細(xì)胞融合技術(shù)(中圖版好

1、細(xì)胞融合技術(shù)細(xì)胞融合技術(shù) 第三節(jié)第三節(jié) 一一.細(xì)胞融合技術(shù)細(xì)胞融合技術(shù) 概念：兩個(gè)或兩個(gè)以上的概念：兩個(gè)或兩個(gè)以上的同種同種或或異種異種細(xì)胞細(xì)胞 融合成為一個(gè)細(xì)胞的過程融合成為一個(gè)細(xì)胞的過程 閱讀課本第閱讀課本第30-3130-31頁內(nèi)容，回答問題：頁內(nèi)容，回答問題：1.1.什么叫細(xì)胞融合技術(shù)？什么叫細(xì)胞融合技術(shù)？ 2.2.常用的人工誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法有哪幾種？哪一種重常用的人工誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法有哪幾種？哪一種重復(fù)性強(qiáng)，對原生質(zhì)體傷害小，方法簡單，可控性強(qiáng)？復(fù)性強(qiáng)，對原生質(zhì)體傷害小，方法簡單，可控性強(qiáng)？用人工方法誘導(dǎo)細(xì)胞融合，并在一定條件下使融合細(xì)胞用人工方法誘導(dǎo)細(xì)胞融合，并在一定條件下使融

2、合細(xì)胞分化再生，形成新物種或新品種的過程。分化再生，形成新物種或新品種的過程。物理法：離心、振動(dòng)、物理法：離心、振動(dòng)、電刺激（傷害小，可控性強(qiáng)）電刺激（傷害小，可控性強(qiáng)）化學(xué)法：用聚乙二醇（）誘導(dǎo)化學(xué)法：用聚乙二醇（）誘導(dǎo)滅活的病毒：仙臺病毒、皰疹病毒等滅活的病毒：仙臺病毒、皰疹病毒等（適合動(dòng)物）（適合動(dòng)物）動(dòng)物細(xì)胞融合（細(xì)胞雜交）動(dòng)物細(xì)胞融合（細(xì)胞雜交）2個(gè)或多個(gè)動(dòng)個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程細(xì)胞細(xì)胞A細(xì)胞細(xì)胞B雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞滅活的病毒滅活的病毒物理法物理法化學(xué)法化學(xué)法仙臺病毒仙臺病毒皰疹病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒新城雞瘟病毒用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合

3、過程用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過程細(xì)胞核細(xì)胞核病毒顆粒病毒顆粒細(xì)胞核細(xì)胞核 細(xì)胞電融合儀？讀下面一段文字資料，思考以下問題：讀下面一段文字資料，思考以下問題：長期以來，為了獲得抗體，采用的是把某長期以來，為了獲得抗體，采用的是把某種抗原反復(fù)注射到動(dòng)物體內(nèi)，然后種抗原反復(fù)注射到動(dòng)物體內(nèi)，然后從動(dòng)物從動(dòng)物血清中分離出所需抗體的方法血清中分離出所需抗體的方法。用這種方。用這種方法獲得的抗體，不僅法獲得的抗體，不僅產(chǎn)量低產(chǎn)量低，而且抗體的，而且抗體的特異性差，純度低，反應(yīng)不夠靈敏特異性差，純度低，反應(yīng)不夠靈敏。人們。人們發(fā)現(xiàn)，在發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的內(nèi)的

4、B B細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的特異細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的特異性抗體性抗體，但是，但是每個(gè)每個(gè)B B細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個(gè)的單一抗體，必須用單個(gè)B B細(xì)胞進(jìn)行無性繁細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖，即克隆殖，即克隆。 1、請從以上文字資料中找出單克隆抗體的概念、請從以上文字資料中找出單克隆抗體的概念2、怎樣才能獲得單克隆抗體？、怎樣才能獲得單克隆抗體？提示提示1 1：僅用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？：僅用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？提示提示2 2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可

5、以無限增殖的？提示提示3 3：有什么方法能使：有什么方法能使B B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力和腫瘤細(xì)胞無限增殖能力同時(shí)具備呢？和腫瘤細(xì)胞無限增殖能力同時(shí)具備呢？用單個(gè)用單個(gè)B B細(xì)胞進(jìn)行克隆，得到的細(xì)胞群能夠分泌細(xì)胞進(jìn)行克隆，得到的細(xì)胞群能夠分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體，這種抗體一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體，這種抗體就叫做單克隆抗體。就叫做單克隆抗體。1 1、如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？、如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？問題討論問題討論提示：提示：2 2、瘤細(xì)胞和癌細(xì)胞有何區(qū)別？、瘤細(xì)胞和癌細(xì)胞有何區(qū)別？B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋

