EppendorfMastercyclereprealplex熒光定量儀操作指南e

1、 操作手冊證書經(jīng)授權的熱量循環(huán)儀該儀器為經(jīng)授權的熱量循環(huán)儀，儀器序列號為：購買者需預先支付由Roche Molecular Systems公司持有的美國專利號為4683195，4683202及4965188的專利預付金以及由F. Hoffmann-La Roche 有限公司持有的美國國外的相關專利索賠金。該儀器用于進行聚合酶鏈反應（PCR）過程全程的本質特性的研究與開發(fā)。按產(chǎn)量支付的專利費用可以支付給應用生物系統(tǒng)，或者也可以通過購買授權試劑的方式來抵付。該儀器作為經(jīng)授權的熱量循環(huán)儀，可以使用由應用生物系統(tǒng)提供的應用軟件。根據(jù)配合使用的授權試劑的標簽權，該儀器與授權試劑的配合使用可以向購買者提供

2、有限的聚合酶鏈反應執(zhí)照。如果僅僅購買儀器，客戶不能夠持有聚合酶鏈反應執(zhí)照，也沒有權力執(zhí)行聚合酶鏈反應過程。有關購買執(zhí)行聚合酶鏈反應的執(zhí)照的更多信息，請通過聯(lián)系應用生物系統(tǒng)執(zhí)照部門經(jīng)理獲得，地址為：美國加利福尼亞州福斯特城林肯驅動中心850號，94404。所有權力均不通過暗示，訴訟等以立即執(zhí)行的方式轉移給專利品，其中不僅僅限于5項核酸酶檢測項目以及任何試劑與用具的專利索賠。應用生物系統(tǒng)對該儀器的性能不作保證。該產(chǎn)品說明書版權所有，如無經(jīng)2005 Eppendorf AG，Hamburg授權不可復制Mastercycler為注冊商標，美國注冊號為2273536，加拿大注冊號為TMA510572Ma

3、stercycle注冊商標受到美國專利號6210958的保護Eppendorf Mastercycler ep realplex目錄：1 安全預防法2 安裝2.1 交貨包裝2.2 儀器的安裝2.3 功能性單元2.3.1 Mastercycler ep realplex2.4 啟動2.4.1 realplex模塊與熱模塊之間的連接2.4.2 Mastercycler ep realplex 與計算機之間的連接2.4.3 與其它部件的連接2.4.4 realplex軟件的安裝2.4.4.1 安裝主程序2.4.4.2 數(shù)據(jù)恢復2.4.4.3 開始realplex軟件的運行3. 操作3.1 管理者登陸

4、3.2 登陸3.3 用戶變更3.4 系統(tǒng)配置3.4.1 對使用者的管理3.4.1.1 新用戶建立3.4.1.2 編輯用戶3.4.1.3刪除用戶3.4.2 用戶層3.4.3 循環(huán)儀3.4.4 realplex 模塊3.4.5 系統(tǒng)層3.4.5.1 特性3.4.5.2 登陸出錯信息3.4.5.3 用戶登陸3.4.5.4 軟件更新3.5 檢測項目管理3.5.1 建立檢測項目3.5.2 打開檢測項目3.5.3 保存檢測項目3.5.4 保存模板文件3.5.5 模板文件的使用3.5.6 復制檢測項目3.5.7 檢測項目的輸出3.5.8 檢測項目的輸入3.5.9 建立文件夾3.5.10 刪除檢測項目和文件夾

5、3.6 探針管理3.7 染料管理3.8 校準3.8.1 背景校準3.8.2 顏色校準3.8.2.1 使用商業(yè)的校準工具包進行的顏色校準3.8.2.2 客戶特有的染料的校準3.9 數(shù)據(jù)庫管理3.9.1 當前數(shù)據(jù)庫的自動保存3.9.2 當前數(shù)據(jù)庫的保存3.9.3 輸入數(shù)據(jù)庫3.9.4 數(shù)據(jù)庫的歸檔4 編程（檢測項目的建立）4.1 建立一個新的檢測項目4.2 建立板布局4.2.1 染料的確定4.2.2 參考染料的選擇4.2.3 樣本容積輸入4.2.4 探針類型的確定4.2.5 背景的確定4.2.6 樣品類型的定義4.2.6.1 標準4.2.6.2 陽性對照4.2.6.3 陰性對照4.2.6.4 未知

6、樣品4.2.7 復制和標準系列的自動建立4.2.8 定量的樣品類型4.2.9 相對定量的樣品類型4.2.9.1 多plex分析例子4.2.9.2 單plex分析的例子4.2.10 熔點分析中的樣品類型4.2.11 終點測定中的樣品類型4.2.12 +/-檢測項目中的樣品類型4.2.13 基因辨識中的樣品類型4.2.12 樣品的復制與剪切4.2.15 刪除樣品4.2.16 幾個樣品的歸組4.2.17 子檢測項目的測定4.2.18 板布局的刪除4.2.19 完整檢測項目的板布局編輯4.3 pcr程序的建立4.3.1 用模板程序建立一個pcr程序4.3.2 不用模板程序建立pcr程序4.3.3 程序

7、步的插入和編輯4.3.3.1 溫度4.3.3.2 循環(huán)（15步循環(huán)）4.3.3.3 保溫4.3.3.4 暫停4.3.3.5 聲音4.3.3.6 熔解曲線4.3.3.7 終點4.3.4 程序的復制4.3.5 程序的刪除4.3.6 測量點的確定4.3.7 熱蓋設置5 操作（監(jiān)測）5.1 樣品的加載5.2 模塊溫度控制5.3 樣品體積5.4 啟動檢測項目5.5 單個樣品的選擇5.6 單個樣品類型的選擇5.7 循環(huán)儀狀態(tài)5.8 當前運行檢測項目的中斷5.9 繼續(xù)運行檢測項目5.10 終止檢測項目5.11 mastercycler ep realplex 作為pcr的 使用5.12 mastercycl

