苧麻果膠測定方法

1、果膠的測定方法1、 引言1.1 果膠簡介果膠是植物膠，是以半乳糖醛酸為主的復(fù)合多糖類物質(zhì)，屬多糖類，存在于高等植物的葉、根、莖的細(xì)胞壁內(nèi)，與細(xì)胞彼此粘合在一起，尤其是果實和葉中的含量多。在橙屬水果的果皮和蘋果渣及甜菜渣中都有20%-50%的果膠。果膠是一種重要的多糖類物質(zhì)，其用途很廣，在食品、醫(yī)藥和其它工業(yè)中廣泛應(yīng)用。果膠為粉末物質(zhì)，黃色或白色；無臭，具粘稠感。能溶于20倍水中生成枯稠溶液，不溶于酒精及一般有機(jī)溶劑，以酒精、甘油或糖漿等浸潤則極易溶于水中。在酸性條件下比較穩(wěn)定，遇強(qiáng)酸強(qiáng)堿易分解，果膠溶液在室溫與強(qiáng)堿作用生成果膠酸鹽，這種鹽已失去凝膠作用。各種果實中的果膠，通常以部分甲基化了的多

2、縮半乳糖醛酸的鈣或鎂形式存在，經(jīng)稀鹽酸水解可以得到水溶性果膠，即多縮半乳糖醛酸甲酯。因此，可以確定果膠的基本組成是半乳糖醛酸，屬酸性物質(zhì)。為非曲直高分子聚合物，分子量20000-400000，水解時，產(chǎn)生果膠酸和甲醇等。苧麻主要由纖維素、半纖維素、木質(zhì)素和果膠等組成，除了纖維素外，其他物質(zhì)統(tǒng)稱為膠質(zhì)。果膠在苧麻生長期是纖維素、半纖維素、和木質(zhì)素等生長的營養(yǎng)物質(zhì)，并起著調(diào)節(jié)植物體內(nèi)水分的作用”1，其含量隨著苧麻的生長而逐漸降低，但在植物生長末期又稍有回升。因此，通過測定果膠的含量，可以實時監(jiān)測苧麻的生長情況。另外，為獲得可紡纖維，必須對收割后的原麻進(jìn)行脫膠處理，纖維脫膠程度直接影響到后序加工的技

3、術(shù)指標(biāo)；而果膠作為原麻膠質(zhì)中的成分之一，也需進(jìn)行成分分析。1.2 果膠的測定方法研究進(jìn)展1.2.1 半乳糖醛酸測定法果膠的制取步驟如下：原料粉碎洗滌消毒晾干水解粗果膠脫皮膠狀果膠粉碎產(chǎn)品一、提取操作將精選的苧麻粉碎至2-3mm，用60的水沖洗兩次，除去糖類等雜質(zhì)，然后噴灑酒精晾24h。稱取100g晾干后的物料置于3000ml燒瓶中，加1500ml水，并用HCl將其PH值調(diào)到2.2，加熱到75，在此溫度下水解20h，此時果膠原水解，并溶解在酸性溶液中，過濾，棄去殘渣，濾液加有機(jī)溶劑，初次沉淀出果膠，用水洗滌，然后加水溶解粗果膠，加2g活性炭于70時脫色1h，熱濾后，濾液于75時濃縮，濃縮到70m

4、l的溶液時，加乙醇，再沉淀果膠，過濾，用稀乙醇洗滌，沉淀物質(zhì)經(jīng)低溫真空干燥，得到膠狀果膠，粉碎后即得果膠成品；濾液主要是稀乙醇，蒸餾后可重新使用。經(jīng)以上操作制得的果膠產(chǎn)品及產(chǎn)量。二、果膠含量的測量稱取以上所得的樣品0.1g放入250ml的燒杯中，加入無水乙醇30ml，充分混合后，用表面皿蓋好，于80-90加熱20min，冷卻一小時，抽濾，將沉淀反復(fù)用無水乙醇洗到無糖份為止。然后將沉淀移入250ml的錐形瓶中，并用60ml加熱至沸的0.05ml/L的HCl將殘留在器皿上的沉淀物完全轉(zhuǎn)移到瓶中：在沸水浴中回流一小時，冷卻到室溫轉(zhuǎn)入100ml的容量瓶中，用水稀釋到刻度，再取該液5ml稀釋到20倍后，

