BRMS1-HDAC1-VEGF-C在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義

1、brms1hdac1vegf-c在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義摘耍冃的探討brms1. hdac1及vegf-c蛋白在乳腺癌、乳房纖維瘤及正常乳腺組 織的表達(dá)及意義。方法 采用免疫組織化學(xué)方法隨機(jī)檢測60例乳腺癌組織標(biāo)木brmsk hdac1、 vegf-c蛋口的表達(dá),隨機(jī)收集乳房纖維瘤組織及其旁正常乳腺組織各20例作為對照組，結(jié)合 臨床病理資料分析其臨床意義。結(jié)果brms1在乳腺癌組織小表達(dá)率為60%,在乳房纖維瘤組 織中表達(dá)率為85%,在正常乳腺組織中表達(dá)率為95%,乳腺癌組織中的brms1的表達(dá)明顯低于乳 房纖維瘤和正常乳腺組織(p0. 05)。11dac1在乳腺癌組織屮表達(dá)率為91. 7%

2、,在乳房纖維瘤組 織屮表達(dá)率為55%,在正常乳腺紐織屮表達(dá)45%, hdac1在乳腺癌纟r織屮的表達(dá)明顯高于乳房纖 維瘤和正常乳腺組織(p0. 01),乳腺癌中vegf-c的表達(dá)58. 3%高于乳房纖維瘤25%和正常組 織20%(p<0. 05) o結(jié)論brms1、hdac1和vegf-c共同參與了乳腺癌的轉(zhuǎn)移，聯(lián)合檢測brms1. iidac1及vegf-c的表達(dá)有助于判斷其預(yù)后。關(guān)鍵詞brms1; hdac1; vegf-c;乳腺癌;免疫組織化學(xué)中圖分類號r737.9 文獻(xiàn)標(biāo)識碼a 文章編號1673-9701(2010)09-10-03expression and significa

3、nce of brms1,hdac1 and vegf-c in breast cancerxia genyu chen binyijishan hospital of wannan medical college, wuhu 241001,chinaabstract objectiveto investigate the expression and cl inical significsnce of breast cancer metastasis suppressor 1(brms1)protein,histone deacetylase 1 (hdac1) and vascular e

4、ndothelial cell growth factor-c(vegf-c) protein in breast cancer. methodsthe expression of brms1 protein, hdac1 and vegf-c was detected by using immunohistochemical technique in 60 cases of breast cancer, 20 cases of breast fibroids and 20 cases of adjacent normal breast tissue as control and the cl

5、 inical significance was analyzed with histopalthological records. resultsthe positive rate of brms1 expression was 60% in breast cancer tissue, 85% in breast fibroids and 95% in normal breast tissue, showing the positive rate of brms1 in breast cancer was much 1ower than that in breast fibroids and

6、 normal breast tissue(p<0. 05). the positive rate of hdac1 expression was 91.7% in breast cancer, 55% breast fibroids and 45% in normal breast tissue, showing the positive rate of hdac1 in breast cancer was obviously higher than that in breast fibroids and normal breast tissue(p0. 01). the positi

7、ve rate of vegf-c expression was 58. 3% in breast cancer, 25% in breast fibroids and 20% in norma i breast tissue(p<0. 05). cone 1 us i onbrms1, hdac1 and vegf-c might synergistically promote the metastasis of breast cancer. therefore,the combined detection of the expression of brms1 hdac1 and ve

8、gfc may be helpful in the determination of the prognosis of breast cancer.key wordsbrms1; hdac1; vegf-c; breast cancer; immunohistochemistry腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因(brms1)是抑制腫瘤轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的一個重耍的途徑。brms1是近年新發(fā) 現(xiàn)的基因，定位于人染色體llql3.廣13.2,與乳腺癌發(fā)生的關(guān)系密切，木文采用免疫組化法探 討brms1的病理特征和轉(zhuǎn)移的關(guān)系,brms1表達(dá)與組蛋口去乙酰化酶1 (hdac1)、血管內(nèi)皮住長 因子-c(vegf-c)的相互作用

9、及對乳腺癌轉(zhuǎn)移過程的影響。1材料與方法1.1臨床資料收集弋磯山醫(yī)院2006年1刀2007年4刀病理科乳腺癌臘塊標(biāo)本60例,均有完整的病 理資料，術(shù)前均未行放化療、內(nèi)分泌及生物靶向治療，患者年齡3179歲，屮位年齡50. 1歲， 其中年齡m50歲28例，50歲32例，腫瘤直徑2cm 39例;腫瘤直徑w2cm 21例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn) 移者20例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者40例;根據(jù)tnm分期，i期9例，ii期27例，iii期21例，iv3例 er 陽性 32 例,er 陰性 28 例,pr (+) 44 例，pr (-) 16 例，her-2 (-)(+) 41 例,her-2 (2+)(3+) 19 例，隨機(jī)