8、er ep realplex 作為熒光計的 使用5.13 關閉6 分析6.1 概要6.1.1 打開檢測項目6.1.1.1 打開在運行的檢測項目6.1.1.2 打開子檢測項目6.1.2 單一檢測項目的選擇6.1.3 使樣品處于不活動狀態(tài)6.1.4 樣品類型的選擇6.1.5 分析模式的選擇6.1.6 圖標縮放6.1.7 存儲默認設置6.1.8 圖表的保存和復制6.1.9 樣品數(shù)據(jù)的保存和復制6.1.10 編輯報告6.1.10.1 模板報告的應用6.1.11 分析的保存6.1.12 調用分析6.2 定量6.2.1 閾值確定6.2.2 基準線測定6.2.3 標準曲線6.2.4 分析6.2.5 mult

9、iplex 分析6.3 相對定量6.3.1 閾值的測定6.3.2 多plex 分析的估算6.3.3 單plex分析的估算6.4 熔解曲線分析6.4.1 閾值的測定6.4.2 分析6.5 終點測量6.5.1標準曲線6.5.2 分析6.6 +/-檢測項目6.6.1 將終點測定作為數(shù)據(jù)源的+/-檢測項目分析模式6.6.1.1 閾值的測定6.6.2 pcr數(shù)據(jù)作為數(shù)據(jù)源的+/-assay6.6.2.1 閾值測定6.6.3 分析6.6.4 多plex分析6.7 基因測定6.7.1 閾值測定6.7.2 分析7 維護7.1 清潔儀器的一般方法7.2 熱模塊的清潔7.3 熱模塊的驗證與校準8 故障查找8.1

10、一般故障8.2 在sybr綠色分析中發(fā)生的錯誤8.3 qrtpcr過程中發(fā)生的錯誤9.1 登陸9.2 新用戶的建立9.3 創(chuàng)建一個檢測項目9.4 檢測項目的保存9.5 執(zhí)行檢測項目9.5.1 概述9.5.2 板布局9.5.3 pcr程序9.5.4 開始檢測項目9.5.5 當前運行檢測項目的中斷9.5.6 繼續(xù)運行檢測項目9.5.7 退出檢測項目9.5.8 分析10 技術數(shù)據(jù)1 安全預防法在使用Mastercycler ep realplex之前，請仔細閱讀該操作手冊。Mastercycler ep realplex僅可用于實驗室內，并需由有資格的專家執(zhí)行實時的聚合酶鏈反應和相關研究工作。注意：

11、如果由于使用者沒有遵循廠商提供的操作手冊使用該儀器，那么導致的任何儀器壞損的擔保索賠和責任都為無效。儀器使用者必須無條件的接受如下使用說明： 該儀器用于實驗室內工作，必須保證時刻有人在旁邊觀察。為避免由冷凝引起的損壞，在安裝后，儀器應該僅打開12個小時。當儀器被挪動位置時，同樣遵循這個規(guī)定。 電源電壓必須與儀器標識牌上的電壓數(shù)值相匹配。儀器必須有接地線接地。在作儀器的維護和清潔時，必須關上儀器開關并且切斷電源，等待模塊冷卻下來才可進行。在啟動儀器前，必須檢查一下接線的正確性。 Mastercycler ep realplex必須被立放在一個穩(wěn)固的工作臺面上，必須提供足夠大的空間以保證儀器前后端

12、通風槽的通暢和保證冷空氣在儀器的下方流通。儀器后端通風槽離墻面的距離至少為10厘米。確定通風槽處于易裝卸狀態(tài)，并且其進出口的通風不會發(fā)生堵塞。儀器下不應放置紙張等物品堵塞通風。 不應有物體放置在加熱蓋上。 在清理加熱蓋時，帶有尖棱角的一些元件就被暴露在外面。所以在清理加熱蓋時，請注意保護那些帶有尖棱角的卷筒形電線和導軌。 開關加熱蓋時或把加熱蓋放在清潔位置時，不要把手指插入蓋子和機柜之間。打開加熱蓋時，不要碰蓋子下面的地方。 樣品物質不可以直接裝入加熱模塊。 當使用不經(jīng)推薦的樣品試管時，將有可能導致模塊和加熱蓋的壞損。同時樣品試管也會被弄破以至于造成樣品物質的外泄。所以在使用具有傳染性的樣品物

13、質時，這一點一定要引起注意。 確保聚合酶鏈反應板被正確放置在模塊上，否則將會導致模塊和加熱蓋的壞損以及樣品物質外泄。 如果試管在模塊中加熱的時候不使用加熱蓋，試管可能因為溫度太高而產(chǎn)生破裂，最后將導致樣品物質的外泄。加熱模塊，加熱蓋的內部及微測試管/聚合酶鏈反應板能迅速達到50攝氏度的高溫。小心不要被灼傷。直到加熱蓋溫度降為30攝氏度或者更低時，才可以打開加熱蓋。不要使用耐溫性（120攝氏度）不夠的材料（試管、聚合酶鏈反應板、罩、箔片和墊子等）。加熱模塊上有如下標記：提出了對加熱模塊和加熱蓋中潛在溫度的提醒指明操作將導致右邊溫度高于左邊溫度。 帶有爆炸、易燃、易揮發(fā)性質的物質禁止在Master

