多型性腮腺腫瘤p和Ki

1、多型性腮腺月中瘤p53和Ki-67的免疫組化表達(dá)郭樹江 河南煤化集團(tuán)鶴壁煤業(yè)公司總醫(yī)院五官科458000【摘要】目的： 探討Ki-67、P53的表達(dá)與多型性腮腺瘤的發(fā)生及其臨床病理 意義。方法：2004年1月至2009年10月所用之石蠟包埋組織標(biāo)本的腮腺多 型性腺瘤患者，經(jīng)隨訪3年以上，其中良性30例，惡性26例；以正常腮腺組 織30例為對(duì)照。應(yīng)用Envision法檢測(cè)應(yīng)用免疫組Ki-67、P53的表達(dá)，分析其 與腮腺多型性腺瘤良惡性之間的關(guān)系。結(jié)果： p53在正常腮腺組織中的表 達(dá)：腺管細(xì)胞P53強(qiáng)陽性1例（）,中等3例（）,弱陽性12例（）,無表 達(dá)14例（）。腺泡細(xì)胞染色陰性25例（）,

2、 3例弱陽性（）, 2例中等（）。 問質(zhì)細(xì)胞p53強(qiáng)陽性1例（）,弱陽性8例（）, 21例陰性（）。Ki-67 在正常腮腺組織中的表達(dá)：腺管細(xì)胞Ki-67強(qiáng)陽性0例（），中等2例（）, 弱陽性6例（）,無表達(dá)22例（）;腺泡細(xì)胞染色陰性27例（）,弱陽性 3例（）;間質(zhì)細(xì)胞染色強(qiáng)陽性0例（）,弱陽性5例（）,無表達(dá)25例（）。 p53在PA表達(dá) p53表達(dá)強(qiáng)陽性7例（）,中度染色16例（）,弱陽性 7例（）。多形性腺瘤粘液軟骨樣組織中P53表達(dá)強(qiáng)陽性1例（）,中度染色 11例（）,弱陽性18例（）。P53在粘液軟骨樣組織中表達(dá)和月中瘤導(dǎo)管細(xì)胞 p53表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P）。Ki-67在PA

3、表達(dá) Ki-67表達(dá)強(qiáng)陽性5 例（）,中度染色12例（）,弱陽性13例（）;多形性腺瘤粘液軟骨樣組 織中Ki-67表達(dá)強(qiáng)陽性2例（）,中度染色7例（）,弱陽性21例（）。Ki-67在粘液軟骨樣組織中表達(dá)與月中瘤導(dǎo)管細(xì)胞之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P）。p53在CAP表達(dá)p53表達(dá)強(qiáng)陽性11例（），中度染色5例（%）, 陰性10例（）。Ki-67在CAP表達(dá)Ki-67表達(dá)強(qiáng)陽性13例（%）,中度 染色3例（）,陰性10例（）。結(jié)論：Ki-67、P53在腮腺月中瘤呈高表達(dá), 二者聯(lián)合檢測(cè)可提高診斷準(zhǔn)確度?！娟P(guān)鍵詞】 腮腺；上皮性月中瘤； 免疫組化檢查；Ki-67多型性腮腺瘤(Pleomorphic

4、salivary adenoma , PA )是最常見的腮腺月中瘤1, 部分可呈惡化并發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移2。腮腺癌在多形性腺瘤中(Carcinoma expleomor phicadenoma CPA)是存在于多型腮腺瘤中惡性轉(zhuǎn)化所致 網(wǎng)，是最常見 的惡性混合瘤，約占全部腮腺月中瘤的10%4。由多型腮腺瘤轉(zhuǎn)化為腮腺癌的確切病理學(xué)機(jī)制仍然不清，可能涉及不同分子學(xué)事件 5。癌癥的分子生物學(xué)研究 表明，月中瘤抑制基因如p53功能的缺失可能導(dǎo)致各種癌癥的發(fā)生6,7。P53月中瘤 抑制基因的突變是人類月中瘤最常見的遺傳變異。月中瘤細(xì)胞增生程度是反映其生物學(xué)行為的重要參數(shù)，直接影響著臨床治療和預(yù)后， Ki-67

