AU系列生化分析儀參數(shù)詳解

1、 AU系列生化儀的部分參數(shù)界面及名詞解釋 AU系列生化儀的部分參數(shù)界面及名詞解釋AU系列生化儀進入中國后，顛覆了以往國人對生化儀盤式進樣的理解。AU自帶軌道的設計顯得高大上，而且速度一直是AU系列的看家法寶，讓先期進入中國的貝克曼和日立毫無招架之力。不過，隨著自動生化儀的普及，人們發(fā)現(xiàn)AU的速度并非優(yōu)勢，結果的不可靠性開始出現(xiàn)，質疑聲不斷。AU的攪拌系統(tǒng)和杯沖洗系統(tǒng)一直成為問題，污染和滴落甚至漫盤讓操作者傷透了腦筋，還為此被加拿大藥監(jiān)局召回。當然還有它的半導體冰箱問題。不過，任何機器都會出問題，也都要保養(yǎng)，保養(yǎng)不夠就會遭到報應?，F(xiàn)在的中國人恨不得回到石器時代，拿起來就用，用完不管。要

2、求所有的機器都做到召之即來，來之能戰(zhàn)，戰(zhàn)之能勝。但就是沒有保養(yǎng)，也不想維護，更不用說維修了，那是花錢的玩意兒，而前者則是費時費力的事情，也是不愿意做。其實，嚴格的保養(yǎng)維護作業(yè)，成本并沒有增加多少，時間也花費不多，卻能得到穩(wěn)定可信的結果。所有的生化儀結果問題，大多出在保養(yǎng)和對設備的理解上。而在設備的理解上，相關名詞的理解最為重要，因為它直接引導你的操作，一旦理解錯誤，那么結果不好也就順理成章了。AU系列生化儀從速度上分為400、800、1600、2000速。從反應盤數(shù)量上分為單盤和雙盤，也就是800速以下和以上的區(qū)別。單反應盤配套試劑針和樣本針各一個，雙反應盤則是雙倍針配套。沖洗站都是一組，攪拌

3、系統(tǒng)有兩組和一組的區(qū)分，AU400/480和2700/5400是一組，AU640/680/5800是兩組。800速以上的機型都是兩組光度計，一個燈泡通過光纖分配使用。以上是簡單的機器上面板介紹，下圖是AU系列反應曲線的示意圖：                        圖1 AU系列生化儀反應曲線示意上圖可以看出，AU的讀點間隔都是18秒，整個反應周期有

4、28個點，也就是28*18=504秒=8.4分鐘。R1+S+R2方式，只能雙試劑。R1加入讀點為P0，S加入讀點為P1，R2加入讀點為P11。R1至R2時間為11*18=198秒=3.3分鐘，S 至R2時間為10*18=162秒=3分鐘，R2至P27最后反應點時間為16*18=288秒=4.8分鐘。AU的反應時間是固定的，只有28個點，沒有長程反應。攪拌一共進行三次，分別是R1、R1+S、R1+S+R2。上圖是兩條曲線，下面那條是試劑空白，上面那條是樣本曲線，下面以AU680為例，解釋一些AU系列的名詞。1 空白概念：AU的空白（Blank）的概念有杯空白，其實這是反應杯的

5、檢查，在Photocal里進行，也是水空白（Water Blank，WB）；實時水空白;試劑空白（ReagentBlank，RB）。1.1杯空白（Water Blank，WB）：AU的杯空白并不是實時的，而是需要時測定，或者執(zhí)行周保養(yǎng)時才測定。一般更換反應杯或者燈泡或者W2清洗后才執(zhí)行。而杯空白的檢查是用來判斷反應杯是不是在使用狀態(tài)，借此判斷是否自動封閉超限的反應杯。各型號AU生化儀都有Photocal光度計校準這個菜單或者選項，在這個界面下可以選擇全部反應杯或指定反應杯號的檢查：圖2 Photocal光度計校準界面這是合格的光度計校準界面，全部反應杯都是黑色字體。綠色CuvetteCheck

6、 Error表示杯檢查錯誤，儀器認為是擦傷。判斷依據(jù)是將一個反應杯分為前后兩部分進行檢測，前后部分吸光度值超過0.01Abs，則認為是有劃痕擦傷。紅色Mean CheckError表示平均值檢查，某一個杯子反應杯的吸光度值與所有反應杯吸光度平均值的差異不能大于0.03Abs，否則該杯將被紅色標記，系統(tǒng)自動封閉該反應杯。橙色Lamp CheckError是燈泡檢查，這一項要經(jīng)過兩次比對，第一次是所有反應杯在所有波長下的吸光度值小于等于1.7Abs，第二次是將所有反應杯的光度計值與更換燈泡后的該反應杯光度計值做比較，兩次的結果應該小于等于0.1Abs。這兩次檢查有任何一次超限就會被橙色標記。要注意

7、的是，儀器并不知道你什么時候換的燈泡，其實是跟上一次的Photocal值做的比較。這一點與AU老型號的機器藍色標記類似，新型號去掉了藍色標記，改用橙色標記。偶爾幾個反應杯出現(xiàn)顏色標記時，可把該反應杯取出，人工清洗擦干后再行測試?；蛘吒纱喔鼡Q。出現(xiàn)橙色或者藍色，可先行保存，然后接著點擊檢查，也就是說上次的數(shù)據(jù)可能是很久之前的，保存一次把數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù)覆蓋，然后再檢查，這樣兩次的比較就應該很接近，藍色或者橙色就會消失。但如果這么操作還是無法消除橙色，就要嘗試更換反應杯或者燈泡了。大面積的出現(xiàn)紅色，應該首先檢查沖洗站，漫盤的可能性最大。大面積出現(xiàn)綠色或者紅綠兼而有之，首先檢查燈泡和燈泡供電，光源不穩(wěn)可