6、白骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合融合（只考慮兩兩融合）（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾種類型？融合細(xì)胞種類型？融合細(xì)胞幾種類型？幾種類型？骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞-骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞- B- B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞-骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞多種多種雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗(yàn)陽性專一抗體檢驗(yàn)陽性克隆上述雜交細(xì)胞克隆上述雜交細(xì)胞分開不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，分開不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，檢驗(yàn)陽性細(xì)胞檢驗(yàn)陽性細(xì)胞單克隆抗體單克隆抗體注射到小鼠體內(nèi)注射到小鼠體內(nèi)體外培

7、養(yǎng)體外培養(yǎng) 該細(xì)胞繼承該細(xì)胞繼承雙親細(xì)胞雙親細(xì)胞的遺傳特性，既能的遺傳特性，既能產(chǎn)生專產(chǎn)生專一抗體一抗體又能又能無限增殖無限增殖。雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？特異性強(qiáng)，靈敏度高特異性強(qiáng)，靈敏度高腹腔注射法腹腔注射法免疫小鼠免疫小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合融合骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體專一抗體檢驗(yàn)陽性檢驗(yàn)陽性專一抗體專一抗體檢驗(yàn)陽性檢驗(yàn)陽性注射到小鼠體內(nèi)注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)單克隆抗體單克隆抗體克隆雜交細(xì)胞克隆雜交細(xì)胞分開不同雜交細(xì)胞，克隆分開不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，檢驗(yàn)陽性細(xì)

8、胞專一抗體，檢驗(yàn)陽性細(xì)胞多種雜交細(xì)胞多種雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？本過程利用的那些技術(shù)？本過程利用的那些技術(shù)？動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是否注射抗原是否注射抗原（只考慮兩兩融合）培（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾種類型？養(yǎng)液中細(xì)胞有幾種類型？幾種融合細(xì)胞？幾種融合細(xì)胞？（二）、單克隆抗體制備過程（二）、單克隆抗體制備過程與傳統(tǒng)制備的抗體相與傳統(tǒng)制備的抗體相比具有什么特點(diǎn)？比具有什么特點(diǎn)？（三）單克隆抗體的應(yīng)用（三）單克隆抗體的應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡易、快速準(zhǔn)確、高效、簡易、快速（導(dǎo)向作用，導(dǎo)向作用，作為載體，作為載體，生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈=

9、單克隆抗體單克隆抗體+藥物，藥物，治療腫瘤）治療腫瘤）診斷乳腺癌單克隆抗體診斷乳腺癌單克隆抗體兩個(gè)過程兩個(gè)過程動(dòng)物細(xì)胞融合過程動(dòng)物細(xì)胞融合過程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程“一二三一二三”二次篩選二次篩選篩選雜交瘤細(xì)胞、能篩選雜交瘤細(xì)胞、能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞一個(gè)新細(xì)胞一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞三個(gè)優(yōu)勢三個(gè)優(yōu)勢產(chǎn)量大、特異性產(chǎn)量大、特異性強(qiáng)、靈敏度高強(qiáng)、靈敏度高(理化性質(zhì)單一理化性質(zhì)單一)的優(yōu)勢的優(yōu)勢動(dòng)植物細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這與它們動(dòng)植物細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這與它們雜交或融合過程有什么影響？雜交或融合過程有什么影響？問題討論問題討論動(dòng)物細(xì)胞無細(xì)胞壁，動(dòng)物

10、細(xì)胞融合過程中動(dòng)物細(xì)胞無細(xì)胞壁，動(dòng)物細(xì)胞融合過程中不須去除細(xì)胞壁和再生出細(xì)胞壁。不須去除細(xì)胞壁和再生出細(xì)胞壁。問題討論問題討論、動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本、動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？原理是否相同？相同，都是細(xì)胞膜的流動(dòng)性相同，都是細(xì)胞膜的流動(dòng)性問題討論問題討論突破了有性雜交方法的局限，突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)源雜交成為可能。使遠(yuǎn)源雜交成為可能。有何同？不同？有何同？不同？動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較細(xì)胞工程細(xì)胞工程植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)質(zhì)內(nèi)容實(shí)質(zhì)內(nèi)容改變遺傳物