10、收集良性乳房紐織經(jīng)病理證實均為乳房纖維腺瘤20例，隨機(jī)收集乳房纖維腺瘤旁 0. 5cm外的正常乳腺組織20例作為對照。1.2標(biāo)木采集和石蠟切片制備乳腺癌和乳房纖維腺瘤蠟塊均來口病理科，收集我院門診乳房纖維瘤旁止常乳腺組織(距 纖維瘤0. 5cm以上)，以10%卬醛固定，石蠟包埋后制成蠟塊，全部蠟塊以4 u m連續(xù)切片，行常 規(guī)he染色，選取形態(tài)典型標(biāo)本行免疫組化染色。1.3主要實驗試劑brms1兔抗人單克隆抗體，工作濃度1: looohdacl鼠抗人多克隆抗體，即用型。即用型sabc 免疫組化染色試劑盒，均購白武漢陳士徳公司。vegf-c兔抗人單克隆抗體和dab顯色試劑盒， 購自北京中杉金橋牛

11、物技術(shù)有限公司。1.4制片檢測正常乳腺組織收集后經(jīng)福爾馬林液固定,24h內(nèi)取材，常規(guī)脫水、透明、浸醋、 包埋，切片(厚度為4ym),制作成石蠟切片。免疫組化(sabc法)嚴(yán)格按試劑盒說明操作。設(shè)陽 性對照和陰性對照，以已知的乳腺癌陽性片為陽性對照，以pbs代替一抗的乳腺癌組織免疫組 化染色結(jié)果為陰性對照。陽性判定:染色主要位于細(xì)胞胞漿或(和)胞核內(nèi)，陽性表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)參照kurose kl和李治 的報道,根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)和著色深度(與背景著色相對比)計分。先將陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度評 分(a),無色或基本不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;再按陽性細(xì)胞 所占的百分比評分(b),每例隨機(jī)計

12、數(shù)5個高倍鏡(x400)視野，確定其每個視野的陽性率，取 平均數(shù)陽性細(xì)胞比例10%為0分,10%50%為1分,50%以上為2分。將兩者得分相加,a+b3 分計為陰性，23分為陽性。1.5統(tǒng)計學(xué)處理實驗資料的統(tǒng)計學(xué)處理通過spss11.5統(tǒng)計軟件包進(jìn)行。率的比較采用x 2檢驗,多個率 的比較采用rxc表x 2檢驗,兩兩比較采用x 2分割法，相關(guān)性分析采用spearman等級和關(guān) 分析。p值0. 05時認(rèn)為兩組之間有差異。p值0. 01有顯著差異。2實驗結(jié)果乳腺癌組60例患者均為女性，年齡3179歲,中位年齡50. 1歲。其中50歲32例，250 歲28例；腫瘤玄徑w2cm 21例，腫瘤玄徑2cm

13、 39例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例; 乳腺癌臨床分期根據(jù)國際抗癌協(xié)會制定的乳腺癌txm分期標(biāo)準(zhǔn)，i期9例，ii期27例,iii期21 例，iv期3例;pr陽性44例,pr陰性16例;er陽性32例，er陰性28例;her-2(-)(+)41 例,her-2 (2+)(3+)19 例。60例乳腺癌組織標(biāo)本及乳房纖維瘤、正常乳腺組織brms1. hdac1、vegf-c蛋口的衣達(dá)。 見表12。3討論3. 1 brms1在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義腫瘤轉(zhuǎn)移是癌癥患者死亡的主要原因，在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中除存在原癌基因的激活、抑癌基 因的失活、細(xì)胞間的黏附異常以及金屬蛋白酶及其抑制劑表達(dá)失控外，

