細菌內(nèi)毒素檢查結果準確性的影響因素ppt課件

1、細菌內(nèi)毒素檢查結果準確性的影響要素一、實驗誤差分析及改良措施鱟試劑質(zhì)量及靈敏度標示值得的影響 細菌內(nèi)毒素任務規(guī)范品效價及運用的影響實驗器皿的的影響樣品成份及理化性質(zhì)的影響實驗員的影響 環(huán)境的影響 1 鱟試劑質(zhì)量及靈敏度標示值得的影響鱟試劑的質(zhì)量：抗干擾才干，穩(wěn)定性；鱟試劑靈敏度標示值的準確性 。 鱟試劑靈敏度的誤差 能否用細菌內(nèi)毒素國家規(guī)范品標定？ 標示值能否準確？2 細菌內(nèi)毒素規(guī)范品引起的誤差細菌內(nèi)毒素規(guī)范品種類細菌內(nèi)毒素規(guī)范品效價誤差細菌內(nèi)毒素規(guī)范品操作誤差細菌內(nèi)毒素單位表示誤差 細菌內(nèi)毒素規(guī)范品的錯誤運用 1 細菌內(nèi)毒素規(guī)范品種類細菌內(nèi)毒素國際規(guī)范品細菌內(nèi)毒素國家規(guī)范品細菌內(nèi)毒素任務規(guī)范

2、品 2 細菌內(nèi)毒素規(guī)范品效價誤差 細菌內(nèi)毒素國家規(guī)范品與細菌內(nèi)毒素任務規(guī)范品之間或細菌內(nèi)毒素任務規(guī)范品與細菌內(nèi)毒素任務規(guī)范品之間的生物效價存在一定的誤差，用不同細菌內(nèi)毒素規(guī)范品復核同一批鱟試劑靈敏度時能夠存在一定的誤差。中國藥典要求“當c在0.5-2(包括0.5和2)時，方可用于細菌內(nèi)毒素檢查，并以標示靈敏度為該批鱟試劑的靈敏度。實驗結果只需在這合格范圍內(nèi)表示鱟試劑標示靈敏度準確。3 內(nèi)毒素規(guī)范品操作誤差 取細菌內(nèi)毒素任務規(guī)范一支，輕彈瓶壁，使粉末落入瓶底，再用砂輪在瓶頸上部悄然劃痕，用75%酒精棉球擦拭后啟開，防止玻璃屑落入瓶內(nèi)。正確正確易折點錯誤易折點錯誤留意：只能在安瓿的易折點上部開啟內(nèi)

3、毒素，不能沿易折點開啟，防止振蕩過程中內(nèi)毒素粘在封口膜上。 只能取1ml的細菌內(nèi)毒素檢查用水復溶細菌內(nèi)毒素任務規(guī)范品。 假設運用的為細菌內(nèi)毒素國家規(guī)范品，可按其運用闡明書中的方法將其稀釋至規(guī)定濃度后分裝保管。假設為細菌內(nèi)毒素任務規(guī)范品，為一次性運用。 4 錯誤運用 有部分客戶運用廠家消費的細菌內(nèi)毒素來復核鱟試劑的靈敏度，這是一種錯誤行為，更有甚者運用廠家消費的細菌內(nèi)毒素來交叉復核鱟試劑的靈敏度，這是一種嚴重錯誤行為。 3 實驗器皿的影響器皿的計量管理校正器皿的選擇規(guī)范器皿的正確處置1 器皿的選擇規(guī)范 鱟實驗對器皿的要求：刻度準確；內(nèi)外表光滑；易于清理。細菌內(nèi)毒素檢查實驗不宜選用注射器，最好運用

4、經(jīng)過校正的刻度玻璃吸管或吸嘴。注射器刻度不準確，內(nèi)壁磨沙面吸附內(nèi)毒素，而且要特別留意注射器針頭引入的鐵離子對實驗結果的干擾，故不宜選用注射器。 假設用量不大，運用頻率不高，建議大家選用本公司提供的一次性耗材。無熱原耗材是一種在此行業(yè)中被鑒定為無內(nèi)毒素和-葡聚糖污染的產(chǎn)品，其中包括, 無熱原試管、無熱原移液器吸頭。這些產(chǎn)品可以給您的任務帶來很大方便,另外，當實驗出現(xiàn)誤差時可首先排除器皿方面的要素,很快分析判別出誤差緣由。 2 器皿的正確處置2005年版278頁細菌內(nèi)毒素檢查法“實驗預備規(guī)定：“將被洗滌的玻璃器皿用洗滌劑和自來水洗凈并烘干水分后，置洗液中浸泡4小時，取出將洗液瀝干，用自來水將剩余的

5、洗液洗凈，再用蒸餾水沖洗枯燥后置適宜的密閉金屬容器中，迅速置烤箱中，除去玻璃器皿外表能夠存在的外源性內(nèi)毒素。應該特別留意，該規(guī)程明確規(guī)定最后沖洗玻璃器皿必需“用蒸餾水沖洗，禁用純化水沖洗。有的客戶運用反浸透制備的純化水沖洗實驗用玻璃器皿，結果實驗中一切的陽性對照都為陰性，復核鱟試劑靈敏度時實驗結果誤差較大，這主要是由于純化水和蒸餾水的質(zhì)量不同所呵斥的。因純化水中存在的陰陽離子經(jīng)250高溫干烤不能完全被破壞，這時不同的離子就產(chǎn)生對鱟試劑酶反響抑制或加強的反響，為了保證實驗結果的準確性和檢驗報告的權威性，我們應該嚴厲遵守操作規(guī)程，用多效蒸餾水沖洗鱟實驗用玻璃器皿。4 樣品成份及理化性質(zhì)的影響 -葡