5、是一種敏感而特異 的增殖期細(xì)胞標(biāo)記物網(wǎng)。本研究的目的在于探討 Ki-67、P53的表達(dá)與多型性腮 腺瘤的發(fā)生及其臨床病理意義。1資料和方法一般資料福爾馬林固定、石臘包埋組織標(biāo)本，多型性腮腺瘤 30例，CPA26 例，男性32例，女性24例，年齡2584 (當(dāng)歲；同期切除的正常腮腺組織 30例(男16例，女14例，年齡2177歲)為對(duì)照組。所有標(biāo)本均經(jīng) HE染 色，并為病理學(xué)醫(yī)生再次確認(rèn)。試劑Ki-67單克隆抗體，克隆號(hào)：SP12; p53單克隆抗體，克隆號(hào)：DO-11。 顯色劑：DAB-0031,福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司；EnvisionTM+加強(qiáng)型試劑盒， 丹麥Dako公司，編號(hào)：K4000

6、33。方法 石蠟標(biāo)本4pm厚連續(xù)切片，免疫組化采用SP法，石蠟切片置L檸檬 酸緩沖液微波修復(fù)抗原，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、透明、封片。已知陽性片作陽性對(duì)照，PBS替代一抗作陰性對(duì)照。結(jié)果判斷Ki-67和p53均定位于細(xì)胞核，以背景清晰細(xì)胞核出現(xiàn)明顯棕黃色 顆粒為陽性反應(yīng)。計(jì)數(shù)采用Ki-67指數(shù)和p53指數(shù)指每個(gè)標(biāo)本低倍鏡（X100）下觀察并確定有代表性的 Ki-67和p53染色陽性視野，選擇5個(gè)視野，在 高倍鏡（X 400）下每個(gè)視野數(shù)200個(gè)月中瘤細(xì)胞,計(jì)算其陽性細(xì)胞總數(shù)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料的比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料的比較采用卡方檢驗(yàn)，取P。2結(jié)果p53在正常腮

7、腺組織中的表達(dá) 腺管細(xì)胞P53強(qiáng)陽性1例（）,中等3例（）, 弱陽性12例（）,無表達(dá)14例（）。腺泡細(xì)胞染色陰性25例（）, 3例弱 陽性（）, 2例中等（）。問質(zhì)細(xì)胞p53強(qiáng)陽性1例（）,弱陽性8例（）, 21例陰性（%）。Ki-67在正常腮腺組織中的表達(dá)腺管細(xì)胞Ki-67強(qiáng)陽性0例（）,中等2例（%）,弱陽性6例（）,無表達(dá)22例（）;腺泡細(xì)胞染色陰性27例（）, 弱陽性3例（）;間質(zhì)細(xì)胞染色強(qiáng)陽性0例（）,弱陽性5例（）,無表達(dá) 25 例（）。p53在PA表達(dá) p53表達(dá)強(qiáng)陽性7例（）,中度染色16例（）,弱陽性7 例（）。多形性腺瘤粘液軟骨樣組織中 P53表達(dá)強(qiáng)陽性1例（）,中度染色

8、 11例（）,弱陽性18例（）。P53在粘液軟骨樣組織中表達(dá)和月中瘤導(dǎo)管細(xì)胞 p53表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P）0Ki-67在PA表達(dá) Ki-67表達(dá)強(qiáng)陽性5例（）,中度染色12例（%）,弱陽性13例（）;多形性腺瘤粘液軟骨樣組織中 Ki-67表達(dá)強(qiáng)陽性2例（）,中 度染色7例（）,弱陽性21例（）。Ki-67在粘液軟骨樣組織中表達(dá)與月中瘤 導(dǎo)管細(xì)胞之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P）。p53在CAP表達(dá)p53表達(dá)強(qiáng)陽性11例（）,中度染色5例（）,陰性10 例（）。Ki-67在CAP表達(dá)Ki-67表達(dá)強(qiáng)陽性13例（）,中度染色3例（）,陰性 10 例（）。PA和CPA中p53表達(dá)和Ki-67表達(dá)比較

9、 PA與CPA中p53表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué) 意義（P）;二者的Ki-67表達(dá)亦未顯示有顯著差異。3討論正常腮腺組織中p53和Ki-67表達(dá) 正常腮腺組織中p53表達(dá)呈陰性或弱陽 性，與文獻(xiàn)9結(jié)果一致。有作者觀察11正常的胸腺上皮細(xì)胞不表達(dá)p53,來自 正?？谇火つひ酂op53表達(dá)12;而口腔癌病人的“正?！别つこ蕄53表達(dá)陽性 13。月中瘤抑制蛋白p53廣泛存在于多種細(xì)胞內(nèi)，在正常細(xì)胞，p53的表達(dá)很低， 免疫組化方法多呈陰性結(jié)果。但是，p53蛋白質(zhì)的基因編碼可發(fā)生頻繁的突變， 導(dǎo)致突變蛋白質(zhì)的積累。因而，在 22%70%的惡性月中瘤如結(jié)腸癌、胃癌、膀 胱癌、乳腺癌、肺癌、甲狀腺癌，p53蛋白質(zhì)可經(jīng)