8、能性最大。在Photocal檢查里進行的杯空白是利用去離子水作為介質的，并不是空反應杯進行測試。所以這里的杯空白又叫水空白（Water Blank）。但Photocal并非強制性，也不是每天必須的。而且是個多合一的數(shù)據(jù)，同時是用來判斷反應杯是否能夠使用的依據(jù)。這個水空白的數(shù)據(jù)在定標、結果計算里會經(jīng)常用到。后面用到的水空白校正公式是：ODF（X）=OD（X）-F（X）ODF（X）是水空白校正后的吸光度值；OD（X）是水空白校正前的吸光度值；F（X）是該反應杯的指定波長吸光度值；X是0-27個讀點。1.2 實時水空白：是沖洗站每次清洗完反應杯后測定的水空白數(shù)據(jù)，這是實時的，每次清洗后的水

9、空白數(shù)據(jù)與上次的Photocal光電校準里的水空白數(shù)據(jù)進行比較，誤差太大則自動封閉，暫時不使用。注意：如果上次Photocal檢測的時候，水質出現(xiàn)問題，會導致所有反應杯的平均值偏高，這時并不會顏色標記。但當水質恢復后，實時空白會遠遠低于當初的的水空白，也不會報警。但由上次水空白記錄的數(shù)據(jù)計算的結果或試劑空白可能會出現(xiàn)負值，導致結果錯誤或試劑空白失敗。所以說這是一個考慮點，如果想排除這個因素的干擾，做一次Photocal保存然后再執(zhí)行一次保存即可。當然可以反推，這次的水質不好也會造成結果的混亂。1.3 雙波長校正：在使用雙波長的項目里，主波長的吸光度減去付波長吸光度。雙波長校正公式是：

10、ODP（x）=ODM（X）-ODS（X）ODP（X）是雙波長校正后的吸光度值；ODM（X）是主波長的吸光度值；ODS（X）是付波長的吸光度值；X是0-27個讀點。1.4 試劑空白（Reagent Blank，RB）：以去離子水為樣本，按照項目參數(shù)的設置進行測試，得到的整條曲線的各個讀點的吸光度值，由于只有試劑參與，所以又叫試劑空白。試劑空白的吸光度值是經(jīng)過水空白校正的，也就是說減去水空白值。試劑空白也是經(jīng)過雙波長校正的，根據(jù)測試方法的不同而決定是否采用試劑空白校正。END1、RATE1和FIXED1這三種方法不使用試劑空白校正，這三種方法是采用的水空白校正。試劑空白的校正公式是：OD

11、R（x）=ODP（X）-RB（x）ODR（X）是試劑空白校正后的吸光度值；ODP（X）是雙波長校正后的吸光度值；RB（X）是試劑空白吸光度值；X是0-27個點。圖3 試劑空白示意圖由于END、RATE、FIXED三種方法都采用試劑空白校正，所以試劑空白變得非常重要。不同廠家、不同批號甚至不同試劑瓶間的試劑空白可能會相差很大，所以在菜單Calibration Parameters定標參數(shù)里，Advanced Calibration選項有批號、換瓶等選項，更換批號或瓶號即會重新定標。而重新定標之前必須先做試劑空白。試劑空白在定標參數(shù)里，可以單獨測試，也可以與定標一起測試，但絕不可以單獨做

12、定標而不做試劑空白。而有些實驗室既不執(zhí)行換瓶換批號定標，也不單獨執(zhí)行試劑空白，或者執(zhí)行試劑空白時作為樣本的去離子水有問題，導致保存在儀器內的試劑空白過高，由于不檢查試劑空白范圍，所以并不報警。但在樣本測試或定標時導致負值出現(xiàn)。所以在AU系列生化儀上，試劑空白和Photocal是經(jīng)常要做的，是耽誤了些時間，耗費了一些試劑，但保證了結果準確，還是值得的。每日開機，可以不做定標，但試劑空白是一定要做的。試劑空白每次執(zhí)行的次數(shù)可以最大到4次，一般要選擇兩次以上，這樣可以看出重復性，繼而推導儀器可能存在的問題。連續(xù)兩次試劑空白則計算平均值，三次是取兩次接近的值平均，四次的話則是去掉最大最小值，剩下的兩次

13、平均。下圖是站上上截取的一幅試劑空白的圖：圖4 試劑空白示意圖由圖可以看出，P0-P27所有讀點的吸光度值都在數(shù)據(jù)庫里保存。根據(jù)測試參數(shù)的設定，有三個主要值單獨標示。P0就是R1加入的吸光度值，這個值理論上同瓶試劑不會改變，或者改變范圍很小。Px是第一個測試點的值，如果只有單點，那就是這個點的吸光度。Py是最后一個點的吸光度。上圖是ASO項目，END方法，讀點分別是10和27，那么Px就是10點的吸光度，Py就是27點的吸光度。批號和瓶號全部輸入的是位置號，也就意味著不會變更，也就不會自動定標。下圖還是這個網(wǎng)友提問的圖片，可惜拍照的不全：圖5數(shù)據(jù)監(jiān)測常規(guī)界面示意圖由于只有14-27點

