糖化血紅蛋白的標準化

1、三三 目錄目錄HbA1c常規(guī)測定方法常規(guī)測定方法1HbA1c檢測的標準化檢測的標準化2HbA1c檢測的規(guī)范化檢測的規(guī)范化3 HbA1c的常規(guī)測定的常規(guī)測定 41978年年-第一臺第一臺商品化儀器問世商品化儀器問世1988年年-美國糖尿病協(xié)會（美國糖尿病協(xié)會（ADA）建議）建議： HbA1c 常規(guī)檢測項目常規(guī)檢測項目 目前檢測方法目前檢測方法 原理原理 不同方法測定糖化血紅蛋白不同的組分不同方法測定糖化血紅蛋白不同的組分 HbA1c 、HbA1（A1a + A1b + A1c）或總糖化血紅蛋白）或總糖化血紅蛋白目前皆以目前皆以HbA1c或等同于或等同于HbA1c來報告結(jié)果來報告結(jié)果 HbA1c測

2、定方法測定方法我國（室間質(zhì)評）我國（室間質(zhì)評） 國際（國際（CAP 能力驗證）能力驗證） 2011年年 2008年年 2011年年 1995年年 免疫法免疫法 26% 36% 71% 11% 離子交換色譜法離子交換色譜法 53% 44% 28% 24% 親和層析法親和層析法 10% 9% 1% 54% 其它其它 11% 11% 電泳法電泳法 11% 從室間質(zhì)評回報統(tǒng)計的在不同時間使用不同的GHB測定方法的實驗室比例目錄目錄HbA1c常規(guī)測定方法常規(guī)測定方法1HbA1c檢測的標準化檢測的標準化2HbA1c檢測的規(guī)范化檢測的規(guī)范化3標準化標準化目的目的: :實現(xiàn)檢驗結(jié)果的可比性實現(xiàn)檢驗結(jié)果的可比性

3、是保證檢驗是保證檢驗質(zhì)量手段質(zhì)量手段意義（益處）意義（益處）可以建立起普遍接受（可用）的參考區(qū)間可以建立起普遍接受（可用）的參考區(qū)間可以合并分析、比較不同醫(yī)學(xué)中心的研究資可以合并分析、比較不同醫(yī)學(xué)中心的研究資料料, ,促進醫(yī)學(xué)研究和研究成果的轉(zhuǎn)化促進醫(yī)學(xué)研究和研究成果的轉(zhuǎn)化能夠有效地應(yīng)用詢證醫(yī)學(xué)和檢驗醫(yī)學(xué)實踐指能夠有效地應(yīng)用詢證醫(yī)學(xué)和檢驗醫(yī)學(xué)實踐指南南 HbA1c標準化標準化 九十年代中晚期，美國糖尿病控制與并發(fā)九十年代中晚期，美國糖尿病控制與并發(fā)癥研究癥研究(DCCT)和英國大規(guī)模的前瞻性糖尿和英國大規(guī)模的前瞻性糖尿病研究病研究(UKPDS)的研究結(jié)果顯示：強化的的研究結(jié)果顯示：強化的血糖控

4、制能顯著降低糖尿病并發(fā)癥的危險血糖控制能顯著降低糖尿病并發(fā)癥的危險和進展，強調(diào)了和進展，強調(diào)了HbA1c在糖尿病患者中在糖尿病患者中血糖控制監(jiān)測的作用。血糖控制監(jiān)測的作用。 從那時起，大多數(shù)臨床糖尿病組織都將從那時起，大多數(shù)臨床糖尿病組織都將 HbA1c作為糖尿病治療目標，作為糖尿病治療目標，糖化血紅蛋糖化血紅蛋白檢測白檢測在世界范圍內(nèi)被廣泛應(yīng)用在世界范圍內(nèi)被廣泛應(yīng)用. 1993 CAP SURVEY(mean 2SD) 1050%實驗室實驗室報告報告 HbA1c 21%實驗室實驗室報告報告HbA129%實驗室實驗室報告報告GHB多數(shù)實驗室結(jié)多數(shù)實驗室結(jié)果與靶值偏倚果與靶值偏倚很大，不具有很大