14、cycler ep realplex中進行加熱。儀器禁止在有潛在爆炸性危險的房間內使用，以防止產(chǎn)生爆炸。 當使用致病物質、放射性物質和其它對人體健康有危害的物質工作時，必須遵守相關的安全手則。 確保儀器內不進水。 儀器的維修必須由經(jīng)過Eppendorf AG授權的專家來操作。該項授權僅可通過參加一個持證培訓課程獲得。 轉交如果儀器發(fā)生轉交時，必須附上本操作手冊。 處理當儀器要被處理掉時，必須遵循相關的法律規(guī)定。電器的清除請遵循歐共體基于EU指令2002/96/EC的對廢電子電氣裝置（WEEE）的國際規(guī)定。根據(jù)這些規(guī)定，在商業(yè)對商業(yè)領域內，05年8月13號以后供應的設備將不再被歸類為城市或家庭廢

15、物，并有如下標記：關于處理的規(guī)定可能存在國家與國家之間的不同，所以如果有需要請聯(lián)系你的供應商解決。2 安裝2.1 交貨包裝交貨包裝中包含以下各個部分：一臺Mastercycler ep realplex的主體裝置一個主電源電纜一個PC控制器局域網(wǎng)絡總線電纜一個控制器局域網(wǎng)絡總線電纜一個USB控制器局域網(wǎng)絡適配器一個3.0毫米帶把手的六角扳手一個內裝有安裝使用手冊和軟件的CD一個英文的安裝使用手冊（印刷本）一對96 tec PCR板，全裙邊/半裙邊一袋封口條，8根一個熱封的薄膜，封裝（5×）一份產(chǎn)品合格證明2.2 儀器的安裝為避免由于冷凝給儀器帶來的損害，安裝后，儀器僅可運行12個小時

16、。當儀器被挪動位置后，同樣要遵守該規(guī)定。儀器必須被嚴格立式放置在穩(wěn)固的工作臺面上。確保儀器放置的位置遠離會產(chǎn)生震動的其他儀器（比如離心分離機等）為保證儀器前后通風槽的通暢，以及儀器下端和空氣的接觸，放置時要留有足夠大的空間。儀器的后通風槽與墻壁之間的距離應大于10厘米。空間要求：寬度：26厘米進深度：41厘米高度：39.6厘米電源設備：一個提供給熱模塊的安全插座。 Realplex模塊由熱模塊的主連線供電。安裝時要確保通風槽的拆卸空間，確保入口與出口的通風順暢。為保證通風順暢，禁止在儀器下放置紙張或者其他物品。電源電壓大小必須與儀器標識牌上的數(shù)據(jù)相符。儀器必須帶有接地線。儀器和供電電源的放置必

17、須可以保證快速的切斷電源。包裝儀器的紙箱應妥善保存以備日后儀器維修時的安全運輸。注意：儀器運輸與貯存溫度不得超過50攝氏度。儀器放置應避免直接日曬。2.3 功能性單元2.3.1 Mastercycler ep realplex圖1：關閉的realplex模塊前面觀1 realplex模塊2 狀態(tài)顯示3 密封壓板（鎖住狀態(tài)）4 控制面板的掛鉤（Mastercycler ep realplex不需要）5 熱模塊圖2：打開的realplex模塊前面觀1 密封壓板（開啟狀態(tài)）2 realplex模塊3 熱模塊放入試驗樣本后，向前拉動realplex模塊，覆蓋住插入的試管。然后用壓板密封，程序開始啟動。

18、注意在把密封壓板歸位時小心不要弄傷手指。當realplex模塊開啟時，不要觸碰蓋子下端以防被灼傷。圖三：后面觀1 realplex模塊2 realplex模塊的接線板(見圖4)3 熱模塊4 通風槽5 供電電源開關，0為關斷，1為接通6 供電電源插座7 熱模塊的接線板圖4：realplex接線板1 RS232：串行接口2 Address：旋轉開關地址3 控制器局域網(wǎng)絡出口4 控制器局域網(wǎng)絡人口5 端部阻抗圖5熱模塊接線板1 Printer：并行接口2 RS232：串行接口3 control panel：控制面板的接線口（Mastercycler ep realplex不需要）4 控制器局域網(wǎng)絡（

19、CAN）出口5 控制器局域網(wǎng)絡人口6終端阻抗7 Address：旋轉開關地址。注意：只有遵循EN/IEC60950和UL60950A標準的儀器才能與此串并行接口相連。2.4 開始安裝2.4.1 realplex模塊與熱模塊之間的連接將控制器局域網(wǎng)絡總線連接電纜接入熱模塊的CAN_out接口將控制器局域網(wǎng)絡總線連接電纜的自由端接入realplex模塊的CAN_in接口將位于realplex模塊后部的開關項設定為開的位置，將熱模塊的開關項設定為關的位置將位于realplex模塊后部的旋轉開關地址設定為11，即兩個旋轉開關上的箭頭都指向1的位置；將熱模塊后部的旋轉開關地址設定為02，即左邊旋轉開關上

20、的箭頭指向0的位置，右邊旋轉開關上箭頭的指向2的位置。注意：啟動前準確設定旋轉開關地址，可以使得儀器啟動后，地址被軟件自動檢測并顯示出來。2.4.2 Mastercycler ep realplex 與計算機之間的連接計算機硬件要求：AMDAthlon/Intel Pentium lll 1.0GHz處理器，最低512MB內存4GB硬板存儲空間（其中大約1GB用于軟件和數(shù)據(jù)存儲）USB1.0/1.1，或者USB2.0連接器集成或者外帶的可寫CD-ROM存儲器控制器局域網(wǎng)絡USB適配器，固件4.2（標準配件）對計算機操作系統(tǒng)的要求：Windows XP家庭版本或者更高版本可選擇的網(wǎng)絡連接環(huán)境：可

