動物實驗研究方法 14.9.16

1、動物實驗研究方法及其在中醫(yī)研究中的應用吳廣文吳廣文中西醫(yī)結合研究院中西醫(yī)結合研究院1.臨床試驗？臨床試驗？2.動物實驗？動物實驗？ 動物實驗是根據(jù)研究目的，恰當?shù)剡x用動物實驗是根據(jù)研究目的，恰當?shù)剡x用標準的并符合實驗要求的實驗動物，在設計標準的并符合實驗要求的實驗動物，在設計的條件下，進行各種科學實驗，觀察、記錄的條件下，進行各種科學實驗，觀察、記錄動物的反應過程與反應結果，以探討或檢驗動物的反應過程與反應結果，以探討或檢驗未知因素對生命活動的作用與影響的醫(yī)學實未知因素對生命活動的作用與影響的醫(yī)學實驗。驗。 1 1嚴格控制實驗條件嚴格控制實驗條件2便于控制處理因素便于控制處理因素4實驗動物可有

2、目的培育實驗動物可有目的培育5實驗動物飼養(yǎng)簡便實驗動物飼養(yǎng)簡便動物實驗的特點動物實驗的特點3最大限度獲取實驗資料最大限度獲取實驗資料 作為作為“人的替身人的替身”承受各種科學研究承受各種科學研究1 1 可以更深入地揭示微觀變化可以更深入地揭示微觀變化2 2 相對減少研究周期相對減少研究周期 3 3動物實驗的意義動物實驗的意義美國心理學會動物研究指導總則美國心理學會動物研究指導總則“動物行為研究動物行為研究者應努力促進對基本行為原理的理解和者應努力促進對基本行為原理的理解和/ /或為提高人或為提高人類的健康和幸福作貢獻。為達到這些目標，研究者要類的健康和幸福作貢獻。為達到這些目標，研究者要保證動

3、物的權利和人道地對待它們。雖然有法律和規(guī)保證動物的權利和人道地對待它們。雖然有法律和規(guī)定，但一只動物的即時保護則有賴于科學家的個人良定，但一只動物的即時保護則有賴于科學家的個人良知。知。”美國心理學會還提供了學生研究者的指導原則。美國心理學會還提供了學生研究者的指導原則?？傮w上，總體上，“當采用動物被試時，應精心照料并盡可能當采用動物被試時，應精心照料并盡可能減少它們的痛苦和不適。減少它們的痛苦和不適。” 參考文獻：參考文獻：B.H.B.H.坎特威茨等坎特威茨等. . 實驗心理學。實驗心理學。 中醫(yī)研究能不能采用實驗動物？中醫(yī)研究能不能采用實驗動物？突出的問題是四診困難、情志難以把握，突出的問

4、題是四診困難、情志難以把握，大家有什么看法大家有什么看法?有人懷疑心理學研究的價值，責問政府何以資助小白鼠走迷津。這是他們對于心理學研究的期望不恰當，而不在于心理學研究的本身。有人通過幾年的研究發(fā)現(xiàn)，盡管不同地區(qū)山雀的“方言”不同，但在同一地區(qū)生活的山雀所發(fā)出的入侵警報模式確可以穩(wěn)定地延續(xù)幾代。參考：B.H.坎特威茨等. 實驗心理學,24，35。動物實驗是實驗中醫(yī)學的重要組成部分和重要動物實驗是實驗中醫(yī)學的重要組成部分和重要的研究方法和手段，無論對中醫(yī)學數(shù)千年來所積累的研究方法和手段，無論對中醫(yī)學數(shù)千年來所積累的疾病認識、防治豐富經(jīng)驗進行驗證和總結，對歷的疾病認識、防治豐富經(jīng)驗進行驗證和總結，