11、質(zhì)、產(chǎn)生新的性狀，獲得細(xì)胞產(chǎn)品改變遺傳物質(zhì)、產(chǎn)生新的性狀，獲得細(xì)胞產(chǎn)品(使后代具有雙親使后代具有雙親的特性的特性)理論基礎(chǔ)理論基礎(chǔ)細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性;植物細(xì)胞全能性植物細(xì)胞全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性;細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖誘導(dǎo)手段誘導(dǎo)手段物理法：離心、振動(dòng)、電激物理法：離心、振動(dòng)、電激化學(xué)法：聚乙二醇化學(xué)法：聚乙二醇物理法：離心、振動(dòng)、電激物理法：離心、振動(dòng)、電激化學(xué)法：聚乙二醇化學(xué)法：聚乙二醇生物法：滅活的病毒生物法：滅活的病毒誘導(dǎo)過程誘導(dǎo)過程去細(xì)胞壁去細(xì)胞壁(纖維素酶、果膠酶纖維素酶、果膠酶)原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合(獲得雜種原生質(zhì)體獲得雜種原生質(zhì)體)植物細(xì)胞培養(yǎng)植物細(xì)胞培養(yǎng)(

12、獲得植株獲得植株)獲得分離的單個(gè)動(dòng)物細(xì)胞獲得分離的單個(gè)動(dòng)物細(xì)胞(胰蛋白酶處理胰蛋白酶處理)誘導(dǎo)融合誘導(dǎo)融合動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)(細(xì)胞產(chǎn)品細(xì)胞產(chǎn)品)應(yīng)用應(yīng)用獲得白菜獲得白菜甘藍(lán)等雜種植物甘藍(lán)等雜種植物主要用于單克隆抗體的制備主要用于單克隆抗體的制備(雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞) 1.下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗體實(shí)驗(yàn)方案抗體實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中、圖中B為為_過程，常用過程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承承_的遺傳特性，既能的遺傳特

13、性，既能_,又能又能_。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是_3、A是從小鼠的脾臟中取得是從小鼠的脾臟中取得_,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生該細(xì)胞能夠產(chǎn)生_5、C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括_培養(yǎng)和培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個(gè)階段，其培養(yǎng)兩個(gè)階段，其中中_代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。制備單克隆抗體制備單克隆抗體B細(xì)胞細(xì)胞抗體抗體細(xì)胞融合細(xì)胞融合滅活病毒滅活病毒雙親細(xì)胞雙親細(xì)胞分泌抗體分泌抗體無限增殖無限增殖原代原代傳代傳代50B骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群足夠數(shù)量的細(xì)胞群A體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔C體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)不能

14、，未對小鼠免疫處理不能，未對小鼠免疫處理2.人人CD20單克隆抗體是治療一些惡性腫瘤的特效藥物，目前主要是通過培養(yǎng)單克隆抗體是治療一些惡性腫瘤的特效藥物，目前主要是通過培養(yǎng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的方式生產(chǎn)。我國科學(xué)家已哺乳動(dòng)物細(xì)胞的方式生產(chǎn)。我國科學(xué)家已 培育出世界上第一頭轉(zhuǎn)入了培育出世界上第一頭轉(zhuǎn)入了CD20抗體基因的轉(zhuǎn)基因牛，可以從它產(chǎn)抗體基因的轉(zhuǎn)基因牛，可以從它產(chǎn) 的牛奶中直接提取的牛奶中直接提取CD20抗體。這項(xiàng)技術(shù)抗體。這項(xiàng)技術(shù)成熟后，有望使這一特效藥成熟后，有望使這一特效藥 的生產(chǎn)成本降至現(xiàn)在的的生產(chǎn)成本降至現(xiàn)在的1/10。請回答：。請回答： (1)單克隆抗體的制備過程需先將單克隆抗體的制備

15、過程需先將_和和 _融合，這一過程的誘導(dǎo)方法與植物體細(xì)胞雜融合，這一過程的誘導(dǎo)方法與植物體細(xì)胞雜交不同的是交不同的是_。 (2)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要在含動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要在含_混合氣體的培混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行，培養(yǎng)液中通常需加入養(yǎng)箱中進(jìn)行，培養(yǎng)液中通常需加入_等一些天等一些天然成分。然成分。 (3)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的核心是轉(zhuǎn)基因技術(shù)的核心是_。該過程。該過程用到的工具酶有用到的工具酶有 _和和_。經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞用滅活的病毒誘導(dǎo)用滅活的病毒誘導(dǎo)95%O2加加5%CO2血清、血漿血清、血漿基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的構(gòu)建限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶

16、限制酶)DNA連接酶連接酶3. 野生馬鈴薯品種的植株具有較強(qiáng)的抗病、抗蟲、抗鹽堿、抗野生馬鈴薯品種的植株具有較強(qiáng)的抗病、抗蟲、抗鹽堿、抗寒能力，但塊莖不能食用。俄、德、芬蘭專家共同做實(shí)驗(yàn)研究，寒能力，但塊莖不能食用。俄、德、芬蘭專家共同做實(shí)驗(yàn)研究， 用野生馬鈴薯與馬鈴薯的體細(xì)胞進(jìn)行雜交，培育出了生活能力強(qiáng)用野生馬鈴薯與馬鈴薯的體細(xì)胞進(jìn)行雜交，培育出了生活能力強(qiáng)的雜交系馬鈴薯。據(jù)圖分析回答問題：的雜交系馬鈴薯。據(jù)圖分析回答問題：(1)過程植物細(xì)胞原生質(zhì)體的分離需經(jīng)過酶解，其中過程植物細(xì)胞原生質(zhì)體的分離需經(jīng)過酶解，其中“酶解酶解”所用的酶應(yīng)該包括所用的酶應(yīng)該包括_。(2)過程可用聚乙二醇過程可用聚

17、乙二醇(PEG)，其目的是，其目的是_。纖維素酶、果膠酶纖維素酶、果膠酶誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合(3)請用文字和箭頭表示出技術(shù)過程的實(shí)驗(yàn)流程：請用文字和箭頭表示出技術(shù)過程的實(shí)驗(yàn)流程：_。由此過程可以看出植物細(xì)胞有形成完整個(gè)體的可能性，這是由此過程可以看出植物細(xì)胞有形成完整個(gè)體的可能性，這是_的表現(xiàn)。的表現(xiàn)。(4)在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間后，原生質(zhì)體會(huì)再生出細(xì)胞壁。可在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間后，原生質(zhì)體會(huì)再生出細(xì)胞壁?？梢匀樱ㄟ^以取樣，通過_實(shí)驗(yàn)來鑒別細(xì)胞實(shí)驗(yàn)來鑒別細(xì)胞壁是否已經(jīng)再生。壁是否已經(jīng)再生。(5)請說明運(yùn)用植物體細(xì)胞雜交法的最大好處：請說明運(yùn)用植物體細(xì)胞雜交法的最大好處：_。融

18、合細(xì)胞融合細(xì)胞 愈傷組織愈傷組織 幼苗幼苗植物細(xì)胞具有全能性植物細(xì)胞具有全能性植物細(xì)胞的質(zhì)壁分離與復(fù)原植物細(xì)胞的質(zhì)壁分離與復(fù)原可以克服不同生物遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙可以克服不同生物遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙4下圖為細(xì)胞融合的簡略過程，請據(jù)圖回答：下圖為細(xì)胞融合的簡略過程，請據(jù)圖回答：(1)若若A、B是植物細(xì)胞，在細(xì)胞融合之前已用是植物細(xì)胞，在細(xì)胞融合之前已用_處理，除去處理，除去_；A、B到細(xì)胞到細(xì)胞C的過程中，常用的物理方法是的過程中，常用的物理方法是_。融。融合完成的標(biāo)志是合完成的標(biāo)志是_.(2)若若A、B是植物細(xì)胞，則形成的是植物細(xì)胞，則形成的D細(xì)胞還要應(yīng)用細(xì)胞還要應(yīng)用_技術(shù)把技術(shù)把D培養(yǎng)培養(yǎng)成

19、植株。成植株。(3)若若A、B是動(dòng)物細(xì)胞，一般取自是動(dòng)物細(xì)胞，一般取自_,然后然后用用_使其分散開來，使其分散開來，A、B到到C的過程中，常用的不同于植物細(xì)胞的的過程中，常用的不同于植物細(xì)胞的手段是手段是_，所形成的，所形成的D稱為稱為_(4)若該過程是制備單克隆抗體，若該過程是制備單克隆抗體，A為小鼠為小鼠B淋巴細(xì)胞，那么，在獲得此細(xì)胞之前，淋巴細(xì)胞，那么，在獲得此細(xì)胞之前，小鼠已被注射了小鼠已被注射了_，注射后小鼠身體產(chǎn)生了相應(yīng)的，注射后小鼠身體產(chǎn)生了相應(yīng)的_，生成了，生成了_。圖中。圖中B為為_。(5)若該過程仍是制備單克隆抗體，在若該過程仍是制備單克隆抗體，在A、B到到C的過程中，所形

