛲蛔兊膽茫赫T變育種營養(yǎng)缺陷型：經誘變產生的一些合成能力出現缺陷，而必須在培養(yǎng)基內加入相應有機養(yǎng)分才能正常生長的變異菌株。大題：產量突變菌株或者營養(yǎng)缺陷菌株的篩選（五大環(huán)節(jié)一樣，在篩選的步驟不一樣，要展開）選擇合適的出發(fā)菌株制備待處理的菌懸液誘變處理篩選：初篩 復篩保藏和擴大試驗。1.出發(fā)菌株的選擇：出發(fā)菌株用來育種處理的起始菌株出發(fā)菌株應具備：對誘變劑的敏感性高； 具有特定生產性狀的能力或潛力； 出發(fā)菌株的來源；自然界直接分離到的野生型菌株：歷經生產考驗的菌株：已經歷多次育種處理的菌株：2.制備細胞懸液要求： 菌體處于對數生長期，并使細胞處于同步生長；細胞分散且為單細胞方法：玻璃珠打散10-15min; 加.3%吐溫80（表面活性劑） 用無菌脫脂棉過濾。 3.誘變處理：產量性狀的育種中多傾向于低劑量（致死率在70-80%）4. 菌種篩選根據菌的特點設計.,產量突變型才需要初篩和復篩的。營養(yǎng)缺陷型的篩選辦法：抗生素法，菌絲過濾法，逐個檢出營養(yǎng)缺陷型。普遍轉導：通過完全缺陷噬菌體對供體菌任何DNA小片段的“誤包”而實現其遺傳性狀傳遞至受體菌的轉導現象，稱為普遍性轉導F+菌株：細