usp39阿齊霉素及其檢驗(yàn)法重點(diǎn)講義

1、 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)1USP 39阿奇霉素阿奇霉素Azithromycin C38H72N2O12 xH2O （無水物） 749.00 83905-01-5(2R, 3S, 4R, 5R, 8R, 10R, 11R, 12R, 13S, 14R)-13- (2, 6-二脫氧-3-C-甲基-3-O-甲基-L-核-己吡喃糖基)氧 -2-乙基-3, 4, 10-三羥基-3, 5, 6, 8, 10, 12, 14-七甲基-11- 3, 4, 6-三脫氧-3-(二甲氨基)-D-木-己吡喃糖基 氧-1-氧雜-6-氮雜環(huán)十五烷-15-酮。 9-氧代-9a-氮雜-9a-甲基-

2、9a-高紅霉素 A 一水合物 767.02 121479-24-4 二水合物 785.02 117772-70-0定義定義阿奇霉素含一分子或兩分子的水。按無水物計(jì)算，每 mg 阿奇霉素中C38H72N2O12的含量應(yīng)為 945g1030g。USP 參比對(duì)照品參比對(duì)照品阿奇霉素 USP 參比對(duì)照品；（USP Azithromycin RS）氮雜紅霉素 A USP 參比對(duì)照品；(USP Azaerythtomycin A RS)阿奇霉素 USP 鑒別對(duì)照品；(USP Azithromycin Identity RS)德糖胺阿奇霉素 USP 參比對(duì)照品（USP Desosaminylazithrom

3、ycin RS）N-去甲基阿奇霉素 USP 參比對(duì)照品（USP N-Demethylazithromycin RS） 阿奇霉素雜質(zhì) F USP 參比對(duì)照品 （USP Azithromycin Related Compound F 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)2RS）【鑒別鑒別】A：紅外吸收 。（如果樣品的紅外譜圖與標(biāo)準(zhǔn)譜圖不同時(shí)，用相同體積的甲醇溶解等量的樣品和對(duì)照品，在真空條件下，水浴加熱至 80 ，持續(xù) 30 分鐘，揮干溶劑。用殘?jiān)僮鰴z測(cè)。 ）B：在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試樣品溶液中阿奇霉素峰的保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液中阿奇霉素峰的保留時(shí)間一致。比旋度比旋度

4、：-45 -49 ，溫度 20。 測(cè)試溶液：20mg/ml, 無水乙醇溶液。結(jié)晶性結(jié)晶性 ：應(yīng)符合要求。（當(dāng)為無定形時(shí), 大多數(shù)微粒不存在雙折射和消光位置。 ）pH 值值 ： 9.011.0。樣品儲(chǔ)備溶液：4mg/ml 的甲醇溶液；樣品溶液：用水將樣品儲(chǔ)備溶液（體積比：1:1）稀釋成 2mg/ml 的溶液。水分，水分，方法1 ：當(dāng)標(biāo)為無結(jié)晶水時(shí)不得大于 2.0%；二水合物，水分在 4.0% 5.0%之間；一水合物在 1.8% 4.0% 之間 ，當(dāng)干燥失重測(cè)定符合要求時(shí)，水分可以在4.0% 6.5% 。 干燥失重干燥失重 （當(dāng)標(biāo)簽標(biāo)示為一水合物，且水分含量在 4.06.5范圍內(nèi)時(shí)，進(jìn)行此項(xiàng)測(cè)定。

5、 ）熱分析 ： 注：用于檢測(cè)的量可依據(jù)儀器的靈敏度進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。 精確稱量 10mg 阿奇霉素，在一適宜的校準(zhǔn)儀器中，用“熱解重量分析法”測(cè)定揮發(fā)性物質(zhì)的含量。在 35ml/min 恒定速率氮?dú)夥罩校瑢悠芬?10/min 的速率從環(huán)境溫度加熱到 150。在“差示熱分析圖”中，標(biāo)示出干燥失重的導(dǎo)數(shù)（每分鐘失重的百分?jǐn)?shù)） ；計(jì)算 70、130處的轉(zhuǎn)折拐點(diǎn)：從環(huán)境溫度到 70，失重不多于 4.5；70拐點(diǎn)到 130拐點(diǎn)，失重量在1.82.6。含量含量 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)3溶液 A：10M 氫氧化鉀溶液溶液 B：將 6.7g/l 磷酸氫二鉀溶液用溶液 A 調(diào)節(jié) pH

6、 至 11.0。溶液 C：將 6.7g/l 磷酸氫二鉀溶液用磷酸調(diào)節(jié) pH 至 11.0。流動(dòng)相：乙腈：溶液 B（60:40）稀釋液：乙腈：溶液 C（60:40）系統(tǒng)適應(yīng)性溶液：阿奇霉素 USP RS、氮雜紅霉素 A USP RS 分別按下法制備 0.5mg/ml 的溶液。先將阿奇霉素 USP RS 和氮雜紅霉素 A USP RS 溶解于乙腈中，取 5%的最終溶液，用稀釋液定容。對(duì)照品溶液：阿奇霉素 USP RS 按下法制備 0.53mg/ml 的溶液。先將阿奇霉素 USP RS 溶解于乙腈中，取 2%的最終溶液，用稀釋液定容。樣品溶液：阿奇霉素樣品按下法制備 0.53mg/ml 的溶液。先將

7、阿奇霉素樣品溶解于乙腈中，取 2%的最終溶液，用稀釋液定容。 色譜系統(tǒng) (見色譜法，系統(tǒng)適應(yīng)性)；模式：液相色譜法檢測(cè)波長(zhǎng)：UV 210nm色譜柱：4.6-mm 25-cm，用粒徑為 5-m 的 L67柱溫：40流速：1mL/ 分鐘。進(jìn)樣量：10l。系統(tǒng)適應(yīng)性系統(tǒng)適應(yīng)性進(jìn)樣：對(duì)照品溶液和系統(tǒng)適應(yīng)性溶液。備注氮雜紅霉素 A 的相對(duì)保留時(shí)間為 0.7，阿奇霉素為 1.0適應(yīng)性要求適應(yīng)性要求分離度：氮雜紅霉素 A 與阿奇霉素的分離度不得少于 3；系統(tǒng)適應(yīng)性溶液。拖尾因子范圍：阿奇霉素峰的拖尾因子應(yīng)為 0.81.5；對(duì)照品溶液。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差：不大于 1.10%；對(duì)照品溶液。分析分析 2016 年 4

8、月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)4進(jìn)樣：對(duì)照品溶液和樣品溶液。按下式計(jì)算每 mg 阿奇霉素中含 C38H72N2O12的量，單位是 g： (rU / rS)（Cs/Cu）P式中：rU 樣品溶液中的峰響應(yīng)值； rS 對(duì)照品溶液中的峰響應(yīng)值。 Cs對(duì)照品溶液中 USP 阿奇霉素 RS 的濃度； Cu樣品溶液中阿奇霉素的濃度； PUSP 阿奇霉素參比對(duì)照品的效價(jià)（g/mg 阿奇霉素）限度：按無水物計(jì)，9451030g/mg。 雜質(zhì)雜質(zhì) 無機(jī)雜質(zhì)無機(jī)雜質(zhì)熾灼殘?jiān)鼰胱茪堅(jiān)?：0.3， 炭化殘留物用 2ml 硝酸及 5 滴濃硫酸潤(rùn)濕。重金屬，重金屬，方法二方法二 ：25ppm。有機(jī)雜質(zhì)有機(jī)雜質(zhì)方法 1 備

