臍血淋巴細(xì)胞亞群水平及其臨床意義

1、臍血淋巴細(xì)胞亞群水平及其臨床意義作者：王軍，何艷芳，陳群娥，張紹美，趙光，高莉莉【摘耍】目的檢測(cè)新生兒臍血淋巴細(xì)胞亞群水平，探討新生兒 臍血的免疫功能。方法24例止常足月口然分娩新生兒臍血作為研究 對(duì)象，26例健康成年獻(xiàn)血員(男女不分)的血液作為對(duì)照，采用流式 細(xì)胞術(shù)(fcm)檢測(cè)臍血和成人血液中cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 ( + )、 cd19 ( + )、cd16+56 ( + )、cd4 ( + ) /cd8 ( + )的水平，對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng) 計(jì)學(xué)分析。結(jié)果臍血中cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 ( + )的量明顯低于 對(duì)照組(p<0. 01或v0.

2、 05)； cd4 ( + ) /cd8 ( + )的水平明顯高于對(duì) 照組(pv0.01)； cd19 ( + )、cd16+56 ( + )的水平與對(duì)照組相比差異 無(wú)顯著性(p>0. 05)o結(jié)論 臍血的淋巴細(xì)胞免疫功能低于健康成人。【關(guān)鍵詞】臍血；免疫功能；淋巴細(xì)胞亞群；流式細(xì)胞術(shù)abstract: objective to study the levels of lymphocyte subsets in cord blood and learn the immune function of cord blood. methods flow cytometry was used t

3、o show the levels of lymphocyte subsets (cd3 (+) , cd4 (+) , cd8 (+) , cd19 (+) and cd16+56 (+ ) ) and to calculate the ratio of cd4 ( + ) /cd8 ( + ) in the cord blood from normal full-term neonates (cord blood group) and in the peripheral blood taken from healthy adult blood donors (control group)

4、the results were analyzed statistically.results the levels of cd3 ( + ) , cd4 ( + ) and cd8 ( + ) were significantly lower than that in control group (p<0.01 or < 0. 05). the value of cd4 ( + ) / cd8 ( + ) was significantly higher in the cord blood than that in the control (p < 0.01) no sig

5、nificant differences in the levels of cd19 ( + ) and cd16+56 (+ ) were found be twee n the cord blood and the con trol (p&gt;0.05) . conclusion the lymphocyte immune function of neonates' cord blood is lower than that of the peripheral blood from healthy adultskey words : cord blood ； immune

6、 function; lymphocyte subsets; flow cytometry臍血中具有高質(zhì)量的未成熟造血干/祖細(xì)胞，比骨髓和外周血更 有利丁造血功能的重建，臍血在基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用中不受道德倫理 的限制，臍血細(xì)胞的收集不會(huì)對(duì)新生兒造成傷害，臍血造血干/祖細(xì)胞 可以低溫保存，解凍后并不丟失增生能力。臍血屮含有豐富的免疫活 性物質(zhì)和功能不成熟的免疫細(xì)胞，這些活性物質(zhì)和免疫細(xì)胞在臍血造 血干/祖細(xì)胞的成功移植及腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用。本研究利用流式 細(xì)胞術(shù)(fcm)檢測(cè)臍血中 cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 (+)、cd19 ( + )、 cd16+56 ( + )、c

7、d4 ( + ) /cd8 ( + )的水平,探討臍血淋巴細(xì)胞免疫功 能特點(diǎn)，為臍血在臨床的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1資料和方法1. 1研究對(duì)象24例臍血是我院2004年9月一2006年4月采集 的，均為足月自然分娩健康新生兒臍血，胎齡3742周，平均(38. 4 ±2. 5)周；出生體重為 25004000 g,平均(3293±386) g, apgar 評(píng)分均為810分。26例對(duì)照組血清來(lái)自社會(huì)健康成年獻(xiàn)血員，無(wú)男 女區(qū)分。1.2方法 取臍血和對(duì)照組血液各4 ml,當(dāng)日測(cè)定。采用fcm測(cè) 定臍血中 cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 ( + )、cd19 ( +

8、)、cd 16+56 ( + )、cd4( + )/cd8( + ),實(shí)驗(yàn)所需的單克隆抗體(單抗)fitc-cd3(+)、fitc-cd4 (+)、 fitc-cd8 (+)、 fitc-cd19 (+)、 fitc-cd16+56 (+)、 fitc-cd4 (+ ) /cd8 ( + )購(gòu)自美國(guó)becton-dickinson公司,流式細(xì)胞儀為美國(guó) becton-dickinson 公司產(chǎn)品。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)以土s,采用spss13. 0軟件包處理結(jié)果。 所有數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)，p<0. 05為差異有顯著性。2結(jié)果臍血清cd19 ( + )、cd16+56 ( + )水平與對(duì)照組比