5、取2ml溶液按半乳糖醛酸的工作曲線法測定樣品的吸光度為0.320，由工作曲線查得這時的濃度為41.76ug/ml。代入公式： 果膠含量=半乳糖醛酸濃度/(樣品重量*500)*100%從而得到果膠含量。1.2.2 微波輔助萃取測定法微波輔助萃取技術(shù)是利用微波對細(xì)胞的破壁作用和加熱作用，加速細(xì)胞內(nèi)的有效成分的快速溶出。微波萃取在天然產(chǎn)物的萃取方面已有廣泛的應(yīng)用，利用微波輔助萃取技術(shù)，從橘皮、檸檬皮、西番蓮果皮中提取制備果膠也多有研究13-51，但將其應(yīng)用到天然產(chǎn)物成分分析中則少有報道。本文利用微波輔助萃取技術(shù)對苧麻中的果膠進(jìn)行了快速萃取，并對其工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化，按照GB5889-86中的計算方法

6、計算果膠的含量；另參照果膠的制備方法將萃取液中的果膠制備成果膠粉，采用紅外光譜法對微波萃取所得果膠粉進(jìn)行了鑒定。一、材料與方法實驗試劑和儀器試劑：草酸銨、濃硫酸、苯、95乙醇、鹽酸、溴化鉀。以上試劑均為市售分析純。標(biāo)準(zhǔn)果膠粉：sigma P9135樣品：湖北省南漳縣所產(chǎn)苧麻。儀器：N9G99S型微波爐、BP221S型分析天平(O0001g)、pHS一3C型數(shù)字酸度計、TENSOR 37型紅外光譜儀。苧麻預(yù)處理將苧麻剪碎成一定長度，烘干稱取5g左右的苧麻，放人盛有一定量蒸餾水的燒杯中，再置于450W微波爐中加熱3min，冷卻后重新?lián)Q新蒸餾水重復(fù)加熱6min，除去水溶性的糖及部分色素類物質(zhì)等，過濾

7、將苧麻烘干至恒重并稱重備用。試驗方法選取鹽酸為萃取劑，采用微波輔助萃取，選擇不同的浸泡時間、濃度、苧麻粒徑、液料比、微波輻射功率、微波時問、萃取劑和萃取次數(shù)等進(jìn)行條件優(yōu)化，將萃取果膠后的苧麻進(jìn)行洗滌、烘干、稱重，根據(jù)“GB5889-86苧麻化學(xué)成分定量分析”中的計算方法得果膠含量，同時選用GB5889-86法作對照。最后在優(yōu)化條件下，按照果膠制備的方法將微波萃取的果膠制備出來，與標(biāo)準(zhǔn)果膠對照，進(jìn)行紅外光譜鑒定。二、結(jié)果與討論微波輔助萃取苧麻中果膠的條件優(yōu)化(1)浸泡時間對果膠含量的影響將經(jīng)預(yù)處理的苧麻浸泡，以利于微波對細(xì)胞的破壁和待檢測成分的溶出。按上述試驗方法，分別選擇浸泡時間為0、10、2

8、0、40、80、100、120min，研究了浸泡時問對果膠含量的影響。(2)鹽酸濃度對果膠含量的影響選擇浸泡時問為20 min，按上述試驗方法，改變鹽酸的濃度，分別為10、32、100、316、100mmolL進(jìn)行果膠萃取，所得果膠含量與鹽酸濃度的關(guān)系。(3)微波輻射功率對果膠含量的影響選擇浸泡20min，鹽酸濃度為100100mmolL，按上所述試驗方法，改變微波輻射功率萃取果膠，所得果膠含量與微波輻射功率之問的關(guān)系。(4)液料比對果膠含量的影響其他條件不變，改變液料比萃取果膠，所得果膠含量與液料比之間的關(guān)系。(5)苧麻纖維長度對果膠含量的影響其他條件不變，改變苧麻纖維的長度萃取果膠，所得果