9、注如果雜質(zhì)譜中有紅霉素 A 肟和紅霉素 A 亞胺醚，用方法 1。 使用的水電阻系數(shù)不小于 18 Mohm-cm.流動(dòng)相 乙腈：溶液 A（250:750） 。用 5M 氫氧化鉀調(diào)節(jié) pH 至10.550.05。溶液 A20mM 磷酸二氫鉀的水溶液。對(duì)照品儲(chǔ)備溶液稱取并用乙腈溶解一定量的 USP 德糖胺阿奇霉素參比對(duì)照品（USP Desosaminylazithromycin RS） ，USPN-去甲基阿奇霉素參比對(duì)照品（USP N-Demethylazithromycin RS） 、USP 氮雜紅霉素 A 對(duì)照品（USP Azaerythromycin A RS）和 USP 阿奇霉素參比對(duì)照品，

10、獲得已知濃度分別為45g/mL, 105g/mL, 150g/mL 和 160g/mL 的溶液。 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)5對(duì)照品溶液將對(duì)照品儲(chǔ)備溶液用流動(dòng)相稀釋，獲得已知德糖胺阿奇霉素 USP 參比對(duì)照品（USP Desosaminylazithromycin RS） ，N-去甲基阿奇霉素USP 參比對(duì)照品（USP N-Demethylazithromycin RS）和阿奇霉素 USP 參比對(duì)照品的濃度分別為 0.9g/ mL, 2.1g/mL 和 3.2g/mL 的溶液。樣品溶液 0.33mg/ml。稱取一定量的阿奇霉素，放入合適的容量瓶中，加入乙腈（乙腈用量為容

11、量瓶體積的 5%） ，若有必要可超聲處理使溶解。用流動(dòng)相稀釋至刻度，混勻。 色譜系統(tǒng)（見色譜法）類型：液相色譜儀。液相色譜儀配有一個(gè)安培型電化學(xué)檢測(cè)器（該檢測(cè)器配有一個(gè)雙玻璃碳電極，在氧化性保護(hù)模式下操作，電極 1 設(shè)置在 +0.70 V，電極 2 設(shè)置在+0.85 V） ； 色譜柱：色譜柱：分析柱：4.6-mm 15-cm，粒徑 3-m 的 L49 填充。檢測(cè)器預(yù)熱：28自動(dòng)進(jìn)樣器：5流速：1mL/ 分鐘。進(jìn)樣量：50l。系統(tǒng)適應(yīng)性系統(tǒng)適應(yīng)性進(jìn)樣：對(duì)照品溶液。適應(yīng)性要求分離度：阿奇霉素和氮雜紅霉素 A 之間的分離度應(yīng)不低于 3.0。拖尾因子：阿奇霉素峰的拖尾因子2.0，N-去甲基阿奇霉素峰的

12、拖尾因子2.5。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差：各雜質(zhì)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差10.0%。分析進(jìn)樣：對(duì)照品溶液和樣品溶液。 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)6備注記錄樣品溶液的色譜圖，時(shí)間不少于阿奇霉素峰保留時(shí)間的 3.3倍。按下列公式計(jì)算阿奇霉素中德糖胺阿奇霉素（Desosaminylazithromycin） 、N-去甲基阿奇霉素（N-Demethylazithromycin）和氮雜紅霉素 A 的百分比：(rU / rS)（Cs/Cu）F100式中：rU 樣品溶液中相應(yīng)待測(cè)物質(zhì)的峰面積； rS 對(duì)照品溶液中相應(yīng)待測(cè)物質(zhì)的峰面積。 Cs對(duì)照品溶液中 USP 參比對(duì)照品的濃度（g/ml） ； Cu樣品溶液

13、的濃度（g/ml） ； F單位轉(zhuǎn)換（0.001mg/g）按下列公式計(jì)算阿奇霉素中其他有關(guān)物質(zhì)的百分比： (rU / rS)（Cs/Cu）F100式中：rU 樣品溶液中其他單個(gè)雜質(zhì)的峰面積； rS 對(duì)照品溶液中阿奇霉素的峰面積。 Cs對(duì)照品溶液中 USP 阿奇霉素參比對(duì)照品的濃度（g/ml） ； Cu樣品溶液的濃度（g/ml） ； F單位轉(zhuǎn)換（0.001mg/g） 限度要求：見雜質(zhì)表 1.雜質(zhì)表 1名稱相對(duì)保留時(shí)間限度， （%）紅霉素 A 亞胺醚Erythrinycin A iminoether0.190.5德糖胺阿奇霉素（Desosaminylazithromycin）0.290.3紅霉素 A

14、 肟0.370.5 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)7Erythromycin A oximeN-去甲基阿奇霉素（N-Demethylazithromycin）0.490.7氮雜紅霉素 AAzaerythromycin A0.801.0阿奇霉素1.03-去氧基阿奇霉素（阿奇霉素 B）3-Deoxyazithromycin2.331.0總雜質(zhì)3.0方法方法 2備注如果雜質(zhì)譜中有紅霉素 A 肟和紅霉素 A 亞胺醚，用方法 1。 溶液 A1.8mg/ml 無水磷酸氫二鈉的水溶液。用 1N 氫氧化鈉溶液或 10%磷酸調(diào)節(jié) pH 至 8.9。溶液 B乙腈和甲醇的混合液（3:1）.溶液

15、C1.73mg/ml 磷酸二氫銨溶液。用氨水 TS 調(diào)節(jié) pH 至10.00.05。溶液 D甲醇、乙腈和溶液 C（7:6:7） 。流動(dòng)相見如下梯度表。時(shí)間（分鐘）溶液 A（%）溶液 B（%）05050254555304060802575815050935050系統(tǒng)適應(yīng)性溶液用溶液 D 溶解，獲得已知 USP 阿奇霉素雜質(zhì) F 參比對(duì)照品濃度為 0.0165mg/ml、USP 德糖胺阿奇霉素參比對(duì)照品濃度為0.027mg/ml 的溶液。 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)8對(duì)照品溶液用溶液 D 溶解，獲得已知 USP 阿奇霉素參比對(duì)照品濃度為86g/ml 的溶液。樣品溶液用溶液

16、D 溶解，獲得已知阿奇霉素濃度為 8.6mg/ml 的溶液。 色譜系統(tǒng) (見色譜法) 模式：液相色譜儀。 檢測(cè)器：UV210nm。 色譜柱：一個(gè) 4.6-mm 25-cm 色譜柱；用 5-m 粒徑的 L1 填充。 柱溫：60 C。 流速：1ml/分鐘。 進(jìn)樣量：50l。 系統(tǒng)適應(yīng)性 進(jìn)樣：系統(tǒng)適應(yīng)性溶液和對(duì)照品溶液。 峰谷比值：1.4，系統(tǒng)適應(yīng)性溶液。備注峰谷比值計(jì)算公式： R=Hp/Hv Hp：德糖胺阿奇霉素峰基線以上的高度； Hv：除德糖胺阿奇霉素峰和阿奇霉素雜質(zhì) F 峰外，基線以上的峰曲線最低點(diǎn)的高度。拖尾因子：0.81.5，對(duì)照品溶液。分析進(jìn)樣：對(duì)照品溶液和樣品溶液。備注在阿奇霉素 3