14、的數(shù)據(jù)，那就有什么看什么了。而且是單波長，所以沒有雙波長校正。圖中的最大OD和最小OD分別是各個波長、反應吸光度和試劑空白的個點吸光度的最大最小值。由于數(shù)據(jù)不全，我們看上圖的試劑空白，最大OD出現(xiàn)在P12點，0.4079，而P11點更高是0.4093，但這一點不計數(shù)。最小OD值出現(xiàn)在P4點，0.0062。而反應最大OD出現(xiàn)在P27點，0.4331。最小讀點應該在P11點之前，圖上顯示是0.058，比試劑空白的最低點還要低。反應OD是根據(jù)公式計算的，終點法大體是最后選擇點的吸光度減去首先選擇點的吸光度乘以液體比率系數(shù)。這個后面可能會有計算方法的解釋。下圖是一個完整的數(shù)據(jù)監(jiān)測界面：圖6 

15、完整的數(shù)據(jù)監(jiān)測常規(guī)界面示意圖這張所謂的完整圖示，其實也沒有13-27點的數(shù)據(jù)。不過屏幕左側是完整的，上面清晰的告訴我們，樣本測試的日期、校準日期、photocal日期和試劑空白日期。不過這個項目采用的END1方法，所以沒有試劑空白數(shù)據(jù)。這個結果的反應曲線如下：圖7 反應曲線示意圖上圖綠色線條是付波長曲線，藍色線條是主波長反應曲線，紅色線條是反應曲線，也就是主波長減去付波長的擬合線，但圖中沒有設置顯示。由于這是廠家說明書上的演示，所以measuring point-1 測量點1選擇的是0-1，measuring point-2沒有選擇，因為是單試劑。這個讀點選擇的很有意思，P

16、0點加入R1開始，加入樣本后的第一點P1就結束，后面的曲線都是瞎忙活，早就測試完了。就算ALB反應快，但也不至于此。2、測試方法：AU系列測試方法有終點法、速率法和固定點法。2.1 終點法：終點法在測試方法選擇里有END和END1兩個選項。END是試劑空白校正，也就是測定樣本的吸光度值減去該點試劑空白的吸光度值。END1是水空白校正，也就是測定樣本的吸光度值減去該點水空白的吸光度值。當然，二者都可以選擇或者不選擇雙波長校正，而且二者都可以選擇一組讀點還是兩組讀點，以形成一點終點法還是兩點終點法。圖8 一點終點法示意圖圖9 兩點終點法示意圖R1.V是R1試劑的體積；

17、S.V是樣本的體積；R2.V是R2試劑的體積；Pz是第一讀點，也叫初始讀點，在參數(shù)設置里是Measuring Point-1，在終點法里是R2之前之后各一個點；Px是第二讀點，也叫最后讀點，在參數(shù)設置里是Measuring Point-2，在終點法里不使用這組讀點。在如果不使用R2，也就是單試劑，是圖8的示意圖，第一讀點一般選擇0-27，第二讀點不選擇，這樣結果會扣除R1的空白。如果選擇END方法，則兩個點都要減去該點的試劑空白后再相減。由于第一讀點本來就是R1的空白，理論上應該與試劑空白P0的是數(shù)值相差無幾甚至完全相等，所以只需要第二讀點減去該點的試劑空白即可。如果選擇END1方法，那么兩點

18、的數(shù)值均要減去水空白。理論上水空白的曲線是一條水平直線，所以兩點減去的值都相同，然后兩點間再相減，得出的吸光度值用于濃度計算。要注意的是：AU640和AU680對Measuring Point的概念是不同的，前者Measuring Point-1是主讀點， Measuring Point-2是前一點，也就是空白點。而后者正好相反。Measuring Point兩組點都選擇，是給雙速率法和雙固定點法準備的，終點法用不上。在圖9中，是雙試劑終點法，需要試劑樣本空白，也就是R1+S的空白，所以第一讀點的Fist應該在R2加入之前的一個點，也就是圖中的Pz，一般選擇P10讀點；Px則是第一讀

19、點的Last點，反應結束的點。終點法的反應OD值計算公式是：反應OD=（Px-K2*P0）-（K3*Pz-K2*P0）K2是R1體積和總反應量的比值，也就是R1.V/（R1.V+S.V+R2.V）；K3是R1+S的體積和總反應量的比值，也就是（R1.V+S.V）/（R1.V+S.V+R2.V）。圖5中的光路校正其實就是這個K值，由于參數(shù)不全，無法計算反推罷了。如果選擇是END方法，而且Measuring Point-1的都選擇上的話，那就是兩點終點法扣除試劑空白，公式就成為：反應OD=（Px-RBPx）-K3（Pz-RBPz）也就是各點的吸光度值減去各點的試劑空白吸光度值，再進行體積系數(shù)校正。

20、如果選擇是END1方法，而且Measuring Point-1都選擇上的話，那就是兩點終點法扣除水空白，公式就成為：反應OD=（Px-WB）-K3（Pz-WB）=Px-K3Pz我們常常習慣使用測量點吸光度值減去水空白（或者杯空白）的方法，并不習慣減去試劑空白，所以END1方法在國內采用的很多。而END減去試劑空白的方法，由于試劑原因和執(zhí)行時間的問題導致一些結果出現(xiàn)負值，特別是低值標本。鬧得沸沸揚揚的免疫比濁項目用終點法都在R2之后的問題，大可不必使用兩點終點法，直接使用一點終點即可，只設置Measuring Point-1（例如：Fist0-Last27）。而非要使用兩點終點法，那就只能R2之