21、以實現(xiàn)連接別的工作站計算機的網(wǎng)卡或者安裝TCP/IP網(wǎng)絡將計算機的控制器局域網(wǎng)絡總線接入熱模塊的CAN_in接口將計算機的控制器局域網(wǎng)絡總線的自由端接入USB CAN適配器將USB CAN適配器接入計算機的USB接口。啟動儀器前，檢查供電電源，檢查供電電壓值是否與熱模塊左端標識牌上給出的數(shù)值相符。將供電電源插入熱模塊，打開電源開關（見圖3，熱模塊后部圖）。Realplex模塊的供電通過與熱模塊的連接實現(xiàn)。當使用者啟動儀器以后，打開realplex軟件，已連接的Mastercycler ep realplex會由軟件自動檢測出來并且顯示其當前狀態(tài)。計算機不得在Mastercycler ep re

22、alplex運行過程中切斷與其之間的連接。圖7：帶有連接電纜的Mastercycler ep realplex1 CAN總線電纜2 計算機CAN總線電纜3 USB CAN 適配器2.4.3 與其它零件的連接注意：只有遵循EN/IEC60950和UL60950A標準的儀器可以接入接口2.4.4 realplex軟件的安裝2.4.4.1 安裝主程序首先關閉計算機正在運行的各項程序，將USB CAN適配器插入USB接口。等待幾秒鐘后，屏幕上將出現(xiàn)硬件安裝向導。注意：在安裝結束前，不要移去USB CAN適配器！現(xiàn)在請插入realplex光板，打開光板目錄下的setup.exe文件（如果計算機的自動運行

23、功能處于激活狀態(tài)時，安裝將被自動運行）。然后軟件會提示關于安裝的各個選項：點擊next，屏幕上會彈出幾個窗口，接著點擊next接受默認的設置。當安裝結束后，重新啟動計算機。現(xiàn)在您會發(fā)現(xiàn)在計算機啟動組里有一組新的程序，從那里您可以打開剛剛安裝過的軟件。此外，軟件會自動在計算機桌面上生成一個圖標。2.4.4.2 數(shù)據(jù)恢復如果realplex軟件是安裝后的第一次運行，那么軟件會識別出數(shù)據(jù)當前是不存在的，然后自動打開數(shù)據(jù)工具欄（Database Tool）。您可以接受恢復數(shù)據(jù)（restore database）表中給出的默認設定，然后按開始恢復（start restore）按鈕。恢復過程結束后，可以按

24、右上端的start realplex按鈕打開軟件。如果realplex軟件以前被安裝過，那么數(shù)據(jù)的恢復操作是不需要進行的，原因是前次安裝的已存在數(shù)據(jù)可以繼續(xù)被使用。2.4.4.3 開始realplex軟件的運行打開mastercycler ep realplex的開關，等待位于開關上部的LED燈將變?yōu)榫G色?，F(xiàn)在您可以開始運行realplex軟件了。您也可以在mastercycler ep realplex處于關斷狀態(tài)下運行realplex軟件，甚至在不接任何硬件的狀態(tài)下運行該軟件。第二種情況下，軟件將會提示一條錯誤信息，可以忽略該信息繼續(xù)運行軟件。注意：當使用realplex軟件時，不要運行其

25、它會占用計算機大部分內存的軟件（如：CD創(chuàng)建器或者媒體播放器等）！決不可以使計算機工作在電池供電模式！調整計算機供電電源的設定值以保證在程序運行過程中，計算機不會進入待機狀態(tài)。3. 操作3.1 管理者登陸當realplex軟件第一次被打開時，將會顯示如圖3.2所示的一個登陸對話框，提示軟件管理者為Eppendorf命名并輸入登陸密碼。這項是儀器的出廠設置，如有需要用戶可以在User Administrator對話框中對此項進行修改（詳細情況請查閱3.4.2節(jié)）。此后軟件再次被打開時，無論軟件管理者還是其他的軟件使用者，都必須建立一個用戶才能登陸使用realplex軟件。3.2 登陸在打開程序時

26、，Mastercycler ep realplex用戶都必須先登陸才能進一步使用軟件。所有用戶名都列在選取框中。我們要做的就是選出自己的用戶名并輸入相應密碼。新用戶由軟件管理者建立。（請參閱3.4.1.1節(jié)）如果登陸密碼輸入錯誤，則會顯示登陸失敗（login failed）。點擊OK鍵確認后，重新進入登陸程序。如果點擊Cancel鍵，則顯示主屏幕（情參閱3.3節(jié)）。但是此時所有的功能鍵都會處于無效狀態(tài)。為進入工作狀態(tài)，使用者必須再次打開登陸對話框（情參閱3.2節(jié)）完成登陸手續(xù)。注意：登陸以后，用戶可以對自己的文件夾和分析程序進行讀或者寫的操作，與Mastercycler ep realplex

27、儀器連接后可以執(zhí)行其他的實驗操作。而對軟件其他用戶的文件夾和分析程序只有讀的權限。如果想要執(zhí)行或編輯其他用戶的分析程序的話，可以將其復制到自己的文件夾中。3.3 用戶變更當已有其他使用者登陸時，可以按照以下方法登陸系統(tǒng)： 通過點擊該圖標以退出登陸。 如果選擇登陸圖標，User login對話框將被彈出，使用者可以按照3.2節(jié)中描述的登陸步驟進行登陸。以上兩種功能也可以通過File菜單來實現(xiàn)。軟件在同一時刻僅允許一名用戶登陸，新用戶的登陸將自動使原來的使用者退出系統(tǒng)。當前登陸用戶將被顯示在屏幕下方的狀態(tài)欄內。登陸后，主屏幕顯示為Administror或者User。主屏幕包括向導區(qū)，工作區(qū)和狀態(tài)區(qū)