10、免疫組織化學(xué)檢測(cè)證實(shí)14,15。Ki-67是與增殖細(xì)胞相關(guān)的核抗原，僅分布于核內(nèi)，其功能被認(rèn)為與細(xì)胞的有絲分裂密切相關(guān)?，F(xiàn)已知道G0期細(xì)胞無Ki-67抗原表達(dá)，在G1后期開始 出現(xiàn)，S、G2期升高，M期達(dá)高峰，其后迅速降解。在甲狀腺的皮質(zhì)組織、外 周淋巴組織生發(fā)中心和睪丸未分化的精原細(xì)胞中未見表達(dá)。 Ki-67抗原在非增 生性的或低轉(zhuǎn)化性的組織中幾乎不表達(dá)，它反映的是細(xì)胞的增殖情況，月中瘤細(xì) 胞的增生活性與月中瘤生物學(xué)行為有關(guān)。p53和Ki-67和PA和CPA中表達(dá) 以核染色p53強(qiáng)陽性和中度染色作為陽性, 本組中PA檢測(cè)陽性率為,與文獻(xiàn)結(jié)果一致16,17。CPA中陽性表達(dá)為,文獻(xiàn) 資料分別為

11、67%10和75%5。Ki-67在PA和CPA中表達(dá)陽性分別為和%。p53和Ki-67表達(dá)與月中瘤Ki-67反映的是細(xì)胞的增殖情況，在許多月中瘤組織 中都高表達(dá)。正常宮頸組織中 Ki-67表達(dá)只存在于基底層細(xì)胞核中，癌組織中 其表達(dá)明顯增強(qiáng)，它在子宮頸上皮內(nèi)瘤變I、子宮頸上皮內(nèi)瘤變R、子宮頸上皮內(nèi)瘤變出及宮頸癌中表達(dá)水平隨病變程度的加重而升高，并與宮頸癌的發(fā) 生、發(fā)展及惡性程度有關(guān)。P53基因是定位于人類第17號(hào)染色體17P13. 1的 抑癌基因，人類月中瘤中約51種與P53基因突變有關(guān)，P53蛋白在細(xì)胞增殖和凋 亡調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用。另一方面，突變型 P53蛋白表達(dá)促進(jìn)月中瘤血管增生，是 月中

12、瘤發(fā)生發(fā)展的機(jī)制之一。本研究結(jié)果顯示，PA和CPA組織中p53和Ki-67表達(dá)均較正常的腮腺組織為高，提示組織細(xì)胞中二者表達(dá)陽性有助于對(duì)月中瘤的 診斷。但是，由于二者在良或惡性月中瘤組織中均呈高表達(dá)，用于鑒別月中瘤組織 良惡尚有困難?？傊狙芯拷Y(jié)果顯示：CPA與PA和正常腮腺組織比較，p53和Ki-67 表達(dá)增強(qiáng)，而對(duì)于PA和CPA的鑒別意義需要增加樣本進(jìn)一步觀察；應(yīng)用明 確的陽性或陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)確定月中瘤抑制基因表達(dá)可能較不同分級(jí)的標(biāo)準(zhǔn)得到 的結(jié)果更能令人信服；月中瘤抑制蛋白 p53和Ki-67聯(lián)合染色分析可提高確診 準(zhǔn)確度；月中瘤抑制蛋白p53和Ki-67在月中瘤細(xì)胞異常表達(dá)頻率較粘液軟骨

13、樣 組織中表達(dá)異常更為多見，這一結(jié)果與粘液軟骨樣組織不是惡性疾病進(jìn)展的重 要月中瘤細(xì)胞相一致；p53和Ki-67在PA和CPA的表達(dá)值得進(jìn)一步進(jìn)行精確 的DNA研究，以確定引起突變的可能原因如甲基化或雜合性(heterozygosity)喪失對(duì)月中瘤發(fā)生和發(fā)展的影響；由于p53和Ki-67在良或惡性月中瘤組織中均呈高表達(dá)，用于鑒別月中瘤組織良惡尚有困難。參考文獻(xiàn)1 Ungari C, Paparo F, Colangeli W,et al. “ Parotidgand stumours: over view of a10 - years experience with 282 patients

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