結(jié)腸癌組織中端粒酶檢測和血清CEA檢測臨床意義

1、結(jié)腸癌組織中端粒酶檢測和血清cea檢測臨床意義【摘要】結(jié)腸癌是消化道腫瘤中發(fā)病率較高的惡性 癌腫，早期發(fā)現(xiàn)、早期手術(shù)是延長生命、提高生活質(zhì)量的關(guān) 鍵。研究發(fā)現(xiàn)端粒酶(telomerase)活性的檢測對結(jié)腸癌早 期診斷是非常有價值，血清癌胚抗原(cea)檢測對結(jié)腸癌 早期診斷亦有輔助作用。本文通過對50例結(jié)腸癌組織中的 端粒酶活性及血清cea的檢測，探討它們在結(jié)腸癌診斷中的 價值?！局袌D分類號】r44【文獻標識碼】a【文章編號】1004-7484 (2013) 09-0756-021料和方法1. 1臨床資料1. 1. 1病例來源：治療組取自2010年1月-2012年10 月吉林大學(xué)第一醫(yī)院普外科

2、結(jié)腸癌根治術(shù)的病人50例，男 30例，女20例，平均年齡56. 5±16. 5歲。對照組為本院門 診鏡檢科行結(jié)腸鏡檢查的病人50例，診斷均為腸良性息肉， 年齡與治療組無顯著差異。標本均于- 8(rc液氮中保存?zhèn)涠?粒酶活性檢測。1. 1.2病理類型及分期：50例結(jié)腸癌患者中：腺癌22 例，粘液癌13例，鱗狀細胞癌15例；臨床分期：i期8例， 1124期例，iii期以上18例。50例門診腸鏡檢查的病人腸 息肉均為良性。1.2實驗方法端粒酶提取 取活檢組織約48mg在ep試管中用pbs緩 沖液去除污血，干凈后勻漿，加入最為合適量的冷pbs于 5-靜置片刻，取上清液180 ul ,離心后收

3、集細胞，立即 加入裂解液30pl ,將其混勻,冰浴約40 min ,接著在4 £ 以14500 r/ min離心9 min ,取上清液在- 20 °c保存。端粒酶活性檢測 以pcr - trap法檢測端粒酶活性，其 反應(yīng)混合液中含 18ul tris - hcl (ph 7.9), lmmol/ lmgc12 , 58 mmol/ l kc1 , 0. 01 % tween 18 , 1. 2 mmol/ legta , 48 mmol/ ldntp , 2 u g t3 基因 29 蛋白，esa 0. 12ug/ ml , a-29p- dctp 7.2 kbq , ta

4、q dna 聚合酶 3iu , ts引物0. 22 u g和蛋白提取物7ug ,高壓后去離 子水，至終體積30iil o使其混勻，上層以石蠟油蓋之，于 37°c保溫32 mino 88°c3 min滅活端粒酶，加cx引物 0. 009 u g行pcr擴增，擴增條件：92°c變性3min , 94 °c39 s , 48°c38 s , 69 °c48s ,共 32 循環(huán)；69°c延伸 6mino 取pcr產(chǎn)物12 pl ,10%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，以x線 膠片放射顯影，-79 2550 h顯示結(jié)果，出現(xiàn)7bp梯 形帶為陽性，以7ug hela細胞蛋白為陽性對照。1. 3血清ca19-9及cea檢測血清cea檢測：取5ml外周血送中心實驗室常規(guī)檢測， ce