28、。如果在左邊的向導欄內選定某一程序函數(shù)時，該程序函數(shù)則會顯示在工作區(qū)內，而狀態(tài)欄中將顯示熱模塊的狀態(tài)信息和當前使用者的用戶信息。1 菜單欄2 工具欄3 向導區(qū)4 工作區(qū)5 狀態(tài)欄 通過選項show/hide navigator，向導區(qū)可以被顯示或者隱藏。這一操作也可以通過setup菜單實現(xiàn)。注意：所有的對程序各個功能的操作以及對系統(tǒng)配置的操作，都可以通過工具欄或者菜單欄實現(xiàn)。選擇性的操作還可以通過點擊鼠標右鍵來實現(xiàn)。3.4 系統(tǒng)配置在setup菜單中選擇system configuration項，則在菜單欄中顯示realplex system configuration對話框。其中對話框左邊列

29、出了所有的使用者名單以及處于連接狀態(tài)的模塊名單，此外還有系統(tǒng)設置及其功能的結點選項。在向導欄內不同的層次顯示為不同的符號。當用光標選中某個結點時，從屬文件夾將變?yōu)榭梢姷模龠x一次則可關閉該結點。如果某層或其從屬文件夾被選中，將在對話框的右邊顯示出相應的窗口內容。3.4.1 對使用者的管理當選中User項，User Administration圖表顯示在對話框右邊，列出所有的用戶名單。軟件管理者登陸系統(tǒng)以后，可以使用該對話框進行建立新用戶，編輯和刪除已建立的用戶的操作。此功能只對已經(jīng)登陸的軟件管理者開放。對于沒有軟件管理者權限的普通使用者來說，這些功能鍵都是無效的。3.4.1.1 新用戶建立新用

30、戶的建立必須由登陸以后的軟件管理者來進行操作。具體建立方法為打開位于setup菜單下的realplex system configuration對話框。當選中User項，User Administration圖表顯示在對話框右邊。點擊功能鍵new，可以打開new user對話框。在對話框的相應欄目中輸入新用戶的用戶名和密碼。用戶的權限可以在用戶組中選擇，其中有兩個預設好的用戶組：administrator：有權操作所有程序和實行管理的各項功能。Standard user：有權操作所有程序另外還可以在comment一欄中輸入一些對用戶的說明。確定以后，窗口關閉，同時一個新建用戶名將在user下的

31、realplex system configuration對話框中顯示出來。其顏色則指明該用戶所屬的用戶組：管理者顏色為紅色，一般用戶的顏色則為綠色。兩組用戶組各自享有固定的權限，并且不能更改。注意：如果用戶忘記了自己的登陸密碼，那么管理者可以登陸系統(tǒng)重新分配一個密碼給該用戶（請參閱3.4.1.2節(jié)）。管理者看不到各個用戶的密碼。3.4.1.2 編輯用戶在realplex system configuration對話框中，所有已建立的用戶的資料信息都可以由管理者進行編輯。具體方法為首先在user administration窗口內選中某用戶，點擊edit功能鍵后，一個edit user對話框就

32、被打開了。編輯完用戶信息以后，點擊ok鍵確認即可。3.4.1.3刪除用戶只有管理者用戶才有權刪除用戶。首先必須如3.1節(jié)中描述的那樣登陸系統(tǒng)，打開realplex system configuration對話框。在窗口user administration中選中一個用戶，點擊delete功能鍵刪除該用戶。3.4.2 用戶層當在realplex system configuration對話框中選中某一用戶時，該用戶的具體信息就被顯示在對話框的右側窗口內。除了顯示其用戶名以及所屬用戶組以外，圖表中還包括由此用戶建立的文件夾和程序的數(shù)量。該用戶最后操作的時間也有顯示。用戶登陸后可以在此窗口內修改用戶

33、說明和密碼。改變密碼首先需要在password欄中輸入新密碼，然后在confirmation欄中再次輸入密碼以確認。接下來點擊ok功能鍵確認修改操作，最后通過點擊close鍵關閉對話框。軟件管理者看不到各用戶的密碼。3.4.3 循環(huán)儀在cycler結點處，可以得到已連接的循環(huán)儀的信息。設備特性被列在properties圖表下。此外相應硬件的資料以及最后登陸的用戶名，還有最后運行的程序都會在此欄下顯示出來。在incubate和lid圖表下，可以調整熱模塊和加熱蓋的溫度值。具體做法為首先在new temperature一欄中填入所需的溫度值，然后選擇incubate復選框以確認。如停止調溫，則釋放

34、incubate復選框。PCR程序文檔信息在protocol圖表下顯示。首先給出了啟動PCR程序的登陸用戶的信息以及該PCR程序的程序名和啟動時間。接下來是相關的程序特性信息和熱蓋設置。除此之外，程序的運行各步驟也會在此顯示出來。如果選中這個功能鍵，則原始記錄將被作為txt文件保存。如果選中這個功能鍵，則原始記錄將被與計算機相連的打印機打印出來。在Cycler結點處雙擊鼠標，System結點就會顯示出來，其中包含有模塊的特性信息。特性：properties欄中顯示出模塊的型號以及熱模塊的序列號，同時熱模塊被最后驗定和校定的信息也會顯示出來。Sensors：顯示當前傳感器的溫度值。溫度驗定：通過

