磷酸鹽緩沖液配制方法

1、磷酸鹽緩沖液（PBS）配制方法0.01M PBSPBS （135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4，pH 7.2）PBS 緩沖液（pH7.2 7.4） : NaCI 137mmol/L , KCI 2.7mmol/L , Na2HPO4 4.3mmol/L , KH2PO4 1.4mmol/L稱 7.9g NaCI, 0.2g KCI, 0.24g KH2PO4（or 1.44g Na2HPO4）和 1.8g K2HPO4 ,溶于 800 ml 蒸 餾水中，用HCI調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4,最后加蒸餾水定容至1 L。保存于4

2、C冰箱中即可。需要注意的是，通常所說的濃度 0.01 M 指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度，而非 Na 離 子或 K 離子的濃度， Na 離子和 K 離子只是用來調(diào)節(jié)滲透壓的。母液的配制:0.2M Na2HPO4 :稱取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4 :稱取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于 1000ml 水各種濃度 PB（pH=7.4） 的配制:先配 0.2M PB （pH=7.4，100ml）:取 19ml 0.2moI/L 的 NaH2PO4， 81ml 0.2moI/L 的Na2HPO4, 即可。然后 只需將 0.2M

3、 PB （pH=7.4） 按相應(yīng)比例適當(dāng)稀釋 即可，如:0.1M PB（PH=7.4）:取 500ml 0.2M PB ，加水稀釋至 1000ml 即可。0.01M PB （ PH=7.4）:取 50ml 0.2M PB，加水稀釋至 1000ml 即可。0.02M PB （ PH=7.4）:取 100ml 0.2 M PB，加水稀釋至 1000ml 即可。若需要NaCl 的話，加入NaCl至 0.9%（g/100ml）即可。另：其它各種另 PH 值的0.2MPB（ 100ml）配方：pH0.2M NaH2PO4（ml）0.2M Na2HPO4（ml）5.793.56.55.89285.9901

4、06.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.5 16847.6 138790.591.59394.77.7 10.57.8 8.57.9 7 8.0 5.3 0.01M磷酸鹽緩沖液（PBS）配制方法稱取 8g NaCI、0.2g KCI、1.44g Na2HPO4 和 0.24g KH2PO4,溶于 800ml 蒸餾水中，用 HCI 調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4,最

5、后加蒸餾水定容至 1L即可。在15lbf/in2（1034 X 105Pa）高壓下蒸 氣滅菌（至少20分鐘），保存存于室溫或 4C冰箱中。需要注意的是，通常所說的濃度 0.01M 指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度，而非 Na 離 子或 K 離子的濃度， Na 離子和 K 離子只是用來調(diào)節(jié)滲透壓的。 如果是用于免疫組化的話， 則需要在配置的時(shí)候分別加入100 u/ml青霉素和鏈霉素之后再調(diào) PH、定容、滅菌消毒。PH7.67.47.27.0H2O1000100010001000NaCl8.58.58.58.5Na2HPO4 2.22.22.22.2NaH2PO4 0.10.20.30.4根據(jù)經(jīng)驗(yàn)

6、來看,新鮮配置的PBS 攪勻后其PH 值約在7.2-7.4 之間,可是在溫度的影響下,尤其在夏天，其電離常數(shù)發(fā)生了改變，在經(jīng)過晝夜的時(shí)間后，PH 值會(huì)明顯改變（我親自測(cè)過偏酸）。所以做實(shí)驗(yàn)的同學(xué)可要注意了， PH 值可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，甚至可能導(dǎo)致陰性。 所以務(wù)必記得這個(gè)時(shí)候和天氣， 要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)條件控制問題。 每次使用前最好用試紙測(cè)一下過 夜了的PBS,如果發(fā)生偏酸或偏堿，注意重新?lián)Q新液。PBS 緩沖液稱取 NaCI 8g , KCl 0.2g , Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g ，溶于 900ml 雙蒸水中， 用鹽酸調(diào)pH值至7.4,加水定容至1L,常溫保

7、存?zhèn)溆?。PBST 緩沖液取300卩l(xiāng) Tween-20加入PBS 100ml中，混勻后即刻使用?，F(xiàn)用現(xiàn)配。如果是把所有固體加大十倍, 配置為濃縮液, 工作時(shí)候十倍稀釋, 那么, 在剛配好濃縮液時(shí), PH 在 6.5 左右,明顯偏酸。不能用鹽酸調(diào)。雖然可以用氫氧化鈉顆粒調(diào),但是有更方便的 方法。十倍稀釋以后, PH 自動(dòng)升高到所需要的值。不需要其它任何處理。這個(gè)可以先取少量試一 試,配好之后再測(cè)一次 PH8.0的PBS配方詳細(xì)1. NaCl 137mmol/L , KCl 2.7mmol/L , Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L2. 向燒杯中加入約800 m

8、l的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 滴加濃鹽酸將 pH 值調(diào)節(jié)至 8.0,然后加入去離子水將溶液定容至 1 L。4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述 PBS Buffer 中無二價(jià)陽離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充 1 mM CaCl2 和 0.5 mM MgCl2 。0.05mol/L PBS（磷酸緩沖液 Phosphate Buffer Solution , PBS）的配制：甲液：0.05mol/L Na2HPO4溶液：稱取磷酸氫二鈉 9.465g 7.099g,加蒸 餾水至1000ml ; 乙液:0.05mol/L KH2P04溶液：稱取磷酸二氫鉀,9.07g 6.803g,加蒸餾水至1000m1。將甲乙液分裝在棕色瓶?jī)?nèi)，于4C冰箱中保存，用時(shí)甲、乙兩液各按不同比例混合，即可得所需 pH 的緩沖液 ,見下表 ：pH甲液 ml乙液 mI5.292.597.55.595.095.05.9110.090.06.2420.0