常用染料的激發(fā)與發(fā)射

1、常用熒光染料的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)Fluorescent Dye （6 染料）Excitation（激發(fā)波長(zhǎng)，nm ）Emission（發(fā)射波長(zhǎng)，nm ）Cy2 ?489506GFP（Red Shifted）488507YO-PRO ? -1491509YOYO ?-1491509Calcein494517FITC494518FluorX494519Alexa ? 488490520Rhodamine 110496520ABI,5-FAM494522Oregon Green ?500503522Oregon Green ? 488496524RlboGreen ?500525Rhodamine Gr

2、een ?502527Rhodamine123507529Magnesium Green ?506531Calcium Green ?506533TO-PRO ?-1514533TOTO-1514533ABI,JOE520548BODIPY? 530/550530550Dil549565BODIPY?R542568BODIPY558/568558568BODIPY564/570564570Cy3 ?550570Alexa ? 546555570TRITC547572Magnesium Orange ?550575Phycoerythrin,R & B565575Rhodamine Ph

3、alloidin550575Calcium Orange ?549576Pyronin Y555580Rhodamine B555580ABI,TAMRA560582Rhodamine Red ?570590Cy3.5 ?581596ABI,ROX588608Calcium Crimson ?590615Alexa ? 594590615Texas Red595615Nile Red549628YO-PRO ? -3612631YOYO ? -3612631R-Phycocyanin618642C-Phycocyanin620648TO-PRO ? -3642660TOTO-3642660Di

4、D DilC ' (5)644665Cy5 ?649670Thiadicarbocyanine651671Cy5.5675694備注：發(fā)射波長(zhǎng)的顏色及頻率顏色波長(zhǎng)頻率紅色約625 740納米約480 405兆赫橙色約590 625納米約510 480兆赫黃色約565 570納米約530510兆赫綠色約500 565納米約600 530兆赫青色約485 500納米約620 600兆赫藍(lán)色約440 485納米約680 620兆赫紫色約380 440納米約790 680兆赫熒光染料的使用口丫噬橙：口丫噬橙是最經(jīng)典的靈敏的熒光染料， 它可對(duì)細(xì)胞中的DNAF口 RNAW時(shí)染 色而顯示不同顏色的熒

5、光，DNA呈綠色熒光，RNA呈橙紅色熒光。EB:染色DNA 和RN砍光素雙醋酸酯（FDA）: FAD?：身無(wú)熒光,無(wú)極性,可透過(guò)完整的原生質(zhì)膜。 一旦進(jìn)入原生質(zhì)體后，由于受到酯酶分解而產(chǎn)生具有熒光的極性物質(zhì)熒光素。它 不能自由出入原生質(zhì)膜，因此有活力的細(xì)胞能產(chǎn)生熒光，無(wú)活力的原生質(zhì)體不能分解FAD無(wú)熒光產(chǎn)生。5mgFDA容于1ml丙酮中，避光4c下貯存，使用時(shí)取 0.22mlFDA貯存液加入5ml0.65mol/L甘露醇中.使用時(shí)，使最終濃度為0.01%。熒 光染料Ho33342和若丹明123:?活細(xì)胞雙熒光染色觀察細(xì)胞核和線粒體。一般的生物染料不能穿透細(xì)胞膜，只有當(dāng)細(xì)胞被固定后改變了細(xì)胞膜的

6、通透性，染料才能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。但有些活體染料能進(jìn)入活細(xì)胞，并對(duì)細(xì)胞不產(chǎn)生毒性作用。熒光染料Ho33342和若丹明123都是活體染料。Ho33342能與細(xì)胞中DNA1行特異的結(jié)合， 若丹明 123 能與線粒體進(jìn)行特異的結(jié)合。采用兩種熒光染料的混合染液可對(duì)一個(gè)活細(xì)胞的核和線粒體同時(shí)染色。熒光組化實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題：1.每種熒光染料，均有自己的最適 PH值,此時(shí)熒光最強(qiáng)。當(dāng)pH 改變時(shí)，不僅熒光強(qiáng)度減弱，而且波長(zhǎng)將有所改變，因此熒光檢測(cè)時(shí)要在一定的PH值的緩沖液中進(jìn)行。2. 一放熒光染色在20c以下時(shí)熒光比較穩(wěn)定，溫度升高常出現(xiàn)溫度猝滅。3在熒光觀察中，常因激發(fā)光的增強(qiáng)而使樣品熒光很快衰竭，造成觀察和照相困難。為此最好用能量小的長(zhǎng)波長(zhǎng)光進(jìn)行觀察，需照相時(shí)再適當(dāng)增強(qiáng)激發(fā)光。4一