羅紅霉素顆粒和干混懸劑中降解產(chǎn)物HPLC測(cè)定方法建立及降解產(chǎn)物產(chǎn)生原因探討

1、    羅紅霉素顆粒和干混懸劑中降解產(chǎn)物hplc測(cè)定方法建立及降解產(chǎn)物產(chǎn)生原因探討    楊雷摘 要：建立反相高效液相色譜法測(cè)定羅紅霉素顆粒和干混懸劑中降解產(chǎn)物去紅霉糖羅紅霉素的含量。方法：采用奧泰公司c18色譜柱（220mm×4.6mm，5m），磷酸鹽緩沖液-乙腈（25：75）和65%乙腈梯度洗脫為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于羅紅霉素顆粒和干混懸劑中降解產(chǎn)物去紅霉糖羅紅霉素的含量測(cè)定。關(guān)鍵詞：羅紅霉素；含量；測(cè)定羅紅霉素是新一代大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，主要作用于革蘭氏陽(yáng)性菌、厭氧菌

2、、衣原體和支原體等1-2。羅紅霉素體外抗菌作用與紅霉素相類似，體內(nèi)抗菌作用比紅霉素強(qiáng)1-4倍。羅紅霉素適用于化膿性鏈球菌引起的咽炎及扁桃體炎；沙眼衣原體引起的尿道炎和宮頸炎；敏感菌所致的鼻竇炎、中耳炎、急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作等3-5。去紅霉糖羅紅霉素為羅紅霉素主要降解產(chǎn)物之一。本文采用高效液相法對(duì)羅紅霉素顆粒和干混懸劑中的降解產(chǎn)物去紅霉糖羅紅霉素進(jìn)行了含量測(cè)定。1 儀器與試藥1.1 儀器：lc-5520高效液相色譜儀（北京東西分析儀器有限公司）；hx-06超聲波清洗器（武漢恒信世紀(jì)科技有限公司）；uv-6雙光束掃描型紫外可見分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司）；precisa xb

3、220a電子分析天平（上海精科天美科學(xué)儀器有限公司）；pc 200-g 50恒溫水?。ㄙ惸w世爾科技（中國(guó)）有限公司）；天星進(jìn)樣瓶清洗機(jī)tx-500型（北京天星科儀科技有限公司）。1.2 色譜柱：奧泰公司c18色譜柱（220mm×4.6mm，5m）。1.3 對(duì)照品：羅紅霉素、去紅霉糖羅紅霉素1.4 試劑：甲醇（紹興經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)忠良化工有限公司）、磷酸二氫銨（紹興經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)忠良化工有限公司）、冰醋酸（紹興經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)忠良化工有限公司）、三乙胺（武漢市偉琪博星生物科技有限公司）、乙腈（紹興經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)忠良化工有限公司）。1.5 試藥：羅紅霉素顆粒、羅紅霉素干混懸劑2 測(cè)定方法確定2.1 色譜條

4、件依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下1-5。流動(dòng)相：流動(dòng)相以磷酸鹽緩沖液-乙腈（25：75）為a，65%乙腈為b，按下表梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30。理論板數(shù)按去紅霉糖羅紅霉素峰計(jì)算應(yīng)不得低于2500。2.2 對(duì)照品溶液的制備取在60減壓干燥4 小時(shí)的去紅霉糖羅紅霉素對(duì)照品適量，精密稱定，加a流動(dòng)相制成每lml含20g的溶液，即得。2.3 供試品溶液的制備取本品適量，精密稱定，加a流動(dòng)相30毫升超聲處理10分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液置50ml量瓶中，用a流動(dòng)相分次洗滌容器和殘?jiān)匆簽V人同一量瓶中，加a流動(dòng)至刻度，搖勻，即得。2.4 精密

