28-2ApoB設(shè)計(jì)開發(fā)方案

1、長沙海潤生物技術(shù)有限公司泗潤VN5海潤斯團(tuán)I G 曰 U Z U U LJ P設(shè)計(jì)開發(fā)方案編號(hào)：HR-SHSJ0028 項(xiàng)目名稱載脂蛋白B測定試劑盒（免疫比濁法）（簡稱：ApoB）血漿脂蛋白中的蛋白質(zhì)部分稱為載脂蛋白,主要分A、1 C、D E五類，主要在肝（部.分在小腸）合成，載脂蛋白是構(gòu)成血漿脂蛋白的重要組分?；竟δ苁沁\(yùn)載脂類物質(zhì)及穩(wěn)定脂蛋白的結(jié)構(gòu)，某些載脂蛋白還有激活脂蛋白代謝酶、識(shí)別受體等功能。按ABC系統(tǒng)命名。ApoB在肝臟和小腸粘膜上皮細(xì)胞合成。是LDL受體的配體，其負(fù)責(zé) LDL在體內(nèi)的清理、參與VLDL的合成分泌、向組織運(yùn)輸脂類和膽固醇等。故ApoB反映了富含甘油三酯的極低密度脂

2、蛋白膽固醇、中間密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇等致動(dòng)脈硬 化脂顆粒的數(shù)目，可更衣?的反映小而密的LDL-C的數(shù)量，代表致動(dòng)脈硬化的因素。血清中APOB勺正常彳！為（1.00-1.76）g/L（各醫(yī)院的測試方法不同，參考值不完全相同）。1）冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病 冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病 （Coronary Atherosclerotic heart disease CHD）是由多種遺傳因素與環(huán)境因素共同作用所致，使冠狀動(dòng)脈呈現(xiàn)粥樣硬化的一種疾病，目前 已成為威脅當(dāng)代人類健康及生命的重要疾病。既往針對(duì)冠心病相關(guān)危險(xiǎn)因素及預(yù)防進(jìn)行 了大量的研究，明確與冠心病發(fā)病及預(yù)后相關(guān)的因素中，已公認(rèn)血

3、脂異常是主要的危險(xiǎn)因素。早期研究主要集中在脂蛋白中脂質(zhì)成分，幾乎所有降脂治 療的臨床指南均主要基于血漿膽固醇水平制定。然而攜帶膽固醇的LDL具有不穩(wěn)定性，產(chǎn)品概述常出現(xiàn)與實(shí)際病人測量不一致的情況。1998年Williams研究認(rèn)為血漿ApoB是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化風(fēng)險(xiǎn)度的良好指標(biāo)，血漿ApoB水平升高與冠心病密切相關(guān)，因此血漿ApoB水平與冠狀動(dòng)脈病變程度的關(guān)系口益受到人們的關(guān)注。Faraj等對(duì)肥胖婦女的研究中將ApoB與傳統(tǒng)因子比較發(fā)現(xiàn)其更能早期反應(yīng)炎癥的發(fā)生，推測ApoB可能作為冠心病和糖尿病的早期風(fēng)險(xiǎn)因子。Mugii等對(duì)611名2型糖尿病白種人患者的研究發(fā)現(xiàn)，ApoB與冠狀動(dòng)脈鈣化有顯著相關(guān)

4、性，而LDL-c沒有特異性差異，研究認(rèn)為在2型糖尿病中，ApoB表達(dá)水平能特異性的作為評(píng)估動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)因子。Motta等對(duì)意大禾J 3288例老年人的回顧性分析發(fā)現(xiàn)ApoB是動(dòng)脈粥樣硬化的診斷指標(biāo)，但是并不能單獨(dú)作為預(yù)防心腦血管并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)因子。故最近人們更加關(guān)注 ApoB/ApoAl比值與心血管疾病的相關(guān)T研究。Talmud等對(duì)2508例男性隨訪 6年的研究結(jié)果顯示：TC, TG, ApoB, ApoAl,ApoB/ApoAl比值、LDL-c, HDL-c均能預(yù)測冠狀動(dòng)脈事件的發(fā)生，但ApoB/ApoAl值的預(yù)測能力最弓雖。一個(gè)超過170 000瑞典人的前瞻性心血管流行病學(xué)

