實驗六膠體金免疫層析技術PPT課件

1、實驗目的實驗目的u掌握膠體金試紙條診斷技術的原理、使用方掌握膠體金試紙條診斷技術的原理、使用方法及結果的判定法及結果的判定第1頁/共16頁簡簡 介介 膠體金試紙條診斷是采用膠體金免疫層析技術研制而成，該技術是膠體金試紙條診斷是采用膠體金免疫層析技術研制而成，該技術是90年代年代初在免疫滲濾技術的基礎上建立的一種簡易快速的免疫學檢測技術，最先用于人初在免疫滲濾技術的基礎上建立的一種簡易快速的免疫學檢測技術，最先用于人絨毛膜促性腺激素（絨毛膜促性腺激素（HCG）的測定和乙型肝炎病毒表面抗原（的測定和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）等檢測。等檢測。第2頁/共16頁膠體金（Colloidal gol

2、d）是氯金酸（HAuCl4）的水溶膠，利用HAuCl4在還原劑（檸檬酸鈉）的作用下，聚合成特定大小的金顆粒，形成帶負電的疏水膠溶液，由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。簡簡 介介第3頁/共16頁質量好的膠體金：溶液呈紅色，膠體金顆質量好的膠體金：溶液呈紅色，膠體金顆粒為球形，大小均一，無棱角。粒為球形，大小均一，無棱角。質量差的膠體金：溶液呈紫色，大小不一，質量差的膠體金：溶液呈紫色，大小不一，形狀各異。形狀各異。膠體金的質量判定標準膠體金的質量判定標準簡簡 介介第4頁/共16頁膠體金標記的原理：膠體金在堿性條件下帶負電荷，與蛋白質分子的正電荷基團藉靜電吸引而形成牢固結合。膠體金標

3、記技術（Immunogold labeling technique）是以膠體金作為示蹤標記物應用于抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術。簡簡 介介第5頁/共16頁膠體金試紙條診斷技術的原膠體金試紙條診斷技術的原理理 以硝酸纖維素膜為載體，利用了微孔膜的毛細作用，滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲移，通過抗原抗體結合，并利用膠體金呈現(xiàn)顏色（紅色）反應，檢測抗原/抗體。最常用的是雙抗夾心法檢測抗原第6頁/共16頁膠體金試紙條示意圖檢測線檢測線質檢線吸收墊樣品墊硝酸纖維素膜連接墊（膠體金墊）背襯（底板）第7頁/共16頁測定時將試紙條下端浸入液體標本中，下端吸水材料即吸取液體向上端移動，流經(jīng)C處時使干片

4、上的免疫金復合物復溶，并帶動其向膜條滲移。測 定第8頁/共16頁若標本中有待測特異抗原，即可與免疫金復合物中的抗體結合，此抗原抗體復合物流至測試區(qū)即被固相抗體捕獲，在膜上顯出紅色反應線條（T）。測 定第9頁/共16頁過剩的免疫金復合物繼續(xù)前行，至參照區(qū)與固相抗小鼠IgG結合（免疫金復合物中的單克隆抗體為小鼠IgG），而顯出紅色質控線條（R）。測 定第10頁/共16頁陰性標本則無反應線條，而僅顯示質控線條。測 定第11頁/共16頁膠體金快速診斷技術的特膠體金快速診斷技術的特點點 u簡捷快速簡捷快速：操作簡單，一般只要：操作簡單，一般只要5-10min 就會出結果，而其它方法如就會出結果，而其它方

5、法如ELISA需要需要1-2h，PCR 需要時間更長。需要時間更長。u結果易于判定結果易于判定：陰、陽性呈色很明顯，肉眼很容易判斷。：陰、陽性呈色很明顯，肉眼很容易判斷。u特異性好特異性好：因為該技術大多用單克隆抗體標記，這決定了它具有很好的特異性。：因為該技術大多用單克隆抗體標記，這決定了它具有很好的特異性。第12頁/共16頁u病毒性疾病病毒性疾病：傳染性法氏囊病、禽流感、新城疫、犬細小病毒、豬瘟等。：傳染性法氏囊病、禽流感、新城疫、犬細小病毒、豬瘟等。u寄生蟲疾病寄生蟲疾病：血吸蟲病、旋毛蟲病、囊蟲病、恙蟲病。：血吸蟲病、旋毛蟲病、囊蟲病、恙蟲病。u細菌性疾病細菌性疾?。夯魜y弧菌、類鼻疽。：霍亂弧菌、類鼻疽。膠體金快速診斷技術的應膠體金快速診斷技術的應用用第13頁/共16頁H5亞型亞型AIV尿尿囊液陽性結果囊液陽性結果陰性對照陰性對照陰性對照陰性對照H5IV細胞細胞毒陽性結果毒陽性結果第14頁/共16頁1.