5、，不具有可比性可比性NGSP （National Glycohemoglobin Standardisation Program：美國美國國家糖化血紅蛋白標準化計劃國家糖化血紅蛋白標準化計劃） 11 美國臨床化學(xué)協(xié)會（AACC）在1993年成立分委會進行GHB測定的標準化工作，使不同實驗室（方法）的結(jié)果可溯源至DCCT的參考結(jié)果。標準化工作由美國國家糖化血紅蛋白標準化計劃（NGSP）指導(dǎo)委員會于1996年完成。 目的：標準化糖化血紅目的：標準化糖化血紅蛋白檢測，使臨床實驗蛋白檢測，使臨床實驗室的測定結(jié)果與室的測定結(jié)果與DCCT具有可比性具有可比性該體系在校準和規(guī)范商該體系在校準和規(guī)范商 業(yè)業(yè)化

6、化HbA1cHbA1c檢測領(lǐng)域發(fā)揮了極檢測領(lǐng)域發(fā)揮了極其重要的作用。其重要的作用。NGSP對廠家方法的認證對廠家方法的認證 12NGSP要求：生產(chǎn)廠家有責(zé)任確保其生產(chǎn)的試劑、校準品、質(zhì)控要求：生產(chǎn)廠家有責(zé)任確保其生產(chǎn)的試劑、校準品、質(zhì)控品、（色譜柱）所測結(jié)果與認證結(jié)果保持一致品、（色譜柱）所測結(jié)果與認證結(jié)果保持一致認證標準：逐步提高認證標準：逐步提高認證有效期：認證有效期：1年年/docs/methods.pdfNGSP對實驗室的認證對實驗室的認證由由NGSP的二級參考實驗室來對實驗室進行認證工作的二級參考實驗室來對實驗室進行認證工作得到認證的實驗室所測結(jié)果

7、是可靠的得到認證的實驗室所測結(jié)果是可靠的認證標準：逐步提高認證標準：逐步提高認證有效期：認證有效期：1年年/docs/labs.pdf我國目前有近我國目前有近20家實驗室得到認證家實驗室得到認證CAP SURVEY (mean 2SD) 147.08.09.010.011.012.013.014.015.016.017.018.019.020.021.0%GHB19932003Total GHBDCCTTargetHbA1HbA1c2003年，年，90%實驗室以實驗室以HbA1c報告結(jié)果，室間報告結(jié)果，室間CV 5%， 測定值與靶值的偏倚測定值與靶值的偏倚

8、0.8%HbA1c IFCC國際標準化國際標準化 151995年年IFCC成立成立HbA1c標準化工作組，旨在建立具標準化工作組，旨在建立具有高計量學(xué)水準的參考系統(tǒng)，用于有高計量學(xué)水準的參考系統(tǒng)，用于HbA1c檢測的檢測的標準化和校準，標準化和校準， 實現(xiàn)實現(xiàn)HbA1c測定的全球可比性測定的全球可比性明確定義明確定義HbA1c 葡萄糖與血紅蛋白葡萄糖與血紅蛋白鏈鏈N末端纈氨酸殘基穩(wěn)定結(jié)合的化合物末端纈氨酸殘基穩(wěn)定結(jié)合的化合物.建立一個特異測定建立一個特異測定HbA1c的參考方法的參考方法 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜或高效液相色譜串聯(lián)毛高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜或高效液相色譜串聯(lián)毛 細管電泳細管電泳制備純化