20、成的的過程中，所形成的C有有_種，用來培養(yǎng)的種，用來培養(yǎng)的D的細(xì)胞應(yīng)該是的細(xì)胞應(yīng)該是_。從中選擇出它的方法是。從中選擇出它的方法是_培養(yǎng)，獲得培養(yǎng)，獲得D后，常用的培養(yǎng)方法是后，常用的培養(yǎng)方法是_和和_。纖維素酶和果膠酶纖維素酶和果膠酶細(xì)胞壁細(xì)胞壁電刺激、振動(dòng)、離心電刺激、振動(dòng)、離心 產(chǎn)生細(xì)胞壁產(chǎn)生細(xì)胞壁植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織胰蛋白酶胰蛋白酶滅活的病毒誘導(dǎo)滅活的病毒誘導(dǎo)雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞效應(yīng)效應(yīng)B細(xì)胞細(xì)胞 抗原抗原抗體和記憶細(xì)胞抗體和記憶細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞3雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞用特定的選擇培養(yǎng)基用特定的選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中培養(yǎng)培養(yǎng)

21、基中培養(yǎng) 小鼠腹腔內(nèi)增殖小鼠腹腔內(nèi)增殖(1)AB(2)CD5.（09山東）人類在預(yù)防與診療傳染性疾病中，經(jīng)常使用疫苗和山東）人類在預(yù)防與診療傳染性疾病中，經(jīng)常使用疫苗和抗體。已知某傳染性疾病病原體為抗體。已知某傳染性疾病病原體為RNA病毒，該病毒表面病毒，該病毒表面A蛋蛋白為主要抗原，其疫苗生產(chǎn)和抗體制備的流程之一如下圖：白為主要抗原，其疫苗生產(chǎn)和抗體制備的流程之一如下圖：請回答：請回答：（1）過程）過程代表的是代表的是_。（2）過程）過程構(gòu)建構(gòu)建A基因表過載體時(shí)，必須使用基因表過載體時(shí)，必須使用_和和 _兩種工具酶。兩種工具酶。（3）過程）過程采用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)是采用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)是_，獲得的，獲得

22、的X是是_。（4）對健康人進(jìn)行該傳染病免疫預(yù)防時(shí)，可選用圖中基因工程）對健康人進(jìn)行該傳染病免疫預(yù)防時(shí)，可選用圖中基因工程生產(chǎn)的生產(chǎn)的 _ 所制備的疫苗。對該傳染病疑似患者確診時(shí)，從所制備的疫苗。對該傳染病疑似患者確診時(shí)，從疑似患者體內(nèi)分離病毒，與已知病毒進(jìn)行疑似患者體內(nèi)分離病毒，與已知病毒進(jìn)行_比較；比較；或用圖中的或用圖中的_進(jìn)行特異性結(jié)合檢測。進(jìn)行特異性結(jié)合檢測。逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄限制酶(限制性內(nèi)切酶） DNA連接酶細(xì)胞融合雜交瘤細(xì)胞 A蛋白 核酸（基因）序列抗A蛋白的單克隆抗體6.(09年寧夏年寧夏)回答下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的問題：回答下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的問題：（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中。當(dāng)貼

23、壁細(xì)胞分裂生長到細(xì)胞表面）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中。當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到細(xì)胞表面_時(shí)，時(shí)，細(xì)胞會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞細(xì)胞會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞_。此時(shí)，瓶壁上形成的。此時(shí)，瓶壁上形成的細(xì)胞層數(shù)是細(xì)胞層數(shù)是_。要使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，。要使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，可用的酶是可用的酶是_。（2）隨著細(xì)胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細(xì)胞分裂停止，進(jìn)而出現(xiàn)）隨著細(xì)胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細(xì)胞分裂停止，進(jìn)而出現(xiàn)_現(xiàn)象；但極少數(shù)細(xì)胞可以連續(xù)增殖，其中有些細(xì)胞會(huì)因遺傳物現(xiàn)象；但極少數(shù)細(xì)胞可以連續(xù)增殖，其中有些細(xì)胞會(huì)因遺傳物質(zhì)發(fā)生改變而變成質(zhì)發(fā)生改變而變成_

24、細(xì)胞，該種細(xì)胞的黏著性細(xì)胞，該種細(xì)胞的黏著性_，細(xì)胞膜表面蛋，細(xì)胞膜表面蛋白質(zhì)（糖蛋白）的量白質(zhì)（糖蛋白）的量_。（3）現(xiàn)用某種大分子染料，對細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，觀察到死細(xì)胞被染色，而活）現(xiàn)用某種大分子染料，對細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，觀察到死細(xì)胞被染色，而活細(xì)胞不染色，原因是細(xì)胞不染色，原因是_（4）檢查某種毒物是否能改變細(xì)胞染色體的數(shù)目，最好選用細(xì)胞分裂到）檢查某種毒物是否能改變細(xì)胞染色體的數(shù)目，最好選用細(xì)胞分裂到_期的細(xì)胞用顯微鏡進(jìn)行觀察。期的細(xì)胞用顯微鏡進(jìn)行觀察。（5）在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，通常在）在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，通常在_條件下保存細(xì)胞。因?yàn)闂l件下保存細(xì)胞。因?yàn)樵谶@種條件下，細(xì)胞中在這種條件下，細(xì)胞中