5、研究 （AMORIS研究）顯示作為脂蛋白相關(guān)的血管疾病危險(xiǎn)總結(jié)指數(shù)，ApoB/ApoAl比值優(yōu)于任一項(xiàng)膽固醇比值，是所有缺血性事件最強(qiáng)最特異的指標(biāo)，Goswami等對(duì)100名患有冠脈疾病患者與100名正常對(duì)照組一比較發(fā)現(xiàn)，在鑒定冠脈疾病風(fēng)險(xiǎn)因子中ApoB/ApoAl比值明顯優(yōu)于TC/HDL, TC-HDL/HDL,LDL,TC/HDL ,研究指出 ApoB/ApoAl比值可以替代其他脂質(zhì)比值來評(píng)估冠脈疾病患者 ApoAl , ApoB/ApoAl 比值、LDL-c, HDL-c均能預(yù)測冠狀動(dòng)脈事件的 發(fā)生，但ApoB/ApoAl值的預(yù)測能力最強(qiáng)。故今后 ApoB/ApoAl比值可能對(duì)于冠心病患

6、病 風(fēng)險(xiǎn)及其預(yù)后具有更高的預(yù)測價(jià)值。2）高血壓高血壓的發(fā)病的機(jī)理很多.其中脂質(zhì)代謝紊亂是其病因之一。高血壓時(shí)，ApoAl下降,ApoB明顯升高，ApoAl/ ApoB比值明顯下降，此三項(xiàng)指標(biāo)均與正常對(duì)照組差異有顯著性， 相關(guān)分析結(jié)果表明與 ApoAl與HDL ApoB與LDL具有顯著相關(guān)性，ApoA1/ApoB與TC HDL LDL相關(guān)性也較顯著。3）糖尿病糖尿病患者不僅空腹血糖明顯增高，而且存在并發(fā)心血管疾病的危險(xiǎn)因素一般情況 下，糖尿病患者 ApoB升高（與正常對(duì)照組差異有顯著性 ），ApoAl及ApoAl/ ApoB下降， 并且隨著病史的延續(xù)而有逐漸加重的趨勢糖尿病患者常伴有心腦并發(fā)癥及

7、視網(wǎng)膜病變， 因此ApoAl和ApoB測定對(duì)并發(fā)癥的診斷、預(yù)后有一定的參考價(jià)值。4）肝臟疾病肝臟是Apo代謝的中心器官，ApoAl、ApoB100由肝臟合成，當(dāng)肝臟損害時(shí)，其合成 功能降低，因而血清中ApoAl、ApoB含量下降，其下降程度與肝細(xì)胞損害程度成正相關(guān)。 一般情況下患急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、膽道梗阻時(shí)ApoAl明顯下降（PV0.05），患膽適梗阻、肝硬化時(shí) ApoB明顯下降（PV0.05）,而患急、慢性肝炎時(shí) ApoB下降，但與正 常對(duì)照組比較差異無顯著性。5）腎病在腎病患者中 ApoAl、ApoAl/ ApoB均明顯低于健康人（Pv0. O5）, ApoB在男 性患者有明顯增

8、高（PV 0.05）。在女性患者中升高不顯著.但女性患者的ApoA1/ApoB較正 常對(duì)照組差異有顯著性，說明腎臟疾病患者中抗動(dòng)脈粥樣硬化因子降低，而致病因子升 高，因此對(duì)腎臟疾病的診治進(jìn)程中，應(yīng)早期觀察Apo的變化，在治療原發(fā)病的同時(shí)，及時(shí)采取相應(yīng)預(yù)防措施，消除或降低引起心血管合并癥的危險(xiǎn)因素，延長患者的生存時(shí)間。對(duì)于ApoB的檢測，暫時(shí)還沒有決定性的方法，在臨床上，ApoB常規(guī)測定方法主要為各種免疫化學(xué)方法，如單向免疫擴(kuò)散法、電免疫分析、免疫濁度法等。其中，比濁法 為最常用的方法，簡單快速，可以自動(dòng)化批量分析，目前，國內(nèi)外生成的試劑盒大多采 用此法，其原理為在適宜的條件下，樣本中Apo B