14、染色體發(fā)生雜和性缺失 (loh)與惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系十分密切，乳腺癌轉(zhuǎn)移抑制基因1 (breast cancer metastasis suppressor 1, brms1)是2000年賓夕法尼亞州立大學(xué)hershey醫(yī)學(xué)中心welch dr研究組發(fā)現(xiàn) 的一種轉(zhuǎn)移抑制基因。brms1可通過多種途徑發(fā)揮抑制腫瘤轉(zhuǎn)移作用，上要集屮在兩方面,一 方而brms1對胞外基質(zhì)變化的彩響以及癌細(xì)胞與胞外基質(zhì)關(guān)系的變化,samant rs3用brms1 轉(zhuǎn)染的mda-mb-435和mda-mb-231乳腺癌細(xì)胞仍能繼續(xù)生長，把浸潤生長的腫瘤注入無胸腺 小鼠乳房組織，顯苦減少往肺和局部淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，并推測br

15、ms1能恢復(fù)細(xì)胞間的縫隙連 接.brms1不上調(diào)具他腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因如nm23, kail, kissk另一方面是brms1對癌細(xì)胞的 自身運動能力變化的影響,brms1可通過磷脂肌醇途徑調(diào)節(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移4及下調(diào)骨橋蛋白(0pn) 加強(qiáng)誘導(dǎo)凋亡，抑制乳腺癌的轉(zhuǎn)移5。本研究通過60例乳腺癌,20例乳房纖維瘤,20例正常乳腺組織，進(jìn)行brms1的蛋白檢測， 結(jié)果表明，乳腺癌的表達(dá)率明顯低于正常乳腺和乳房纖維瘤的表達(dá)(p0. 01),而乳房纖維瘤和 正常乳腺組織表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)的差異(p>0. 05),在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 組,tnm分期iii+iv低于i +11組,er (+)組表達(dá)

16、率低于er組(p<0. 05), pr(-)組低于pr(+)組 (p<0. 05),而與年齡、腫瘤大小和her-2狀態(tài)無關(guān)。從表中可以看出，無淋巴結(jié)及冇淋巴結(jié)轉(zhuǎn) 移組差異較為明顯(p0. 05),可以推測brms1的缺失是造成乳腺癌轉(zhuǎn)移的因素之一，與乳腺癌 的侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)，尤其與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),brms1可作為乳腺癌預(yù)后的一個獨 立指標(biāo)。防止brms1的缺失，提高其在乳腺癌的表達(dá)是預(yù)防乳腺癌發(fā)病和治療乳腺癌的一種手 段,brms1可調(diào)控多個基因抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，但要準(zhǔn)確判斷是否有轉(zhuǎn)移，還要結(jié)合其他相關(guān)指標(biāo) 及是否與其他生物學(xué)指標(biāo)冇相互作用。3.2 hdac1在乳腺癌中的表

17、達(dá)及臨床意義組蛋白去乙酰化/脫乙?；懪c基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控有密切的關(guān)系。hdac1既可直接抑制基因 轉(zhuǎn)錄，又與轉(zhuǎn)錄共抑制子msin3、rb等相互作用介導(dǎo)他們的功能6。hdac1作為一種基因調(diào) 控因了，在乳腺惡性腫瘤屮可能抑制er的表達(dá)7。hdac1拮抗劑是抗乳腺癌的新途徑8。 hdac1拮抗劑功能的一個方面是hdac1參與組成的多蛋口復(fù)合體完整性受損從而影響該多蛋 白復(fù)合體的功能，使其甲基化功能受損。同時hdac1表達(dá)減少可通過pzi和bd-2的ax這一通 路引起細(xì)胞凋亡增多和細(xì)胞周期受阻而使增殖減少。統(tǒng)計學(xué)結(jié)果顯示,hdac1蛋口在乳腺癌表達(dá)率是91. 7%,乳房纖維瘤蛋口表達(dá)率是55%,正 常

18、乳腺組織表達(dá)率是45%,hdac1在乳腺癌表達(dá)明顯高于乳房纖維瘤和正常乳腺組織 (p<0. o1),hdac1在乳房纖維瘤和正常乳腺組織的表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)意義(p0. 05)。hdac1的表達(dá) 與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、tnm分期、er的表達(dá)相關(guān)(p<0. 05),與年齡，腫瘤大小、pr、her-2受體狀態(tài) 無和關(guān)性(p>0. 05) o值得注意的是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和txm分期與乳腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移密切和關(guān)， 兩者均有顯著差異(p<o.o1),i1dac1陽性簾提示乳腺癌預(yù)后不良，因此i1dac1是乳腺浸潤和轉(zhuǎn) 移的一個因素，與乳腺癌發(fā)病及轉(zhuǎn)移相關(guān)，是乳腺癌預(yù)后的一個指標(biāo)。3.3 vegf-c