9、的制備純化的HbA1c和和 HbA0標準物質(zhì)標準物質(zhì)建立國際參考實驗室網(wǎng)絡(luò)建立國際參考實驗室網(wǎng)絡(luò) 完成了與指定比對方法的比較工作完成了與指定比對方法的比較工作 參考方法原理參考方法原理HbA0六肽六肽HbA1c六肽六肽谷氨酸內(nèi)切酶谷氨酸內(nèi)切酶 參考方法流程參考方法流程 17溶血液制備溶血液制備酶解酶解HPLC串聯(lián)毛細管串聯(lián)毛細管電泳電泳HPLC串聯(lián)質(zhì)譜串聯(lián)質(zhì)譜IFCC結(jié)果與指定比對方法結(jié)果之間的關(guān)系結(jié)果與指定比對方法結(jié)果之間的關(guān)系HbA1c-NGSP = 0.915 HbA1c-IFCC + 2.15 (r2= 0.998) Clin Chem. 2004, 50: 166-174 回歸方程能

10、夠?qū)FCC的結(jié)果與DCCT所得出的有著重要臨床意義的結(jié)果聯(lián)系起來。IFCC 結(jié)果與比對方法結(jié)果的關(guān)系結(jié)果與比對方法結(jié)果的關(guān)系 19 IFCC HbA1c (mmol/mol) NGSP HbA1c (%) JDS HbA1c (%) Swedish HbA1c (%) eAG(mmol/l) 42 6 5.8 50歲歲 5.3 7.0 53 76.6 6.13 8.6 64 87.7 7.2 10.2 7598.7 8.3 11.8 86109.7 9.413.4 971110.7 10.514.9 1081211.7 11.6 16.5 小結(jié)小結(jié)臨床試驗確立了臨床試驗確立了HbA1c和糖尿

11、病并發(fā)癥之間和糖尿病并發(fā)癥之間的相關(guān)性，將這些試驗結(jié)果統(tǒng)一后，的相關(guān)性，將這些試驗結(jié)果統(tǒng)一后，NGSP非常成功地降低由于不同實驗方法和不同實非常成功地降低由于不同實驗方法和不同實驗室所造成驗室所造成HbA1c的差異。的差異。IFCC的參考方的參考方法有利于將劑量溯源升級到更高等級的參考法有利于將劑量溯源升級到更高等級的參考系統(tǒng)。系統(tǒng)。已建立起這兩種單位相互轉(zhuǎn)換的等式。報告已建立起這兩種單位相互轉(zhuǎn)換的等式。報告何種單位由各國自行決定。何種單位由各國自行決定。小結(jié)小結(jié)HbA1c是糖尿病血糖控制的金標準，是國是糖尿病血糖控制的金標準，是國際專家委員會、際專家委員會、WHO和許多國家的糖尿病和許多國家

12、的糖尿病診斷標準，其測定結(jié)果應(yīng)該標準化診斷標準，其測定結(jié)果應(yīng)該標準化HbA1c的測定方法有多種，測定原理、組的測定方法有多種，測定原理、組分各不相同，由于分各不相同，由于IFCC及及NGSP的標準化的標準化工作，目前都以工作，目前都以HbA1c或等同于或等同于HbA1c來來報告結(jié)果報告結(jié)果國際上存在不同的標準化組織，不同組織國際上存在不同的標準化組織，不同組織的結(jié)果數(shù)值是不同的的結(jié)果數(shù)值是不同的目錄目錄HbA1c檢測的標準化檢測的標準化2HbA1c常規(guī)測定方法常規(guī)測定方法1HbA1c檢測的規(guī)范化檢測的規(guī)范化3HbA1c標準化目標標準化目標精密度：室間變異系數(shù)（精密度：室間變異系數(shù)（CV）5%只

13、有控制室內(nèi)（總）只有控制室內(nèi)（總）CV3%，才可能實現(xiàn)室，才可能實現(xiàn)室間間CV5%準確度：準確度：國際糖尿病專家委員會、國際糖尿病專家委員會、ADA推推薦：薦：0.5% HbA1c準確度建立在精密度基礎(chǔ)上準確度建立在精密度基礎(chǔ)上2009年美國年美國99%溯源到溯源到DCCT/UKPDS 英國英國97%、加拿大加拿大100% 室間室間CV 5%，測定值與靶值的，測定值與靶值的Bias0.3% CAP SURVEY(mean 2SD) 252010年，年，99%實驗室以實驗室以HbA1c報告結(jié)果，室間報告結(jié)果，室間CV 5%， 測定值與靶值的偏倚測定值與靶值的偏倚 0.8%HbA1c 國內(nèi)、外變異

