第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)

1、接種操作接種操作 細(xì)菌菌落特征剖面圖細(xì)菌菌落特征剖面圖細(xì)菌菌落特征正面圖細(xì)菌菌落特征正面圖稀釋倒平板法稀釋倒平板法Spread platen無菌水、梯度稀釋無菌水、梯度稀釋n涂布平板涂布平板 n對于生產(chǎn)中使用的菌種保藏培養(yǎng)基，對于生產(chǎn)中使用的菌種保藏培養(yǎng)基，要求比較豐富的氮源，以防止菌種退要求比較豐富的氮源，以防止菌種退化變質(zhì)?；冑|(zhì)。分辨率n肉眼分辨率一般只有肉眼分辨率一般只有0.25mmn光學(xué)顯微鏡分辨率光學(xué)顯微鏡分辨率0.18mn電子顯微鏡可達(dá)電子顯微鏡可達(dá)0.2nmnR=0.5 /sin/2n式中：n=介質(zhì)折射率；=鏡口角（標(biāo)本對物鏡鏡口的張角），sin/2 =鏡口率細(xì)菌染色法細(xì)菌染色

2、法死菌死菌正染色正染色負(fù)染色：負(fù)染色：簡單染色法簡單染色法鑒別染色法鑒別染色法 革蘭氏染色法革蘭氏染色法 抗酸性染色法抗酸性染色法芽芽 孢孢 染染 色色 法法莢膜染色法等莢膜染色法等 活菌活菌: 用美藍(lán)或用美藍(lán)或TTC（氯化三苯基四氮唑）等氯化三苯基四氮唑）等 作活菌染色作活菌染色 姬姆薩染色法姬姆薩染色法染色觀察染色觀察n細(xì)菌和古生菌細(xì)菌和古生菌 n真菌真菌 n藻類藻類 n原生動物原生動物 球菌(coccus)單球菌單球菌雙球菌雙球菌四聯(lián)球菌四聯(lián)球菌八疊球菌八疊球菌葡萄球菌葡萄球菌鏈球菌鏈球菌Arrangement of Spherical Bacterial Cellsdiplococci

3、 streptococci tetracocci sarcinae staphylococci .單球菌（顯微鏡下示意圖）單球菌單球菌(single coccus). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .雙球菌（顯微鏡下示意圖）雙球菌雙球菌(double coccus)Micrococcus aerobic, gram-positive, cell arranges mainly in pairs, or irregular clusters. They are often yellow, o

4、range or red in colour 上：顯微鏡效果 下：電 鏡 照 片 四聯(lián)球菌四聯(lián)球菌(Micrococcus lactis)八 疊 球 菌八疊球菌八疊球菌(Sarcina ureae)八疊球菌（顯微鏡下示意圖） 葡萄球菌左：電鏡照片左：電鏡照片右：顯微鏡下的金黃色葡萄球菌右：顯微鏡下的金黃色葡萄球菌葡萄球菌葡萄球菌(Staphylococcus aureus)Staphylococcus - facultatively anaerobic, gram-positive, usually form irregular clusters, nonmotile, catalase po

5、sitive but oxidase negative, ferment glucose anaerobically.staphylococcistaphylococci鏈球菌鏈球菌鏈球菌（顯微鏡下示意圖）鏈球菌（電鏡照片）鏈球菌（電鏡照片）Streptococcus - facultatively anaerobic or microaerophilic, catalase negative, gram-positive, Cell arranges in pairs or chains, usually nonmotile, A few species are anaerobic rath

6、er than facultative. 電子顯微鏡下的結(jié)核菌電子顯微鏡下的結(jié)核菌 （綠色的就是結(jié)核桿菌）（綠色的就是結(jié)核桿菌）桿菌桿菌動物宿主細(xì)胞感染桿菌瀕臨死亡 電鏡照片鏈桿菌鏈桿菌鏈桿菌鏈顯微鏡下的鏈桿菌顯微鏡下的鏈桿菌螺旋菌（螺旋菌（Spirlla) 弧菌 (vibrio) 螺菌（spirllum） 螺旋體(spirochaeta)Vibrio, Spirillum and Spirochetevibriospirillumspirochete顯微鏡下的螺旋菌 幽門螺旋菌幽門螺旋菌左：顯微數(shù)碼攝像右：結(jié)構(gòu)示意圖放線菌的分布與生活方式放線菌的分布與生活方式放線菌一般分布在含量較低；有機(jī)物