35、溫度傳感器對儀器的溫度值進行測量，屬于儀器溫度驗定系統(tǒng)的一部分（請詳見命令信息）。該過程在溫度驗定系統(tǒng)的操作手冊中有具體描述。溫度校定：借助于溫度傳感器，對儀器的溫度值進行的調整操作。其性能在溫度驗定系統(tǒng)的操作手冊中有具體描述。3.4.4 realplex 模塊在realplex module結點下將顯示realplex模塊的特定的系統(tǒng)信息。除了顯示mastercycler ep realplex儀器的版本信息和軟件的版本信息以外，其他裝配件的序列號也會在此顯示出來。同時還有濾波器設備資料和光電倍增器所選電壓值。Realplex module還會指明設置realplex模塊的CAN總線地址以及

36、熱模塊和realplex模塊之間是否是通過CAN總線電纜相連的。Cover state一欄中顯示出加熱蓋的當前位置。在realplex module結點處雙擊鼠標左鍵打開下層各結點。Module log文件目錄下記錄了程序運行中出現(xiàn)的所有出錯信息。這一圖表中的出錯信息可以通過選中save功能鍵以txt格式保存下來，或者選中print功能鍵通過已連接的打印機打印出來。3.4.5 系統(tǒng)層system結點給出當前軟件版本的信息，其中還包括了用戶登陸以及登陸出錯等信息，以監(jiān)視用戶的操作和任何操作失誤。 通過show system info圖標，可以打開可選的realplex system info對話

37、框。3.4.5.1 特性在此處可以看到熱模塊和realplex模塊的狀態(tài)。3.4.5.2 登陸出錯信息登陸出錯信息中列出所有的出錯信息。該信息可以選中save功能鍵保存或者選中print功能鍵打印。3.4.5.3 用戶登陸userlog中記錄了對mastercycler ep realplex進行的所有操作。系統(tǒng)記錄了所有的登陸和退出登陸的操作，記錄了所有有關用戶的資料，所有程序的開啟，暫停和退出的操作。Userlog可以選中save功能鍵保存或者選中print功能鍵打印。3.4.5.4 軟件更新雙擊系統(tǒng)（system）結點后，顯示出其包含的兩個結點。點擊其中一個結點后，軟件將在右邊的工作區(qū)內

38、運行更新程序。 當選中browse圖標后，將顯示出load firmware file對話框。選中軟件的版本后，將在設定的源路徑（source path）中下載更新。選中start功能鍵后，軟件開始運行更新程序。3.5 檢測項目管理在工具欄中可以實現(xiàn)以下的檢測項目的管理功能：1 新檢測項目2 打開檢測項目3 保存檢測項目4 打印報告5 將文件輸入當前的選中部分6 將當前的選中部分輸出注意：以上提及的各個功能還可以通過file菜單，或者把鼠標放在向導欄中點擊右鍵來實現(xiàn)。3.5.1 建立檢測項目 當選中new assay圖標時，將出現(xiàn)一個空白的板塊，標準的pcr程序將在工作區(qū)內被裝載。3.5.2

39、打開檢測項目 當選中open assay圖標以后，將彈出檢測項目對話框：如果一個用戶或者文件夾處于選中狀態(tài)時。除了文本名、建立時間和更新時間會在assays面板上顯示出來以外，所有保存其中的檢測項目也都會在右邊顯示出來。而且還會提示出各文本的狀態(tài)。 標有setup的文本代表從沒被打開過。打開文本時，文本將被裝載在assay setup和analysis中，而且在analysis中沒有數(shù)據(jù)資料。 標有template的文本可以作為建立新文本的模板文本使用。更多相關信息請詳見3.5.4和3.5.5節(jié)的關于模板文本的建立日期和使用的介紹。標有complete的文本代表數(shù)據(jù)獲得已經(jīng)發(fā)生過的文本。如果這

40、樣的文本被打開，數(shù)據(jù)將會顯示在analysis下。并且除非有其它文本當前正在被運行的情況下，該文本才會顯示在assay setup中。詳見6.1.1.1節(jié)中的介紹。當某個文本被選中，該文本中保存的所有分析數(shù)據(jù)都將被顯示在下方的analysis窗口中。數(shù)據(jù)建立和執(zhí)行這些分析的用戶名都會被在這里列出來。因為斷電或者系統(tǒng)發(fā)生錯誤等原因造成失敗的文本都帶有這個aborted的標志。如果在發(fā)生失敗前獲得了足夠多的數(shù)據(jù)，那么該文本還是可以被拿來分析的。3.5.3 保存檢測項目檢測項目可以由登陸用戶在他的結點下或者文件夾中執(zhí)行保存操作。只有登陸用戶才能執(zhí)行對這些程序文件的編輯操作。而其他使用者只能對這些文件

41、執(zhí)行讀或者復制的操作。當save assay的圖標被選中后，當前的檢測項目被執(zhí)行保存操作。當要把一個檢測項目保存在某目標文件夾下時，可以選中file菜單下的save as功能鍵，打開相關對話框來實現(xiàn)。輸入檢測項目名后，文本通過復選框assay type被選中，點擊ok以確認。3.5.4 保存模板文件當一個檢測項目要在被創(chuàng)建以后多次重復使用時，該文件將被保存為模板文件。具體方法為在保存文件的過程時，復選框中選擇template欄。3.5.5 模板文件的使用當創(chuàng)建簡單的新檢測項目時可以用到模板文件。具體方法：模板文件在assay setup通過功能鍵open assay中被裝載，以檢測項目的形式，