21、前之后各一組點，這毫無疑問見過很多實驗室里的試劑空白都是空的，根本不做，因為方法都采用END1、RATE1和FIXED1。在終點法當中，無論采用一點還是兩點，亦或是END還是END1，都有一個先天不足，那就是樣本本身的空白無法排除，有的樣本本身的顏色就很深，加入試劑后反應度很小，可能會造成假陽性。為了解決這個問題，AU可以采用樣本空白校正（sample blank correction）。在菜單Parameters>Common Test Parameters>Test Name中，選擇點擊下面的Sample Blank，就會出現(xiàn)樣本空白界面，一共只能選擇10個項目，分別選擇每一個

22、項目的顏色和空白項目名稱，然后保存。在進行這個項目測試的時候，就會先占用一個反應杯，用去離子水做試劑稀釋樣本進行樣本本身顏色的比色（樣本空白），然后再占用一個反應杯，用參數(shù)設定的試劑進行比色（顏色反應），最后顏色反應的吸光度值減去樣本空白的吸光度值。樣本空白的計算公式是：反應OD=ODC-K*ODBODC是該點的顏色反應吸光度值；ODB是該點的樣本空白吸光度值；K是樣本空白體積和顏色反應體積的比值，一般是1。根據(jù)END或END1方法的不同，還要分別減去該點的試劑空白或者水空白。下圖就是樣本空白校正的示意圖：圖10 樣本空白校正示意圖2.2 速率法 Rate：AU中

23、， 有Rate和Rate1兩個速率法選項。Rate，是扣除試劑空白的速率法；Rate1，是扣除水空白的速率法；速率法可以使用單速率法和雙速率法兩種方法。圖11 速率法示意圖當使用單速率法時，只有上圖的OD2，參數(shù)中只選擇Measuring Point-1就行了，給出開始和結束的兩點，儀器根據(jù)這兩點計算每分鐘吸光度變化。這也是最常用的速率法。當使用雙速率法時，就要在R2加入之前選擇兩個點，作為Measuring Point-1的值，然后在Measuring Point-2里輸入R2之后的兩個點，這樣前者是OD1，后者是OD2，計算公式時：反應OD=（OD2-OD1）/min當然，Rat

24、e方法要減去各點的試劑空白再計算OD，Rate1要減去水空白再計算OD。與終點法一樣，大多采用Rate1方法。線性范圍（Linearity Limit）：在速率法當中，線性檢查是必要的。根據(jù)速率法選擇的讀點數(shù)不同，系統(tǒng)將全部讀點一分為二，分前半程和后半程兩部分分別進行OD/min計算，然后二者再進行公式計算。圖12 速率法線性檢查示意圖前半程的OD/min為E1，后半程的OD為E2，在菜單參數(shù)設置里面有個Linearity Limit選項， |（E1-E2）|÷|（E1+E2）/2|*100Linearity Limit為正常線性，否則判斷為線性錯誤，結果有*號提

25、示。這是第一個線性判斷依據(jù)。第二個線性判斷依據(jù)是|（E1-E2）|0.003，否則也會判斷為線性錯誤。這個0.003是系統(tǒng)默認值。也就是說前半程和后半程的OD/min差值絕對值不能超過0.003（Q鍵菜單中的Decision of Linearity Check設置）。逆向反應檢查（Reverse Reaction Check）：在速率法反應中，逆向檢查也很有必要，如果在讀點范圍內有任何一個點出現(xiàn)反轉，哪怕是整個讀點區(qū)的反應趨勢沒有改變，都會被監(jiān)測到，在結果中用* 號提示。圖13 逆向檢查示意圖檢查公式是：正反應 （Pn-Pn+1）/20.002負反應 （Pn+1

26、-Pn）/20.002（Q鍵菜單中的Decision ofReaction設置）所以，當結果出現(xiàn)*號提示時，有兩個方面需要考慮，可能是某一點顛倒了方向，也可能是線性不好。LAG-TIME(延遲時間)：在速率反應中，有些反應速度過快，導致在讀點區(qū)有2個以上的點沒有讀數(shù)，例如典型的底物過剩反應。這樣選擇是否進行延遲讀點，系統(tǒng)可以選擇延遲后讀點進行計算。這個功能要與OD Limit里的MIN OD和MAXOD配合使用。當下降反應開啟了LAG-TINE和設置了ODLIMIT的Min OD，速率反應低于Min OD設置值時，結果會用B提示。當上升反應開啟了LAG-TINE和設置了ODLIMIT的MAX

27、OD，速率反應高于MAX OD設置值時，結果會用D提示。圖14 速率反應過快示意圖圖中的a線是正常速率曲線，b和c都過快，而且低于Min  OD設置的0.5的范圍。在速率法當中，也可以選擇使用樣本空白校正，利用單獨的反應杯進行樣本空白比色，然后再相減。動態(tài)范圍（Dynamic Range）：在速率法中，讀點區(qū)域兩點間的吸光度變化也要被監(jiān)測，不然會漏報高濃度樣本。而高濃度樣本不完全會造成底物過剩。所以在動態(tài)范圍里設置最低最高吸光度，用來監(jiān)測兩點間的吸光度變化。超過高值限制則用F提示，超過低值限制則用G提示。2.3 固定點法（FIXED）：在AU中，有FIXED和FI

