黃酮的提取方案

1、黃酮提取實驗方案1材料與儀器1.1 材料1.2 試齊IJ蘆丁，無水乙醇，氫氧化鈉，石油醒，硝酸鋁，三氯化鐵，三氯化鋁，濃氨水，濃鹽酸，鎂粉，亞硝酸鈉（以上均為國產分析純），實驗所用水均為蒸儲水。1.3 實驗儀器電熱恒溫水浴鍋電子天平（感量 0.0001g ）722型光柵分光光度計索氏提取器量筒（100ml,10ml ） 25ml比色管 移液管 小試管 白瓷板圓底燒瓶 100m 容量瓶錐形瓶2實驗原理2.1提取原理溶劑提取原理游離黃酮黃酮菩備注乙醇溶解范圍廣+（甲醇）昔、谷元均可溶（ 90-95%） （60%）甲醇毒性大沸水 多糖苔易于水+成本低，安全，水溶性雜質多堿性水或稀氫氧化鈉溶出能力強堿

2、性乙醇 盼羥基的酸性 +石灰水除雜質效果好ij萃取法分離依據分離工藝乙酸乙醋回收回收多糖普游離黃酮的乙醛液黃酮與雜質 昔與昔元 菩元與百元酸化-0H黃酮之間的極性（分配系數K）4%NlOH液母液 t（脂溶性雜質）H黃酮依次以5%NaHC(h , 5%NajCO30.2%N&0H、4%NaOH萃?。ǘ﹑H梯度萃取法分離依據：游離黃酮類化合物的酸性差異（見黃酮酸性規(guī)律） 分離工藝：C03液5%Na2CO3液 0. 2%N這0H液石油醍液 乙醛液 （脂溶性雜質）|水飽和正丁醇 母液（水溶性雜質） 減壓回收原料的提取冷縮液（水溶液） 依次以石油醒、乙醵、 乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取3 實驗部

3、分3.1 原料的預處理金星科厥類葉f除雜-水洗-晾干-粉碎3.2 蘆丁標準溶液的配制將蘆丁在干燥箱里用120條件下恒重1.5h, 然后精確稱取蘆丁標準品0.01g 用85%的乙醇溶液配制成100.00mL 的溶液，備用。3.3 測定波長的選擇精確移取蘆丁標準溶液0.50mL, 置于 25.00mL 的比色管中，用質量分數為85%的乙醇稀釋到10.00mL 處， 加人5%的亞硝酸鈉溶液0.80mL, 混勻， 放置 10min; 加入10%硝酸鋁溶液0.80mL , 混勻，放置 10min, 再加入4%的氫氧化鈉溶液10.00mL, 混勻，放置10min, 加入85%的乙醇溶液至刻度，搖勻，10m

4、in后在460560nm處測定吸光度，4 （以試劑樣品做空白）選擇最大吸收波長。3.4 蘆丁標準曲線的繪制精確吸取蘆丁標準溶液0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL于6支25.00mL的比色管中，用質量分數為85%的乙醇稀釋到10.00mL 處，加人5%的亞硝酸鈉溶液0.80mL, 混勻，放置10min; 加入 10%硝酸鋁溶液0.80mL , 混勻， 放置 10min, 再加入4%的氫氧化鈉溶液10.00mL, 混勻， 放置 10min，加入85%勺乙醇溶液至刻度，搖勻， 10min后于波長500nm處測定吸光度，（以第一瓶為空白溶液）然后以吸光度和蘆丁溶液濃度做圖

5、，繪制標準曲線。3.5 黃酮類化合物的特征性實驗5-6在一定條件下對提取的黃酮類化合物進行特征性實驗，具體內容如下：（ 1） 鹽酸鎂粉反應：取1.00mL 提取液于試管中加適量鎂粉搖勻，再加入濃鹽酸數滴（1 次加入），觀察其泡沫顏色。（ 2） 三氯化鋁反應：取提取液點在濾紙上，滴加1%三氯化鋁乙醇溶液，吹干，觀察顏色變化。（ 3） 三氯化鐵反應：取幾滴提取液于白瓷板上，滴加1%三氯化鐵乙醇溶液，觀察其顏色。（4） 濃氨水反應：取乙醇提取液點在濾紙上，將濾紙在濃氨水上方熏0.5min ，觀察其顏色變化。3.6 單因素實驗2.6.1 較佳提取劑質量分數的確定準確稱取3g 處理好的金星厥科葉樣品置于

6、圓底燒瓶中，分別用無水乙醇、 95%、 85% 80%、75%的乙醇60mL對3g金星厥科葉樣品在水浴溫度為80c下回流提取3h.提取完畢，用與提取劑的質量分數相同的乙醇反復洗滌圓底燒瓶、濾紙包，將其定容于100:00mL 容量瓶中，然后精確吸取0.50mL 提取液置于25.00mL 的比色管中，用與提取劑質量分數相同的乙醇稀釋到10.00mL 處，加人5%的亞硝酸鈉溶液0.80mL, 混勻，放置10min; 加入10%硝酸鋁溶液0.80mL , 混勻，放置10min, 再加入4%的氫氧化鈉溶液10.00mL, 混勻，放置10min, 加入85%的乙醇溶液至刻度，搖勻，10min 后于波長50

7、0nm處測定其吸光度，同時做三組平行實驗。2.6.2 較佳提取時間的確定準確稱取3g處理好的金星厥科葉樣品置于圓底燒瓶中，分別用 2h、2.5h、3h、3.5h提取時 間用60mL 85%勺乙酉1對3g金星厥科葉樣品在水浴溫度為80c下回流提取，乙醇提取液的處理方法如前，測定其吸光度，同時做三組平行實驗。2.6.3 較佳提取溫度的確定稱取3g處理好的金星厥科葉樣品置于圓底燒瓶中，分別在75C、80 C、85C、90 c的水浴溫度下用60mL 85%勺乙酉1對3g金星厥科葉樣品回流提取 2.5 h,乙醇提取液的處理方法如前，測 定其吸光度，同時做三組平行實驗。2.6.4 較佳物料比的確定稱取3g

