(新編)課題2-土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)課件

1、課題課題2 2 土壤分解尿素的細菌的分土壤分解尿素的細菌的分離與計數(shù)離與計數(shù)課標領(lǐng)航課標領(lǐng)航1舉例說明什么是選擇培養(yǎng)基，并研究培舉例說明什么是選擇培養(yǎng)基，并研究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用。養(yǎng)基對微生物的選擇作用。2設(shè)置重復(fù)組和對照組，對土壤中分解尿設(shè)置重復(fù)組和對照組，對土壤中分解尿素的細菌進行分離和計數(shù)。素的細菌進行分離和計數(shù)?！局攸c】【重點】選擇培養(yǎng)基的作用。選擇培養(yǎng)基的作用?！倦y點】【難點】菌落數(shù)目的統(tǒng)計。菌落數(shù)目的統(tǒng)計。一、研究思路一、研究思路(一一)篩選菌種篩選菌種尋找耐高溫的尋找耐高溫的DNA聚合酶聚合酶耐高溫耐高溫的酶的酶耐高溫耐高溫生物體生物體耐高溫耐高溫環(huán)境（熱泉、火山口）環(huán)境（

2、熱泉、火山口）尋找尋找尋找尋找Taq細菌細菌該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是什么物質(zhì)？源的分別是什么物質(zhì)？碳源碳源：葡萄糖、尿素：葡萄糖、尿素氮源氮源：尿素：尿素思考：思考： 選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基 此配方能否篩選出產(chǎn)生脲酶的細菌？為什么？此配方能否篩選出產(chǎn)生脲酶的細菌？為什么？原則上能。原則上能。（1 1）將土壤中的固氮菌分離出來）將土壤中的固氮菌分離出來（2 2）將土壤中自養(yǎng)微生物分離出來）將土壤中自養(yǎng)微生物分離出來舉一反三（3 3）篩選出抗青霉素的微生物）篩選出抗青霉素的微生物（4 4）篩選出耐高濃度食鹽的微生物）篩選出耐高

3、濃度食鹽的微生物不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基思考：思考：以尿素為以尿素為唯一氮源唯一氮源的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)基是是分離分離尿素尿素細菌細菌判斷該判斷該培養(yǎng)基培養(yǎng)基有無選有無選擇性擇性實驗組實驗組對照組對照組培養(yǎng)基類型培養(yǎng)基類型是否是否接種接種 目的目的 結(jié)果結(jié)果只生長只生長尿素細尿素細菌菌生長多種生長多種微生物微生物是是如何對細菌進行計數(shù)？方法方法 運用運用稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法來來統(tǒng)計統(tǒng)計樣品中的樣品中的活菌活菌數(shù)

4、。數(shù)。原理原理 1 1個菌落個菌落1 1個活菌個活菌選擇菌落數(shù)在選擇菌落數(shù)在3030300300的平板上計數(shù)。的平板上計數(shù)。需培養(yǎng)計算出需培養(yǎng)計算出三個或三個以上三個或三個以上的平板菌的平板菌落求落求平均數(shù)平均數(shù)。統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低低。注意事項注意事項看課本看課本P22，并討論你認為這兩位同學(xué)的作法正確嗎？如，并討論你認為這兩位同學(xué)的作法正確嗎？如果有問題，錯在哪？果有問題，錯在哪？第一位同學(xué)：沒有第一位同學(xué)：沒有重復(fù)實驗重復(fù)實驗（至少涂布（至少涂布3 3個平板）個平板）第二位同學(xué)：第二位同學(xué)：A A組結(jié)果誤差過大，不應(yīng)用于計算平均值組結(jié)果誤差過大，

5、不應(yīng)用于計算平均值計算公式：計算公式：某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均數(shù)為234，那么每克樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1ml）()A.2.34108B.2.34109C.234D.23.4B閱讀閱讀P22P222323頁頁“（三）設(shè)置對照（三）設(shè)置對照”一段討論教材中提出一段討論教材中提出的問題。的問題。(1)A(1)A同學(xué)出現(xiàn)此結(jié)果的可能原因？同學(xué)出現(xiàn)此結(jié)果的可能原因？(2)(2)設(shè)置對照實驗，幫助設(shè)置對照實驗，幫助A A同學(xué)排除上述兩個可能影響實驗同學(xué)排除上述兩個可能影響實驗結(jié)果的因素？結(jié)果的因素？實驗流程：實驗流程：樣品稀釋涂布平板樣品稀釋涂