25、_的活性降低，細(xì)胞的活性降低，細(xì)胞_的速率降低。的速率降低。（6）給患者移植經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)形成的皮膚組織后，發(fā)生了排斥現(xiàn)象，這是因?yàn)椋┙o患者移植經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)形成的皮膚組織后，發(fā)生了排斥現(xiàn)象，這是因?yàn)闄C(jī)體把移植的皮膚組織當(dāng)作機(jī)體把移植的皮膚組織當(dāng)作_進(jìn)行攻擊。進(jìn)行攻擊。相互接觸相互接觸單層（一層）單層（一層）接觸抑制接觸抑制胰蛋白酶胰蛋白酶衰老甚至死亡衰老甚至死亡不死性不死性降低降低減少減少 由于活細(xì)胞的膜具有選擇透過性，大分子染料不能由于活細(xì)胞的膜具有選擇透過性，大分子染料不能進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)，故活細(xì)胞不能著色進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)，故活細(xì)胞不能著色中中冷凍（超低溫、液氮）冷凍（超低溫、液氮）新陳代謝新陳代謝酶酶

26、抗原抗原7.（10福建卷）紅細(xì)胞生成素福建卷）紅細(xì)胞生成素(EPO)是體內(nèi)促進(jìn)是體內(nèi)促進(jìn)紅細(xì)胞生成的一種糖蛋白，可用于治療腎衰性貧紅細(xì)胞生成的一種糖蛋白，可用于治療腎衰性貧血等疾病。由于天然血等疾病。由于天然EPO來源極為有限，目前臨來源極為有限，目前臨床上使用的紅細(xì)胞生成素主要來自于基因工程技床上使用的紅細(xì)胞生成素主要來自于基因工程技術(shù)生產(chǎn)的重組人紅細(xì)胞生成素術(shù)生產(chǎn)的重組人紅細(xì)胞生成素(rhEPO)，其簡要，其簡要生產(chǎn)流程如右圖。請回答：生產(chǎn)流程如右圖。請回答：(1)圖中圖中所指的是所指的是_技術(shù)。技術(shù)。(2)圖中圖中所指的物質(zhì)是所指的物質(zhì)是_，所指的物質(zhì)是所指的物質(zhì)是_。(3)培養(yǎng)重組培養(yǎng)

27、重組CHO細(xì)胞時(shí)，為便于清除代謝產(chǎn)物，細(xì)胞時(shí)，為便于清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害，應(yīng)定期防止細(xì)胞產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害，應(yīng)定期更換更換_。(4)檢測檢測rhEPO的體外活性需用抗的體外活性需用抗rhEPO的單克的單克隆抗體。分泌該單克隆抗體的隆抗體。分泌該單克隆抗體的_細(xì)胞，可細(xì)胞，可由由rhEPO免疫過的小鼠免疫過的小鼠B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合而成。細(xì)胞融合而成。PCR PCR mRNAmRNArhEPOrhEPO培養(yǎng)液培養(yǎng)液雜交瘤雜交瘤第一節(jié)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)第一節(jié)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 知識能力化知識能力化1為了使用于培養(yǎng)的動(dòng)物組織細(xì)胞分散開以便配制成一

28、定濃度為了使用于培養(yǎng)的動(dòng)物組織細(xì)胞分散開以便配制成一定濃度的細(xì)胞懸浮液，選取來的動(dòng)物組織應(yīng)選用下列哪種物質(zhì)處理的細(xì)胞懸浮液，選取來的動(dòng)物組織應(yīng)選用下列哪種物質(zhì)處理A.胃蛋白酶胃蛋白酶 B.胰蛋白酶胰蛋白酶 C.鹽酸鹽酸 D.胰脂肪酶胰脂肪酶2下列與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)有關(guān)的表述中，不正確的是下列與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)有關(guān)的表述中，不正確的是 （ ）A培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等清等B原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右便會(huì)出現(xiàn)生長停滯代左右便會(huì)出現(xiàn)生長停滯C動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一般能夠傳到動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一般能夠傳到4050