9、較差異無(wú)顯著 性(p>0. 05)；臍血中cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 ( + )水平顯著低于對(duì) 照組(p<0. 01或<0. 05), cd4 ( + ) /cd8 (+)水平顯著高于對(duì)照組 (p<0.01)o見(jiàn)表1。表1臍血和成人血液中淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定結(jié)果 比較3討論t淋巴細(xì)胞在宿主抗移植物免疫反應(yīng)屮發(fā)揮重要作用，因此，從 亞群變化來(lái)觀察t淋巴細(xì)胞顯得尤為必要。外周成熟的t細(xì)胞無(wú)論在 表型還是在功能上都是異質(zhì)性群體，根據(jù)其表面標(biāo)志細(xì)胞黏附分子 (cd)的不同，淋巴細(xì)胞可分為cd4 ( + )和cd8 ( + )細(xì)胞兩大亞群。cd3 ( + )為全細(xì)

10、胞標(biāo)準(zhǔn)，代表著t淋巴細(xì)胞總數(shù)，一般為cd4 ( + )和 cd8 ( + )細(xì)胞之和，cd4 ( + ) / cd8 ( + )比值恒定維持細(xì)胞免疫反應(yīng) 的平衡。通常用檢測(cè)t淋巴細(xì)胞亞群的方法來(lái)間接反映細(xì)胞免疫功能 的狀況。cd4 ( + )能識(shí)別抗原，分泌多種淋巴因子，能輔助b細(xì)胞、t 細(xì)胞活化，從多方面調(diào)節(jié)和增強(qiáng)免疫力。cd8 ( + )細(xì)胞常在免疫應(yīng)答 后期增多，能識(shí)別可溶性抗原，分泌抑制因子，減弱或抑制免疫應(yīng)答。 cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 ( + )、cd4 ( + ) /cd8 ( + )表達(dá)水平高低代表 細(xì)胞免疫建立與否或免疫表達(dá)強(qiáng)弱，cd4 ( + ) /c

11、d8 ( + )比例關(guān)系是 機(jī)體免疫功能網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的重要樞紐，調(diào)控免疫進(jìn)行的方向。本實(shí)驗(yàn)屮 臍血清cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 ( + )水平顯著低于對(duì)照組(pv0.01 或v0.05 ), cd4 ( + ) /cd8 ( + )水平顯著高于對(duì)照組(pv0.01),表 明臍血中t淋巴細(xì)胞免疫功能比健康成人低，因所采用的臍血均為止 常足月健康新生兒臍血。分析其原因可能是臍血中的免疫細(xì)胞發(fā)育不 成熟，抗原表達(dá)和功能活性低下所致。賈廷珍等1等研究認(rèn)為新生 兒臍血t淋巴細(xì)胞發(fā)育不成熟，多為幼稚細(xì)胞或處于“抑制”狀態(tài)。 通常胎兒循環(huán)血中的t淋巴細(xì)胞數(shù)量在妊娠中期逐漸增加，其cd4( +

12、 ) /cd8 ( + )比例在出生時(shí)相對(duì)高于成人2o本研究結(jié)果顯示，與健康 成人相比，新生兒臍血t淋巴細(xì)胞亞群cd4 ( + ) /cd8 ( + )明顯升高, 此結(jié)果與既往部分研究結(jié)果一致，而與劉敬等3研究屮發(fā)現(xiàn)的cd4(+ ) /cd8 ( + )倒置，新生兒臍血t淋巴細(xì)胞亞群分布與正常人無(wú)顯 著性差異結(jié)果不同。究其原因，主要是由于眾多因素(包括種族、母體、 胎齡等)可影響新生兒t淋巴細(xì)胞亞群分布有關(guān)4o其中有可能影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素包括：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的差異(包括檢測(cè)方法、樣木量大 小)；影響t細(xì)胞亞群的因素較多，如藥物、心理活動(dòng)變化等，t細(xì) 胞亞群的變化有晝夜節(jié)律，抽取血樣的時(shí)間對(duì)結(jié)果會(huì)有