17、-N-氧化物之前和在 3-脫氧阿奇霉素（阿奇霉素B）之后析出的峰忽略不計(jì)。面積小于對(duì)照品溶液中阿奇霉素峰面積 0.1 倍的峰忽略不計(jì)。按下式計(jì)算阿奇霉素中各雜質(zhì)的百分比：(rU / rS)（Cs/Cu）PF1100/F2式中：rU 樣品溶液中各雜質(zhì)的峰響應(yīng)值； rS 對(duì)照品溶液中阿奇霉素的峰響應(yīng)值； Cs對(duì)照品溶液中 USP 阿奇霉素參比對(duì)照品的濃度（mg/ml） ； 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)9 Cu樣品溶液中阿奇霉素的濃度（mg/ml） ； P USP 阿奇霉素 RS 的效價(jià)（g/mg 阿奇霉素） F1單位轉(zhuǎn)換系數(shù)（0.001mg/g） ； F2相對(duì)響應(yīng)因子 (見表

18、 2)限度要求：見雜質(zhì)表 2雜質(zhì)表 2雜 質(zhì)相對(duì)保留時(shí)間相對(duì)響應(yīng)因子（F2）限度(, %)Azithromycin N-oxide 阿奇霉素-N-氧化物 a0.290.430.53-(N,N-didemethyl)-3-N-formylazithromycin3-(N,N-二去甲基)-3-N-甲酰阿奇霉素 b0.371.70.53-（N, N-didemethyl) azithromycin3-（N, N-二去甲基）阿奇霉素 c 0.431.00.5阿奇霉素雜質(zhì) F d0.513.80.5Desosaminylazithromycin德糖胺阿奇霉素 e0.541.00.33-N-4-(Acet

19、ylamino)phenyl-3,3-didemethylazithromycin 3-N-4-(乙酰氨基)苯基-3,3-二去甲基阿奇霉素0.55120.15N-demethyl-azithromycin N -去甲基-阿奇霉素 f0.611.00.7Azithromycin C （3-O-demethylazithromycin）阿奇霉素 C（3-O-去甲基阿奇霉素） g0.731.00.53-De(dimethylamino)-3-oxoazithromycin3-去（二甲氨基）-3-氧絡(luò)阿奇霉素 h0.761.50.53-N-4-(Acetylamino)phenylsulfonyl-3

20、-demethylazithromycin 3-N-4-(乙酰氨基)苯基磺?；?3-去甲基阿奇霉素0.79100.5 Azaerythromycin A氮雜紅霉素 A i0.831.00.5Azithromycin impurity P阿奇霉素雜質(zhì) P j0.921.00.2阿奇霉素1.02-Desethyl-2-propylazithromycin2-去乙基-2-丙基阿奇霉素 k1.231.00.5 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)10雜 質(zhì)相對(duì)保留時(shí)間相對(duì)響應(yīng)因子（F2）限度(, %)3-N-demethyl-3-N-(4-methylphenyl)sulfonylazi

21、thromycin3-N-去甲基-3-N-(4-甲苯基)磺酰阿奇霉素 l1.2650.53-Deoxyazithromycin (azithromycin B)3-去氧阿奇霉素（阿奇霉素 B） m1.311.01.0其他未知單個(gè)雜質(zhì)1.00.2總雜質(zhì)3.0 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)11【包裝和貯藏包裝和貯藏】密封保存標(biāo)示標(biāo)示標(biāo)簽應(yīng)說明此為一水合物還是為二水合物。用任何方法制得的阿奇霉素，其含量均應(yīng)該以無水物 C38H72N2O12來計(jì)算標(biāo)示。 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)12USP 附錄翻譯附錄翻譯紅外吸收紅外吸收6 種方法用于配制干性的試驗(yàn)樣品

22、和分析用的參照標(biāo)準(zhǔn)。在試驗(yàn)條件下，參照，指將樣品與溴化鉀充分混合。參照，指在試驗(yàn)條件下將樣品在礦物油中分散。參照，指在試驗(yàn)條件下將樣品懸浮于適當(dāng)?shù)膲浩逯g（如：氯化鈉或溴化鉀） 。參照，指用專論中特定的溶劑配制已知濃度溶液，將該溶液在 0.1mm 目篩下檢測(cè)。參照，指在試驗(yàn)條件下將樣品與用于削減全反射分析內(nèi)部的反射因素密切聯(lián)系。參照，指在試驗(yàn)條件下將樣品壓制成一個(gè)薄片進(jìn)行紅外微觀分析。削減全反射和技術(shù)被認(rèn)為是、和的替代方法，進(jìn)行定量試驗(yàn)，且參照標(biāo)準(zhǔn)圖譜也是按類似方法獲得的。 除非專論中有特別說明的，應(yīng)在 2.6m 到 15m（3800cm-1650cm-1）的變化范圍內(nèi)記錄試驗(yàn)樣品和美國(guó)藥典

23、參比對(duì)照品的圖譜。供試樣品的配制應(yīng)與參照對(duì)照品一致，應(yīng)先將供試樣品按參比對(duì)照品的特定條件干燥，有其他的特殊要求或采用的該參照對(duì)照品在未經(jīng)干燥的情況下除外。在相同波長(zhǎng)下，只有當(dāng)供試樣品與美國(guó)藥典參照對(duì)照品的配制一致時(shí)，可比性最大。 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)13某些情況下，樣品的紅外圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜存在差異，可視為存在多晶型物，這種結(jié)果不經(jīng)常被接受（見分光光度儀和光散過程） 。除非專論中有特別說明，應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行試驗(yàn)。如果紅外分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)圖譜出現(xiàn)差異，在等體積合適的溶劑中，溶解等量的待測(cè)樣品和對(duì)照品，在相同條件下，在相似的容器內(nèi)，蒸發(fā)溶液至干，對(duì)殘余物重復(fù)進(jìn)行試驗(yàn)。旋光度中的

24、旋光度中的藥品中比旋度781S表示由樣品溶液觀察到的光學(xué)旋光值計(jì)算而得到的比旋光度。除非特別說明，光學(xué)旋光值的測(cè)定是在 25時(shí)用 589nm 光線測(cè)得的。測(cè)定時(shí)使用光電偏光計(jì)，每一次測(cè)試前都需要將溶劑的旋光值調(diào)零。使用偏光計(jì)時(shí)，將同一個(gè)裝有空白溶劑的旋光管校正后，不少于 5 次測(cè)定的平均值是有效的。測(cè)試供試液旋光值時(shí)的溫度應(yīng)保持在固定值的0.5。使用同一個(gè)旋光管測(cè)定樣品以及空白溶劑。每次讀數(shù)據(jù)時(shí)保持旋光管的角度一致。將旋光管放置在每次光線都能夠從同一方向通過的地方。除非有其他規(guī)定，比旋光度是以干燥品或者以無水基準(zhǔn)來計(jì)算的。溶液的光學(xué)旋光值應(yīng)在 30min 內(nèi)測(cè)定，如果已知待測(cè)物質(zhì)會(huì)發(fā)生消旋或者

