xsl新新動物細胞融合與單克隆抗體

1、1會計學xsl新新動物細胞融合與單克隆抗體新新動物細胞融合與單克隆抗體2、動物融合的過程、動物融合的過程 動物細胞融合過程示意圖動物細胞融合過程示意圖不同DNA的兩個細胞 滅活的病毒有絲分裂兩個完整的雜交細胞 酶解法，如纖維素酶或果膠酶酶解法，如纖維素酶或果膠酶2.2.動物細胞融合時需要進行去壁處理嗎？為什么？動物細胞融合時需要進行去壁處理嗎？為什么？無需，因為動物細胞無細胞壁無需，因為動物細胞無細胞壁3.3.植物體細胞雜交誘導原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些植物體細胞雜交誘導原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？離心、電激等物理方法；離心、電激等物理方法；PEGPEG等化學方法等化學方法4.4.動物細胞

2、融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法動物細胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？嗎？能能 還可以利用滅活的病毒進行誘導還可以利用滅活的病毒進行誘導5.5.植物體細胞雜交應先進行原生質(zhì)體的融合再進行組織培養(yǎng)植物體細胞雜交應先進行原生質(zhì)體的融合再進行組織培養(yǎng)形形 成完整的雜種個體，動物細胞融合后能形成雜種動物成完整的雜種個體，動物細胞融合后能形成雜種動物個體嗎？個體嗎？不能不能不同不同DNADNA的的兩個細胞兩個細胞2、動物融合的過程、動物融合的過程誘導融合誘導融合方法：聚乙二方法：聚乙二醇、醇、滅活病毒滅活病毒、電激等、電激等雜交細胞雜交細胞細胞膜的流動性細胞膜的流動性（3 3）、）、應

3、用：主要用于制備單克隆抗體應用：主要用于制備單克隆抗體(2)(2)、意義：意義： 克服遠緣雜交不親和性，成為研究細胞遺傳、細克服遠緣雜交不親和性，成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。主要用于制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體獲得雜種植株獲得雜種植株主要用途主要用途物理、化學方法物理、化學方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒物理（離心、振物理（離心、振動、電刺激）動、電刺激）化學（聚乙二醇）化學（聚乙二醇）誘導方法誘導方法使細胞分散后誘使細胞分散后誘導細胞融合導細胞融合去除細胞壁后誘去除細胞壁后誘導原生質(zhì)體融合導原生質(zhì)體融

4、合 細胞融合的方法細胞融合的方法細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞膜的流動性、細胞膜的流動性、植物細胞全能性植物細胞全能性細胞融合的原理細胞融合的原理動物細胞融合動物細胞融合植物體細胞雜交植物體細胞雜交比較項目比較項目3 3、比較、比較意義：意義：克服遠緣雜交障礙克服遠緣雜交障礙使遠緣雜交成為可能使遠緣雜交成為可能復習？1.1.抗體是由何種細胞產(chǎn)生的？抗體是由何種細胞產(chǎn)生的？漿細胞漿細胞2.2.一個淋巴細胞一個淋巴細胞( (漿細胞漿細胞) )能分泌多種抗體嗎？能分泌多種抗體嗎？ 每一個淋巴細胞只分泌一種特異性抗體。每一個淋巴細胞只分泌一種特異性抗體。3.3.一種抗原侵入機體之后，引起機體免疫反應

5、產(chǎn)生的抗體只有一種抗原侵入機體之后，引起機體免疫反應產(chǎn)生的抗體只有一種嗎？一種嗎？ 動物在免疫反應過程中，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達百萬種以上動物在免疫反應過程中，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達百萬種以上。4. 4. 簡述獲得抗體的傳統(tǒng)途徑？簡述獲得抗體的傳統(tǒng)途徑？ 抗原抗原 動物體動物體 抗體抗體 抗原不純抗原不純 抗體不純抗體不純（二）、單克隆抗體（二）、單克隆抗體刺激漿細胞閱讀課本第閱讀課本第5354頁內(nèi)頁內(nèi)內(nèi)容，回答相關問題是內(nèi)容，回答相關問題是。6.6.如何獲得化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體？如何獲得化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體？ 體外培養(yǎng)單個淋巴細胞，提取分泌的抗體體外培養(yǎng)單個淋

