超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測

1、 超敏反應(yīng)超敏反應(yīng)/ /變態(tài)反應(yīng)變態(tài)反應(yīng) Hypersensitivity/AllergyHypersensitivity/Allergy 定義：機(jī)體接觸到某種抗原并且致敏后，再次受到定義：機(jī)體接觸到某種抗原并且致敏后，再次受到相同抗原刺激時(shí)，出現(xiàn)相同抗原刺激時(shí)，出現(xiàn)生理功能紊亂生理功能紊亂或或組織細(xì)胞損組織細(xì)胞損傷傷的異常適應(yīng)性免疫應(yīng)答。的異常適應(yīng)性免疫應(yīng)答。變應(yīng)原變應(yīng)原(Allergen):(Allergen):引起超敏反應(yīng)的抗原引起超敏反應(yīng)的抗原超敏反應(yīng)分為四型超敏反應(yīng)分為四型 （依發(fā)生機(jī)制和臨床特點(diǎn)）（依發(fā)生機(jī)制和臨床特點(diǎn)）： 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) ( (速發(fā)型超敏反應(yīng)速發(fā)型超敏反應(yīng))

2、 ) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) ( (細(xì)胞溶解型或細(xì)胞毒型細(xì)胞溶解型或細(xì)胞毒型) ) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) ( (免疫復(fù)合物型或血管炎型免疫復(fù)合物型或血管炎型) ) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) ( (遲發(fā)型超敏反應(yīng)遲發(fā)型超敏反應(yīng)) ) 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 特點(diǎn)：特點(diǎn)：1.1.發(fā)生快，恢復(fù)快；發(fā)生快，恢復(fù)快；2.2.常引起生理功能紊亂，一般無組織損傷；常引起生理功能紊亂，一般無組織損傷； 3.3.由由IgEIgE介導(dǎo)，介導(dǎo)，肥大細(xì)胞肥大細(xì)胞和和嗜堿性粒細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞參與參與4.4.有明顯的個(gè)體差異和遺傳背景。有明顯的個(gè)體差異和遺傳背景。 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 一一. .參與參與型超敏反應(yīng)的成分型超敏反

3、應(yīng)的成分 ( (一一) )變應(yīng)原變應(yīng)原 藥物或化學(xué)物質(zhì)藥物或化學(xué)物質(zhì) - - 青霉素、磺胺等青霉素、磺胺等 吸入性變應(yīng)原吸入性變應(yīng)原 - - 花粉、屋塵花粉、屋塵( (塵螨、皮屑、塵螨、皮屑、真菌的孢子等真菌的孢子等 食物變應(yīng)原食物變應(yīng)原 - - 魚、蝦、肉、蛋、牛奶等魚、蝦、肉、蛋、牛奶等 接觸性變應(yīng)原接觸性變應(yīng)原-工業(yè)產(chǎn)品及合成物工業(yè)產(chǎn)品及合成物 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng)( (二二) )抗體IgEIgE( (三三) )細(xì)胞細(xì)胞肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞IgEIgE Fc Fc受體受體嗜酸性粒細(xì)胞嗜酸性粒細(xì)胞 型超敏反應(yīng)的常見疾病型超敏反應(yīng)的常見疾病（一）過敏性休克（一）過敏性

4、休克 藥物過敏性休克藥物過敏性休克 血清過敏性休克血清過敏性休克（二）呼吸道過敏反應(yīng)（二）呼吸道過敏反應(yīng) 過敏性鼻炎過敏性鼻炎( (枯草熱枯草熱) )、支氣管哮喘、支氣管哮喘（三）消化道過敏反應(yīng)（三）消化道過敏反應(yīng)（四）皮膚過敏反應(yīng)（四）皮膚過敏反應(yīng) 蕁麻疹、濕疹、蕁麻疹、濕疹、血管血管神經(jīng)性水腫。神經(jīng)性水腫。 蕁麻疹蕁麻疹 濕濕 疹疹結(jié)膜炎結(jié)膜炎哮喘病哮喘病 I I型超敏反應(yīng)免疫學(xué)檢測項(xiàng)目型超敏反應(yīng)免疫學(xué)檢測項(xiàng)目皮膚試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理：變應(yīng)原 致敏者皮膚 Ag+IgE （M、B) 皮膚挑刺、劃痕皮內(nèi)注射釋放生物活性介質(zhì)20-30m局部皮膚出現(xiàn)紅暈、紅斑、風(fēng)團(tuán) 陽性 皮膚試驗(yàn)皮內(nèi)試驗(yàn)方法皮膚消毒變應(yīng)