25、旋光改變，那么應(yīng)該小心注意將待測(cè)物溶解于溶劑與將溶液放于旋光管之間的時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)化。結(jié)晶性結(jié)晶性在專論中要求對(duì)藥品進(jìn)行結(jié)晶性分析時(shí)，需作此試驗(yàn)。操作詳細(xì)介紹按照【776】 ?！?76】中的結(jié)晶性特征物質(zhì)的結(jié)晶性可認(rèn)為是，確定與專論中所需結(jié)晶性一致的一種特征。除個(gè)別專論有特殊要求外，在干凈的玻璃載玻片上，放上一些礦物質(zhì)油包裹的樣品顆粒。用偏振顯微鏡檢測(cè)此混合物：當(dāng)顯微鏡的級(jí)數(shù)旋轉(zhuǎn)時(shí)，此顆粒顯示雙折射（干涉色）和消光現(xiàn)象。pH理論（略）pH 計(jì)校正用的緩沖溶液計(jì)校正用的緩沖溶液 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)14pH 計(jì)校正用的緩沖溶液可以按照附表進(jìn)行制備。國(guó)家科學(xué)與技術(shù)委員會(huì)（N

26、ational Institute of Science and Technology）有緩沖鹽所必需的純度。溶液可以存放在帶密封口或二氧化碳吸收管的硬質(zhì)玻璃或者聚乙烯瓶中。新制的溶液使用不能超過 3 個(gè)月，并且溶液要用無二氧化碳水制備。表中給出了緩沖溶液的 pH 值隨溫度的變化值。這里所列的是適應(yīng)于標(biāo)出摩爾濃度的溶液。然而，為了方便制備，在摩爾濃度的基礎(chǔ)上，與其標(biāo)出 1000g 溶劑不如稀釋成 1000ml體積。這里指示的量是考慮了其他因素計(jì)算出來的。標(biāo)準(zhǔn)緩沖液的 pH 值：溫度/草酸鉀0.05m苯二甲酸氫鉀 0.05m磷酸鹽0.05m硼砂0.01m氫氧化鈣飽和（25 ）101.674.00

27、6.929.3313.00151.674.006.909.2812.81201.684.006.889.2312.63251.684.016.869.1812.45301.684.026.859.1412.29351.694.026.849.1012.13401.694.046.849.0711.98451.704.056.839.0411.8451.74.066.839.0111.71 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)1501551.724.086.838.9911.57601.724.096.848.9611.45草酸鉀，0.05m精確稱取 KH3(C2O4)2H2O12

28、.61g，加水使溶解并稀釋至1000ml。苯二甲酸氫鉀，0.05m精確稱取在 100干燥 1 小時(shí)的KHC8H4O410.12g，加水使溶解并稀釋至 1000ml。磷酸鹽，0.05m精確稱取在 120干燥 2 小時(shí)的 Na2HPO43.53g 與3.39gKH2PO4，加水使溶解并稀釋至 1000ml。硼砂，0.01m精確稱取 Na2B4O710H2O3.80g，加水使溶解并稀釋至1000ml。避免空氣中二氧化碳進(jìn)入。氫氧化鈣，飽和（25）于 25，用無二氧化碳的水制備氫氧化鈣的飽和溶液，取上清液使用。存放時(shí)應(yīng)防止空氣中的二氧化碳進(jìn)入。一旦混濁，應(yīng)棄去重配。由于環(huán)境和所用 pH 計(jì)的不同，給出

29、一個(gè)適合于所有電勢(shì)測(cè)定 pH 計(jì)的用法說明是不實(shí)際的。一般的規(guī)則見一下幾段，這些規(guī)則是每個(gè)儀表廠家都實(shí)行的說明書。如果在使用前存在鹽橋，檢查電極。按需要補(bǔ)充鹽橋溶液，并且注意說明書或電極廠家標(biāo)出的其它事項(xiàng)。 為了校正 pH 計(jì)，應(yīng)選擇二種 pH 值相差小于 4 個(gè) pH 單位的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液，并使供試品的 pH 值處于二者之間。在測(cè)試溫度下向電池里加入第一種標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液。將溫度控制在溶液的溫度，調(diào)節(jié)刻度使儀器與表列數(shù)值一致。用第二種標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液多次沖洗電極和電池，然后在測(cè)試溫度將它加入到電池里。誤差應(yīng)不大于0.07pH 單位。若大于此偏差，則應(yīng)小心調(diào)節(jié)斜率或溫度使示值與第二種標(biāo)準(zhǔn)緩沖液的表列數(shù)值相

30、符。重復(fù)上述定位與斜率的調(diào)節(jié)操作，至儀器示值與標(biāo)準(zhǔn)緩沖液的規(guī)定數(shù)值相差不大于 0.02pH 單位。否則，需要檢查儀器或更換電極后，再行校正至符合要求。當(dāng)系統(tǒng)運(yùn)行滿意后，用少量待測(cè)液沖洗電極和電池幾次，將待測(cè)液加到電池里，讀取 pH 值。在測(cè)定 pH 時(shí)，用無二氧化 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)16碳水(見溶劑、指示劑與溶液的選擇的水)制備溶液或稀釋待測(cè)液。在所有的 pH測(cè)試中，都要使之有充足的時(shí)間穩(wěn)定。指示劑和測(cè)試紙（見溶劑、指示劑與溶液中的指示劑和指示測(cè)試紙）的 pH值足夠接近就符合要求了。關(guān)于緩沖液的討論及測(cè)試與分析所需的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液的成分，見溶劑、指示劑與溶液中的緩沖

31、溶液。水分，方法水分，方法 1方法方法1 （滴定滴定）用方法用方法1a測(cè)定水份，除非藥品單個(gè)說明中有特殊規(guī)定。測(cè)定水份，除非藥品單個(gè)說明中有特殊規(guī)定。方法方法1a（直接滴定）（直接滴定）試劑試劑按如下方法制備卡爾-費(fèi)休氏（Karl Fischer）試劑。將125g碘加入到含有670ml甲醇以及170ml吡啶的溶液中，冷卻。用250ml量筒量取100ml吡啶，并置于冰浴中，通入二氧化硫直到溶液體積達(dá)到200ml。將此溶液慢慢地滴加到冷卻的碘混合物中，振蕩，直至碘溶解。將此溶液移到儀器中，在標(biāo)定之前放置過夜。剛配制的此溶液1ml相當(dāng)于5mg水，但是它會(huì)逐漸變質(zhì)，故而應(yīng)在使用前一小時(shí)內(nèi)對(duì)其進(jìn)行標(biāo)定（

32、如果經(jīng)常用的話，則需要每天進(jìn)行標(biāo)定） 。使用時(shí)，避光。將此溶液在密封良好、具玻璃瓶塞的容器中避光冷藏保存。商業(yè)上可用的、穩(wěn)定的卡爾-費(fèi)休氏試劑也可以使用。除了吡啶、乙醇和甲醇以外，包括溶劑或者堿在內(nèi)的商業(yè)上銷售的試劑也可以使用。在一些藥品的單個(gè)說明書中，稀釋試劑應(yīng)該按制造商提供的方法進(jìn)行稀釋。甲醇或者其他合適的溶劑，如乙二醇甲醚也可作為稀釋液。樣品溶液樣品溶液除特別說明外，精密稱量大約含有10250mg水的供試品。如果供試品為推進(jìn)式氣霧劑，在冷藏室中至少冷凍2h。在10或者更高的溫度下，測(cè)試10.0ml的混合均勻的樣品到滴定終點(diǎn)。如果供試品為膠囊，則不能少于4粒。如果供試品為片劑，則應(yīng)在不影響