9、膠含量與苧麻纖維長度之間的關(guān)系。(6)微波輻射時間對果膠含量的影響其他條件不變，改變微波加熱時間萃取果膠，所得果膠含量與微波時間之間的關(guān)系。（7）萃取劑的選擇以鹽酸為萃取劑是因為很多文獻(xiàn)中選用的比較多，目的是為了制備果膠，萃取劑的用量比較大，從成本角度考慮的。而本文是以含量分析為目的，為了有利于微波輔助萃取法與GB法的對照研究，將萃取劑改為GB法中所用的溶劑草酸銨及其濃度為5g/L，其他試驗條件相同的條件下下進(jìn)行實驗，得果膠含量與萃取劑的選擇之間的關(guān)系。（8）蘋取次數(shù)以草酸銨為萃取劑，其它條件同上，增加萃取次數(shù)，所得含量與萃取次數(shù)之間的關(guān)系。三、微波輔助萃取苧麻中果膠的含量測定及鑒定果膠含量的

10、測定：根據(jù)以上試驗得出了以下優(yōu)化工藝條件：萃取劑為5gL草酸銨，浸泡時間為20min，微波功率為450W，料液比為20 mLg，纖維長度為10cm，微波輻射時問為6min，萃取次數(shù)為二。在以上最佳條件下進(jìn)行微波輔助萃取試驗，將萃取后的苧麻經(jīng)過濾、沖洗、烘干和稱重，按照GB法中的計算方法計算果膠含量。微波輔助萃取所得果膠的紅外鑒定：按照果膠制備的方法圈將微波輔助萃取的果膠制成果膠粉，采用KBr壓片法進(jìn)行紅外光譜鑒定，標(biāo)準(zhǔn)果膠粉(sigma)的紅外圖譜和對照圖譜進(jìn)行對比。1.2.3 微生物脫膠菌脫膠測定法本法通過以腐爛的苧麻為研究對象，對其中存在的具有苧麻生物脫膠能力的微生物進(jìn)行分離鑒定，并對其脫

11、膠活性進(jìn)行比較研究。為篩選并獲得苧麻微生物脫膠菌種，將富集培養(yǎng)與稀釋涂布相結(jié)合，從隨機(jī)選取的幾種腐爛苧麻樣品中獲得微生物純培養(yǎng)物38株，以形態(tài)學(xué)觀察、生理生化測定和16S rRNA聚類分析對細(xì)菌進(jìn)行鑒定。利用透明圈法篩選得到脫膠能力相對較強(qiáng)的微生物9株，其中細(xì)菌6株，分別隸屬于芽孢桿菌屬(Bacillus)1株、不動桿菌屬(Acinetobacter)2株、類芽孢桿菌屬(Paenibacillus)2株、伯克霍爾德氏菌屬(Burkholderia)l株、絲狀真菌3株。以殘膠率為標(biāo)準(zhǔn)，比較6株細(xì)菌綜合脫膠能力，其中枯草桿菌(Bacillus subtilis)脫膠能力最強(qiáng)，殘膠率為1382。由實

12、驗數(shù)據(jù)可知，本法尚處于研究探索階段，尚不能用于實際生產(chǎn)。1.2.4 3，5一二硝基水楊酸顯色法測定法一、測定原理：用果膠酶將煙草中的果膠質(zhì)水解，得到的半乳糖醛酸類物質(zhì)在pH12條件下與DNS發(fā)生顯色反應(yīng)，產(chǎn)生棕紅色的物質(zhì)。在一定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，半乳糖醛酸的量與反應(yīng)液的顏色成正比例關(guān)系。二、材料與方法（1）材料SHAB 2002型恒溫水浴震蕩器(常州國華電器有限公司)；754型紫外可見分光光度計(上海精密化學(xué)儀器有限公司)；DK一98一I型電子恒溫水浴鍋(犬津市泰斯特儀器有限公司)；A1204電子天平(感量00001g，Merrier-toledoGroup)。20000ug復(fù)合果膠酶(適宜條

13、件：pH4，50。C)(云南大學(xué)微生物重點實驗室)；果膠(標(biāo)準(zhǔn)樣品，SIGMAALDRICH CHEMIE Gmbh PO112089552 SteinheimGemany 497329970)；3，5一二硝基水楊酸(DNS)(CP，中國醫(yī)藥上海化學(xué)試劑公司)；四水合酒石酸鉀、氫氧化鈉、冰醋酸和硼酸(AR，上?；瘜W(xué)試劑有限公司)；苯酚和無水亞硫酸鈉(AR，天津化學(xué)試劑有限公司)；磷酸(AR，廣東省汕頭市西隴化工廠)。 （2）方法溶液的配制(1)DNS試劑。在500mL含有182g酒石酸鉀的熱(60)水溶液中，依次加入63gDNS、262mL(2molL)NaOH溶液、5g苯酚和5g亞硫酸鈉，攪