5、原提取液注入前臂內(nèi)側(cè)皮內(nèi)（0.01-0.02ml）2-3mm的皮丘兩種間距2.2-5.0cm 15-25分鐘觀察結(jié)果陰性對照-生理鹽水陽性對照-鹽酸組胺 皮膚試驗(yàn)假陽性原因假陽性原因變應(yīng)原稀釋液偏酸或偏堿患者有皮膚劃痕癥抗原不純和被污染抗原量注射過多假陰性原因假陰性原因變應(yīng)原抗原性喪失或濃度過低患者皮膚反應(yīng)較低受試者正使用抗組胺類藥或激素類藥注射部位過深或注射量太少 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 臨床意義 尋找變應(yīng)原 預(yù)防藥物或疫苗過敏 應(yīng)用評價(jià) 過敏原有限 食物過敏與皮膚試驗(yàn)相關(guān)性較差 選擇過敏原應(yīng)結(jié)合實(shí)際情況型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 血清總IgEIgE檢測常用方法：免疫比濁法 化學(xué)發(fā)光免疫法 酶聯(lián)免疫

6、吸附法-適用于中小實(shí)驗(yàn)室臨床意義：升高見于型超敏反應(yīng)性疾病， 寄生蟲感染， IgE型多發(fā)性骨髓瘤應(yīng)用評價(jià)：應(yīng)建立當(dāng)?shù)厝巳篒gEIgE水平的參考區(qū)間 臨床實(shí)驗(yàn)室常用型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 特異性IgEIgE檢測（sIgE） 放射變應(yīng)原吸附試驗(yàn) 免疫印跡測定法 斑點(diǎn)酶免疫印跡法斑點(diǎn)酶免疫印跡法實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 用用NCNC膜作為固相支持物，檢測區(qū)的不同區(qū)域包被有特膜作為固相支持物，檢測區(qū)的不同區(qū)域包被有特異性的過敏原。檢測時(shí)將稀釋的病人血清加入反應(yīng)槽內(nèi)，異性的過敏原。檢測時(shí)將稀釋的病人血清加入反應(yīng)槽內(nèi)，血清中的血清中的sIgEsIgE與與NCNC膜上的相應(yīng)過敏原結(jié)合，再加入酶標(biāo)記膜上的相應(yīng)過敏原結(jié)合

7、，再加入酶標(biāo)記的抗人的抗人IgEIgE抗體，此抗體會與檢測區(qū)抗體，此抗體會與檢測區(qū)NCNC膜上的膜上的sIgEsIgE結(jié)合，然結(jié)合，然后加入底物顯色。通過顯色區(qū)帶確定血清中含有哪種后加入底物顯色。通過顯色區(qū)帶確定血清中含有哪種sIgEsIgE，進(jìn)而判斷待檢者對哪種過敏原過敏。，進(jìn)而判斷待檢者對哪種過敏原過敏。稀釋好的洗液將檢測條要充分浸透，放在搖床上搖稀釋好的洗液將檢測條要充分浸透，放在搖床上搖10分鐘分鐘倒掉洗液，加入稀釋好的測試者血清，放于搖床室溫反應(yīng)倒掉洗液，加入稀釋好的測試者血清，放于搖床室溫反應(yīng)1.5小時(shí)小時(shí) 倒掉小槽中的血清，依次加入洗液，震蕩倒掉小槽中的血清，依次加入洗液，震蕩1

8、0分鐘，重復(fù)三次分鐘，重復(fù)三次 每槽加入堿性磷酸酶標(biāo)記的抗人每槽加入堿性磷酸酶標(biāo)記的抗人IgE，放于搖床上室溫反應(yīng)，放于搖床上室溫反應(yīng)30分鐘分鐘將堿性磷酸酶標(biāo)記的抗人將堿性磷酸酶標(biāo)記的抗人IgE倒掉，用洗液洗三次，每次倒掉，用洗液洗三次，每次10分鐘分鐘 加入堿性磷酸酶底物，放于搖床，避光反應(yīng)約加入堿性磷酸酶底物，放于搖床，避光反應(yīng)約10分鐘分鐘 去掉底物溶液，用純水洗三次，每次去掉底物溶液，用純水洗三次，每次5分鐘分鐘操作步驟操作步驟將檢測條放在干燥紙上，等檢測條完全干燥后判定檢測結(jié)果將檢測條放在干燥紙上，等檢測條完全干燥后判定檢測結(jié)果結(jié)果分析結(jié)果分析 通過顯色區(qū)帶確定血清中含有哪種通過顯