33、結(jié)果的大氣溫度、濕度的環(huán)境中將不少于4片的供試品磨成粉末后再進(jìn)行測(cè)試。如果供試品吸濕，用干燥的注射器將一定體積的甲醇或其他適宜的溶劑注入到已“去皮”的容器中，稱重，振蕩至供試品溶解。利用同一注射器將此溶液 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)17轉(zhuǎn)移到測(cè)定方法中的滴定瓶中。用另外的甲醇或其他適宜的溶劑重復(fù)此步驟，并將洗液一并加入到上述滴定瓶中，并立即滴定。按“剩余滴定中水溶液標(biāo)定剩余滴定中水溶液標(biāo)定”中的方法，測(cè)定溶解供試品、洗滌容器及注射器時(shí)所用相同體積的溶劑中的水分含量，單位為mg；從滴定供試品所得水含量的數(shù)值(單位mg)中減去上述數(shù)值。在100的密閉環(huán)境中干燥3h，于干燥器

34、中冷卻，稱重,其與容器初始重量的差值即為供試品的重量。試劑標(biāo)定試劑標(biāo)定將足量的甲醇或其他溶劑加入到滴定瓶中,以蓋住電極為限；再加入試劑，直到滴定終點(diǎn)特征性顏色出現(xiàn)，或者直到約200mv電壓下產(chǎn)生10050mA的直流電。要測(cè)定痕量的水分含量（1） ，則需要用酒石酸鈉作為便利的水分參考物質(zhì)。用差量法精確稱量150350mg酒石酸鈉（C4H4Na2O62H2O） ，并快速地加入到體系中，滴定到終點(diǎn)。水分平衡因子F，單位為mg水/ml試劑，可用以下式子計(jì)算：2（18.02/230.08）(W/V)其中，18.02、230.08分別為水、酒石酸鈉的分子質(zhì)量；W是二水合酒石酸鈉的質(zhì)量，單位mg；V為第二次

35、滴定時(shí)所消耗的試劑體積，單位ml。若要精密地測(cè)定水分含量（1） ，則須用純水作為參考物質(zhì)。用稱量管，或者已稱重的注射器（或微型稱量管） ，依據(jù)差量法，快速地稱取25250mg水，具體的稱取量依據(jù)試劑濃度以及滴定管的尺寸來選擇（參考容量?jī)x器容量?jī)x器 31），滴定到終點(diǎn)，用下式計(jì)算水分平衡因子F，單位mg水/ml試劑：W/V其中，W是水的重量，單位mg；V為所用試劑的體積，單位ml。測(cè)定方法測(cè)定方法除有特別說明外，量取3540ml甲醇或其他溶劑到滴定瓶中，用試劑滴定到儀器標(biāo)示的或者可視的滴定終點(diǎn)，以消耗任何存在的水分。 （此次滴定所消耗的體積沒有用途,因?yàn)樗粫?huì)列入計(jì)算中） 。迅速地加入樣品溶液，

36、搖勻，再次用試劑滴定到儀器標(biāo)示的或者可視的滴定終點(diǎn)。用下式計(jì)算樣品中的水分含量：SF其中，S為第二次滴定中所消耗的試劑體積，單位為ml；F為試劑的水分平衡因子。 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)18方法方法1b（剩余滴定）（剩余滴定）儀器、試劑、樣品溶液儀器、試劑、樣品溶液與方法1a相同。剩余滴定中水溶液的標(biāo)定剩余滴定中水溶液的標(biāo)定用甲醇或其他溶劑將2ml水稀釋到1000ml制成水溶液水溶液。按“試劑標(biāo)定試劑標(biāo)定”中的方法,用25.0ml試劑標(biāo)定此水溶液。用下式計(jì)算每1ml水溶液中水的含量，單位mg:VF/25其中，V為所消耗的試劑試劑體積；F為試劑的水分平衡因子。每周測(cè)定水

37、溶液中的水含量，并定期地對(duì)試劑進(jìn)行標(biāo)定。測(cè)定方法測(cè)定方法當(dāng)藥品的單個(gè)說明書中要求需要用方法1b測(cè)量含水量時(shí)，量取3540ml甲醇或其他溶劑于滴定瓶中，用試劑滴定到儀器標(biāo)示的或者可視的滴定終點(diǎn)。迅速地加入樣品溶液，搖勻；加入精確稱量的試劑(過量)。經(jīng)過足夠的時(shí)間讓反應(yīng)完全，用標(biāo)定過的水溶液滴定未消耗的試劑到儀器標(biāo)示的或者可視的滴定終點(diǎn)。用下式計(jì)算樣品中的水含量，單位mg：F(X-XR)其中，F(xiàn)為試劑的水分平衡因子；X為加入樣品后所加入試劑的體積，單位ml；X為用于中和未消耗掉的試劑所需已標(biāo)定的水溶液的體積，單位ml；R為V/25的比值（每ml試劑/每ml水溶液） 。方法方法1c（庫(kù)侖滴定）（庫(kù)侖

38、滴定）儀器裝置儀器裝置任何商業(yè)提供的包括一個(gè)配有合適電極和磁力攪拌器的絕對(duì)密閉的儀器都是可用的。該裝置的微處理器控制著分析過程并顯示最后的結(jié)果。當(dāng)消耗的電流能被完全測(cè)定時(shí)，不需要對(duì)儀器進(jìn)行校正。試劑試劑見方法1a。樣品溶液樣品溶液如果樣品為可溶性固體，精確稱量一定量樣品，用無水甲醇或其他溶劑將其溶解。液體樣品亦可以按此法制備，或者也可在其他無水溶劑中制備。如果樣品是不溶性固體，用無水溶劑將水分萃取出來，精確稱量后，注入到電解質(zhì)溶液中，或者依照蒸發(fā)的方法，在干燥的惰性氣體流中，在管中加熱樣品，水蒸氣和惰性氣體一同通入到電池中。 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)19測(cè)定方法測(cè)定方

39、法精確稱量大約含0.55mg水(或者按照儀器說明所標(biāo)示的量)的樣品溶液，用干燥的注射器注入陽(yáng)極，搖勻，用庫(kù)侖滴定法滴定到測(cè)定終點(diǎn)。從儀器顯示上直接讀取測(cè)試溶液中的水分量，并計(jì)算其在物質(zhì)中的百分量。做一次空白測(cè)定，以做一些必要的修正。灼燒殘?jiān)茻龤堅(jiān)?測(cè)定方法測(cè)定方法坩堝(可為硅、鉑、石英、瓷等材質(zhì))在60050下灼燒30min，然后在裝有硅膠或其他合適干燥劑的干燥器中冷卻，稱重。精確稱量供試品12g（或按各專論項(xiàng)下所規(guī)定的重量） ，置于該坩堝中。用少許硫酸（通常為1ml）濕潤(rùn)樣品，在盡可能低的溫度下，小心加熱至樣品完全炭化，冷卻，除有特別說明外，用少許硫酸（約1ml）濕潤(rùn)剩余物，小心加熱直到不