8、處理好的金星厥科葉樣品置于圓底燒瓶中，分別用30mL 45mL、60mL、75mL、90mL的85%勺乙醇溶液在水浴溫度為85 c下對3g金星厥科葉樣品回流提取2.5 h,乙醇提取液的處理方法如前，測定其吸光度，同時做三組平行實驗。2.6.5 素對黃酮類物質的影響稱取15g金星厥科葉樣品放于錐形瓶中用 90mL的石油醛浸泡8個小時對其脫色，過濾、干燥。 然后準確稱取處理過的 3g金星厥科葉樣品用質量分數為 85%勺60mL乙醇溶液在水浴溫度為 85c下 對其回流提取2.5h ,乙醇提取液的處理方法如前，測定其吸光度，同時做三組平行實驗。2.6.6 厥科葉中黃酮類化合物含量的測定精密量取石油醛處

9、理過的提取液0.50mL,置于25.00mL的比色管中。力口85%勺乙醇稀釋到10.00mL,加入5%勺亞硝酸鈉溶液 0.80mL,混勻，放置10min;加入10%5肖酸鋁溶液0.80mL,混勻， 放置10min,再加入4%勺氫氧化鈉溶液 10.00mL,混勻，放置10min,加入85%勺乙醇溶液至刻度， 搖勻，10min后于波長500nm處測定吸光度。同時做樣品空白管.根據標準曲線計算提取物中黃酮類化合物的含量.（把樣品所測得吸光度的平均值代入標準曲線方程，再算出0.50mL提取液中黃酮類化合物的濃度，然后再根據濃度算出樣品 中黃酮類化合物的百分含量.）計算方法（公式）如下：設樣品中黃酮類化

10、合物的含量為，稀釋以后的濃度為 C;原提取液的濃度為 C0 ;Co 100ml3.000g 1000100%Co =C VVo4結果與討論4.1 最大吸收波長的選擇將定量的黃酮提取液顯色以后在460560nm處測定吸光度，（以試劑樣品做空白）選擇最大吸收波長，測定結果如下：表1 波長與吸光度的關系波長（nm） 吸光度（A） 波長（nm） 吸光度（A）從表1中可以知道當波長在什么時候有最大吸收波峰。4.2 產丁的標準曲線的繪制精確吸取0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL的蘆丁標準溶液稀釋、顯色以后在波長 500nm處測定吸光度（以第一瓶為空白溶液），以濃度 （c）為橫

11、坐標，吸光度（A）為縱坐標，繪制標準曲線， 結果如下：表2蘆丁溶液濃度與吸光度的關系濃度（mg/mL）0.0020.0040.0080.0120.016吸光度實驗結果表明黃酮類化合物含量在0100ug/mL范圍內與吸光度呈良好的線性關系，其回歸方程為Y=11.5548X-0.00406 R=0.99342,4.3 黃酮類化合物的特征性實驗對所提取的黃酮類化合物進行特征性實驗的結果如下表：表3定性實驗結果試劑現象鹽酸一鎂粉1%三氯化鋁1%三氯化鐵 濃氨水從表3可知，黃酮類化合物的特征性實驗結果較符合黃酮類化合物的特征顏色反應，證明所提取中含有黃酮類化合物。4.4 單因素實驗的結果4.4.1 較佳

12、提取劑質量分數的確定準確稱取3g處理好的金星厥科葉樣品置于圓底燒瓶中，分別用無水乙醇、95% 85% 80%、75%的乙醇60mL對3g金星厥科葉樣品在水浴溫度為80c下回流提取3h.顯色后測其吸光度，測定結果如下：表4不同乙醇質量分數對西山中黃酮類物質提取的結果乙醇的質量分數（）無水乙醇95858075吸光度1吸光度2 吸光度3平均值4.4.2 較佳提取時間的確定準確稱取3g處理好的金星厥科葉樣品置于圓底燒瓶中，分別用 2h、2.5h、3h、3.5h提取 時間用60mL 85%勺乙酉I對3g金星厥科葉樣品在水浴溫度為80c下回流提取。顯色后測其吸光度，測定結果如下：表5不同提取時間對西山中黃

13、酮類物質的提取結果提取時間（h）22.533.5吸光度1吸光度2吸光度3平均值4.4.3 較佳提取溫度的確定稱取3g處理好的金星厥科葉樣品置于圓底燒瓶中，分別在75 C、80 C、85C、90 c的水浴溫度下用60mL 85%勺乙酉I對3g金星厥科葉樣品回流提取2.5 h。顯色后測其吸光度，測定結果如下：表6不同提取溫度對西山中黃酮類物質的提取結果提取溫度（C）75808590吸光度1吸光度2吸光度3 平均值4.4.4 較佳物料比的確定稱取3g處理好的金星厥科葉樣品置于圓底燒瓶中，分別用30mL 45mL、60mL、75mL、90mL質量分數為85%勺乙醇在水浴溫度為 85c下對3g樣品回流提取2.5 h。顯色后測其吸光度，測定結 果如下：表7不同物料比對 金星厥科葉 中黃酮類物質的提取結果物料比（w/v）1:101:151:201:251:30吸光度1吸光度2吸光度3平均值4.5 葉綠素對黃酮類物質含量測定的影響準確稱取用石油醛脫色過的3g金星厥科葉樣