9、色區(qū)帶確定血清中含有哪種sIgE，進(jìn)而判斷，進(jìn)而判斷待檢者對哪種過敏原過敏。待檢者對哪種過敏原過敏。臨床意義臨床意義 slgE測定是體外檢測變應(yīng)原的重要手段，主要用于測定是體外檢測變應(yīng)原的重要手段，主要用于型超敏反應(yīng)的診斷。該檢測條包被有多種特異性過敏原，通型超敏反應(yīng)的診斷。該檢測條包被有多種特異性過敏原，通過檢測血漿（血清）中過敏原過檢測血漿（血清）中過敏原slgE，篩查待檢者對何種過敏，篩查待檢者對何種過敏原過敏，為臨床進(jìn)行脫敏治療奠定基礎(chǔ)。原過敏，為臨床進(jìn)行脫敏治療奠定基礎(chǔ)。 II II 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng)定義：定義： II型超敏反應(yīng)又稱細(xì)胞毒型（cytotoxic type）或細(xì)胞溶

10、解型（cytolytic type）超敏反應(yīng)，它是由靶細(xì)胞表面的抗原與相應(yīng)IgG或IgM類抗體結(jié)合后，在補(bǔ)體、巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞參與下，引起的以細(xì)胞溶解或組織損傷為主的病理性免疫反應(yīng)。 II II 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng)特點(diǎn)：特點(diǎn)： 1. 直接或間接與細(xì)胞有關(guān)直接或間接與細(xì)胞有關(guān) 2. IgG 或或 IgM 介導(dǎo)介導(dǎo) 3. 補(bǔ)體、吞噬細(xì)胞、補(bǔ)體、吞噬細(xì)胞、NK細(xì)胞參與細(xì)胞參與 4. 造成細(xì)胞溶解或功能紊亂造成細(xì)胞溶解或功能紊亂 II II 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng)靶細(xì)胞：正常組織細(xì)胞、改變的自身組織細(xì)胞、修飾的自身組織細(xì)胞抗原：同種異型抗原、共同抗原、變性自身抗原、外來抗原 抗體：IgG和IgM類抗

11、體參與細(xì)胞損傷的物質(zhì)：補(bǔ)體 、吞噬細(xì)胞、NK細(xì)胞變應(yīng)原輸血反應(yīng)（輸血反應(yīng)（transfusion reaction） 新生兒溶血（新生兒溶血（hemolytic of the newborn）自身免疫性溶血性貧血（自身免疫性溶血性貧血（autoimmune hemolytic anemia）藥物過敏性血細(xì)胞減少藥物過敏性血細(xì)胞減少甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)（甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)（Graves disease）鏈球菌感染后腎小球腎炎鏈球菌感染后腎小球腎炎Type II Hypersensitivity Reactions:Type II Hypersensitivity Reactions:Examples of

12、 DiseasesExamples of Diseases甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)(Graves病病) IIII型超敏反應(yīng)免疫學(xué)檢測項(xiàng)目型超敏反應(yīng)免疫學(xué)檢測項(xiàng)目患者紅細(xì)胞患者紅細(xì)胞Coombs試劑試劑檢測紅細(xì)胞上不完全抗體檢測紅細(xì)胞上不完全抗體直接直接Coombs試驗(yàn)試驗(yàn)試管法操作步驟試管法操作步驟用生理鹽水配用生理鹽水配5%紅細(xì)胞懸液紅細(xì)胞懸液取潔凈小試管取潔凈小試管2支，支，1管加管加1滴滴5%紅細(xì)胞懸液，另一管加生理鹽紅細(xì)胞懸液，另一管加生理鹽水作對照水作對照 在生理鹽水和在生理鹽水和5%紅細(xì)胞懸液中分別加入診斷試劑一滴，使其紅細(xì)胞懸液中分別加入診斷試劑一滴，使其混勻，室溫稍待片刻混

13、勻，室溫稍待片刻1000r離心離心1 min或或3000r離心離心15s。 取出試管先以肉眼觀察有無溶血，再輕輕搖動試管，如有凝集，取出試管先以肉眼觀察有無溶血，再輕輕搖動試管，如有凝集，則為陽性結(jié)果；如無凝集，應(yīng)在室溫延長則為陽性結(jié)果；如無凝集，應(yīng)在室溫延長1530 min的反應(yīng)時(shí)的反應(yīng)時(shí)間，再離心看結(jié)果。間，再離心看結(jié)果。結(jié)果分析結(jié)果分析 生理鹽水對照不應(yīng)發(fā)生凝集，為均勻渾濁的乳狀液。生理鹽水對照不應(yīng)發(fā)生凝集，為均勻渾濁的乳狀液。在紅細(xì)胞懸液中，如紅細(xì)胞凝集成片狀，邊緣皺褶如花在紅細(xì)胞懸液中，如紅細(xì)胞凝集成片狀，邊緣皺褶如花邊狀或邊緣松散為陽性。如與對照相同，為陰性。邊狀或邊緣松散為陽性。