7、豐富和呈放線菌一般分布在含量較低；有機(jī)物豐富和呈微生物堿性的土壤中。微生物堿性的土壤中。 107個個g左右左右能看到：北方春季深層黑土能看到：北方春季深層黑土 地的白絲地的白絲能聞到：泥土特有的能聞到：泥土特有的“泥腥味泥腥味”Chain of conidiosporesAgar surfaceSubstrate myceliumAerial hyphaeVarious types of spore-bearing structures on the streptomyces放線菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)（模式圖）放線菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)（模式圖）氣生菌絲孢子絲分生孢子基內(nèi)菌絲固體基質(zhì)基內(nèi)菌絲（Substrate

8、mycelium) 又稱營養(yǎng)菌絲，功能是吸收營養(yǎng)，直徑 0.2-1.2um長度100600um，色素可有可無?；鶅?nèi)基內(nèi)菌絲菌絲放線菌放線菌氣生菌絲（Aerial mycelium) 基內(nèi)菌絲長到一定時期，長出培養(yǎng)基外，伸向空間的菌絲，直徑11.4um, 長短不一，形狀不一，顏色較深。 氣生菌絲氣生菌絲 孢子絲孢子絲(Reproductive mycelium) 當(dāng)氣生菌絲生長發(fā)育到一定階段，氣當(dāng)氣生菌絲生長發(fā)育到一定階段，氣生菌絲上分化出的可形成孢子的菌絲。生菌絲上分化出的可形成孢子的菌絲。 孢子的形狀及在氣生菌絲上排列的方式孢子的形狀及在氣生菌絲上排列的方式隨種而異。隨種而異。Various

9、 types of spore-bearing structures on the streptomyces放線菌孢子絲類型放線菌孢子絲類型直形彎曲叢生成束單輪生無螺旋 開環(huán)鉤形原始螺旋形松螺旋 緊螺旋螺旋單輪生無螺旋兩級輪生螺旋兩級輪生放線菌的菌落形態(tài)菌落質(zhì)地硬而且致密，菌落小而不廣泛延伸菌落質(zhì)地硬而且致密，菌落小而不廣泛延伸菌落表面呈緊密的絨狀或堅(jiān)實(shí)、干燥多皺。菌落表面呈緊密的絨狀或堅(jiān)實(shí)、干燥多皺。接種針難以挑取，有時可挑碎，有時可將整接種針難以挑取，有時可挑碎，有時可將整個菌落挑起。個菌落挑起。細(xì)菌電子顯微鏡照片3、原核生物的細(xì)胞大小、原核生物的細(xì)胞大小普通光學(xué)顯微鏡下用測微尺測細(xì)菌大小

10、細(xì)菌細(xì)胞的大小細(xì)菌細(xì)胞的大小細(xì)胞的大小是細(xì)菌分類特征細(xì)胞的大小是細(xì)菌分類特征不同細(xì)菌細(xì)胞大小不同不同細(xì)菌細(xì)胞大小不同同一細(xì)菌的不同菌齡細(xì)胞大小不同同一細(xì)菌的不同菌齡細(xì)胞大小不同細(xì)菌細(xì)胞大小還與營養(yǎng)等因素相關(guān)細(xì)菌細(xì)胞大小還與營養(yǎng)等因素相關(guān)細(xì)胞大小的測量結(jié)果只是近似值或平均值細(xì)胞大小的測量結(jié)果只是近似值或平均值Fungi1. Filamentous fungi2. Unicellular fungin菌絲體：由許多菌絲交織在一起而組成。菌絲體：由許多菌絲交織在一起而組成。 n在固體培養(yǎng)基上，真菌菌絲可分為：營養(yǎng)在固體培養(yǎng)基上，真菌菌絲可分為：營養(yǎng)菌絲、氣生菌絲和繁殖菌絲。菌絲、氣生菌絲和繁殖菌絲。 Sporan