LAB1301020新生兒溶血病檢測操作規(guī)程D

1、新生兒溶血病檢測操作規(guī)程1原理新生兒溶血病一般特指母嬰血型不合而引起的胎兒或新生兒免疫性溶血性疾病HDN ,可由多種原因引起.臨床常見的是ABO、Rh等血型系統(tǒng).胎兒和新生兒紅細(xì)胞被來自母親的IgG抗體所包被,并在嬰兒的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)內(nèi)受到免疫性破壞.2試劑和材料2.1母親血樣 3-5ml,患兒抗凝血 3-5ml2.2抗人球蛋白試劑包括廣譜、IgG、C3、2-Me應(yīng)用液、抗-A、抗-B、抗-D、抗-C、抗-c、抗-E血清試劑% y * ! I2.3 5% A1、B、O型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液3方法 I O /I I j I主要以三項(xiàng)試驗(yàn)為主患兒直接抗人球蛋白試驗(yàn)患兒游離抗體試驗(yàn)吸收放散試驗(yàn)V'

2、- 丁 三 |3.1 ABO新生兒溶血病檢測_ ''kl.l I Il 1/ABO新生兒溶血病主要是由于胎兒紅細(xì)胞A或B抗原與來自母體的抗 A或抗B抗體反響的結(jié)果. 以母親為O型,胎I I兒為A型或B型的發(fā)病率為最高.-I/r m / 孑3.1.1母、子父紅細(xì)胞 ABO血型鑒定參照 ABO血型鑒定3.1.2子紅細(xì)胞試驗(yàn)3.1.2.1子紅細(xì)胞直接抗人球蛋白試驗(yàn)RBC生理鹽水洗3遍,配成5%RBC懸液,取小試管加 1滴2-5%子RBC,加多特異性抗球蛋白1滴,混勻離心看結(jié)果.3.1.2.2子紅細(xì)胞抗體放散試驗(yàn)：取經(jīng)鹽水洗滌的患兒壓積RBC0.5-1ml,加等量鹽水于試管中, 56C

3、水浴,不斷振搖 10分鐘,然后置于 56 C溫水離心管內(nèi),立即以 1300g離心5分鐘,吸取上清液備用.取 3只試管 標(biāo)記Ac、Bc、Oc,將 放散液分為3份分別參加3個小試管中,分別加 2-5%A、B、O細(xì)胞1滴,37 C水浴1小時加PEG縮短至5分鐘,I L二二取岀后用生理鹽水洗滌3遍,倒盡鹽水,各加抗多特異性抗球蛋白1-2滴,混勻離心看結(jié)果.3.1.2.3子血清中游中游離抗體檢查取3支小試管標(biāo)明 Ac、Bc、Oc,每管加患兒血清 2-4滴,分別參加2-5%A、B、O指示紅細(xì)胞鹽水懸液 1滴,混勻后 離心,看結(jié)果.如有凝集,說明有相應(yīng)鹽水抗體,不凝集將試管放入37C水浴1小時加PEG5分鐘

4、后,用生理鹽水洗3遍,吸盡鹽水后,每管加多特異性抗球蛋白1滴,離心看結(jié)果.3.1.2.4母血清作產(chǎn)前檢測血清中IgG抗A抗B效價測定及血清抗體篩選.詳見產(chǎn)前檢測.3.2 Rh新生兒溶血病檢測Rh血型系統(tǒng)的HDN是由于母嬰Rh血型不合造成的,母親的Rh免疫抗體作用于胎兒及嬰兒,引起貧血和高膽紅素血癥,以D抗原不合為最多見,一般母親曾有輸血或妊娠史.321母、子、父作 ABO、Rh血型鑒定參照 ABO血型鑒定及 Rh血型鑒定.母親一般為Rh陰性,患兒為 Rh陽性.3.2.2 子紅細(xì)胞試驗(yàn)322.1子紅細(xì)胞直接抗人球蛋白試驗(yàn)同.322.2子紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)：直抗陽性者做此試驗(yàn).用三氯甲烷/三氯乙烯

5、放散法,洗滌壓積紅細(xì)胞后,加等量鹽水或AB型血清,再加 2體積三氯甲烷/三氯乙烯等量混合液,用玻璃紙壓住管口,顛倒混合1分鐘,以30005000轉(zhuǎn)/別離心35分鐘,吸取上層櫻紅色液體放入另一試管,并將此含放散液試管置37C水浴510分鐘,除盡三氯甲烷/三i '氯乙烯,用標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞鑒定抗體,方法同熱放散抗體法.3.2.2.3子血清游離抗體檢測同.322.4母血清ABO以外抗體檢測：用配組細(xì)胞及丈夫或子細(xì)胞與母血清在鹽水中看是否有凝集,再做酶法或抗人球111 !；法,陽性者作抗體鑒定及測抗體效價. ffjL,I I I4結(jié)果判定I1 Ijf 4.1 ABO HDN結(jié)果判定根據(jù)患兒三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果

6、按下表作結(jié)果判斷：直接抗人球蛋白試驗(yàn)游離抗體試驗(yàn)抗體放散試驗(yàn)結(jié)果判定+可證實(shí)為ABO HDN+-可證實(shí)為ABO HDN+-+可證實(shí)為ABO HDN-+可證實(shí)為ABO HDN+-可疑為ABO HDN-+-可疑為ABO HDN-不可證實(shí)為ABO HDN母親為O型,子為A型或B型,子紅細(xì)胞直抗陽性或和游離抗體陽性,母親IgG抗體抗A或抗B效價高者可疑為ABO新生兒溶血病.4.2 Rh HDN結(jié)果判定母親為Rh陰性、子為Rh陽性,子紅細(xì)胞直抗陽性及抗體釋放試驗(yàn)陽性即可判定為Rh血型HDN游離抗體試驗(yàn)有時可表現(xiàn)為陰性.3項(xiàng)試驗(yàn)均陰性那么可否認(rèn)為Rh血型HDN其他血型 HDN可根據(jù)檢測結(jié)果直接報.5支持性文件?全國臨床檢驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)程?6相關(guān)表單WXXZ/QR/1202-0