【微生物檢驗(yàn)】食品中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)PPT課件

1、1、檢驗(yàn)程序、檢驗(yàn)程序檢樣檢樣做成幾個(gè)適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液做成幾個(gè)適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液選擇選擇2-32-3個(gè)適宜稀釋度個(gè)適宜稀釋度各以各以1ml1ml之量分別入滅菌平皿內(nèi)之量分別入滅菌平皿內(nèi)每皿內(nèi)加入每皿內(nèi)加入46460 0c c左右適量左右適量營(yíng)養(yǎng)瓊脂營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)培養(yǎng)4848小時(shí)小時(shí)報(bào)告菌落數(shù)報(bào)告菌落數(shù)第一節(jié)第一節(jié) 菌落總數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)測(cè)定2、檢樣處理、檢樣處理（1）以無(wú)菌操作將檢樣）以無(wú)菌操作將檢樣25g（或（或25ml）剪碎，放于含有）剪碎，放于含有225ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)（瓶?jī)?nèi)滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)（瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或預(yù)

2、置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨制成研磨制成1：10的均勻稀釋液。的均勻稀釋液。 固體檢樣在加入稀釋液后，最好置滅菌均質(zhì)器中以固體檢樣在加入稀釋液后，最好置滅菌均質(zhì)器中以8000r/min100000r/min的速度處理的速度處理1min，做成，做成1：10的的均勻稀釋液。均勻稀釋液。（2）用）用1ml滅菌吸管吸取滅菌吸管吸取1：10稀釋液稀釋液1ml，沿管壁徐徐，沿管壁徐徐注入含有注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋的試管內(nèi)（注意吸滅菌生理鹽水或其他稀釋的試管內(nèi)（注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液），振搖試管混合均勻，制管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液），振搖試管混合均勻，制成成1：1

3、00的稀釋液。的稀釋液。（3）另?。┝砣?ml的滅菌吸管，按上項(xiàng)操作順序的滅菌吸管，按上項(xiàng)操作順序,制制10倍遞增倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支支1ml滅菌吸管。滅菌吸管。（4）根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計(jì)，）根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計(jì)，選擇選擇23個(gè)適宜稀釋度，分別在制個(gè)適宜稀釋度，分別在制10倍遞增稀釋的同時(shí)，倍遞增稀釋的同時(shí)，即以吸取該稀釋度的吸管移即以吸取該稀釋度的吸管移1ml稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度作兩個(gè)平皿。個(gè)稀釋度作兩個(gè)平皿。（5）稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時(shí)將涼至）稀釋液移入平

4、皿后，應(yīng)及時(shí)將涼至460c營(yíng)養(yǎng)瓊脂培營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng) 基養(yǎng) 基 ( 可 放 置 在可 放 置 在 4 6 10c 水 浴 鍋 內(nèi) 保 溫水 浴 鍋 內(nèi) 保 溫 ) 注 入 平 皿注 入 平 皿15ml20ml，混合均勻，混合均勻.同時(shí)將營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有同時(shí)將營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1ml稀釋液（不含樣品）的滅菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。稀釋液（不含樣品）的滅菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。 （6）等瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置（）等瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置（361）0c恒溫箱恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)（內(nèi)培養(yǎng)（482）h取出，計(jì)算平板內(nèi)菌落數(shù)目取出，計(jì)算平板內(nèi)菌落數(shù)目, ,乘以倍數(shù)，乘以倍數(shù)，即得即得每每g（每每ml）樣品所含菌落

5、總數(shù)。）樣品所含菌落總數(shù)。 3、菌落計(jì)算方法、菌落計(jì)算方法（1）菌落計(jì)數(shù)方法）菌落計(jì)數(shù)方法 做平板菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀查，必要時(shí)用放大鏡做平板菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀查，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。度的各平板平均菌落總數(shù)。（2）菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告）菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告平板菌落數(shù)的選擇平板菌落數(shù)的選擇 選取菌落數(shù)在選取菌落數(shù)在3030300300之間的平板作為菌落總數(shù)測(cè)定標(biāo)之間的平板作為菌落總數(shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平板，應(yīng)采用兩個(gè)平板平均數(shù)，準(zhǔn)。一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平板，應(yīng)采用兩個(gè)平板平均數(shù)

6、，其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均勻，菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘即可計(jì)算半個(gè)平板后乘2 2以代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有鏈以代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長(zhǎng)時(shí)（菌落之間無(wú)明顯界線(xiàn)），若僅有一條鏈，狀菌落生長(zhǎng)時(shí)（菌落之間無(wú)明顯界線(xiàn)），若僅有一條鏈，可視為一個(gè)菌落數(shù)；如果有不同來(lái)源的幾條鏈，則應(yīng)將每可視為一個(gè)菌落數(shù)；如果有不同來(lái)源的幾條