14、拌溶解，冷卻至20左右后用蒸餾水定容到1L，搖勻，貯于棕色瓶中備用。(2)羅賓遜緩沖液(pH4)。先配制每升含392g磷酸、240g乙酸和247g硼酸的混合溶液，然后每100mL混合液中加入25mL 02molLNaOH溶液，混勻即可。樣品處理與分析將苧麻樣品于45下烘1d，粉碎，過40目篩。準(zhǔn)確稱取15g苧麻末(含水率約5)，分別置于250mL三角瓶中，加入150mL蒸餾水，置于沸水浴中回流1h，過濾，再加蒸餾水回流，如此重復(fù)3遍(以去除糖和色素)后用約lOOmL pH4的羅賓遜緩沖液把濾渣沖入150mL三角瓶中，加入05g復(fù)合果膠酶，混勻，置于50水浴搖床上以120rmin的轉(zhuǎn)速振蕩5h后

15、，立即放于沸水中8min(使酶失活)，過濾，用熱水洗滌(60mL×5)，濾液和洗液合并，冷卻到20左右后傾人500 mL容量瓶中，用蒸餾水定容到500mL，搖勻，得樣品處理液；取05mL樣品處理液，加入1mL DNS試劑和1mL(125molL)NaOH溶液，于沸水中顯色8min，冷卻到20左右后用蒸餾水定容到5mL。以空白(加相同的酶經(jīng)過相同處理的不加樣的顯色液)作參比，用紫外可見分光光度計于波長540nm處測定吸光度，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求出其濃度，按下式計算出樣品中的果膠含量：果膠含量=C*V*10/m*（1-含水率）*1000000*100%式中：c由標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算的濃度（ug

16、mL)；y待測液的總的定容體積(mL)；m稱取煙樣的質(zhì)量(g)。1.2.4 AAS法間接測定植物果膠含量測定法一、測定原理本法利用果膠在堿性條件下尤其有Na2CO3存在下，加速水解成果膠酸，使果膠酸與CaCl2反應(yīng)生成果膠酸鈣，利用原子吸收分光光度法測定其中Ca的含量，進(jìn)而測得果膠的含量，方法簡便、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好，且AAS法測定Ca靈敏度高，可檢測至ug/g濃度，故對低含量果膠用原子吸收光譜法效果更好，同時與重量法比較，結(jié)果較理想。二、材料與方法材料：試驗材料采用新鮮苧麻磨碎日立Z-8000型原子吸收分光光度計、電子天平方法：稱取苧麻鮮樣2.5g加30ml 2%含0.16%NaOH的Na2

17、CO3溶液，將離心管浸入沸水加熱20min，不斷攪拌溶液、離心，將上清液倒入燒杯中，再將沉淀每次用10ml蒸餾水沖洗2次，混勻并離心，將全部離心液合并到燒杯中，進(jìn)行果膠酸沉淀，加入1ml冰臘酸酸化溶液，再加2ml 25%CaCl2，仔細(xì)混勻，置電爐上，在攪拌的情況下加熱至開始沸騰，溶液冷卻10-15min，離心取沉淀，每次用0.1%臘酸10ml沖洗沉淀，共洗4-5次，離心取沉淀。將上述沉淀烘干至恒重，稱重，所得果膠酸Ca，乘以換算系數(shù)0.9235，即可得果膠質(zhì)含量。向獲得沉淀中加入10ml硝酸-高氯酸（5：1）混酸消煮至清亮透明冒白煙，定容50ml，再稀釋若干倍于日立Z-8000型原子吸收分光

18、光度計上測定Ca含量，Ca標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍為0-12mg/L，儀器條件為：波長324.8nm，燈電流7.5mA，狹縫0.4nm，燃助比為0.35/1.6.燃燒器高度為10mm，以Ca的結(jié)果乘以12.072，即可獲得果膠質(zhì)的含量。1.2.5 超臨界二氧化碳酶降解苧麻膠質(zhì)與產(chǎn)物測定法一、測定原理本法結(jié)合前人的研究成果對超臨界二氧化碳酶降解和常壓條件下酶催化降解苧麻膠質(zhì)進(jìn)行對比分析研究，對其主要降解成分進(jìn)行測定分析，以期通過產(chǎn)物形成規(guī)律揭示超臨界二氧化碳酶催化脫膠機(jī)制，為改進(jìn)生物脫膠的污染治理工藝提供參考數(shù)據(jù)，也期望為尋求一種更清潔高效的苧麻脫膠介質(zhì)做理論探究。二、實驗材料實驗材料：苧麻原麻由中國農(nóng)業(yè)科