28、XED1兩個選項。也叫做兩點法。FIXED，是扣除試劑空白的固定點法；FIXED1，是扣除水空白的固定點法；固定點法都可以采用單固定點和雙固定點法。也可以進行樣本空白校正。圖15 固定點法示意圖反應OD的計算公式是：OD = (Px - Py) - K1 X (Pw - Pz)K1是體積校正系數(shù)，(R1 +S)/(R1 + R2 + S) ；Px, Py MeasuringPoint-2的第一點和最后一點的吸光度值；Pw, Pz MeasuringPoint-1試劑樣本空白的第一點和最后一點吸光度值。由于固定點法僅僅是主讀點區(qū)兩點間的差值，而且都在R2之

29、后，所以無論終點法還是速率法都可以這個使用。而鬧得沸沸揚揚的免疫比濁項目用終點法都在R2之后的問題，換成這個方法即可，也可以說選點沒有問題，問題出在方法上。而采用這個方法，Measuring Point-1和Measuring Point-2的間隔要相當遠才行。例如，單固定點法一般這樣選擇：Measuring Point-1 Fist12， Last27；雙固定點法一般這樣選擇：Measuring Point-1 Fist2， Last10；Measuring Point-2 Fist12， Last27；3. 定標方法：分為ACAL自動定標和MCAL人

30、工定標兩大類。ACAL可分為AA、AB和7AB三小類，MCAL可以分為MB和7MB兩個小類。3.1 ACAL 自動定標：根據(jù)給定的定標液位置和濃度，以及計算公式進行的自動定標曲線繪制。ACAL AA：是兩點線性定標，給出兩個定標液濃度，自動計算繪制一條直線（線性定標的曲線）。這種方法適用于零濃度值不過原點的定標，也就是說有截距。ACLA AB：是單點線性定標，只需要給出一個定標液濃度，自動計算繪制一條經(jīng)過原點的定標曲線。根據(jù)直線公式：Y=KX+B得知，K為直線的斜率，B則是截距。圖16 AA和AB定標曲線示意圖上圖坐標系是扣除水空白的，也就是說不考慮水空白的因素。如果選擇了END1、

31、Rate1和FIXED1這些扣除水空白的測試方法，又是線性定標的話，直接選擇AB即可。如果選擇AA，則會出現(xiàn)一個零濃度截距ODa，也就是試劑空白，當試劑改變，出現(xiàn)波動的話，可能低值標本會出現(xiàn)負值。因為有可能試劑空白發(fā)生改變，低于定標時很多，這樣低值樣本的OD會低于ODa很多，AA直線延長下來，濃度X軸的值就是負的，到了第二象限去了。如果選擇了END、Rate和FIXED這些扣除試劑空白的測試方法，又是線性定標的話，直接選擇AA定標即可。因為每次定標前必須執(zhí)行試劑空白測定，這個截距會自動被試劑空白校正過來，這樣就會把X軸移動到X1位置，相當于AA也是過了修正后的原點。如果這個時候選擇AB方法，則

32、很有可能低值標本的吸光度是負值的情況下才能得出低值濃度，到了第四象限去了。所以說，測試方法和定標方法要結合使用才能達到最佳的狀態(tài)，并不是絕對的哪一個方法負值概率就低。無論是試劑空白校正還是水空白校正，前提是要經(jīng)常做試劑空白和水空白，不然依舊會導致負值出現(xiàn)。ACAL 7AB：是多點線性或多點非線性定標，最多7個點，最少2個點，默認零濃度點為原點。圖17 7AB定標曲線示意圖7AB定標可選擇的公式很多，后面會單獨介紹計算公式。3.2 MCAL 人工定標：根據(jù)跟定的數(shù)據(jù)繪制定標曲線，而不需要定標液。MCALMB：給出線性定標的直線斜率，也就是K值，默認是過原點的。MCAL7MB：多點定標，

33、最多7個點，最少兩個點。但每兩個點間的斜率要人工給出，也就是說只能給出折線，做不了弧線。圖18 MCAL MB和7MB示意圖由此可以看出，MCAL是最不靠譜的定標方法，能不采用就不采用。3.3 定標公式（Fomula）：與定標方法配合使用，確立定標曲線的繪制方法。在菜單Parameters>Calibration Parameters>CalibrationSpecific中，會見到下面的圖：圖19 AU定標參數(shù)界面上圖中CalibrationType里就是選擇剛才所講的定標方法，F(xiàn)omula就是計算公式。Straight Line 直線線性，公式是：y

34、0;= Ax 或 y = Ax + BPolygonal Line 折線，公式是：y =Anx + BnQuadratic Type 二元二次方程，公式是：y = Ax2 + Bx + CTertiary Type二元三次方程，公式是：y = Ax3 + Bx2 + Cx + DTertiary Type (ReversedFunctio

35、n) 反轉的二元三次方程，公式是：x = Ay 3 + By 2 + Cy + DEIA-TYPE 1 對數(shù)曲線Logit-Log4PEIA-TYPE 2 對數(shù)曲線Logit-Log5PEIA-TYPE 3 指數(shù)函數(shù)曲線EIA-TYPE 4 可能是同工酶多點線性Spline 樣條曲線圖20 部分多點定標曲線的計算公式在AU系列中，定標公式使用最多的是線性、EIA-TYPE 1和Spline。這里不再給出各公式的曲線趨勢圖。3.