42、命名后保存在用戶結點下。3.5.6 復制檢測項目用戶可以復制其它用戶的文本到自己的文件夾,對這些文本與模板進行啟動和編輯。具體方法為：在assay對話框中使用open assay選中和打開其他用戶文件夾下相關的檢測項目，然后通過save as將文本復制到自己的結點下（請查閱3.5.3節(jié)）。這時用戶就可以在連接mastercycler ep realplex以后，直接啟動和執(zhí)行復制的檢測項目了。3.5.7 檢測項目的輸出檢測項目的輸入輸出功能用于幾個工作站之間的文本交換。在此檢測項目與板布局、PCR程序和被測數(shù)據(jù)一同被輸入輸出。 圖標export assay to file用來以ASY格式保存當

43、前的檢測項目到另一個工作站上的計算機上以便對文本做更多的處理。在窗口的靠上一欄中選出檢測項目的保存位置，然后輸入文本的名字，并在file type一欄中選擇realplexexchange（*.asp）。3.5.8 檢測項目的輸入 當選中圖標import assay from file時，一個格式為ASY的檢測項目就會被裝載到一個空白的文本中。當輸入一個檢測項目時，必須在窗口的靠上一欄內選中一個相關的保存位置，文件類型為realplexexchange（*.asp）。3.5.9 建立文件夾登陸用戶可以在本人用戶結點下建立文件夾，相關的文件和文本都在這個文件夾中保存，以方便日后的調用。根據(jù)如下的

44、步驟建立文件夾：通過圖標open assay打開檢測項目的對話框。 選中本人用戶結點后，通過功能鍵new來添加一個新的文件夾。 可以首先通過選中文件夾，然后再點擊功能鍵rename來重新命名。然后檢測項目就可以在建立的文件夾中進行復制和創(chuàng)建等操作了。（請查閱3.5.4和3.5.2節(jié)）3.5.10 刪除檢測項目和文件夾通過圖標open assay，用戶可以在檢測項目對話框中，點擊功能鍵delete來刪除選中的檢測項目，最后點ok確認刪除操作。同樣的刪除操作可以用來刪除文件夾。 選中一個檢測項目或者文件夾后，可以通過點擊功能鍵delete，和確認yes來刪除該檢測項目或者文件夾。3.6 染料管理

45、選中dyes圖標后，將會彈出相應對話框。這個對話框用于實現(xiàn)對染料的管理。在熒光測量中，染料是必須被適當設定的。相應染料的最大發(fā)射波長對于用戶選擇適當濾光片(如FAM520nm與一號濾光片520+/-5 nm ）濾光片是非常重要的。請向各自的生產(chǎn)商咨詢所需染料的最大放射量。注意：在執(zhí)行顏色校準（請查閱3.8.2節(jié)）前，必須先定義相應的染料。 染料名稱 染料最大的發(fā)射波長，單位為納米（nm） 染料檢測通道。基于特定的染料波長有程序預先自動設定。 具體染料校準時的光電倍增器的敏感度。包含有四位數(shù)碼，用來為四個濾光片中的每一個設定相應數(shù)值（1代表低敏感度，9代表高敏感度）。該數(shù)碼由軟件預先設置。 最后

46、一次執(zhí)行染料校準的用戶 最后一次校準時間。 在點擊此鍵以后所顯示的對話框中，新染料的所有數(shù)據(jù)都可以在這里輸入進來。這個對話框用來輸入新染料的名稱和檢測新染料的濾光片。濾光片必須與新染料的發(fā)射波長相匹配。 當前染料的所有數(shù)據(jù)都可以在點擊此鍵以后顯示的對話框中修改。按ok以確認。 點擊此鍵后，選擇yes確認刪除的染料。注意：如果染料的濾光片發(fā)生改變的話，將會失去染料的校準資料。3.7 探針管理探針管理允許系統(tǒng)在檢測項目板布局完成后在選擇探針類型。這個功能僅僅用于文檔編制，對pcr程序則沒有什么影響。為獲得數(shù)據(jù)而需要的測量點是在建立pcr程序時確定下來的。（請查閱4.3.6節(jié)） 當圖標probes被

47、選中后，會彈出相應的對話框。在這個對話框下，任何用戶都可以在磁板布局時，實現(xiàn)對探針的管理。探針型在顯示的對話框中被命名，點擊ok以確認命名。 當前探針的名字可以在顯示的對話框中修改，點擊ok以確認。 點擊yes以確認探針型的刪除操作。3.8 校準在使用mastercycler ep realplex做熒光試驗時，需要事先進行背景和顏色校準。校準應和隨后的試驗處于相同的溫度下。注意：為保證密封蓋上沒有液體，溶液內沒有空氣泡，校準前應首先對校準板進行離心操作。一定要確保沒有液體蒸發(fā)，否則使用新的校準板。在校準前，要保證儀器已經(jīng)啟動了至少15分鐘。注意：軟件會自動確定每個染料和濾光片所需的光電倍增器

48、敏感度。所以用戶無需有任何輸入。背景校準必須要在顏色校準之前執(zhí)行。3.8.1 背景校準選中菜單欄setup后，就會彈出background calibration對話框，列出所有保存的背景校準。該列表還列出了校準時間和執(zhí)行校準的用戶名。除此之外還顯示了背景校準的狀態(tài)。 使用的板名稱 作為默認設置的背景校準，帶有十字標記。 光電倍增器的敏感度在染料校準過程中以四位數(shù)碼的形式被確定下來。四個濾光片中，每個濾光片都對應確定一個數(shù)碼（1代表低敏感度，9代表高敏感度）。這四個數(shù)碼由軟件預先設定。 執(zhí)行背景校準的日期 執(zhí)行背景校準的用戶 一個新的背景校準過程會在點擊該欄后出現(xiàn)的對話框中進行。 對話框new