14、度對比國內(nèi)、外變異度對比 2626靶值：5.4最大值：6.3 最小值：4.6變異系數(shù)：3.5靶值：5.5最大值：7.2最小值：3.9變異系數(shù)：8.41 所有儀器組 2 Abbott Architect System/Aeroset組 3 Bio-Rad HPLC組 4 TOSOH G7組 5 Drew DS5/Bio-Rad Diastat組 6 其它儀器組 7 Primus HPLC組 8 NycoCard Reader II組 9 ARKRAY HA-8160組 10 Beckman Synchron Systems組 11 Olypus AU Systems組 12 Roche COBA

15、S,Roche/Hitachi組 13 惠中MQ-2000我國室間質(zhì)評我國室間質(zhì)評CAP能力驗證能力驗證我國我國201111樣本結(jié)果樣本結(jié)果 (mean 2SD）靶值：靶值：6.6 %6.6 % HbA1cHbA1c組組實驗室數(shù)實驗室數(shù)平均值平均值中位數(shù)中位數(shù)標準差標準差變異系數(shù)（變異系數(shù)（% %）最大值最大值 最小值最小值A(chǔ)bbott Architect Abbott Architect System/AerosetSystem/Aeroset組組14146.55 6.55 6.59 6.59 0.73 0.73 11.15 11.15 7.74 7.74 5.20 5.20 Bio-Rad

16、 HPLCBio-Rad HPLC組組1671676.53 6.53 6.60 6.60 0.29 0.29 4.51 4.51 7.10 7.10 5.80 5.80 TOSOH G7TOSOH G7組組69696.71 6.71 6.70 6.70 0.42 0.42 6.31 6.31 8.10 8.10 5.00 5.00 Drew DS5/Bio-Rad DiastatDrew DS5/Bio-Rad Diastat組組28287.21 7.21 7.05 7.05 0.67 0.67 9.30 9.30 8.45 8.45 6.20 6.20 其它儀器組其它儀器組58586.49

17、6.49 6.57 6.57 0.69 0.69 10.64 10.64 8.00 8.00 4.70 4.70 Primus HPLCPrimus HPLC組組34346.80 6.80 6.80 6.80 0.21 0.21 3.04 3.04 7.30 7.30 6.37 6.37 NycoCard Reader IINycoCard Reader II組組24246.40 6.40 6.40 6.40 0.81 0.81 12.67 12.67 8.70 8.70 4.90 4.90 ARKRAY HA-8160ARKRAY HA-8160組組32326.78 6.78 6.80 6.

18、80 0.25 0.25 3.67 3.67 7.20 7.20 6.10 6.10 Beckman Synchron SystemsBeckman Synchron Systems組組8 86.81 6.81 6.71 6.71 0.63 0.63 9.21 9.21 7.60 7.60 5.76 5.76 Olypus AU SystemsOlypus AU Systems組組46466.34 6.34 6.28 6.28 0.84 0.84 13.19 13.19 8.44 8.44 4.58 4.58 Roche COBAS,Roche/HitachiRoche COBAS,Roche

19、/Hitachi組組79796.63 6.63 6.67 6.67 0.53 0.53 7.98 7.98 7.90 7.90 5.40 5.40 惠中惠中MQ-2000MQ-20008 87.95 7.95 7.60 7.60 0.93 0.93 11.70 11.70 9.30 9.30 6.70 6.70 2010-2011國內(nèi)外變異度對比國內(nèi)外變異度對比我國我國CAP56家三甲醫(yī)院實家三甲醫(yī)院實驗室，采用國際驗室，采用國際普遍使用的方法普遍使用的方法（HPLC法法、免疫免疫法）法）2010年年EQA我國不同級別實驗室變異度對比我國不同級別實驗室變異度對比2010年我國參加國際比對年我國