40、再有白色泡沫產(chǎn)生；然后在60050下（除有特別說明外）灼燒，直到殘留物完全灰化。在上述操作的過程中要確保不著火。在盛有硅膠或其他干燥劑的干燥器中冷卻，稱重，計(jì)算殘?jiān)陌俜趾?。除特別說明外，如果殘?jiān)亓砍^了各藥品項(xiàng)下的限定值，則須重復(fù)用硫酸濕潤(rùn)、加熱、灼燒等步驟，直到殘留物連續(xù)兩次的測(cè)量數(shù)值不大于0.5mg或者其百分含量在各專論的限定值內(nèi)。 灼燒時(shí)置于一個(gè)通氣性良好的罩內(nèi)，但要防止接觸空氣流，在盡可能低的溫度下達(dá)到碳的完全燃燒。如果想使用烘爐也可以，但要使溫度在60050下。烘爐的校正可以使用一個(gè)合適的數(shù)字溫度計(jì)，按標(biāo)準(zhǔn)和技術(shù)國(guó)家委員會(huì)的要求，用標(biāo)準(zhǔn)熱電偶去校準(zhǔn)工作熱電偶探頭。烘爐的測(cè)量和控

41、制電路要通過檢測(cè)爐子的溫度控制裝置進(jìn)行準(zhǔn)確驗(yàn)證，允許公差為25。重金屬，重金屬，方法二方法二 方法1 和 3 （略） 注：此方法用于汞、鉍、砷、銻、錫、鎘、銀、銅、鉬等金屬的檢測(cè) 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)20特殊試劑特殊試劑硝酸鉛貯備溶液硝酸鉛貯備溶液將159.8mg硝酸鉛溶解于100ml水中，加入1ml硝酸，用水稀釋到1000ml即得硝酸鉛備溶液。配制與儲(chǔ)存用的玻璃容器均不得含可溶解的鉛鹽。標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液臨用前，用水將10.0ml的硝酸鉛貯備溶液稀釋至100.0ml。每1ml標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液中含有相當(dāng)于10g的鉛。利用此標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液，配制成每100l標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液中含1g

42、供試樣品的對(duì)照溶液，此溶液中相當(dāng)于每1000000份待測(cè)樣品中有一份為鉛。方法方法此方法用于在方法I中不能產(chǎn)生清澈、無色的測(cè)試液的情況下，或者是由于自身聚合的性能而干擾形成金屬二價(jià)硫離子沉淀的物質(zhì)，或者是揮發(fā)及不揮發(fā)性油。注意注意此方法不能用于汞金屬的檢測(cè)。PH=3.5醋酸緩沖液醋酸緩沖液將25.0g醋酸銨溶解于25ml水中，加入38.0ml的6N鹽酸溶液。若需要的話，用6N鹽酸或6N氫氧化銨溶液調(diào)PH值至3.5，用水稀釋至100ml，混合均勻。標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)溶液向50ml的比色管中加入2ml標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（20g的鉛） ，然后用水稀釋至25ml。在PH計(jì)或精密PH試紙檢測(cè)下，用1N醋酸或6N氨水調(diào)

43、PH值至3.04.0，用水稀釋至40ml，混合均勻。樣品溶液樣品溶液按下式計(jì)算測(cè)試所需樣品的質(zhì)量，單位為g： 2.0/（1000L）其中，L為重金屬限度（%） 。將稱量的樣品置于坩堝中，加入足量的硫酸以濕潤(rùn)樣品，在低溫下小心地灼燒樣品直至完全炭化。 （在灼燒過程中此坩堝需蓋上,但不用蓋得太緊密） 。加入2ml硝酸及5滴硫酸，小心加熱至不再有氣泡產(chǎn)生。在500600爐子中灼燒,直至碳完全燃燒。冷卻后加入4ml的6N鹽酸，蓋上蓋子，在蒸氣浴中煮15min，然后移去蓋子，慢慢在蒸氣浴上蒸發(fā)至干。用一滴鹽酸溶液潤(rùn)濕殘留物后，再加入10ml熱水，煮2分鐘。然后滴加6N氨水調(diào)溶液為堿性（用石蕊試紙檢測(cè)），

44、用水稀釋至25ml后, 在PH計(jì)或精密PH試紙檢測(cè)下，用1N醋酸調(diào)PH值至3.04.0。如需要可過濾一遍，并用10ml水沖洗坩鍋和 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)21過濾器，將濾液和洗滌水倒入一個(gè)50ml的比色管中，最后用水稀釋至40ml，混合均勻。 測(cè)定方法測(cè)定方法向標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品溶液標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品溶液的試管中分別小心地加入2mlPH=3.5醋醋酸緩沖液酸緩沖液，然后加入1.2ml硫代乙酰胺丙三醇?jí)A性試液（Thioacetamide-glycerin base TS） ，用水稀釋到50ml，搖勻，放置2min，在白色背景下，自上而下透視：樣品溶液的顏色要不深于標(biāo)準(zhǔn)溶液的顏

45、色。 注硫代乙酰胺丙三醇?jí)A性試液（Thioacetamide-glycerin base TS）：將0.2ml硫代乙酰胺試液和1ml丙三醇?jí)A性試液混合，沸水浴加熱20秒鐘?；旌弦杭从眉磁?。硫代乙酰胺試液：將4g硫代乙酰胺溶解于100ml水中。丙三醇?jí)A性試液：向200g丙三醇中加水，使總重量達(dá)235g。再向其中加入140ml的1N氫氧化鈉溶液和50ml水。色譜中的系統(tǒng)適用性色譜中的系統(tǒng)適用性621高壓液相色譜法高壓液相色譜法高壓液相色譜法（HPLC），有時(shí)也稱為高效液相色譜法，是基于固體為固定相，液體為流動(dòng)相的分離技術(shù)。分離是通過分配、吸附或者離子交換過程來完成，取決于所用的固定相類型。分析有機(jī)

46、物方面 HPLC 比氣相有明顯優(yōu)勢(shì)。將待分析的混合物溶解在適宜的溶劑中，且大多數(shù)分離在室溫條件下即可進(jìn)行。因此，大部分樣品包括難揮發(fā)或者熱不穩(wěn)定性化合物可以被分離，而不需要分解或衍生成易揮發(fā)性物質(zhì)。大部分藥物分析是基于分配色譜，并且在 30 分鐘內(nèi)完成色譜分析。同氣相色譜一樣，化合物洗脫時(shí)間可以用容量因子 k 描述（參見符號(hào)術(shù)語(yǔ)表），它取決于被分析物的化學(xué)性質(zhì)、流動(dòng)相的組成和流速以及固定相的組成和表面積。柱長(zhǎng)也是分離度的重要的決定性因素。只有具有不同容量因子的混合物才可以被 HPLC 分開。儀器裝置儀器裝置液相色譜是由流動(dòng)相貯液瓶、在高壓下能夠使流動(dòng)相通過系統(tǒng)的泵、將樣品引入流動(dòng)相的進(jìn)樣器、色

