000001d9_風(fēng)濕安泰片中馬兜鈴酸A的HPLC限量檢查

1、風(fēng)濕安泰片中馬兜鈴酸a的hplc限量檢查丁愛(ài)英1高玉秋 李艷茹1曲佳1 康櫻櫻1 陳艷秋1作者1吉林益民堂制藥有限公司1360012四平市中心醫(yī)院136000摘要：目的 建立hplc法測(cè)定風(fēng)濕安泰片中馬兜鈴酸a的方法。方法：采用rp-hplc法 測(cè)定。用shimadzuci8色譜柱（250mmx4. 6mm,5um），以甲醇水冰醋酸（59： 40： 1）為 流動(dòng)相，流速為lml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)250nm,柱溫為室溫，進(jìn)樣量為10口1。結(jié)果 馬兜鈴 酸a的保留時(shí)間約為32分鐘，與其他峰的分離度大于1.5。馬兜鈴酸a的線(xiàn)性范圍為1.038 ug/ml-127.6ug/ml, y二0.9998,最

2、低檢測(cè)限為 5.34x10_3ug （信噪比為 3： 1）,平均回 收率為9& 682%（n二5）。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于風(fēng)濕安泰片中馬兜 鈴酸a的測(cè)定，馬兜鈴酸a未檢出。關(guān)鍵詞：風(fēng)濕安泰片；馬兜鈴酸a；高效液相色譜風(fēng)濕安泰片是以生川烏、生草烏、細(xì)辛等二十五味藥材為原料提取制得的純中藥制劑, 具有舒筋活血，祛風(fēng)鎮(zhèn)痛的作用。用于筋骨麻木，手足拘攣，腰腿疼痛，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等癥。 細(xì)辛中含有馬兜鈴酸a。馬兜鈴酸a具有蓄積毒性，長(zhǎng)期或人量服用或?qū)е聡?yán)重的腎毒性、 肝毒性等，因此，監(jiān)測(cè)馬兜鈴酸a對(duì)于保障風(fēng)濕安泰片的用藥安全性具有垂要的意義。木 實(shí)驗(yàn)是在建立風(fēng)濕女泰片中馬兜鈴酸

3、a鑒別的基礎(chǔ)上，釆用hplc法測(cè)定了其限度，低于 于最低檢測(cè)限度，可視為未檢出。1儀器與試藥ii本島津lc-2010a高效液和色譜儀，lc-10avp檢測(cè)器，lc-solution色譜工作站。t 醇為一級(jí)色譜純，其他試劑均為優(yōu)級(jí)純。風(fēng)濕安泰片由吉林益民堂制藥有限公司生產(chǎn)，馬兜 鈴酸a （批號(hào)為110746-200305）對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所。2方法和結(jié)果2.1色譜條件:色譜柱:shimadzu型液相色譜柱（shimadzucig, 250mm x 4. 6mm, 5 um）；以甲醇水冰醋酸（59： 40： 1）為流動(dòng)相，流速為lml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)250nm,柱 溫為室溫，進(jìn)樣量

4、為5口 io2.2對(duì)照溶液的制備：取馬兜鈴酸a對(duì)照品6.38mg,精密稱(chēng)定，置50ml量瓶中，加屮 醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取2.5ml h 10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻， 即得。2.3供試品溶液的制備：取風(fēng)濕安泰片20片，除去薄膜衣，研細(xì)，取約5g,精密穩(wěn)定, 加甲醇50ml,超聲提取30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?.5%氫氧化鈉溶液15ml溶解， 用6mol/l鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph至2,濾過(guò)，濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗屮，用正已烷萃取兩次（10ml . 10ml）,萃取后的水溶液用三氯甲烷振蕩萃取4次（10ml、10ml> 10ml、10ml）,合并萃 取后的三氯甲烷溶液蒸干