36、4 定標檢查在圖19的定標參數(shù)界面中，有個Counts，這是每次定標的重復次數(shù)，最多4次，一般選擇2次，這樣可以驗證儀器的重復性。在線性定標中，可以選擇是否進行斜率檢查（Slope Check）, 也就是與上次的斜率值進行比較，超過一定的范圍則報告錯誤提示。而這個百分比范圍是在Q鍵菜單里設置的。定標參數(shù)中，允許范圍（Allowable Range Check）檢查也是有必要的，它規(guī)定了試劑空白和定標液的吸光度值不能超出多少范圍。這一項只能是ACAL方法時才能設置。高級定標（Advanced calibration）選擇Yes時，可以選擇LOT-LOT，LOT-Bottle，

37、Bottle-Bottle等批號和瓶號改變而自動進行試劑空白和定標作業(yè)。在這個界面下，還可以選擇定標和試劑空白的穩(wěn)定期（Stabilty），可以設置X天X小時的方式，超過這個時間范圍，系統(tǒng)會提示重新定標。MB type Factor其實就是人工定標的因數(shù)，也就是手工輸入的K系數(shù)，當選擇MB定標時這個參數(shù)必須輸入。1-point Calibration Point 是一點定標校正的點，也是兩點或多點定標才能使用，要么不填，要么填寫1-7的數(shù)字，表示要校正哪一個點，這個點一定是小于最高濃度的一個點。換句話說，不能校正最高濃度點。with CONC-0 復選框是讓操作人員選擇是否

38、使用零濃度定標液，如果使用就打上。這個只在2AB-7AB的時候與1-point Calibration Point配合才能使用，在一點校正的時候，是否加上零濃度點，形成一個兩點校正。定標曲線修正：在多點定標中，由于最高濃度定標液缺失或者只有一個非最高濃度值的非上次定標所用的定標液，這種情況下如果要修正定標曲線的話，可以采用一點定標修正，也可以采用擬合曲線校正。圖21 1點校正示意圖上圖的曲線校正公式是：ODn'= ODn × （OD3'/OD3）CONC3是修正的那一個點的濃度值，相應的通過計算OD3（原來的曲線該點吸光度值）和OD3（修正后的該點

39、吸光度值）的比值，計算其它各點，從而重新描繪定標曲線（實線）。圖22 帶有零濃度點修正的1點校正示意圖上圖的曲線校正公式是：ODn'= (ODn- OD1)*（OD3'-OD1'）/（OD3-OD1）+OD1用零濃度點和CONC3兩個點進行曲線修正。    圖23 擬合曲線校正示意圖在定標參數(shù)界面里，除了輸入各種定標液的濃度值和位置外，在下面還有一個選擇，那就是在定標完成后的修正。Point Cal. for Master Curve 這一項就是利用擬合曲線修正點的設置，后面緊跟著的是No.of Correct

40、ion Points選擇，可以選擇1-2個點，然后是User Master Curve，就是使用何種擬合曲線（MC1或MC2，也就是1點還是兩點）。接下來就是輸入需要擬合的1個或兩個點的濃度值和名稱，系統(tǒng)會在執(zhí)行定標的時候自動擬合。圖23的虛線是原來的主曲線，給出的兩個擬合點CONC1/2與原來的定標液濃度值可以是毫無干系的，通過這兩個點，把整條曲線擬合校正。計算公式是：OD(n)=OD(n)m-OD(2)m*OD(1)-OD(2)/OD(1)m-OD(2)m+OD(2)圖24 線性自動定標參數(shù)示意圖這是線性自動定標的示意圖，與圖19的手工多點定標可以比較出差異。因數(shù)和吸光度（Fac

41、tor/OD Range）范圍檢查：這是針對線性定標的AA和AB進行的檢查，斜率和因數(shù)不能超過規(guī)定的范圍，否則會報錯導致定標失敗，如果不進行該項檢查，則最低最高值放到最大，因數(shù)范圍是：±9999999，OD吸光度范圍是-2.0000至3.0000。多點斜率檢查（Multi-Slope Check）：這是內置的檢查項目，多點定標中，根據(jù)反應方向的不同，各點的吸光度值應該依次增大或者減少，違背這個原則就會被認為出現(xiàn)拐點而報錯，定標失敗。圖25 多點斜率檢查示意圖4. 測試參數(shù)設置：圖26 測試參數(shù)基本界面示意圖測試名稱（Test Name）：測試名稱登記注冊

42、后，就可以設置參數(shù)菜單。樣本形式（Type）：有血清、尿液等選擇（“Serum”,“Urine”, “Other-1”, and “Other-2”.）操作選項（Operation）：是否啟用這個測試項目。樣本相關參數(shù)：樣本體積（Sample Volume）：非自動稀釋樣本的范圍是1.6-25ul，如果要機內稀釋，范圍則是1.6-20ul，可以0.1ul步進；稀釋后樣本量（Dilution）：有0和10ul可供選擇；樣本預稀釋比例（Pre-DilutionRate）：有1、3、5、10、15、20、25、50、75、100可供選擇。選擇比例后，儀器自動按照此比例加注稀釋液。此功能會延遲報告結果

43、的速度，整機速度也會延遲一些，但可以大大減少高濃度樣本警報的比例。試劑相關參數(shù)：試劑量（Reagent Volume）：0，10-235ul之間，1ul步進。稀釋液（Dilution）：試劑稀釋液的量，有些濃縮試劑是可以稀釋的。每種試劑和稀釋液的量不能超過250ul；R1+S+R2的總量不能超過450ul，不能低于120ul。試劑吸光度范圍（Reagent OD Limit）：分為第一試劑吸光度高低限制和第二試劑吸光度高低限制，如果超過這個限制，會提示Y（y）和U（u），要么留空，要么放到最大：-2.0000和3.0000。公共試劑（common Reagent）：這是針對3試劑項目應用的，是