47、譜柱、檢測(cè)器和數(shù)據(jù)采集裝置（例如 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)22計(jì)算機(jī)、積分儀或記錄儀）組成的。短的、口徑小且含有密度較高的固定相填料的色譜柱可以為化合物在流動(dòng)相和固定相間快速交換提供條件。除接收和報(bào)告檢測(cè)器輸出結(jié)果之外，計(jì)算機(jī)被用來控制色譜儀設(shè)置和操作，如此可為長(zhǎng)期無人操作提供必要條件。泵系統(tǒng)HPLC 泵系統(tǒng)定量地將流動(dòng)相通過高壓管路和裝置從儲(chǔ)液瓶運(yùn)送到色譜柱。現(xiàn)代的系統(tǒng)包括一個(gè)或更多計(jì)算機(jī)控制的計(jì)量泵，可根據(jù)編訂好的程序按梯度色譜的要求來變化流動(dòng)相的組成，或混合無梯度的流動(dòng)相（即流動(dòng)相有固定的溶劑比值）。然而，在預(yù)混和的無梯度流動(dòng)相中各種成分的比例，與那些用多個(gè)泵系

48、統(tǒng)混合的相比，更能準(zhǔn)確地控制。常見的情況為運(yùn)行壓力高達(dá) 5000psi 或更高，此時(shí)泵的轉(zhuǎn)送速度可達(dá) 10ml/min。用于定量分析的泵應(yīng)由惰性的耐流動(dòng)相腐蝕的材料組成，且在輸送流動(dòng)相過程中以不變的速率運(yùn)送流動(dòng)相，同時(shí)可以很小的波動(dòng)運(yùn)行很長(zhǎng)一段時(shí)間。進(jìn)樣器待測(cè)化合物在流動(dòng)相或其他適當(dāng)?shù)娜芤褐腥芙夂?，通過人工操作注射器或定量環(huán)，或者用自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)注入流動(dòng)相。后者是由一個(gè)轉(zhuǎn)盤或轉(zhuǎn)送架和一個(gè)進(jìn)樣裝置組成，轉(zhuǎn)盤或轉(zhuǎn)送架上面可以盛放帶有可刺破的膜或塞子的樣品瓶，進(jìn)樣裝置可以將樣品從樣品瓶中轉(zhuǎn)移定量環(huán)中從而進(jìn)入色譜系統(tǒng)。有些自動(dòng)進(jìn)樣器可以通過程序設(shè)計(jì)來控制樣品體積、進(jìn)樣次數(shù)和定量環(huán)清洗循環(huán)、進(jìn)樣時(shí)間間隔和

49、其它操作變量。當(dāng)柱頭壓力小于 70 個(gè)大氣壓（約 1000 psi）時(shí)可以用注射器通過隔膜手動(dòng)進(jìn)樣。在較高壓力的情況下，必須有一個(gè)進(jìn)樣閥。一些閥系統(tǒng)將定量環(huán)合并在一起，將定量環(huán)內(nèi)所裝的供試品溶液在流動(dòng)相中轉(zhuǎn)移至色譜柱。在另一些系統(tǒng)中，供試品溶液通過注射器注入空腔中，再轉(zhuǎn)動(dòng)閥開關(guān)，使其進(jìn)入流動(dòng)相。色譜柱對(duì)于大多數(shù)藥物的分析，是通過將供試品溶液中的化合物分配于流動(dòng)相和固定相之間來實(shí)現(xiàn)分離的。由非極性流動(dòng)相和極性固定相組成的系統(tǒng)稱為正相色譜，反之，由極性流動(dòng)相和非極性固定相組成的系統(tǒng)稱為反相色譜。分配色譜常被用于分子量小于 1000 的碳?xì)浠衔锏姆治觥；衔飳?duì)固定相的親合力，以及因此而得到的在柱中

50、的保留時(shí)間，可以通過調(diào)節(jié)流動(dòng)相的極性高低來控制。流動(dòng)相的極性可以通過加入第二種和第三種有時(shí)甚至是第四種成分而改變。 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)23現(xiàn)在典型的反相液相色譜的固定相是由有機(jī)相化學(xué)鍵合到硅膠或其他材料上而成。粒徑通常為 310m，但制備柱的大小可以達(dá)到 50m 甚至更高。帶有薄層有機(jī)相包裹的小顆?？梢蕴峁┑唾|(zhì)量傳遞阻力，因此可以提供化合物在固定相和流動(dòng)之間的快速傳遞。色譜柱的極性取決于鍵合官能團(tuán)的極性，它包括從相對(duì)無極性的十八烷基硅烷到強(qiáng)極性的硝基。液體，未鍵合的固定相基本上不得溶于流動(dòng)相。即使如此，常常需要用固定相來預(yù)飽和流動(dòng)相以防止固定相從色譜柱中被剝離。

51、包裹在支持物上的聚合物固定相具有更好的耐用性。用于分析分離的色譜柱內(nèi)徑通常為 25mm；制備色譜采用大內(nèi)徑的色譜柱。對(duì)色譜柱升溫可能會(huì)獲得更有效的分離，但由于存在固定相降解或流動(dòng)相揮發(fā)的可能性，故很少將其加熱到 60以上。除非在個(gè)論中另有規(guī)定，色譜柱應(yīng)在室溫下使用。離子交換色譜用于分析分離分子量不超過 1500 的水溶性的、離子化的化合物。固定相通常是合成的有機(jī)樹脂，陽(yáng)離子交換樹脂含有負(fù)電荷活性位點(diǎn)，用于分離堿性物質(zhì)，例如胺；而陰離子交換樹脂含有正電荷活性位點(diǎn)，用于分離還有負(fù)電荷基團(tuán)的化合物，例如磷酸、磺酸或羧酸。水溶性離子或離子化的化合物吸附到樹脂上，親合能力的不同產(chǎn)生了色譜分離。流動(dòng)相的

52、pH、溫度、離子類型、離子濃度和有機(jī)物修飾劑可以影響平衡，可以調(diào)節(jié)這些變量來獲得所需的分離度。在分子排阻色譜中，色譜柱中填充的是多孔固定相。按照化合物分子量的大小進(jìn)行色譜分離。分子量大的分子不能進(jìn)入孔內(nèi)而不保留地排出色譜柱。分子量小的分子進(jìn)入孔內(nèi)隨分子量降低而保留時(shí)間增加。這些色譜柱典型地應(yīng)用于測(cè)量聚合物和大分子的降解（見分子排阻色譜一節(jié)）。檢測(cè)器許多藥典中的 HPLC 方法需要使用分光光度度檢測(cè)器。這種檢測(cè)器由在色譜柱的末端安裝的一個(gè)流通池構(gòu)成。紫外光穿過流通池進(jìn)入檢測(cè)器。當(dāng)化合物從色譜柱上洗脫時(shí)，通過流通池產(chǎn)生吸收，導(dǎo)致測(cè)量的能量水平發(fā)生變化。固定波長(zhǎng)、可變波長(zhǎng)和多波長(zhǎng)的檢測(cè)器被廣泛應(yīng)用。

53、固定波長(zhǎng)檢測(cè)器只能在一個(gè)單波長(zhǎng)下操作，典型的為 254nm，由低壓力汞燈發(fā)射光源?？勺儾ㄩL(zhǎng)檢測(cè)器含有一個(gè)連續(xù)的光源，例如氘燈或高壓氙燈，用一個(gè)單色器或干涉濾光片 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)24在操作者所選擇的波長(zhǎng)處產(chǎn)生單色光。裝有單色器的可變波長(zhǎng)檢測(cè)器的波長(zhǎng)準(zhǔn)確性需要按照生產(chǎn)廠商的程序方法進(jìn)行檢查，如果檢測(cè)的波長(zhǎng)偏離校正值超過3nm，就要對(duì)儀器進(jìn)行重新校正?，F(xiàn)在的可變波長(zhǎng)檢測(cè)器在分析過程中可以程序地變化波長(zhǎng)。多波長(zhǎng)檢測(cè)器可以同時(shí)在兩個(gè)或更多波長(zhǎng)下測(cè)量吸收情況。在二極管陣列多波長(zhǎng)檢測(cè)器中，連續(xù)發(fā)射的光透過樣品池，然后分解成其組成的波長(zhǎng)，用二極管陣列分別檢測(cè)。這些檢測(cè)器可以