6、布平板微生物的培養(yǎng)與觀察微生物的培養(yǎng)與觀察 菌落計數(shù)菌落計數(shù)二、實驗設(shè)計土壤取樣土壤取樣制備培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基（一）土壤取樣（一）土壤取樣從肥沃、酸堿度接近中性的濕潤土壤中取樣。從肥沃、酸堿度接近中性的濕潤土壤中取樣。先鏟去先鏟去表層土表層土3cm3cm左右左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的信，再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中。封中。取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。使用前都要滅菌。（二）制備培養(yǎng)基（二）制備培養(yǎng)基制備制備選擇培養(yǎng)基（尿素為唯一氮源）選擇培養(yǎng)基（尿素為唯一氮源）制備制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 相同的菌液，在牛肉

7、膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯數(shù)目應(yīng)明顯多于多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，牛肉膏蛋牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為對照，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起白胨培養(yǎng)基可以作為對照，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了到了選擇選擇作用。作用。（三）樣品稀釋涂布平板（三）樣品稀釋涂布平板稀釋倍數(shù)為稀釋倍數(shù)為 10101 1 10106 6。每個稀釋度均用。每個稀釋度均用3 3個選擇培養(yǎng)基個選擇培養(yǎng)基和和1 1個蛋白胨培養(yǎng)基個蛋白胨培養(yǎng)基。實驗時要對實驗時要對培養(yǎng)皿作好標記培養(yǎng)皿作好標記。注明培養(yǎng)基類型、。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時間、稀釋度、培養(yǎng)物等。

8、培養(yǎng)時間、稀釋度、培養(yǎng)物等。稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)目的目的細菌細菌10104 4、10105 5、10106 6放線菌放線菌10103 3、10104 4、10105 5真菌真菌10102 2、10103 3、10104 41 1、取土用的、取土用的小鐵鏟小鐵鏟的盛土樣的的盛土樣的信封信封在使用前都需要在使用前都需要滅菌滅菌。2 2、應(yīng)在、應(yīng)在火焰旁火焰旁稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入錐形瓶稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入錐形瓶中，塞好棉塞。中，塞好棉塞。3 3、在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在、在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁火焰旁操作。操作。注明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期、平板

9、培養(yǎng)樣品的稀釋度等。注明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期、平板培養(yǎng)樣品的稀釋度等。三、操作提示三、操作提示四、結(jié)果分析與評價四、結(jié)果分析與評價 1. 1.培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落？是否篩選出菌落？ 對照的培養(yǎng)皿對照的培養(yǎng)皿無菌落說明培養(yǎng)基沒有污染無菌落說明培養(yǎng)基沒有污染。 牛肉膏培養(yǎng)基的牛肉膏培養(yǎng)基的菌落數(shù)目多余選擇培養(yǎng)基的菌菌落數(shù)目多余選擇培養(yǎng)基的菌落數(shù)目落數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。四、結(jié)果分析與評價四、結(jié)果分析與評價 2. 2.獲得某一稀釋度下，菌落數(shù)獲得某一稀釋度下，菌落數(shù)3030300300

10、的平板，的平板，在這以稀釋度下在這以稀釋度下, ,是否至少有兩個平板的菌落數(shù)相是否至少有兩個平板的菌落數(shù)相接近？接近？ 相接近，說明操作成功。相接近，說明操作成功。五、課題延伸五、課題延伸鞏固練習1.1.使用選擇培養(yǎng)基的目的是（使用選擇培養(yǎng)基的目的是（ ） A.A.培養(yǎng)細菌培養(yǎng)細菌 B.B.培養(yǎng)真菌培養(yǎng)真菌 C.C.使需要的微生物大量繁殖使需要的微生物大量繁殖 D.D.表現(xiàn)某微生物的特定性狀與其他微生物加以區(qū)別表現(xiàn)某微生物的特定性狀與其他微生物加以區(qū)別2.2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是別是( )( ) A.CO A.CO2 2和和N N2

11、2 B. B.葡萄糖和葡萄糖和NHNH3 3 C.COC.CO2 2和尿素和尿素 D.D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素C CD D3.3.下列說法不正確的是（下列說法不正確的是（ ）A.A.科學(xué)家從科學(xué)家從70708080度熱泉中分離到耐高溫的度熱泉中分離到耐高溫的TaqDNATaqDNA聚聚 合酶。合酶。B.B.統(tǒng)計某一稀釋度的統(tǒng)計某一稀釋度的5 5個平板的菌落數(shù)依次為個平板的菌落數(shù)依次為M1M1、M2M2、 M3M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3作為該樣品菌落數(shù)的估計值。作為該樣品菌落數(shù)的估計值。C.C.設(shè)置對照實驗的主要目的是排除實驗組中非測試因設(shè)置對照實驗的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度 D.D.同其他生物環(huán)境相比，