44、在菜單Parameters>Common Test Parameters>CommonReagents中設置的最多10個試劑。不過，這里的三試劑與AU自有的糖化血紅蛋白的三試劑概念不同。前者是采用三種試劑完成一個項目的測試，而后者是采用三種試劑完成兩個項目的測試，兩個項目的波長、方法甚至反應方向都不相同。反應方法相關參數(shù)：波長（Wave Length）：主波長Pri.和付波長Sec.可以選擇，主波長必選。方法（Methed）：就是反應方法，END、END1、Rate、Rate1、Fixed、Fixed1可供選擇。反應方向（Reaction Slope）：有+和-可供選擇，代表正負反

45、應方向；測量點（Measuring Point）：分為Measuring Point-1和Measuring Point-2，每組點都有開始點Fist和結束點Last輸入框。該點的選擇與反應方法有關。一定注意AU680的這兩組點與AU640的概念不同。AU640中，Measuring Point-1為主讀點，Measuring Point-2為子讀點。而AU680，常規(guī)使用時，Measuring Point-1是主讀點，在雙速率法和雙固定點法時是子讀點，Measuring Point-2則成為主讀點。舉例說明：Measuring Point的使用單試劑終點法：Measuring Point-1

46、 Fist（0），Last（Px）。Px是1-27點之間的讀點，根據(jù)需要設置，這也是一點終點法。雙試劑終點法，帶試劑樣本空白的：Measuring Point-1 Fist（Pz），Last（Px）。Px是11-27點之間的讀點，根據(jù)需要設置。Pz是1-10之間的讀點，根據(jù)需要設置，也就是R2加入之前的一個點，這也是兩點終點法。單速率法和固定點法：Measuring Point-1 Fist（Pw），Last（Px）。Px和Pw是11-27點之間的讀點，根據(jù)需要設置，Px>pw，都在R2之后。雙速率法和固定點法：Measuring Point-1Fist（Pz），Last（Pe）。Mea

47、suring Point-2Fist（Pw），Last（Px）。Px和Pw是11-27點之間的讀點，根據(jù)需要設置，Px>pw，也就是R2之后的一組讀點。Pz和Pe是1-10點之間的讀點，根據(jù)需要設置，Pe>Pz，也就是R2之前的一組讀點。反應監(jiān)測參數(shù)：線性范圍（Linrarity Limit），可以單獨使用，詳見前面的介紹；延遲時間（Lag Time Check），與吸光度范圍結合使用，詳見前面的介紹；吸光度范圍（OD Limit），與延遲時間結合使用，詳見前面的介紹；以上只能速率法使用。動態(tài)范圍（Dynamic Range），詳見前面的介紹；相關系數(shù)（Correlation Fa

48、ctor）：與動態(tài)范圍配合使用，利用直線方程Y=AX+B，進行斜率A和截距B的修正，修改A、B值后，已經(jīng)測定的結果數(shù)值實時改變。默認為1和0。在動態(tài)范圍檢查之后進行相關系數(shù)檢查。制造系數(shù)（Factor For Maker）:與動態(tài)范圍配合使用，利用直線方程Y=AX+B，進行斜率A和截距B的修正，在動態(tài)范圍之前進行制造系數(shù)檢查。對于某些項目的結果，質控值與靶值總是相差一個范圍的數(shù)值時，利用直線相關系數(shù)和制造系數(shù)校正很有必要。試劑穩(wěn)定期（Onboard Stability Period）：試劑放入試劑倉后的穩(wěn)定期，超過這個時間則報告試劑失效，提示更換試劑。圖27 LIH樣本檢查設置界面LIH樣本是

49、脂血（乳糜）Lipemia、黃疸Icterus和溶血Hemolysis的三個首字母縮寫，這三種樣本對結果的影響很大，因為樣本本身的顏色就很重。目前大多采取的方式是上機前人工判斷，將這三種樣本單獨稀釋后上機，或者將這三種樣本單獨修改參數(shù)，用樣本空白通道的方式進行校正，還有的是上機自動稀釋，還有的采用兩點終點法和雙速率雙固定點法來盡可能的消除干擾。AU自帶的LIH參數(shù)設置，是機器自動進行LIH樣本的定性判定，并在結果上給出提示。采用LIH分析，需要在公共試劑里添加一個專用的或者非專用的LIH試劑。AU自己有專門的LIH試劑，而非專用的試劑一般是生理鹽水或者水或者測試項目本身的試劑，這些都需要在公共

50、試劑界面里進行設置。在LIH參數(shù)設置界面里，LIHReagent要選擇專用試劑（Dedicated）或者非專用試劑（Not dedicated），設置好樣本量和稀釋量，以及第一試劑的量，然后就是設置一個+到五個+的吸光度值。LIH檢測是內定的參數(shù)，無法進行更改。大致原理是用專用鹽水（或者生理鹽水、去離子水、項目R1試劑）與樣本混合，分別讀取410（主波長）和480nm（付波長）波長下的P1（主讀點）和P0（子讀點）點吸光度值，570和600nm的P2和P0點吸光度值，660和800nm的P3和P0點吸光度值。也就是說有三個內置的MB定標的終點法項目，分別檢測LIH在P1、P2、P3點的數(shù)值。吸