6、巴細胞，提取分泌的抗體7.7.體外培養(yǎng)淋巴細胞能無限增殖嗎體外培養(yǎng)淋巴細胞能無限增殖嗎? ?怎樣解決這個怎樣解決這個問題？問題？5.5.這種方法獲得的抗體有什么缺陷？這種方法獲得的抗體有什么缺陷？ 產(chǎn)量低，純度低，特異性差產(chǎn)量低，純度低，特異性差設計方案：設計方案：一個一個B B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體淋巴細胞只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細胞能夠在體外大量增殖小鼠骨髓瘤細胞能夠在體外大量增殖雜種細胞雜種細胞（二）、單克隆抗體（二）、單克隆抗體1、原始獲得抗體的方法：、原始獲得抗體的方法：向動物體內(nèi)反復注射某種向動物體內(nèi)反復注射某種抗原，使動物產(chǎn)生抗體，然后，從動物血清中分離所抗原，使動物

7、產(chǎn)生抗體，然后，從動物血清中分離所需抗體。（缺點：產(chǎn)量低、純度低、特異性差）需抗體。（缺點：產(chǎn)量低、純度低、特異性差）制備過程制備過程免疫小鼠免疫小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細胞培養(yǎng)骨髓瘤細胞融合融合B B淋巴細胞淋巴細胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體專一抗體檢驗陽性檢驗陽性專一抗體專一抗體檢驗陽性檢驗陽性注射到小鼠體內(nèi)注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)單克隆抗體單克隆抗體克隆雜交細胞克隆雜交細胞分開不同雜交細胞，克隆分開不同雜交細胞，克隆專一抗體，檢驗陽性細胞專一抗體，檢驗陽性細胞 單克隆抗體制備過程示意圖單克隆抗體制備過程示意圖多種雜交細胞多種雜交細胞 單克隆抗體制

8、備過程單克隆抗體制備過程注射特注射特定抗原定抗原誘導融合誘導融合克隆培養(yǎng)，檢測，篩選，克隆培養(yǎng)，檢測，篩選，能分泌所需抗體能分泌所需抗體的雜交瘤細胞的雜交瘤細胞注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體小鼠小鼠相應的相應的漿細胞漿細胞骨髓瘤骨髓瘤細胞細胞選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基 ，篩選，篩選多種細胞多種細胞雜交瘤細胞雜交瘤細胞體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)從培養(yǎng)液中提取從培養(yǎng)液中提取從小從小鼠鼠腹水腹水中提取中提取說明：雜交瘤細說明：雜交瘤細胞特點：既能大量胞特點：既能大量繁殖，又能產(chǎn)生專繁殖，又能產(chǎn)生專一抗體。一抗體。第一次篩選：選第一次篩選：選出雜交瘤細胞。出雜交瘤細胞。第二次篩選：選第二次篩選：

9、選出能分泌所需抗體出能分泌所需抗體的雜交瘤細胞。的雜交瘤細胞。 由單個由單個B細胞克隆形成的細胞群細胞克隆形成的細胞群產(chǎn)生的化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體產(chǎn)生的化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體 。3、單克隆抗體：、單克隆抗體：優(yōu)點：特異性強、靈敏度高、并可大量制備優(yōu)點：特異性強、靈敏度高、并可大量制備 。4.4.單克隆抗體的應用：單克隆抗體的應用：（1 1）作為診斷試劑：）作為診斷試劑：具有準確、高效、簡易具有準確、高效、簡易、快速的特點。、快速的特點。 “生物導彈生物導彈”：借助單克隆抗體的導向作用：借助單克隆抗體的導向作用，能將藥物定向帶到癌細胞所在位置，在原，能將藥物定向帶到癌細胞所在位置，在