29、代，但其遺傳物質(zhì)發(fā)生代，但其遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變了改變D動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)可用于檢測有毒物質(zhì)和獲得大量自身健康細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)可用于檢測有毒物質(zhì)和獲得大量自身健康細(xì)胞3動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)胞來自于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)胞來自于（ ）A任何個(gè)體的細(xì)胞任何個(gè)體的細(xì)胞 B只能取自幼齡動(dòng)物的組織細(xì)胞只能取自幼齡動(dòng)物的組織細(xì)胞C只能只能取自動(dòng)物胚胎細(xì)胞取自動(dòng)物胚胎細(xì)胞 D胚胎或幼齡動(dòng)物的器官和組織細(xì)胞胚胎或幼齡動(dòng)物的器官和組織細(xì)胞BCD4動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段中，最基礎(chǔ)的是動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段中，最基礎(chǔ)的是 （ ） A.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) B.動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合 C.單克隆杭體單克隆杭體 D.胚胎、

30、核移植胚胎、核移植5在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中有部分細(xì)胞可能在培養(yǎng)條件下無在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中有部分細(xì)胞可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱之為限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱之為: A原代培養(yǎng)原代培養(yǎng) B傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng) C細(xì)胞株細(xì)胞株 D細(xì)胞系細(xì)胞系6衛(wèi)生部衛(wèi)生部2005年年4月月6日發(fā)布了蘇丹紅危險(xiǎn)性報(bào)告評日發(fā)布了蘇丹紅危險(xiǎn)性報(bào)告評估，報(bào)道中提到蘇丹紅一號是一種人工色素估，報(bào)道中提到蘇丹紅一號是一種人工色素(工業(yè)染工業(yè)染料料)，它在人體內(nèi)代謝生成相應(yīng)的胺類?？蒲腥藛T欲采用，它在人體內(nèi)代謝生成相應(yīng)的胺類?？蒲腥藛T欲采用一定的技術(shù)手段探究蘇丹紅是否對人體有危害，你認(rèn)為一定的技術(shù)手段探究蘇丹紅是否

31、對人體有危害，你認(rèn)為采取下列哪種技術(shù)手段最合適：采取下列哪種技術(shù)手段最合適： A動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合 B動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) C胚胎移植胚胎移植 D核移植核移植ADB7下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，不正確的是下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，不正確的是A.用于培養(yǎng)的細(xì)胞大都取自胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或用于培養(yǎng)的細(xì)胞大都取自胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織組織B.將所取的組織先用胰蛋白酶等進(jìn)行處理使其分散成將所取的組織先用胰蛋白酶等進(jìn)行處理使其分散成單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞C.在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細(xì)胞從瓶壁上脫離，在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細(xì)胞從瓶壁上脫離，制成懸浮液制成懸浮液D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能傳動(dòng)

32、物細(xì)胞培養(yǎng)只能傳50代左右，所培養(yǎng)的細(xì)胞就會(huì)代左右，所培養(yǎng)的細(xì)胞就會(huì)衰老死亡衰老死亡8用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織，其主要原因是這樣生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞的組織細(xì)胞 （ ）A.容易產(chǎn)生各種變異容易產(chǎn)生各種變異 B具有更強(qiáng)的全能性具有更強(qiáng)的全能性C.取材十分方便取材十分方便 D分裂增殖的能力強(qiáng)分裂增殖的能力強(qiáng)DD第二節(jié)植物組織培養(yǎng)第二節(jié)植物組織培養(yǎng) 知識能力化知識能力化1 1用高度分化的植物細(xì)胞、組織和器官進(jìn)行組織培養(yǎng)可以形成用高度分化的植物細(xì)胞、組織和器官進(jìn)行組織培養(yǎng)可以形

33、成愈傷組織，下列敘述錯(cuò)誤的是（愈傷組織，下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）A.A.該愈傷組織是細(xì)胞經(jīng)過脫分化和分裂形成的該愈傷組織是細(xì)胞經(jīng)過脫分化和分裂形成的B.B.該愈傷組織的細(xì)胞沒有全能性該愈傷組織的細(xì)胞沒有全能性C.C.該愈傷組織是由排列疏松的薄壁細(xì)胞組成該愈傷組織是由排列疏松的薄壁細(xì)胞組成D.D.該愈傷組織可以形成具有生根發(fā)芽能力的胚狀結(jié)構(gòu)該愈傷組織可以形成具有生根發(fā)芽能力的胚狀結(jié)構(gòu)2.2.要將胡蘿卜韌皮部細(xì)胞培養(yǎng)成完整植株，不需要（要將胡蘿卜韌皮部細(xì)胞培養(yǎng)成完整植株，不需要（ ）A A具有完整細(xì)胞核的細(xì)胞具有完整細(xì)胞核的細(xì)胞 B B離體狀態(tài)離體狀態(tài)C C導(dǎo)入外源基因?qū)胪庠椿?D D一定的營養(yǎng)