13、影響。今后當(dāng) 進(jìn)一步擴(kuò)大樣本數(shù)量進(jìn)行研究。cd19 ( + )分布于除漿細(xì)胞外的b 細(xì)胞譜系發(fā)育的各個(gè)階段，是b細(xì)胞的重要標(biāo)記，其功能類似于t細(xì) 胞表面的cd4 ( + )、cd8 ( + ),在b細(xì)胞活化及信號(hào)傳導(dǎo)中起協(xié)同受體 的作用，它調(diào)節(jié)b細(xì)胞的活化和增殖，為cr2復(fù)合體包括cd21 ( + )、 cd19 ( + )、cd81 ( + )的成員，參與b細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)。b細(xì)胞一方 面可作為apc加工處理變應(yīng)原而活化th細(xì)胞，另一方面可接受其他 apc提呈的抗原的刺激而活化?；罨腷細(xì)胞特異性表面分子mhc、b7(cd80 ( + )和cd86 ( + )等表達(dá)上調(diào)，mhc與b7分別和t淋

14、巴細(xì)胞 表面受體分子tcr/cd3 ( + )及cd28 ( + )相結(jié)合，共同構(gòu)成一對(duì)共刺 激分子，產(chǎn)生胞內(nèi)共刺激信號(hào)，使t細(xì)胞活化。b細(xì)胞的主要功能是 產(chǎn)生抗體、提呈抗原及分泌細(xì)胞因子參與免疫調(diào)節(jié)等。cd10 ( + )分子 主要分布b細(xì)胞膜上，是不成熟b細(xì)胞的協(xié)同刺激分子，恒定表達(dá)于 b細(xì)胞，屬于tnf受體家族。cd40 ( + )的配體cd40 ( + ) -l與b細(xì)胞 上的cd40 ( + )結(jié)合，誘導(dǎo)b細(xì)胞再次免疫應(yīng)答及形成生發(fā)中心。cd23(+ )在靜止期的b細(xì)胞上不表達(dá)，在成熟b細(xì)胞上低表達(dá)，主要在活 化的b細(xì)胞上表達(dá)，是激活b細(xì)胞亞群的表面標(biāo)志。b細(xì)胞受到抗原 刺激后分裂增殖

15、，分化為漿母細(xì)胞，進(jìn)而成熟為具有抗體生成能力的 漿細(xì)胞，合成并分泌免疫球蛋白發(fā)揮體液免疫功能作用。本研究結(jié)果 cd19 ( + )的表達(dá)與健康成人相比無(wú)顯著性差異，許利民等5研究 認(rèn)為臍血中b細(xì)胞主要以不成熟b細(xì)胞亞群(cd19 ( + )、cd10 ( + ) 為主。因此認(rèn)為臍血中b細(xì)胞數(shù)量雖然與健康成人相比無(wú)顯著性差異, 但是b細(xì)胞不成熟或未活化，是臍血移植早期體液免疫功能低下的主 要原因。cd 16+56 ( + )是自然殺傷細(xì)胞(nk細(xì)胞)的標(biāo)志物，表達(dá)的量 可能與nk細(xì)胞的數(shù)量或功能有關(guān)。nk細(xì)胞是機(jī)體防御體系的第一道 屏障，是機(jī)體抗腫瘤、抗感染的重耍免疫因素。nk細(xì)胞起源于cd34

16、(+ )造血細(xì)胞6,在骨髓微環(huán)境內(nèi)發(fā)育成熟,幼稚型nk細(xì)胞在il-2、 il-15和c-kit配基等早期造血生長(zhǎng)因子的作用下分化成熟，形成具 有免疫活性的成熟型nk細(xì)胞。成熟型nk細(xì)胞分泌y干擾素(ifn- y )、 腫瘤壞死因了 a (tnf-a )及粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因了(gm-csf) 等先天性免疫調(diào)節(jié)因子，參與機(jī)體早期抗感染免疫反應(yīng)，通過(guò)自然細(xì) 胞毒性殺傷病毒感染細(xì)胞，通過(guò)fcrr iii受體與抗體fc部分結(jié)合介導(dǎo) 抗體依賴性細(xì)胞毒性作用。本研究結(jié)果顯示，臍血屮cd16+56 ( + )的 量和健康成人相比差異無(wú)顯著性。臍血移植后抗感染、抗腫瘤作用弱, 可能是因?yàn)槟氀械膎k細(xì)胞

17、以幼稚型為主，nk細(xì)胞耒分化成熟從而 不能發(fā)揮正常的免疫功能。綜上所述，我們認(rèn)為臍血淋巴細(xì)胞免疫功能較健康成人低，部分 原因是淋巴細(xì)胞發(fā)育尚不完全成熟或沒(méi)有受到抗原刺激而活化，至于 其他的因素尚需要進(jìn)一步探討?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 賈廷珍，劉長(zhǎng)安，楊光臍血基礎(chǔ)與臨床研究j 中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志，2006, 26 (1)： 10-14.2 lapolla a, dalfra mg, sanzari m, et a 1. lymphocyte subsets and cytokines in women with gestational diabetes mel 1 itus and their ne

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