7、鏈，則應(yīng)將每條鏈作為一個(gè)菌落計(jì)。條鏈作為一個(gè)菌落計(jì)。 稀釋度的選擇稀釋度的選擇 應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在3030300300之間的稀釋度，乘以稀之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。若有兩上稀釋度，其生長(zhǎng)的菌落數(shù)均在釋倍數(shù)報(bào)告之。若有兩上稀釋度，其生長(zhǎng)的菌落數(shù)均在3030300300之間，則視兩者之比如何來(lái)決定。若其比值小于之間，則視兩者之比如何來(lái)決定。若其比值小于或等于或等于2 2，應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)；若大于，應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)；若大于2 2則報(bào)告其中較小的數(shù)則報(bào)告其中較小的數(shù)字。字。 若所有稀釋度平均菌落數(shù)均大于若所有稀釋度平均菌落數(shù)均大于300300，則應(yīng)按稀釋度，則應(yīng)按稀釋度最高的平均

8、菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于3030，則應(yīng)按稀釋度，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。 若所有稀釋度均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于若所有稀釋度均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于1 1乘以最低稀乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之。釋倍數(shù)報(bào)告之。 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在3030300300之間，其之間，其中一部分大于中一部分大于300300或小于或小于3030時(shí)，則以最接近時(shí)，則以最接近3030或或300300的平均的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。

9、菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。菌落數(shù)的報(bào)告菌落數(shù)的報(bào)告 菌落數(shù)在菌落數(shù)在100以?xún)?nèi)時(shí)，按其實(shí)有數(shù)報(bào)告以?xún)?nèi)時(shí)，按其實(shí)有數(shù)報(bào)告; ;大于大于100時(shí)，時(shí)，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計(jì)算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可用五入方法計(jì)算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可用10的指的指數(shù)來(lái)表示。數(shù)來(lái)表示。注意英文表述l 菌落總數(shù)aerobic bacterial count大腸菌群coliform bacteria沙門(mén)氏菌salmonella致瀉性埃希氏菌diarrheogenic escherichia coli霉菌和酵母molds

10、 and yeasts金黃色葡萄球菌staphylocl 菌落形成單位colony form unitl 微生物學(xué)檢驗(yàn) microbiological examination討論1l真菌菌落算不算菌落總數(shù)？（請(qǐng)學(xué)生比較新老國(guó)標(biāo)中關(guān)于菌落的定義的差異） 討論2l 新國(guó)標(biāo)上菌落總數(shù)計(jì)算公式上n 分別代表什么？ l（n1 第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)（含適宜范圍菌落數(shù)）n2 第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)（含適宜范圍菌落數(shù)）討論3l成片的菌落如何計(jì)數(shù)？ 討論4l對(duì)原始記錄表的評(píng)價(jià) l設(shè)計(jì)原始記錄表菌落總數(shù)的測(cè)定菌落總數(shù)的測(cè)定 平板菌落計(jì)數(shù)法平板菌落計(jì)數(shù)法 菌落總數(shù)記錄報(bào)告菌落總數(shù)記錄報(bào)告產(chǎn)品名

11、稱(chēng)生產(chǎn)日期細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)依據(jù) 培養(yǎng)基接種110-110-210-310-410-5空白備注檢驗(yàn)員：營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基a日期：生產(chǎn)車(chē)間抽樣日期b平均數(shù)復(fù)核：班次檢驗(yàn)日期結(jié)果報(bào)告數(shù)（個(gè)/g或ml）日期：記錄表按照以下原則進(jìn)行編制：可以滿(mǎn)足檢驗(yàn)過(guò)程的復(fù)現(xiàn)；可以實(shí)現(xiàn)培養(yǎng)基和試劑的溯源及復(fù)現(xiàn)其制備過(guò)程；一頁(yè)原始記錄基本包括該樣品的多個(gè)常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目，也就是一份樣品的所有微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目在一張?jiān)加涗浬象w現(xiàn)。為了符合實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)認(rèn)定評(píng)審的要求，可能會(huì)有點(diǎn)繁，而且基本上沒(méi)有辦法對(duì)原始記錄作假，因?yàn)橛涗浬象w現(xiàn)的內(nèi)容環(huán)環(huán)相扣。 菌落總數(shù)的測(cè)定菌落總數(shù)的測(cè)定 出現(xiàn)的實(shí)際工作問(wèn)題出現(xiàn)的實(shí)際工作問(wèn)題 做菌落總數(shù)檢測(cè)時(shí),發(fā)現(xiàn)稀釋倍數(shù)大的比稀釋倍數(shù)小的平皿上生長(zhǎng)的菌落數(shù)還多,而且空白對(duì)照又沒(méi)長(zhǎng)菌,我找不出啥原因？ 我做的菌落總數(shù)的測(cè)定，是把濃縮的復(fù)合芽孢桿菌進(jìn)行10-8、10-9、10-10稀釋?zhuān)谕坎挤ㄎ?.1ml的3個(gè)濃度的時(shí)候，培養(yǎng)皿中長(zhǎng)出來(lái)的菌2個(gè)10-9長(zhǎng)了一大片的菌連在一起，10-8也有一個(gè)這樣，其他的幾乎不長(zhǎng)，究竟怎么會(huì)事？ 檢測(cè)菌落總數(shù)時(shí),有些菌落難以區(qū)別,有沒(méi)有什么好的試劑,能增加菌落的可見(jiàn)率？ 我公