10、原位置殺死癌細胞。位置殺死癌細胞。( (在抗體上連接藥物）在抗體上連接藥物）優(yōu)點：療效高、毒副作用小優(yōu)點：療效高、毒副作用?。?）用于治療疾病和運載藥物。）用于治療疾病和運載藥物。知識結(jié)構兩個過程兩個過程動物細胞培養(yǎng)過程動物細胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程三個三個“一一”一個誘導細胞融合的新方法一個誘導細胞融合的新方法 滅活的病毒滅活的病毒一個新細胞一個新細胞雜交瘤細胞雜交瘤細胞一個優(yōu)勢一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性單克隆抗體特異性 強、靈敏度高的優(yōu)勢強、靈敏度高的優(yōu)勢B2.2.單克隆抗體是由下列哪種細胞產(chǎn)生的單克隆抗體是由下列哪種細胞產(chǎn)生的（ ）A.BA.B淋巴細胞淋巴細胞 B.T

11、B.T淋巴細胞淋巴細胞 C.C.骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞 D.D.雜交瘤細胞雜交瘤細胞 D3.3.（多選）（多選）19751975年米爾斯坦和柯勒成功地獲得了單克隆抗體。下年米爾斯坦和柯勒成功地獲得了單克隆抗體。下列細胞中與單克隆抗體的制備有關的是列細胞中與單克隆抗體的制備有關的是（ ）A.A.效應效應B B細胞細胞 B BT T淋巴細胞淋巴細胞C.C.骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞 D D雜交瘤細胞雜交瘤細胞 A B C DB B體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)量的細胞群足夠數(shù)量的細胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔A AC C 4.4.下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術的方法，設計的生產(chǎn)破下圖為某同學根

12、據(jù)雜交瘤技術的方法，設計的生產(chǎn)破傷風桿菌的實驗方案傷風桿菌的實驗方案制備單克隆抗體制備單克隆抗體不能，沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)不能，沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)生單一抗體的生單一抗體的B B淋巴細胞。淋巴細胞。(1).(1).該實驗方案的目的是：該實驗方案的目的是：_(2).(2).該方案能達到預期效果嗎？為什么？該方案能達到預期效果嗎？為什么？(3).A(3).A是從小鼠的脾臟中取得是從小鼠的脾臟中取得_ _ 該細胞能該細胞能夠產(chǎn)生夠產(chǎn)生_ _ 。(4).(4).圖中圖中B B為為_過程，常用過程，常用_作為誘導劑，該細胞繼承作為誘導劑，該細胞繼承_的遺傳特性，既能的遺傳特性

13、，既能_,_,又能又能_。(5).C(5).C過程指細胞培養(yǎng)，該過程包括過程指細胞培養(yǎng)，該過程包括_培養(yǎng)和培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個階段，其中培養(yǎng)兩個階段，其中_代以內(nèi)的的細胞屬于細胞株。代以內(nèi)的的細胞屬于細胞株。B B淋巴細胞淋巴細胞抗體抗體細胞融合細胞融合滅活的病毒滅活的病毒雙親細胞雙親細胞分泌抗體分泌抗體無限增殖無限增殖原代原代傳代傳代5050C C2.2.動物細胞融合和植物原生質(zhì)融合決定于動物細胞融合和植物原生質(zhì)融合決定于 ( )( )A.A.細胞膜的流動性細胞膜的流動性 B B細胞膜的選擇透過性細胞膜的選擇透過性C.C.細胞質(zhì)的流動性細胞質(zhì)的流動性D D細胞質(zhì)酶的活性細胞質(zhì)酶的活性 A一一.選