19、學(xué)院麻類研究所提供，將質(zhì)量均勻的原麻剪短為1 cm左右，除雜備用。酶制劑：耐熱堿性果膠酶Bioprep，諾維信公司生產(chǎn)；耐熱堿性半纖維素酶Coloxylan，江蘇無錫德冠公司生產(chǎn)。試劑：NazHP04·12H：0-KH2PO。緩沖液(pH值867)，3，5-二硝基水楊酸(分析純)，乙腈(色譜級)，標(biāo)準(zhǔn)D-木糖(分析純)，標(biāo)準(zhǔn)D-半乳糖(分析純)，標(biāo)準(zhǔn)D-葡萄糖(分析純)，D-半乳糖醛酸(分析純)，咔唑(分析純)，濃硫酸(分析純)，97乙醇，四硼酸鈉(分析純)。儀器與設(shè)備：756型紫外分光光度計，HPLC色譜儀，Waters600泵控制儀，Waters410視差折光檢測器，杭州英譜V4

20、0+-HS色譜數(shù)據(jù)工作站，色譜柱Hypersil NH25u，尺寸46 mm×300 mm，GSH-2型高壓反應(yīng)釜，KYKY-1000B型掃描電鏡。三、實驗方法3.1、酶降解過程樣品預(yù)處理：20 g麻樣放入裝有300 mL、pH值為867的Na2HP04·12H20-KH2P04緩沖液的三角瓶，置入水浴恒溫振蕩器，溫度55，振蕩速度250 rmin，預(yù)處理30 min后滴加3 molL NaOH溶液調(diào)至pH值為100，放回振蕩器同轉(zhuǎn)速再處理30 min，待反應(yīng)體系pH值達(dá)到85后加入酶制劑復(fù)配液。常壓條件下酶降解：預(yù)處理后的樣品瓶內(nèi)加入酶制劑復(fù)配液，常壓條件下進(jìn)行酶降解反應(yīng)

21、。超臨界二氧化碳酶降解：將預(yù)處理后的麻樣放入高壓反應(yīng)釜，泵入二氧化碳，當(dāng)壓力為100 MPa，溫度為55時開始計時。酶降解反應(yīng)的終止：終止反應(yīng)后，將麻樣瓶置入沸水浴鍋中，于97酶滅活15 min。再將反應(yīng)樣用2層紗布過濾，收集濾液，濾渣放回原三角瓶并加入200 mL蒸餾水后于氣浴搖床中在50，300 r/min條件下，反復(fù)搖15 min將降解物充分洗滌脫落，第2次用2層紗布過濾，收集濾液、濾渣。濾渣在85電熱恒溫干燥箱烘干，2次濾液并存在1個三角瓶里備用。3.2、測定方法膠質(zhì)去除率：烘干殘渣并室溫放置1 d，稱殘重，計算膠質(zhì)去除率。酸度：測定第1次降解酶解濾液的pH值，制作酸度變化曲線。還原總

22、糖：采用DNS法。并存2次濾液于85烘箱內(nèi)濃縮體積至100 mL，取一定樣品溶液在8 000 rmin下，離心6 min。取上清液，稀釋5倍，在450 nm處測其OD值，根據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計算酶降解過程中各時段還原總糖含量并繪制變化曲線。單糖：HPLC法。色譜條件：流動相為75乙腈，柱溫45，檢測器溫度35，流速1 mLmin，進(jìn)樣量20ul，氦氣頻率25 mLmin。檢測方法：外標(biāo)法。定量方式：峰面積法。峰標(biāo)識：保留時間。糖醛酸：以半乳糖醛酸為標(biāo)準(zhǔn)，采用咔唑比色法測定。將各處理時段2次過濾酶解濃縮液280 mL，取一定樣品溶液以8 000 rmin離心6 min。各吸取上清液用蒸餾水稀釋2倍