5、，殘?jiān)眉状既芙?，轉(zhuǎn)移5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即 得。2.4色譜系統(tǒng)性試驗(yàn)：照上述色譜條件，分別取對(duì)照品、細(xì)辛藥材、供試品溶液注入液 相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)附圖1-3?？梢?jiàn)，風(fēng)濕安泰片供試品色譜圖小，在與馬兜鈴 酸a對(duì)照品色譜和應(yīng)的位置上，無(wú)和同保留時(shí)間的色譜峰，而細(xì)辛藥材色譜圖中，在與對(duì) 照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同保留時(shí)間的色譜峰。馬兜鈴酸a的保留時(shí)間約為32分鐘， 理論塔板數(shù)以馬兜鈴酸a峰計(jì)不低于3000,304050 min2 »圖1馬兜鈴酸a對(duì)照品222一 -ek -01020304050min圖3風(fēng)濕女泰片2.5線(xiàn)性關(guān)系考察：取馬兜鈴酸a分別配1.038

6、ug/ml> 1. 110ug/mk 1.276ug/ml> 1.595 ug/ml> 6. 38 u g/mk 127.6ug/ml六種不同濃度的對(duì)照溶液,按上述色譜條件依次 進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。以峰而積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)illi線(xiàn)，得冋歸方程 y=48352. 05x-66881.77,相關(guān)系數(shù)為y =0. 9998.結(jié)果表明,馬兜鈴酸a濃度在1.038 u g/ml-127. 6u g/ml與峰面積有良好的線(xiàn)性關(guān)系。2.6最低檢測(cè)限：在信噪比s/n=3時(shí),最低檢測(cè)限為5. 34x10_3ugo2.7重現(xiàn)性考察:取20061001批號(hào)樣品按上述供試品溶液制備方

7、法制備，分別取5 u 1, 連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果表明，供試品溶液的色譜圖上在32分鐘左右沒(méi)有相應(yīng)的峰出現(xiàn)。說(shuō)明 風(fēng)濕安泰丿v的馬兜鈴酸a未檢ill,重現(xiàn)性良好。2.8精密度試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液5u1,重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰血積，結(jié)杲馬兜鈴酸a 的峰面積rsd為1. 79%02.9冋收率試驗(yàn)：采取加樣冋收法。精密量取批號(hào)為20061001的樣品5g 5份，分別加 入馬兜鈴酸a對(duì)照溶液適量，制備供試品溶液，進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算 回收率,結(jié)果馬兜鈴酸a的平均回收率為102. 68%, rsd為1. 72%。2.10穩(wěn)定性試驗(yàn):取對(duì)照溶液,按上述色譜條件每隔2小時(shí)測(cè)定一次，記錄峰面枳，

8、結(jié) 果表明，馬兜鈴酸a在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，rsd為1.34%2.11樣品測(cè)定:取風(fēng)濕女泰片(批號(hào)為20061001 > 20061002> 20061003),分別制備供試 品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行分析，色譜圖中在32分鐘左右均未有峰出現(xiàn)，說(shuō)明風(fēng)濕安泰 片中未檢出馬兜鈴酸a。2.12藥材測(cè)定:取細(xì)辛藥材按供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣5u1,記錄色譜圖，進(jìn)行 分析，細(xì)辛藥材屮含馬兜鈴酸a為22.10 ng/go經(jīng)折算，馬兜鈴酸a按100%轉(zhuǎn)移到制劑屮， 為2.95x 10 3 pg,遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于最低檢出限5. 34x10pg,因此判定風(fēng)濕安泰片中含馬兜鈴酸a 不得檢出。3討論3實(shí)驗(yàn)以甲醇水為流動(dòng)相，馬兜鈴酸a易拖尾，于流動(dòng)相中加入適量的冰醋酸可抑 制。3.2本實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)1-3,并結(jié)合實(shí)驗(yàn)，確定供試品經(jīng)超聲、酸化、正已烷、三氯甲烷 萃取，可消除其他物質(zhì)對(duì)馬兜鈴酸a色譜峰的干擾。3.3我國(guó)新約在審評(píng)過(guò)程中耍求馬兜鈴酸不得檢出，本實(shí)驗(yàn)確定的方法