9、與其相應(yīng)抗體相遇，形成抗原 -抗體復(fù)合物，產(chǎn)生一定濁度。該濁度的高低在一定量抗體存在時(shí)與抗原的含量成正比?？衫?校準(zhǔn)濃度和其生成的濁度在340nm處的吸光度建立吸光度與濃度的校準(zhǔn)曲線，從而計(jì)算出樣本中Apo B的含量。©長沙海潤生物技術(shù)有限公司泗潤VfiUI引用標(biāo)準(zhǔn) 和規(guī)范GB/T 191-2009包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志YY/T 0466.1-2009醫(yī)疔器械用于醫(yī)疔器械標(biāo)簽、標(biāo)記和提供信息的符號(hào)第1部分GB/T 26124-2011臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第 3版）體外診斷試劑分析性能評(píng)估系列指導(dǎo)原則（征求意見稿）國食藥監(jiān)械2007229號(hào)體外診斷試劑注冊(cè)管理辦

10、法（試行）國食藥監(jiān)械2007240號(hào)體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則國食藥監(jiān)械2007240號(hào)體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則國家食品藥品監(jiān)督管理局令第10號(hào)醫(yī)疔器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識(shí)管理規(guī)定產(chǎn)品構(gòu)成試劑盒由液體雙試劑組成試劑1主要成分：三羥甲基氨基甲烷、PEG 600R曲拉通X-100等。試劑2主要成分：抗人 ApoB抗體、三羥甲基氨基甲烷等。預(yù)期用途本試劑盒用于體外定量測定人體血清中載脂蛋白B （ApoB）的含量，臨床上主要用于評(píng)價(jià)心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)。主要技術(shù)參數(shù)或指標(biāo)1、試劑空白：試劑空白吸光度A空白W0. 200 （37C,光徑1cm, 340nm）,2、分析靈敏度：濃度為 1.10g/

11、L時(shí)，吸光度差值 AA>0.300;3、準(zhǔn)確度：質(zhì)控品測試，測定結(jié)果在質(zhì)控范圍內(nèi)；4、精密度：重復(fù)性 CV （% W5%批間差w 8%5、線性范圍：在（0.2-2.5 ） g/L線性范圍內(nèi)，r >0.990 o在0.6-2.5 ） g/L范圍內(nèi) 的相對(duì)偏差不超過 15%測定結(jié)果為（0.2-0.6 ） g/L時(shí)的絕對(duì)偏差不超過 0.09g/L 。6、穩(wěn)定性：原包裝試劑盒在2c8c密閉避光貯存，有效期為 12個(gè)月。開瓶后，28 c避光儲(chǔ)存可穩(wěn)定 2周。檢驗(yàn)原理本試劑盒采用免疫比濁法，在適宜的條件下，樣本中Apo B與其相應(yīng)抗體相遇，形成抗原-抗體復(fù)合物，產(chǎn)生一定濁度。該濁度的高低在一定

12、量抗體存在時(shí)與抗原的含量成 正比?？衫眯?zhǔn)濃度和其生成的濁度在340nm處的吸光度建立吸光度與濃度的校準(zhǔn)曲線，從而計(jì)算出樣本中 Apo B的含量。實(shí)施方案本項(xiàng)目開發(fā)實(shí)施計(jì)劃周期為：2013年07月01日起2015年09月30日止，具體進(jìn)度安排如下：1、2013年07月01日8月30日完成主要原材料的研究、篩選與采購工作。2、2013年09月05日前完成主要原材料的驗(yàn)收檢驗(yàn)工作。3、2013年09月20日前完成配方和工藝的選定，樣品小試及試生產(chǎn)驗(yàn)證工作。4、2013年11月20日前完成中試生產(chǎn)放大與驗(yàn)證工作。長沙海潤生物技術(shù)有限公司I Q |海潤*團(tuán)5、2015年01月31日前完成分析性能評(píng)估、穩(wěn)定性研究及機(jī)型驗(yàn)證。6、2014年11月10日2014年12月31日間完成注冊(cè)及臨床樣品的生產(chǎn)與自檢。7、2015年03月31日前完成產(chǎn)品的注冊(cè)檢驗(yàn)。8、2015年05月31日前完成產(chǎn)品的臨床試驗(yàn)。9、2015年06月30日前完成注冊(cè)申報(bào)資料