5、度試驗(yàn)精密稱取去紅霉糖羅紅霉素對(duì)照品適量，加a流動(dòng)相使溶解，制成濃度為20g·ml-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10l，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，rsd=0.56%，表明本方法精密度良好。2.5 對(duì)照品的線性考察精密稱取適量去紅霉糖羅紅霉素對(duì)照品，加入a流動(dòng)相溶液使溶解分別配制成每毫升含5、10、15、20、25、30微克的溶液對(duì)照品溶液。分別精密上述溶液吸取10l，注人液相色譜儀，依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄色譜峰。以峰面積（y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（x）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，羅紅霉素在530g·ml-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。2.6

6、 準(zhǔn)確度試驗(yàn)取對(duì)照品適量，精密稱取已知含量的樣品9份，置量瓶中，分別精密加入去紅霉糖羅紅霉素對(duì)照品，按項(xiàng)下方法制備成80% 100%、120%。取模擬樣品照“含量測(cè)定”項(xiàng)下方法試驗(yàn)， 計(jì)算回收率為95-105%之間，平均回收率為96.5%。2.7 樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批樣品，按2.3項(xiàng)下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、0.5、1.5、2小時(shí)，精密吸取供試品溶液10？滋l 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。結(jié)果表明供試品不穩(wěn)定，需臨用新配。取去紅霉糖羅紅霉素對(duì)照品，按2.2項(xiàng)下的對(duì)照品制備方法制備對(duì)照品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、0.5、1、1.5、2.0小時(shí)，

7、精密吸取供試品溶液10？滋l 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測(cè)定去紅霉糖羅紅霉素峰面積的rsd=0.76%。結(jié)果表明對(duì)照品2小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。2.8 專屬性試驗(yàn)取合成原料及合成中間體，照2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測(cè)定，結(jié)果在去紅霉糖羅紅霉素出峰處陰性液無(wú)色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒有干擾，表明本方法專屬性良好。2.9 破壞性試驗(yàn)酸分解產(chǎn)物溶液的制備：取羅紅霉素適量，置試管中，加沿管壁緩緩加入1mol/l鹽酸1ml，煮沸10分鐘，冷卻，加流動(dòng)相a稀釋至10ml，調(diào)節(jié)溶液ph值至中性，轉(zhuǎn)移定容至25毫升容量瓶?jī)?nèi)，用流動(dòng)相a定容，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。堿分解產(chǎn)物溶液的制備：取羅紅霉素適

8、量，置試管中，加1mol/l naoh溶液1ml，煮沸10分鐘，冷卻，加流動(dòng)相a稀釋至10ml，調(diào)節(jié)溶液ph值至中性，轉(zhuǎn)移定容至25毫升容量瓶?jī)?nèi)，用流動(dòng)相a定容，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。樣品熱分解產(chǎn)物試驗(yàn)溶液的制備：取羅紅霉素適量，置試管中，105攝氏度加熱1小時(shí)，冷卻，加流動(dòng)相a稀釋至10ml，轉(zhuǎn)移定容至25毫升容量瓶?jī)?nèi)，用加流動(dòng)相a定容，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。羅紅霉素被酸堿破壞后產(chǎn)生大量去紅霉糖羅紅霉素，加熱破壞后無(wú)去紅霉糖羅紅霉素產(chǎn)生。破壞性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)羅紅霉素不耐酸堿，羅紅霉素顆粒和干混懸劑ph值偏酸性，這可能是羅紅霉素顆粒和干混懸劑降解的原因之一。參考文獻(xiàn)1欒連軍，邵青，李士敏，王萍.羅紅霉素顆粒劑、膠囊劑及片劑人體生物利用度測(cè)定j.中國(guó)新藥雜志，1999（08）.2李珍，沈意翔，石晶，王卓，范國(guó)榮，胡晉紅.國(guó)產(chǎn)羅紅霉素膠囊和片劑的藥物動(dòng)力學(xué)和生物利用度比較j.中國(guó)藥房，2000（01）.3張蓉映，李寧.羅紅霉素緩釋片治療社區(qū)獲得性呼吸道感染的臨床療效和安全性分析j.中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2010（02）.4曹麗華，王