14、如與對照相同，為陰性。 臨床意義臨床意義 直接直接Coombs試驗(yàn)用于檢測患者紅細(xì)胞上不完全抗體，試驗(yàn)用于檢測患者紅細(xì)胞上不完全抗體，Coombs試驗(yàn)陽性可見于自身免疫性溶血性貧血、冷凝集素試驗(yàn)陽性可見于自身免疫性溶血性貧血、冷凝集素綜合征、藥物誘發(fā)的免疫性溶血性貧血、新生兒同種免疫性綜合征、藥物誘發(fā)的免疫性溶血性貧血、新生兒同種免疫性溶血病、某些高球蛋白血癥患者，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)溶血病、某些高球蛋白血癥患者，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕、惡性腫瘤等。濕、惡性腫瘤等?；颊哐灏屑t細(xì)胞致敏紅細(xì)胞Coombs試劑檢測血清中的抗紅細(xì)胞抗體檢測血清中的抗紅細(xì)胞抗體間接間接Coombs試驗(yàn)試驗(yàn)微柱法操

15、作步驟微柱法操作步驟撕開微柱凝膠卡密封紙，標(biāo)記撕開微柱凝膠卡密封紙，標(biāo)記加加1%篩選紅細(xì)胞篩選紅細(xì)胞50l及受檢者血清及受檢者血清25l37孵育孵育15min離心機(jī)離心離心機(jī)離心10min，1000r/min 觀察結(jié)果，如紅細(xì)胞懸浮在反應(yīng)管頂部或凝膠中，則為陽觀察結(jié)果，如紅細(xì)胞懸浮在反應(yīng)管頂部或凝膠中，則為陽性結(jié)果；反之，如紅細(xì)胞沉于凝膠底部（管底尖部），則為性結(jié)果；反之，如紅細(xì)胞沉于凝膠底部（管底尖部），則為陰性結(jié)果。陰性結(jié)果。結(jié)果分析結(jié)果分析 - 100%的紅細(xì)胞沉在微管的底部的紅細(xì)胞沉在微管的底部+/- 100%的紅細(xì)胞沉在微管的下端的紅細(xì)胞沉在微管的下端1/3之內(nèi)之內(nèi)1+ 80%的紅細(xì)

16、胞沉在微管的下端的紅細(xì)胞沉在微管的下端2/3之內(nèi)之內(nèi)2+ 80%的紅細(xì)胞沉在微管的上端的紅細(xì)胞沉在微管的上端2/3之內(nèi)之內(nèi)3+ 80%的紅細(xì)胞沉在微管的上端的紅細(xì)胞沉在微管的上端1/3之內(nèi)之內(nèi)4+ 凝集的細(xì)胞全部處于微管的頂部凝集的細(xì)胞全部處于微管的頂部d.p. 雙群雙群Hemo. 溶血溶血反應(yīng)格局及判斷標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)格局及判斷標(biāo)準(zhǔn) 臨床意義臨床意義 間接間接Coombs試驗(yàn)用于檢測患者游離血清中的不完試驗(yàn)用于檢測患者游離血清中的不完全抗體。此實(shí)驗(yàn)多用于檢測母體全抗體。此實(shí)驗(yàn)多用于檢測母體Rh（D）抗體，以便及）抗體，以便及早發(fā)現(xiàn)和避免新生兒溶血癥的發(fā)生，亦可對紅細(xì)胞不相早發(fā)現(xiàn)和避免新生兒溶血癥的發(fā)

17、生，亦可對紅細(xì)胞不相容的輸血所產(chǎn)生的血型抗體進(jìn)行檢測。容的輸血所產(chǎn)生的血型抗體進(jìn)行檢測。 III III 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 定義：定義： III型超敏反應(yīng)是指由可溶性免疫復(fù)合物沉積于局部或全身多處毛細(xì)血管基底膜，通過激活補(bǔ)體,并在血小板、嗜堿性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等的參與下，引起的以充血水腫、局部壞死和中性粒細(xì)胞浸潤為主要特征的炎癥反應(yīng)和組織損傷。Blood cell antigenAdsorbed drug orDrug metaboliteAntibody to drugcomplementLysis藥物過敏性血細(xì)胞減少藥物過敏性血細(xì)胞減少 III III 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 特點(diǎn)：特