19、在乳腺癌中表達(dá)及臨床意義vegf-c是vegf的新成員，又稱淋巴管生長因子，腫瘤細(xì)胞通過合成vegf-c誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞 生長并形成新的淋巴管，在乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中有重要作用。vegf-c能改變淋巴管內(nèi)皮的黏 附特性，影響其分泌的細(xì)胞因子和趨化因子9。但vegf-c不能誘導(dǎo)口發(fā)的淋巴管生成，其發(fā) 揮作用依賴于原有的淋巴系統(tǒng)，它可以是誘導(dǎo)孤立的淋巴島連接成網(wǎng)，也可以是以發(fā)岀絲狀偽 足的方式萌芽10。本研究顯示:vegf-c在乳腺癌表達(dá)的陽性率是5& 3%,纖維瘤陽性率是25%,正常乳腺組織 是20%,差異冇統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01),vegf-c在乳腺癌表達(dá)率與乳房纖維瘤相比較，有統(tǒng)計

20、學(xué) 意義(p0. 05),乳腺癌與正簾乳腺紐織比較，有顯著差異(p0. 01),乳房纖維瘤和正簾乳腺組 織vegf-c的表達(dá)無顯著的區(qū)別(p>0. 05), vegf-c表達(dá)在冇淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組冇就 著性差異(p<0.01),與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，而與腫瘤大小、年齡、er、pr、tnm分 期及her-2受體狀態(tài)無關(guān)(p>0. 05)。提示vegf-c可能參與乳腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，與乳腺癌轉(zhuǎn) 移和預(yù)后相關(guān)，尤其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，因此vegf-cnj作為預(yù)后的指標(biāo)，抑制vegf-c在乳 腺癌組織的表達(dá)是防治乳腺癌的一個有效的途徑。3.4 brms1. hdac

21、1與vegf-c的相關(guān)性及可能存在的作用機(jī)制spearman等級和關(guān)分析表明，乳腺癌屮brms1少hdac1呈負(fù)相關(guān)(r =-0. 406, p<0. 01), brms1 的表達(dá)與 vegf-c 的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r =-0. 262, p<0. 05), hdac1 的表達(dá) 與vegf-c的表達(dá)呈正相關(guān)(r =0. 312, p<0. 05),這說明三者可能共同參與了乳腺的侵襲和轉(zhuǎn)移, 而且存在著相互作用機(jī)制,brms1使hdac1下調(diào),hdac1能上調(diào)vegf-c,產(chǎn)生血管和淋巴管，產(chǎn) 生淋巴管通過與vegfr-3結(jié)合,通過多種途徑，最終在細(xì)胞外基質(zhì)成分及淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞周

22、圍 形成新生淋巴管。綜上所述,我們的實驗結(jié)果是在乳腺癌中可能存在這樣的一條通路:brms1可 卜調(diào)hdac1的表達(dá)，使vege-c的表達(dá)減少，從而達(dá)到抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移，我們針對brms1的轉(zhuǎn)移 機(jī)制進(jìn)行靶向治療，可抑制乳腺癌的轉(zhuǎn)移，延長生命,改善生存質(zhì)量及預(yù)后，為我們防癌抗癌提 供了一個新的途徑。參考文獻(xiàn)1 kurose k, gilley k, matsum oto s, et al. frequent soma tic mutations in pten and tp53 are mutually exclusive in the stroma of breast careinomasj.

23、nat genet, 2002, 32 (3): 355-357.2 李治，帥曉明，黃韜mmp-2、mmp-9在乳腺癌轉(zhuǎn)移中作用的研究j.華西醫(yī) 學(xué),2006,21 (1):43-44.3 samant rs, seraj mj, saunders mm, et al. analysis of mechanisms underlying brms1 suppression of metastasisj. clin exp metastasis, 2000, 18(8):683-693.4 dewald db, torabinejad j, samant rs,et al. metastasis

24、 suppression by breast cancer metastasis suppressor 1 involves reduction of phosphoino- si tide signaling in mda-mb-435 breast carcinoma cellsj. cancer res, 2005, 65(3):713-717.5 hedley bd, welch dr, allan al, et al. downregula tion of osteopont in con tributes to metastasis suppression by breast cancer metastasis suppressor 1j. int j cancer, 2008, 123 (3): 526-534.6 yang l, mei q, zielinska-kwiatkowska a,et al. an erg(ets-related gene) -associated his tone methyl transferase i nteracts with histone deacetylases 1/2 and transcription corepressors msin3a/bj. bioch