23、，按制作標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的操作方法在497 nm處測定OD值。取3次重復(fù)的平均吸光值，計算各時段的糖醛酸含量。3.3、苧麻韌皮結(jié)構(gòu)的掃描電鏡觀察采用靜止酶降解法，實驗樣品為在2種條件下降解2 h的麻樣，反應(yīng)結(jié)束后，將處理樣置于97，酶滅活15 min，隨后將麻樣放入清水中浸泡后輕輕撈起，自然晾干，使其韌皮結(jié)構(gòu)處于自然分散狀態(tài)。對2種條件下降解2 h的電鏡掃描圖進(jìn)行比較，直觀地揭示2種系統(tǒng)中膠質(zhì)類物質(zhì)的降解差別。1.2.6 高效液相色譜法測定苧麻中的果膠含量法為了快速準(zhǔn)確地測定苧麻中的果膠，我們研究了用高效液相色譜法測定苧麻中果膠含量的方法。該方法由于經(jīng)過色譜柱分離，比容量法、重量法和比色法具有更好

24、的選擇性，測定結(jié)果更準(zhǔn)確可靠。一、主要儀器和試劑高效液相色譜儀(美國PERKINEI。MER公司)，包括250泵，LC-30示差折光檢測器，LCOven一101柱溫箱；大連化物所KYKY-SPS-色譜工作站。流動相用水為石英亞沸蒸餾水并用MilliQ50超純水儀(美國Millipore公司)處理；EDTA鈣鈉：高效液相色譜專用(Waters公司提供)；半乳糖醛酸標(biāo)樣(Fluka公司生產(chǎn)，含量99)。二、方法色譜條件：色譜柱：waters sugar，Pak-1鈣型陽離子交換柱(65×300mm)，流動相為0.059L EDTA鈣鈉水溶液，流速為0.5mlmin；柱溫85；進(jìn)樣量20u

25、l。樣品處理準(zhǔn)確稱取25g苧麻樣品于250mL圓底燒瓶中，加人70mL水和25鹽酸7mL，在沸水浴中回流水解25h，將水解液過濾至100mL容量瓶中，加入一滴0.5的甲基紅指示劑，調(diào)pH到近中性(先用40氫氧化鈉粗調(diào)，臨近中性時改用1氫氧化鈉調(diào))；定容到100mL。取2mL用45um針頭過濾器過濾，取濾液20uL進(jìn)樣分析。三、結(jié)果與討論31、檢測器的選擇由于待測定物在紫外光區(qū)無吸收，而且待測物在樣品中的含量較高，故選用示差折光檢測器檢測。32、流動相的選擇waters suga卜Pakl鈣型陽離子交換柱一般以水作流動相，水中加入少量EDTA鈣鈉可減少柱材料上的鈣離子流失，延長柱的壽命。實驗選用

26、0.059LEDTA鈣鈉水溶液作流動相。33、柱溫的選擇在室溫(1825)下色譜峰型比較差，而且色譜柱反壓大，容易損傷色譜柱，柱溫保持在70一90之間可使半乳糖醛酸得到較好的分離且柱反壓小，故實驗控制柱溫為85。34、樣品前處理需將苧麻樣品的果膠水解成半乳糖醛酸再測定，用鹽酸水解，實驗表明在樣品中加入70mL水和7mL鹽酸，沸水浴加熱回流水解2h以上，可讓果膠完全水解為半乳糖醛酸；實驗選用加熱回流水解25h。水解樣品調(diào)正pH后用0.45um針頭過濾器過濾后即可進(jìn)行高效液相色譜分析。35、回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限分別配制濃度為5.0、1.0、0.2、0.04、0.008gL的半乳糖醛酸緩沖標(biāo)準(zhǔn)

27、溶液，進(jìn)樣后根據(jù)不同濃度的峰面積計算出回歸方程?；貧w方程為A(峰面積)=475+146×100000000C(gL)。根據(jù)信噪比SN=3，可得檢出限為1.0mgL。36、樣品分析結(jié)果苧麻樣品每樣稱兩份，其中一份加入0.2g的半乳糖醛酸標(biāo)樣，按樣品處理的方法進(jìn)行水解后按選定色譜條件進(jìn)行分析。按加標(biāo)樣品測得量減去未加標(biāo)樣品測得量再除以標(biāo)準(zhǔn)加入量計算回收率，每樣品平行測定5次計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，再將本法與重量法分析結(jié)果對比。該方法用酸將果膠水解為半乳糖醛酸后，用Waters suga-Pakl鈣型陽離子交換柱高效液相色譜法測定水解樣中的半乳糖醛酸，然后折算為果膠含量。由于經(jīng)過色譜柱分離，苧麻