49、被打開后，輸入背景板的名稱。 在右邊的對話框的incubation欄中，輸入模塊和蓋子的溫度值。模塊溫度的缺省值為60攝氏度，蓋子溫度的缺省值為105攝氏度。 插入背景板以后，單擊功能鍵calibrate開始執(zhí)行校準，單擊ok鍵確認操作。 在加熱和第一次讀值完成后，軟件會提示翻轉背景板，請按照軟件的提示操作，翻轉背景板，單擊ok確認操作。 如果背景校準成功完成的話，背景板會顯示出96個綠色位置的板布局。單擊ok確認以關閉“校準成功完成”提示框。如果背景板在校準過程中的某些位置校準失敗時，單擊cancel來放棄校準數(shù)據(jù)。在這種情況下，前次的校準數(shù)據(jù)將被用來使用。選中proceed鍵時，背景校準數(shù)

50、據(jù)在任何情況下都會被排除。 在顯示的對話框內，可以改變當前背景校準的所有的數(shù)據(jù)，然后校準過程被重復進行。前次的背景校準的數(shù)據(jù)將被覆蓋。 當選中功能鍵default時，對于所有的檢測項目來說，校準都為默認設置。此時在背景校準列表中，將顯示一個十字標志。 點擊yes來確認對背景校準的刪除。背景校準失敗的另一個原因可能是熱模塊內一些容器內的熒光污染造成的。熱模塊的清潔請詳見7.2節(jié)。3.8.2 顏色校準在顏色校準過程中，要調整96個光路的不同的敏感度等級。除此之外，顏色校準是基于多種染料檢測，進行多個檢測項目運行的前提條件。通常來講，這些熒光染料的發(fā)射波波長很寬，以至于其發(fā)射的光波可以被多個濾光片檢

51、測到。當進行多檢測項目運行時，軟件可以使用顏色校準得出的校準數(shù)據(jù)來計算在別的濾光片中染料之間的干擾情況。注意：在進行顏色校準時，可以使用實時PCR中適用的所有試管和密封蓋，應該記住一點，在顏色校準時使用的背景校準必須用相同的物品來進行。3.8.2.1 使用商業(yè)化的校準工具包進行的顏色校準注意：只有96孔型的校準工具包適用于mastercycler ep realplex的顏色校準。這些工具包必須包含一個板/染料（例如：ABI棱鏡7000SDS 96孔光譜校準工具包）。當使用用于商業(yè)的校準工具包來進行顏色校準時，背景校準必須使用這個工具包提供的背景板來進行。校準所需染料的選擇取決于裝在maste

52、rcycler ep realplex中的濾光片。 在setup菜單中打開color calibration對話框。 打開color calibration對話框以后，用組合框來選擇工具包內的背景板。染料的名稱同時在此被輸入進來。 在右邊的對話框的incubation一欄中，輸入模塊與蓋子的溫度值。模塊的默認溫度設置為60攝氏度，蓋子的默認溫度設置為105攝氏度。 當插入顏色校準板后，點擊功能鍵calibrate來執(zhí)行校準操作。點擊ok來確認操作。 在加熱和首次讀值后，軟件提示用戶翻轉校準板，請翻轉校準板，然后點擊ok以確認。 如果顏色校準被成功運行，板布局顯示出96個顏色校準板的綠色位置。點

53、擊ok以關閉calibration successfully finished提示框。如果顏色校準在某位置發(fā)生了失敗，可以選擇cancel鍵來放棄校準數(shù)據(jù)。在此情況下，該染料的前次校準數(shù)據(jù)將被使用。選擇proceed時，顏色校準數(shù)據(jù)在任何情況下都會被排除。對每種染料，該過程都被反復執(zhí)行。當校準完成后，在calibration面板中將會顯示出一個敏感度碼。這個敏感度碼是一個數(shù)值組合，每一位數(shù)都確定著光電倍增器的敏感度級別，用來在校準過程中，測量相應濾光片里的染料。校準工具包中的染料的敏感度級別是由軟件預先設定的。3.8.2.2 客戶特有的染料的校準根據(jù)下列表格中顯示的推薦濃度值，每個染料都應事先

54、準備出一個相應的濃度。對于每種濃度，50微升的溶液逐一被移液到96孔板的每個孔內。密封好校準板后，對于每種染料濃度開始執(zhí)行顏色校準操作。（請查閱3.8.2.1章內容）注意：在背景校準和顏色校準時，使用相同的工具。應該首先進行背景校準。用于校準客戶特有染料的主濾光片（nm）(上表中第一行左邊內容翻譯)顏色校準推薦使用的染料濃度值(上表中第一行右邊內容翻譯)注意：染料的最大輻射量應在主濾光片允許范圍內。在每個數(shù)碼位置中，敏感度代碼都不能是1。主濾光片的代碼必須為在2到7之間的數(shù)字。如果在主濾光片中，敏感度代碼中包含有8或者9時，用一個較高的染料濃度重復顏色校準操作。而當敏感度代碼包含1這種情況下，必須用較低的染料濃度重復顏色校準操作。3.9 數(shù)據(jù)庫管理所有的數(shù)據(jù)、設置值、用戶結構都自動保存在數(shù)據(jù)庫中，推薦用戶定期為數(shù)據(jù)庫建立備份。注意：不要混淆不同器皿的數(shù)據(jù)庫。Database tool軟件可以用來管理數(shù)據(jù)庫。 雙擊圖標database tool后，顯示出realplex database administration對話框。上面的selected database面板顯示出當前數(shù)據(jù)庫和其當前狀態(tài)。Datebases and Archives圖表顯示了所有可用數(shù)據(jù)庫的列表。共有兩種形式的數(shù)據(jù)庫： 實際使用的數(shù)據(jù)庫，其中的數(shù)據(jù)都