20、參加國際比對平均值平均值BiasBias（%HbA1c)%HbA1c)CVCV（% %）C16.53 6.53 2 2.52 C28.00 8.00 2 2.82 C310.49 10.49 0.260.263.18 3.18 C46.45 6.45 0.060.062.52 2.52 NGSP靶值1616家三甲醫(yī)院實驗室，采用國際普遍使用的方法家三甲醫(yī)院實驗室，采用國際普遍使用的方法（HPLC法法、免疫法）免疫法）影響檢測質(zhì)量的因素影響檢測質(zhì)量的因素 方法選擇方法選擇 使用方法種類多，有的方法沒有進行標準化認證使用方法種類多，有的方法沒有進行標準化認證

21、 方法使用方法使用人員：能力參差不齊人員：能力參差不齊室內(nèi)質(zhì)控：少做、不做室內(nèi)質(zhì)控：少做、不做校準：不能定期、定時校準，不使用配套校準品校準：不能定期、定時校準，不使用配套校準品試劑：色譜柱（適用時）：超限使用試劑：色譜柱（適用時）：超限使用儀器：不能定期維護、保養(yǎng)儀器：不能定期維護、保養(yǎng) HbA1c檢測質(zhì)量保證檢測質(zhì)量保證 31宗旨：建立宗旨：建立HbA1c檢測的檢測的技術(shù)規(guī)范，提高技術(shù)規(guī)范，提高HbA1c測定結(jié)果的可比性程度測定結(jié)果的可比性程度指南從指南從方法的選擇方法的選擇方法的規(guī)范使用方法的規(guī)范使用測定結(jié)果質(zhì)量的監(jiān)測測定結(jié)果質(zhì)量的監(jiān)測三個質(zhì)量環(huán)節(jié)制定了系統(tǒng)三個質(zhì)量環(huán)節(jié)制定了系統(tǒng)的技術(shù)規(guī)

22、范原則，以保的技術(shù)規(guī)范原則，以保證糖化血紅蛋白測定結(jié)證糖化血紅蛋白測定結(jié)果質(zhì)量果質(zhì)量 方法的選擇方法的選擇 32應(yīng)選用測定結(jié)果可溯源至應(yīng)選用測定結(jié)果可溯源至IFCC參考系統(tǒng)的參考系統(tǒng)的分析系統(tǒng)，例如：獲得分析系統(tǒng)，例如：獲得NGSP認證。認證。NGSP認證的有效期為認證的有效期為1年，查詢網(wǎng)址：年，查詢網(wǎng)址：/docs/methods.pdf實驗室應(yīng)知曉所選分析系統(tǒng)可能存在的干實驗室應(yīng)知曉所選分析系統(tǒng)可能存在的干擾因素擾因素不同分析系統(tǒng)干擾因素是不同的不同分析系統(tǒng)干擾因素是不同的POCT（point-of-care testing）方法）方法的精準性不能滿足臨床需求，目

23、前不應(yīng)用的精準性不能滿足臨床需求，目前不應(yīng)用于糖尿病的診斷于糖尿病的診斷 方法性能方法性能 33實驗室準備采用一個新的分析系統(tǒng)（新儀器實驗室準備采用一個新的分析系統(tǒng)（新儀器、新試劑）測定臨床樣品前，應(yīng)對系統(tǒng)性、新試劑）測定臨床樣品前，應(yīng)對系統(tǒng)性能進行驗證能進行驗證 精密度：室內(nèi)精密度：室內(nèi)CV3% 目前許多測定方法的室內(nèi)目前許多測定方法的室內(nèi)CV小于小于2% 只有控制室內(nèi)只有控制室內(nèi)CV小于小于3%，才能實現(xiàn)室間，才能實現(xiàn)室間CV小于小于5%，應(yīng)控制室內(nèi)，應(yīng)控制室內(nèi)CV小于小于3%精密度實驗方法精密度實驗方法分別采用不少于分別采用不少于2個水平的質(zhì)控物或樣品（個水平的質(zhì)控物或樣品（高、低值），