28、中半纖維素、淀粉等物質(zhì)永解產(chǎn)生的木糖、阿拉伯糖等不再干擾測定，方法測定結(jié)果更為準(zhǔn)確可靠。1.2.7 咔唑比色法測定苧麻中的果膠含量法本試驗將咔唑比色法應(yīng)用于劍麻果膠含量的測定，對果膠粉的水解條件和半乳糖醛酸的測定條件進(jìn)行了詳細(xì)的探索，并確定了最佳的試驗條件。一、主要儀器與試劑儀器：UV2102 PCS紫外可見分光光度計：上海尤尼科儀器有限公HHSl 1-2電熱恒溫水浴鍋：上海醫(yī)療器械五廠；AL204型電子分析天平：上海梅特勒一托利多稱重設(shè)備有限公司。試劑：半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液：配制109L的貯備液；咔唑：Sigma公司；苧麻果膠：廣西大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院林翠梧實驗室自制；濃硫酸：優(yōu)級純； 無水乙醇

29、：分析純。二、試驗方法2.1、樣品測定準(zhǔn)確稱取苧麻果膠樣品30 mg于50 mL燒杯中，加入1.0 molL硫酸溶液6.0 mL，在70水浴中加熱20 min進(jìn)行水解，水解物冷卻至室溫后移人50 mL容量瓶，水稀釋定容，得到樣品溶液。準(zhǔn)確移取樣品溶液10 mL并定容到50 mL，移取稀釋后的樣品溶液1.0 mL于試管中，加入濃硫酸6.0 mL，邊加邊流水冷卻，冷至室溫后流水冷卻，冷至室溫后加入0.15的咔唑無水乙醇溶液0.50 mL，搖勻，在室溫下暗處放置30 min后，以試劑空白為參比，在530nm處測定其吸光度。2.2、計算公式樣品中的果膠物質(zhì)總含量以半乳糖醛酸表示。果膠含量=(C

30、5;50×50×0.000001)/(10×W)×100式中：C為從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的所測果膠液中的半乳糖醛酸的濃度，(mgL)；W為果膠粉質(zhì)量，g。1.2.8 近紅外光譜法快速測定苧麻果膠含量法本法旨在探討應(yīng)用近紅外光譜法快速測定苧麻中果膠含量的可行性。對62個苧麻樣品進(jìn)行近紅外光譜掃描及果膠含量的測定采用偏最小二乘法(PLS)建立近紅外光譜信息與果膠含量的校正模型。該模型的相關(guān)系數(shù)為0904。利用該模型對16個驗證集樣品進(jìn)行果膠合量的預(yù)測，預(yù)測標(biāo)準(zhǔn)差為021。結(jié)果表明，該方法用于快速測定苧麻果膠含量是可行的。一、測定原理近紅外光(Near Infrare

31、d)是指介于可見光與中紅外光之間的電磁波，波長為7802526nm。近紅外光譜分析技術(shù)具有快速、高效、非破壞性等優(yōu)點。有機(jī)分子中的OH、CH等基團(tuán)振動光譜的倍頻及合頻吸收，以漫反射方式捕獲在近紅外區(qū)的吸收光譜，通過主成份分析、偏最小二乘法、多元線性回歸和人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)等化學(xué)計量學(xué)手段，建立樣品光譜與待測成分含量間的線性或非線性關(guān)系，即建立校正模型，然后根據(jù)模型和未知樣品的光譜預(yù)測未知樣品的成分含量。果膠分子內(nèi)大量的羥基(OH)、羰基(CO)和甲氧基(CH30)使得其在近紅外光譜區(qū)有豐富的吸收。本文利用近紅外光譜法對苧麻中的果膠含量進(jìn)行預(yù)測，建立了果膠含量的預(yù)測模型，采用該模型對未知樣品進(jìn)行預(yù)測與傳統(tǒng)法所取得結(jié)果基本一致。二、測定方法21、樣品采集及處理實驗所用材料為中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院麻類研究所國家種質(zhì)長沙苧麻圃內(nèi)78個樣品的韌皮纖維。62個作為校正集樣品，另16個作為驗證集樣品對模型進(jìn)行驗證。用于近紅外光譜采集的樣品經(jīng)風(fēng)干后粉碎，過60目篩，用于果膠化學(xué)值測定的樣品按照“GB