54、獲得在整個(gè)紫外-可見范圍的吸收數(shù)據(jù)，因而可以提供給分析人員在多個(gè)、選擇性波長(zhǎng)處的圖譜以及各洗脫峰的圖譜。二極管陣列檢測(cè)器與固定波長(zhǎng)檢測(cè)器或可變波長(zhǎng)檢測(cè)器相比，有較低的信噪比，因此不適于分析低濃度的化合物。示差折光檢測(cè)器測(cè)量單獨(dú)的流動(dòng)相折光率與從色譜柱中流出的含有待測(cè)物質(zhì)的流動(dòng)相折光率之間的差異。示差折光檢測(cè)器用于檢測(cè)非紫外吸收的化合物，但其靈敏度比紫外檢測(cè)器低。它們對(duì)溶劑組成、流速和溫度的微小變化非常敏感，因此需要一個(gè)參比柱來獲得滿意的基線。熒光檢測(cè)器對(duì)那些本身具有熒光以及可以通過化合物的轉(zhuǎn)化或與熒光試劑在特定的官能團(tuán)下配對(duì)轉(zhuǎn)變成熒光衍生物的化合物敏感。如果需要衍生化，可以色譜分離前衍生，試劑

55、也可以在進(jìn)入檢測(cè)器前將其引入流動(dòng)相中。電位、伏特或極譜電化學(xué)檢測(cè)器用于定量測(cè)定能在工作電極處被氧化或被還原的樣品。這些檢測(cè)器有選擇性、靈敏可信，但要求流動(dòng)中不能溶解有氧氣和還原性金屬離子。必須使用無脈沖型泵，并且要確保流動(dòng)相的 pH、離子強(qiáng)度和溫度保持恒定。工作電極容易被伴隨產(chǎn)生的具有可變響應(yīng)值的還原產(chǎn)物污染。還有碳糊電極的電化學(xué)檢測(cè)器可以方便地用于定量測(cè)定納克級(jí)的易氧化化合物，特別是酚類和兒茶酚類。新的檢測(cè)器陸續(xù)被開發(fā)，以克服正在使用的檢測(cè)器的缺點(diǎn)。數(shù)據(jù)采集裝置現(xiàn)在的數(shù)據(jù)工作站可以收集和貯存檢測(cè)器輸出的結(jié)果，并且可以輸出峰高、峰面積、樣品鑒定和方法變量的色譜圖。它們(數(shù)據(jù)采集裝置)也可以用于

56、液相色譜編程，控制大多數(shù)變量，提供長(zhǎng)時(shí)間的無人值守操作。 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)25數(shù)據(jù)也可以用簡(jiǎn)單的手動(dòng)測(cè)量記錄儀或單獨(dú)的積分儀來采集，它們可以完成從輸出峰面積到輸出帶有峰面積和峰高結(jié)果計(jì)算的色譜圖，以及貯存后來操作過程中得到的數(shù)據(jù)。操作步驟操作步驟流動(dòng)相組成可以很大地影響色譜性能和被分離的混合化合物的分離度。對(duì)于準(zhǔn)確定量的測(cè)定，必須使用高純度的試劑和“HPLC 級(jí)”有機(jī)溶劑。所使用水的質(zhì)量要求具有低電導(dǎo)和低紫外吸收。特定類型檢測(cè)器（例如電化學(xué)、質(zhì)譜）所用的試劑，可能要求制定附加的條件，以避免潛在的干擾。對(duì)于容量因子 k 來說，組成比溫度的影響更大。在分配色譜中，

57、決定分離的分配系數(shù)可以通過在流動(dòng)相中加入其它化合物而發(fā)生變化。在離子交換色譜中，流動(dòng)相的 pH 值和離子強(qiáng)度以及組成都會(huì)影響容量因子。使用在色譜運(yùn)行的過程中連續(xù)變化流動(dòng)相溶劑的組成的技術(shù)叫做梯度洗脫或程序變?nèi)軇┫疵?。它有時(shí)用于容量因子差別很大的混合化合物的色譜分離。對(duì)于溶劑組成變化敏感的檢測(cè)器，例如示差折光檢測(cè)器，使用梯度洗脫技術(shù)比較困難。檢測(cè)器必須具有一個(gè)很寬的線性動(dòng)態(tài)范圍，被檢測(cè)化合物必須與其它干擾物分離。化合物的線性動(dòng)態(tài)范圍是指檢測(cè)器信號(hào)響應(yīng)值與化合物的量成正比的范圍。對(duì)于定量檢測(cè)的最大適應(yīng)性，此范圍應(yīng)該有大約三個(gè)數(shù)量級(jí)。HPLC 系統(tǒng)可以通過使用已知濃度的對(duì)照品與峰響應(yīng)值作圖，按外標(biāo)法

58、或內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行校正。如果使用自動(dòng)進(jìn)樣器，可以用外標(biāo)法獲得可信的定量結(jié)果。這種方法可以通過直接比較供試品和對(duì)照品溶液峰響應(yīng)值而直接獲得。如果必須使用注射器進(jìn)樣，由于在高壓下的不重現(xiàn)性，需用已知量的不具干擾性的化合物做內(nèi)部校正來獲得比較好的定量結(jié)果，將內(nèi)標(biāo)物加入到供試品溶液和對(duì)照品溶液中，將藥物峰面積響應(yīng)值與內(nèi)標(biāo)物峰面積響應(yīng)值的比值進(jìn)行比較。由于儀器設(shè)備、進(jìn)樣和技術(shù)的正常變化，需要進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以確保給定的操作系統(tǒng)是可用的。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的主要特征在下文中闡述。對(duì)結(jié)果解釋，見色譜圖解釋一節(jié)。系統(tǒng)適用性系統(tǒng)適用性系統(tǒng)適用性是構(gòu)成氣相和液相色譜方法所必須的部分。它們常用作證明色 2016 年 4 月 1 日 第 頁(yè) 共 28 頁(yè)26譜體系的分辨率和重現(xiàn)性適合所進(jìn)行的分析。試驗(yàn)依據(jù)于儀器、電子設(shè)備、分析操作和待分析的樣品，組成一個(gè)完整的體系。分辨率，R， （注參見符號(hào)術(shù)語(yǔ)表）具有代表柱子效率N的功能，用于說明待洗脫化合物能否彼此分別開來，建立系統(tǒng)的完全分辯能力，保證內(nèi)標(biāo)物能從藥物中分離出來。柱效率也可以說明系統(tǒng)適用性，尤其色譜圖中僅有一個(gè)峰時(shí)；然而，與直接測(cè)量相比，可靠性低。柱子效率是峰清晰度的一個(gè)量度，對(duì)于檢驗(yàn)痕量化合物比較重要。在操作中，標(biāo)準(zhǔn)溶液的重復(fù)進(jìn)樣要滿足精密度的要求。除非個(gè)別專論的特殊要求外，如果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差要求2