24、每天測定高、低值），每天測定2次（次（2次時間間隔次時間間隔不少于不少于2小時），每次重復(fù)測小時），每次重復(fù)測2個結(jié)果，測個結(jié)果，測定定20個工作日，以個工作日，以20個工作日的個工作日的80個結(jié)個結(jié)果計算平均值、標準差及變異系數(shù)果計算平均值、標準差及變異系數(shù)時間長度很重要，因為只有在相對較長的時間內(nèi)，時間長度很重要，因為只有在相對較長的時間內(nèi)， 一一些因素（不同批號試劑些因素（不同批號試劑/校準物校準物/色譜柱（適用時）、色譜柱（適用時）、校準頻率、不同操作人員、不同分析儀狀況、不同環(huán)校準頻率、不同操作人員、不同分析儀狀況、不同環(huán)境條件等）對測定結(jié)果的影響才能體現(xiàn)，可以客觀反境條件等）對測定

25、結(jié)果的影響才能體現(xiàn)，可以客觀反映實際情況映實際情況方法的規(guī)范化使用方法的規(guī)范化使用實驗室應(yīng)制定標準操作程序?qū)嶒炇覒?yīng)制定標準操作程序項目名稱項目名稱方法學(xué)原理方法學(xué)原理樣本（采血管樣本（采血管/抗凝劑、儲存）抗凝劑、儲存）校準程序（校準日期間隔、校準方、校準方法）校準程序（校準日期間隔、校準方、校準方法）室內(nèi)質(zhì)控程序室內(nèi)質(zhì)控程序樣品的測定程序樣品的測定程序試劑試劑色譜柱（適用時）色譜柱（適用時）干擾因素干擾因素參考區(qū)間（范圍）參考區(qū)間（范圍）維護程序維護程序 內(nèi)部質(zhì)量控制內(nèi)部質(zhì)量控制室內(nèi)質(zhì)控室內(nèi)質(zhì)控每個測定日的開始和結(jié)束均應(yīng)做質(zhì)控分析每個測定日的開始和結(jié)束均應(yīng)做質(zhì)控分析應(yīng)同時測定至少應(yīng)同時測定至

26、少2個不同水平（高、低值）的個不同水平（高、低值）的質(zhì)控品質(zhì)控品凍干粉質(zhì)控品在更換試劑或色譜柱時可能會有凍干粉質(zhì)控品在更換試劑或色譜柱時可能會有基質(zhì)效應(yīng)，程度取決于所用方法基質(zhì)效應(yīng)，程度取決于所用方法更換試劑、校準物、儀器設(shè)備的關(guān)鍵配件或質(zhì)更換試劑、校準物、儀器設(shè)備的關(guān)鍵配件或質(zhì)控值超出質(zhì)控限，應(yīng)再做質(zhì)控控值超出質(zhì)控限，應(yīng)再做質(zhì)控樣品采集、處理和儲存樣品采集、處理和儲存檢測樣品不受飲食和采血時間的影響檢測樣品不受飲食和采血時間的影響不同測定方法的樣品穩(wěn)定性是不同的不同測定方法的樣品穩(wěn)定性是不同的一般情況下，全血樣品在一般情況下，全血樣品在4儲存，可以穩(wěn)儲存，可以穩(wěn)定定1周周在在-70或更低溫度可以長期儲存，至少或更低溫度可以長期儲存，至少穩(wěn)定穩(wěn)定1年以上，但不宜在年以上，但不宜在-20長期儲存長期儲存任何對樣品的不當(dāng)處理，如置于高溫環(huán)境，可任何對樣