51、光度計算方法是：脂血（乳糜）Lipemia檢測的吸光度值= P3(OD660-OD800)-P3（RBOD660-RBOD800)也就是P3點的主波長660nm吸光度值減去子波長800nm的吸光度值，然后減去同點的試劑空白相應波長的差。黃疸Icterus檢測的吸光度值=P1OD480-P2OD570)-（P2RBOD660-P3RBOD800)P1點的480nm吸光度值減去P2點的570nm吸光度值，再減去P2點的660nm和P3點800nm的試劑空白吸光度差值。溶血Hemolysis檢測的吸光度值=P1（OD410-OD480）-（P2RBOD660-P3RBOD800)P1點的410和48

52、0nm的差值減去減去P2點的660nm和P3點800nm的試劑空白吸光度差值。LIH檢查的P0-P3點設置是在Q鍵菜單里，可以根據(jù)需要修改，不過默認的已經(jīng)足夠了，一般都是樣本加入后的兩三個點。得到吸光度值數(shù)據(jù)后，還要經(jīng)過公式計算才能得到檢查值：LIH檢查值=反應吸光度值*（R1.V+S.V）/(300)*(18)/（S.V）計算出的LIH檢查值與LIH設置里的LIH判斷水平（LIH Judgment Level）進行比較，符合哪一個范圍就報告哪一個定性。AU的手冊上，除了說明專用試劑外，對于判斷水平的設置只用了一句聯(lián)系廠家服務人員帶過。但在AU640這樣的老版本手冊中，提供了計算方式和公式。設

53、置LIH檢查，這么多年我僅做過1次，當時是一家醫(yī)院兩臺同樣的機器，用生理鹽水做了10個正常人的標本，計算前幾個點的吸光度值，按照公式計算后，得到的檢查值乘以20%輸入到第一個+號那里，超過這個吸光度就報告一個+號，然后翻倍輸入其余幾個+號那里。后來幾天的測試結果出來后，院方竟然比較滿意，從一個+號到五個+號都有出現(xiàn)，重點復查了一個+號的標本，認為取值范圍比較準確。在AU640的說明書里，廠家給出了一個實例，但也聲明僅僅是例子，并不代表標準，各實驗室要自行確定數(shù)值或聯(lián)系客服。由于是定性檢查，而且占用反應杯很多，每個項目都開展的話，生化速度勢必會降低很多。而且并不多收費，所以很多醫(yī)院并不啟用這個功

54、能。圖28 ISE參數(shù)設置界面示意圖ISE參數(shù)設置：安裝ISE模塊后這個界面才有效。在這個界面里，可以選擇血清或尿液的K、Na、CL三個電解質項目是否開啟；樣本量和稀釋量的設置，中標液和高低標準液濃度的設置，以及動態(tài)范圍和相關系數(shù)的設置等。圖29 糖化血紅蛋白設置界面示意圖糖化血紅蛋白（HbA1c）：上圖是AU專用試劑的糖化血紅蛋白參數(shù)界面，如果第三方的試劑參數(shù)與此類似，照抄或稍微修改即可。根據(jù)這個參數(shù)做出來的數(shù)值有三個，其中T-Hb和HbA1c是直接測定出來的，HbA1c%則是(HbA1c/T-Hb)×91.5)+2.15計算出來的。采用這個參數(shù)，需要固定三個試劑通道，也

55、就是100、101和102，名稱分別是HbA1c%，T-Hb和HbA1c，這是不可更改的。從這張圖可以看出，T-Hb和HbA1c是兩套反應，有各自的波長、方法、試劑以及讀點。圖30 計算項目設置界面示意圖計算項目（Calculated Test）：這是設置根據(jù)任意幾個結果計算另一個結果的界面，給出根據(jù)哪幾個測試結果（Test Name）和常數(shù)（Constant）的值（Value），再經(jīng)過給出的公式（Formula）進行計算得出的結果。比如經(jīng)常用到的AST/ALT比值項目，就可以在這里進行設置，計算后在結果里多出一個AST/ALT項目和數(shù)值。圖31 范圍設置界面示意圖范圍（Range）

56、設置：這個功能目前很少使用了，因為都用LIS進行設置。在這里，可以設置正常范圍，根據(jù)年齡段和性別設定正常范圍，危急值設定，還有項目結果的單位。當然也可以設置是數(shù)值還是旗標，也就是定性還是定量。5.自動重測參數(shù)（Repeat Parameters）設置：自動重測功能十分有用，特別是針對特異樣本，比如濃度極高的樣本非常有效。但自動重測功能設置很有琢磨勁兒，不是簡單的超過高低值就重測這么簡單。首先要了解一下旗標5.1旗標（Flag）：下圖是AU680的旗標，以及旗標產(chǎn)生的范圍，不做翻譯，可自行翻譯或對照中文手冊。圖32 旗標Flag列表5.2 自動重測公共參數(shù)（Repeat Common）：圖33 自動重測公共參數(shù)示意圖在這個界面中，Data Flag數(shù)據(jù)旗標里有兩個選項（是否啟用旗標自動重測和是否將重測結果覆蓋原始結果），和三組選擇。第一組選擇是等量重測，20個旗標可供選擇，可以全選也可以部分選擇。當選擇的旗標出現(xiàn)時，自動等量樣本重測一次。這個意義不大，首先儀器要保證的是重復性，如此重測數(shù)值差別不大，其次是重復性不好的儀器，無論怎么