18、點(diǎn)： 1. 形成中等大小形成中等大?。?06 Da）、）、可溶性可溶性（19s）復(fù)復(fù)合物（合物（IC)， IC沉積在血管基底膜上沉積在血管基底膜上 2. IgG,IgM 或或 IgA介導(dǎo)介導(dǎo) 3. 補(bǔ)體、中性粒細(xì)胞參與補(bǔ)體、中性粒細(xì)胞參與 4. 造成血管及周圍組織炎癥造成血管及周圍組織炎癥 免疫復(fù)合物易于形成與沉積的因素免疫復(fù)合物易于形成與沉積的因素1.1.抗原成分在體內(nèi)長期滯留抗原成分在體內(nèi)長期滯留2.2.血管通透性增強(qiáng)血管通透性增強(qiáng)3.3.組織的解剖學(xué)及血流動力學(xué)組織的解剖學(xué)及血流動力學(xué) 免疫復(fù)合物易沉積于靜脈壓較高及形成渦流的毛細(xì)血管迂回處，免疫復(fù)合物易沉積于靜脈壓較高及形成渦流的毛細(xì)血

19、管迂回處，如腎小球基底膜及關(guān)節(jié)滑膜、肝、脾、血管等部位。如腎小球基底膜及關(guān)節(jié)滑膜、肝、脾、血管等部位。4.4.免疫復(fù)合物的性質(zhì)免疫復(fù)合物的性質(zhì) 中等大小，可溶性免疫復(fù)合物中等大小，可溶性免疫復(fù)合物 組織內(nèi)沉積組織內(nèi)沉積。 III III 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng)Arthus反應(yīng)及類反應(yīng)及類Arthus反應(yīng)反應(yīng) (局部免疫復(fù)合物病局部免疫復(fù)合物病)血清病（血清?。╯erum sickness）鏈球菌感染后腎小球腎炎鏈球菌感染后腎小球腎炎類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis）系統(tǒng)性紅斑狼瘡（系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）等）等臨床常見的臨床常見的III型超敏反應(yīng)性疾病型超

20、敏反應(yīng)性疾病 III III 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) RA RA 患者手指關(guān)節(jié)實(shí)質(zhì)性損傷患者手指關(guān)節(jié)實(shí)質(zhì)性損傷IIIIII型超敏反應(yīng)免疫學(xué)檢測項(xiàng)目型超敏反應(yīng)免疫學(xué)檢測項(xiàng)目 PEG比濁法比濁法實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 本試驗(yàn)是檢測抗原非特異性循環(huán)免疫復(fù)合物的一種方本試驗(yàn)是檢測抗原非特異性循環(huán)免疫復(fù)合物的一種方法。法。PEG是環(huán)氧乙烷和水的多聚物，為一種不帶電荷的直是環(huán)氧乙烷和水的多聚物，為一種不帶電荷的直鏈大分子多糖。終濃度為鏈大分子多糖。終濃度為3%4%的的PEG能相對選擇性地能相對選擇性地沉淀沉淀CIC。用分光光度計(jì)測定濁度，反應(yīng)沉淀物含量。用分光光度計(jì)測定濁度，反應(yīng)沉淀物含量。 臨床意義臨床意義 循

21、環(huán)免疫復(fù)合物（循環(huán)免疫復(fù)合物（Circulationimmunecomplex，CIC）又稱可溶）又稱可溶性免疫復(fù)合物，分子量為性免疫復(fù)合物，分子量為50萬萬100萬，沉降系數(shù)萬，沉降系數(shù)8.819S，它不易被，它不易被吞噬細(xì)胞吞噬，又不能經(jīng)腎小球排出，可較長時(shí)間在血液中循環(huán)，一吞噬細(xì)胞吞噬，又不能經(jīng)腎小球排出，可較長時(shí)間在血液中循環(huán)，一旦大量循環(huán)免疫復(fù)合物沉積于組織中，則引起組織損傷及相關(guān)的免疫旦大量循環(huán)免疫復(fù)合物沉積于組織中，則引起組織損傷及相關(guān)的免疫復(fù)合物病。復(fù)合物病。CIC陽性常見于：陽性常見于： 1. 部分自身免疫性疾病，如部分自身免疫性疾病，如SLE，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等；，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等； 2. 膜增殖性腎炎，鏈球菌感染后腎炎；膜增殖性腎炎，鏈球菌感染后腎