HIV病毒與艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測學(xué)習(xí)教案

1、會計學(xué)1HIV病毒與艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測病毒與艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測第1頁/共22頁HIV病原學(xué)中文名稱：中文名稱：人類免疫缺陷病毒 英文名稱：英文名稱：human immunodeficiency virus;HIV 定義：定義：引起獲得性免疫缺陷綜合征和相關(guān)疾病的RNA病毒。病毒主要侵犯CD4 T細(xì)胞、CD4單核細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞。IntroductionHIV病毒結(jié)構(gòu)模式圖病毒結(jié)構(gòu)模式圖第2頁/共22頁HIV病原學(xué)Structural proteins病毒基因組是兩條相同的正股RNA，每條RNA長約。編碼了至少9個蛋白，可分為三類：結(jié)構(gòu)蛋白、調(diào)控蛋白、輔助蛋白。 結(jié)構(gòu)蛋白結(jié)構(gòu)蛋白 Gag gag基因

2、產(chǎn)生55kD的蛋白p55：p17基質(zhì)、p24衣殼、p9核衣殼、p6。 Pol Gag-Pol融合蛋白 ：p10蛋白酶、p50逆轉(zhuǎn)錄酶、p15 RNA酶H 及p31整合酶。 Env Env起先是160kD的蛋白 ：gp41與gp120 。調(diào)控蛋白調(diào)控蛋白 輔助蛋白輔助蛋白 第3頁/共22頁HIV病原學(xué)HIV structure & life cycle第4頁/共22頁HIV病毒感染病程現(xiàn)已證實(shí)HIV感染可分為4個階段，但不是所有感染HIV的患者都一定經(jīng)歷這4個階段。 HIV感染的急性初期；HIV感染的慢性無癥狀期；HIV感染的癥狀期；晚期，稱為AIDS。 第5頁/共22頁艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測

3、目前檢測HIV的方法有100多種，總體來說可以分為兩大類： 抗體檢測 病毒檢測 細(xì)胞培養(yǎng)(病毒分離) p24抗原檢測 病毒核酸檢測早期對HIV的診斷主要是通過血清學(xué)試驗(yàn)檢測抗HIV的抗體,間接地診斷HIV感染。 第6頁/共22頁血清學(xué)試驗(yàn)分為初篩和確認(rèn)試驗(yàn)。最常用的初篩試驗(yàn)：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）最常用的確認(rèn)試驗(yàn)：免疫印跡試驗(yàn)(WB)。 艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測：血清學(xué)試驗(yàn)第7頁/共22頁HIV病毒感染后血清學(xué)動態(tài)變化第8頁/共22頁HIV病毒感染窗口期Window Period艾滋病窗口期是針對艾滋病檢測的標(biāo)志物而言，并非一個籠統(tǒng)的概念。 人體感染HIV后，一般需要2-3周，最多6周左右血液

4、中才可檢測到HIV抗體或者HIV抗原。因?yàn)閺母腥綡IV到機(jī)體產(chǎn)生抗體的這一段時間檢測不到HIV抗體或者HIV抗原，故稱之為窗口期，又叫做空窗期，是英文Window Period的翻譯。值得注意的是，感染艾滋病病毒的個體在窗口期內(nèi)同樣具有傳染性。 在病毒感染后3個月，大多數(shù)患者的血清學(xué)試驗(yàn)為陽性。盡管有報道有感染1年后才出現(xiàn)血清陽性化，但實(shí)際上，所有患者都是在6個月內(nèi)出現(xiàn)血清的陽性轉(zhuǎn)化。 第9頁/共22頁HIV病毒感染窗口期Window Period第10頁/共22頁HIV病毒感染窗口期Window Period第11頁/共22頁艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測：ELISA試劑分代情況：第一代HIV診斷試劑原理

5、為間接ELISA法，所用的包被抗原為體外培養(yǎng)的HIV裂解物，含有很多雜抗原，主要HIV結(jié)構(gòu)和表達(dá)蛋白濃度不能保證，靈敏度和特異性不高，出現(xiàn)許多假陰性和假陽性 第二代使用基因重組或合成多肽抗原，利用間接ELISA原理，窗口期比第一代診斷試劑縮短了約20天，靈敏度和特異性也有所提高。在一次試驗(yàn)中可同時檢測HIV-1和HIV-2抗體 。第三代利用雙抗原夾心法檢測標(biāo)本中的抗體，酶標(biāo)記物改為特異性HIV抗原，檢測HIV-1、HIV-2和HIV-10抗體 。第四代HIV診斷試劑是一種HIV-1/HIV-2抗體與HIV-10亞群抗體及p24抗原的聯(lián)合檢測方法。 第12頁/共22頁艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測：ELISA

6、第13頁/共22頁艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測：確證試驗(yàn)WB結(jié)果判讀結(jié)果判讀第14頁/共22頁艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測：病毒載量測定病毒核酸提取 逆轉(zhuǎn)錄 PCR第15頁/共22頁病毒數(shù)量預(yù)測生存時間病毒數(shù)量預(yù)測生存時間HIV-1的數(shù)量（的數(shù)量（ml）生存期生存期（年年）1第16頁/共22頁艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測：流式細(xì)胞術(shù)CD4淋巴細(xì)胞計數(shù)不是診斷性檢查，主要用于判斷免疫抑制的程度。 流式細(xì)胞儀（流式細(xì)胞儀（FCM）工作原理）工作原理第17頁/共22頁艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測：流式細(xì)胞術(shù)用于HIV感染的疾病分期表，凡CD4+T淋巴細(xì)200mm3，或者CD4+T淋巴細(xì)胞%14%的HIV感染者可歸為艾滋病。第18頁/共22頁艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測：流式細(xì)胞術(shù)一般而言， CD4+T淋巴細(xì)越少，大部分并發(fā)癥出現(xiàn)的頻率越高。第19頁/共22頁 This is not the end. It is not even the beginning