34、物質(zhì)和激素一定的營養(yǎng)物質(zhì)和激素3.3.甘薯種植多年后易積累病毒而導(dǎo)致品種退化。目前生產(chǎn)上采用甘薯種植多年后易積累病毒而導(dǎo)致品種退化。目前生產(chǎn)上采用莖尖分生組織離體培養(yǎng)的方法快速繁殖脫毒的種苗，以保證該品莖尖分生組織離體培養(yǎng)的方法快速繁殖脫毒的種苗，以保證該品種的品質(zhì)和產(chǎn)量水平。這種通過分生組織離體培養(yǎng)獲得種苗的過種的品質(zhì)和產(chǎn)量水平。這種通過分生組織離體培養(yǎng)獲得種苗的過程不涉及細(xì)胞的（程不涉及細(xì)胞的（ ）A A有絲分裂有絲分裂 B B分化分化 C C減數(shù)分裂減數(shù)分裂 D D全能性全能性BCC4.4.下列關(guān)于植物組織培養(yǎng)的敘述中，錯(cuò)誤的是（下列關(guān)于植物組織培養(yǎng)的敘述中，錯(cuò)誤的是（ ）A A培養(yǎng)基中

35、添加蔗糖的目的是提供營養(yǎng)和調(diào)節(jié)滲透壓培養(yǎng)基中添加蔗糖的目的是提供營養(yǎng)和調(diào)節(jié)滲透壓B B培養(yǎng)基中的生長素和細(xì)胞分裂素影響愈傷組織的生長和分化培養(yǎng)基中的生長素和細(xì)胞分裂素影響愈傷組織的生長和分化C C離體器官或組織的細(xì)胞都必須通過脫分化才能形成愈傷組織離體器官或組織的細(xì)胞都必須通過脫分化才能形成愈傷組織D D同一株綠色開花植物不同部位的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)獲得的愈傷組織基同一株綠色開花植物不同部位的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)獲得的愈傷組織基因相同因相同5.5.將基因型為將基因型為AaBbAaBb的水稻的水稻( (具有具有2424條染色體條染色體) )的葉肉細(xì)胞通過無菌的葉肉細(xì)胞通過無菌操作接入含有全部營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基的試管

36、中，在一定條件下形操作接入含有全部營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基的試管中，在一定條件下形成試管幼苗，其過程如下圖所示：成試管幼苗，其過程如下圖所示： (1)(1)圖中的圖中的11叫叫_，圖中的，圖中的2_2_。(2)(2)在在33過程最重要的兩種植物激素是過程最重要的兩種植物激素是_、_。(3)(3)如果如果44是無病毒植株，則水稻的細(xì)胞應(yīng)選用是無病毒植株，則水稻的細(xì)胞應(yīng)選用_或或 _細(xì)胞。其培養(yǎng)成的植株的基因型為細(xì)胞。其培養(yǎng)成的植株的基因型為_。D脫分化脫分化再分化再分化生長素生長素細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂素根尖根尖莖尖莖尖AaBbAaBb (4)(4)如果某種細(xì)胞選用的是水稻花粉細(xì)胞，則如果某種細(xì)胞選用的是水

37、稻花粉細(xì)胞，則44稱為稱為_?；蛐涂赡苁恰；蛐涂赡苁莀。植株。植株特點(diǎn)為特點(diǎn)為_，需用，需用_處理，處理，使其恢復(fù)正常體細(xì)胞染色體數(shù)才可育，其基因型為使其恢復(fù)正常體細(xì)胞染色體數(shù)才可育，其基因型為_。(5)(5)如果此過程是為了生產(chǎn)水稻的人工種子，則人工種如果此過程是為了生產(chǎn)水稻的人工種子，則人工種皮包裹的是皮包裹的是 _ _。單倍體植物單倍體植物ABAB、AbAb、aBaB、abab（矮小瘦弱）（矮小瘦弱）高度不育高度不育秋水仙素秋水仙素AABBAABB、AAbbAAbb、aaBBaaBB、aabbaabb3 3 胚狀體胚狀體 單：一個(gè)雜交瘤細(xì)胞 克?。涸摷?xì)胞增殖分化為相同的細(xì)胞群 抗體：該細(xì)胞群產(chǎn)生的抗體。 特點(diǎn)：特異性強(qiáng) 靈敏度高單克隆抗體制備單克隆抗體制備應(yīng)用了哪些技術(shù)手段雜交瘤技術(shù)的基本原理雜交瘤技術(shù)的基本原理主要用于制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體獲得雜種植株獲得雜種植株物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒物理（離心、振物理（離心、振蕩、電激）蕩、電激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）使細(xì)胞分散后誘使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性用途用途誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法步驟步驟融合的原理融合的原理動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合植