14、擇題選擇題D4.4.只能使動物細胞融合的常用誘導方法是只能使動物細胞融合的常用誘導方法是 （ ）A APEGPEG B B滅活的病毒滅活的病毒 C C電刺激電刺激 D D離心離心B二二. .簡答題簡答題1.1.淋巴細胞是由動物體淋巴細胞是由動物體-中的中的-細胞分細胞分化發(fā)育而來的?；l(fā)育而來的。2.2.雜交瘤細胞從培養(yǎng)基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是雜交瘤細胞從培養(yǎng)基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是-骨髓骨髓造血干造血干主動運輸主動運輸提示：植物體細胞雜交技術與動物細胞融合技術基本提示：植物體細胞雜交技術與動物細胞融合技術基本相同，不同的是植物體細胞融合前需去掉細胞壁，然相同，不同的是植物

15、體細胞融合前需去掉細胞壁，然后再融合；動物細胞融合是兩個體細胞直接融合。后再融合；動物細胞融合是兩個體細胞直接融合。 提示：哺乳動物感染抗原后，其體內(nèi)會形成相應的提示：哺乳動物感染抗原后，其體內(nèi)會形成相應的B B淋巴細胞，淋巴細胞，B B淋巴細胞能分泌相應的抗體凝聚或殺死這些抗原。動物在免疫淋巴細胞能分泌相應的抗體凝聚或殺死這些抗原。動物在免疫反應的過程中，每一種反應的過程中，每一種B B淋巴細胞能分泌一種特異性抗體，要想淋巴細胞能分泌一種特異性抗體，要想獲得大量的特異性抗體，必須使能分泌該單一抗體的獲得大量的特異性抗體，必須使能分泌該單一抗體的B B淋巴細胞淋巴細胞大量增殖。大量增殖。B B

16、淋巴細胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外淋巴細胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外增殖；骨髓瘤細胞是一種癌細胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖；骨髓瘤細胞是一種癌細胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。因此，把一種增殖，但不能產(chǎn)生抗體。因此，把一種B B淋巴細胞與骨髓瘤細胞淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行細胞融合，產(chǎn)生雜交瘤細胞，它會兼有兩個親本細胞的特進行細胞融合，產(chǎn)生雜交瘤細胞，它會兼有兩個親本細胞的特性性在體外培養(yǎng)條件下能不斷增殖，同時能產(chǎn)生出某種特異在體外培養(yǎng)條件下能不斷增殖，同時能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。性的抗體。 主要用于制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體獲得雜種植株獲得

17、雜種植株主要用途主要用途物理、化學方法物理、化學方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒物理（離心、振物理（離心、振動、電刺激）動、電刺激）化學（聚乙二醇）化學（聚乙二醇）誘導方法誘導方法使細胞分散后誘使細胞分散后誘導細胞融合導細胞融合去除細胞壁后誘去除細胞壁后誘導原生質(zhì)體融合導原生質(zhì)體融合 細胞融合的方法細胞融合的方法細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞膜的流動性、細胞膜的流動性、植物細胞全能性植物細胞全能性細胞融合的原理細胞融合的原理動物細胞融合動物細胞融合植物體細胞雜交植物體細胞雜交比較項目比較項目3 3、比較、比較意義：意義：克服遠緣雜交障礙克服遠緣雜交障礙使遠緣雜交成為可能使遠緣雜交成為

18、可能6.6.如何獲得化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體？如何獲得化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體？ 體外培養(yǎng)單個淋巴細胞，提取分泌的抗體體外培養(yǎng)單個淋巴細胞，提取分泌的抗體7.7.體外培養(yǎng)淋巴細胞能無限增殖嗎體外培養(yǎng)淋巴細胞能無限增殖嗎? ?怎樣解決這個怎樣解決這個問題？問題？5.5.這種方法獲得的抗體有什么缺陷？這種方法獲得的抗體有什么缺陷？ 產(chǎn)量低，純度低，特異性差產(chǎn)量低，純度低，特異性差設計方案：設計方案：一個一個B B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體淋巴細胞只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細胞能夠在體外大量增殖小鼠骨髓瘤細胞能夠在體外大量增殖雜種細胞雜種細胞（二）、單克隆抗體（二）、單克隆抗體1、原始獲得抗體的