6、聚糖樣物質(zhì)的影響PH值的影響金屬離子和弱酸陰離子的影響藥物濃度的影響 1 1 - -葡聚糖樣物質(zhì)的影響葡聚糖樣物質(zhì)的影響常見景象：假陽性。常見景象：假陽性。鱟試劑的特異性系指在藥品、生物制品和血液制鱟試劑的特異性系指在藥品、生物制品和血液制品中鱟試劑能準確測出被測物質(zhì)內(nèi)毒素的才干，品中鱟試劑能準確測出被測物質(zhì)內(nèi)毒素的才干，既不能呵斥樣品內(nèi)毒素的漏檢，也不能將其它物既不能呵斥樣品內(nèi)毒素的漏檢，也不能將其它物質(zhì)錯判為內(nèi)毒素。質(zhì)錯判為內(nèi)毒素。目前我公司研討證明，知能與鱟試劑發(fā)生反響的物質(zhì)有細菌內(nèi)毒素和-葡聚糖，而內(nèi)毒素反響曲線為S型特征曲線，-葡聚糖反響曲線為經(jīng)過0點的斜線。鱟試劑的特異性差的另一種

7、表現(xiàn)，是將其它物質(zhì)如-葡聚糖斷定為內(nèi)毒素，錯誤將合格藥品判為不合格，呵斥制藥廠直接經(jīng)濟損失。鱟試劑反響機理圖判別假陽性的方法：1、特異性鱟試劑法；2、定量反響曲線分析法；3、家兔模擬實驗法。2 PH值對反響速度的影響常見景象：樣品陽性不成立。鱟試劑與內(nèi)毒素反響的最適宜pH在6.5-8.0；pH 3 或10時，酶活性遭到抑制。相對活力PH7.0PH對反響速度的影響:影響酶原的激活；影響酶分子的構象，過高過低的PH會改動酶的活性中心的構象，或甚至改動整個酶分子的機構使其變性失活。 故鱟實驗時，供試品 pH 最好應預調(diào)和6.5-8.0 為好，必要時可用無內(nèi)毒素的 HCl 或NaOH 稀溶液調(diào)理 pH

8、 值。美國、日本藥局方以及中國藥典故2005版規(guī)定檢品必需調(diào)理PH值6.0-8.0。3 金屬離子和弱酸陰離子 離子對細菌內(nèi)毒素測定結果影響較大，一方面陽離子如Fe3+、Al3+強度較大會引起內(nèi)毒素的聚集呵斥內(nèi)毒素部分濃度過高，同時還必需留意高價陽離子如Fe3+的氧化性對鱟試劑酶反響具有強抑制造用；重金屬離子如Ag+、Cu2+、Pb2+可以使蛋白量變性而使酶失活；另一方面鱟試劑必需在二價陽離子Ca2+、Mg2+的參與下才干被激活構成凝膠反響。許多藥物因PH值10時，其中的陰離子會吸收鱟試劑中的Ca2+、Mg2+離子，使實驗呈假陰性。4 藥物濃度1、10%葡萄糖注射液2、白蛋白、小牛血清3、醫(yī)用透

9、明質(zhì)酸鈉4、中藥類注射液 5 實驗員的影響操作時嚴厲按操作規(guī)程進展，安瓿開啟前應先用酒精棉球擦拭曲頸部，用將頸部折斷，防止碎玻屑掉入安瓿內(nèi)。在鱟試劑的溶解、樣品的稀釋及加樣時，取樣均應準確。假設一人獨立完成實驗，可先稀釋配制好內(nèi)毒素規(guī)范溶液和樣品溶液，然后開啟復溶鱟試劑，最后加樣，盡能夠縮短鱟試劑溶液暴露在空氣中的時間最好控制在15分鐘內(nèi)。6、環(huán)境的影響保溫時間保溫溫度1保溫溫度 將細菌內(nèi)毒素任務規(guī)范品用細菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋成2，進展鱟實驗，然后分別放置于25、28、31、34、37、41、43、46、49水浴保溫。實驗中察看到凝膠構成的速度隨著溫度的升高而加快，但到達49保溫90min也未出現(xiàn)凝膠。 從實驗可以看出，溫度對鱟試劑的靈敏度影響很大，保溫溫度在2541之間，隨著溫度的升高，反響速度也升高，41尚未到達反響速度峰值，25 時反響速度已相當快；在4146之間，溫度對鱟試劑的靈敏度無明顯影響；到達49或更高溫度時，隨溫度升高而使酶蛋白逐漸變性，那么鱟試劑被破壞，反響速度反而降低。 2保溫時間 將細菌內(nèi)毒素任務規(guī)范品用細菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋成2，進展鱟實驗，37保溫，分別在10、20、30、40、50、70min時察看