5、對歷代醫(yī)家理法方藥的研究，對中醫(yī)學理論的研究和發(fā)代醫(yī)家理法方藥的研究，對中醫(yī)學理論的研究和發(fā)展，還是對當前中醫(yī)藥學各個學科的教學、科研，展，還是對當前中醫(yī)藥學各個學科的教學、科研，對新的治療方法（包括應用藥物和非藥物療法）的對新的治療方法（包括應用藥物和非藥物療法）的發(fā)展，乃至對新的中醫(yī)藥學理論體系的創(chuàng)立，等等，發(fā)展，乃至對新的中醫(yī)藥學理論體系的創(chuàng)立，等等，都是不可缺少的。都是不可缺少的。動物實驗在中醫(yī)藥發(fā)展中的作用動物實驗在中醫(yī)藥發(fā)展中的作用1 1驗證中醫(yī)藥療效驗證中醫(yī)藥療效2展示和檢驗傳統(tǒng)理論展示和檢驗傳統(tǒng)理論4精確診察手段精確診察手段3擴大認識范圍擴大認識范圍一、實驗動物的選擇一、實驗動

6、物的選擇實驗動物的定義實驗動物的定義：實驗動物是指以實驗研究實驗動物是指以實驗研究為目的，在一定的環(huán)境條件控制下，經(jīng)過培養(yǎng)馴為目的，在一定的環(huán)境條件控制下，經(jīng)過培養(yǎng)馴化，具有明確的生物學特性和清楚的遺傳和微生化，具有明確的生物學特性和清楚的遺傳和微生物背景的動物物背景的動物。圖1 小鼠 圖2 裸小鼠 圖3 裸大鼠 圖4 大鼠 圖5 白兔 圖6 兔的飼養(yǎng)圖7 比格犬及其飼養(yǎng) 圖8 馬及其飼養(yǎng)常用實驗動物實驗動物種類繁多，在進行實驗時，應根據(jù)課題實驗動物種類繁多，在進行實驗時，應根據(jù)課題的需要和動物的特性加以選擇，使研究目的與動物的的需要和動物的特性加以選擇，使研究目的與動物的種屬、特性和個體差異

7、相吻合，才能保證研究工作的種屬、特性和個體差異相吻合，才能保證研究工作的順利進行。順利進行。不同的科學實驗要求選擇和開發(fā)最適宜的實驗動不同的科學實驗要求選擇和開發(fā)最適宜的實驗動物。正確選擇實驗動物，實驗設計周密詳盡，可以節(jié)物。正確選擇實驗動物，實驗設計周密詳盡，可以節(jié)省人力、動物和時間，以最小的代價，最大限度地獲省人力、動物和時間，以最小的代價，最大限度地獲得可靠的研究結果。否則，不僅會造成不必要的浪費，得可靠的研究結果。否則，不僅會造成不必要的浪費，嚴重的還會影響到實驗結果的判斷，甚至導致實驗的嚴重的還會影響到實驗結果的判斷，甚至導致實驗的失敗。因此，選擇和開發(fā)實驗動物是動物實驗的首要失敗。

8、因此，選擇和開發(fā)實驗動物是動物實驗的首要環(huán)節(jié)，至關重要，應予以足夠的重視。環(huán)節(jié)，至關重要，應予以足夠的重視。三個基本要求：三個基本要求：實驗動物通常應該具備個體間實驗動物通常應該具備個體間的均一性、遺傳性能的穩(wěn)定性和比較容易獲得這三的均一性、遺傳性能的穩(wěn)定性和比較容易獲得這三個基本要求。個基本要求。具體要求如下：具體要求如下：1 1盡量選用機能、代謝、結構及其它方面機盡量選用機能、代謝、結構及其它方面機能與人相似的實驗動物能與人相似的實驗動物一般來說，動物的進化階段愈高，機能、代謝、一般來說，動物的進化階段愈高，機能、代謝、結構愈復雜，也就愈接近人類。結構愈復雜，也就愈接近人類。2 2選用標準

9、化的實驗動物選用標準化的實驗動物標準化實驗動物指遺傳背景明確、飼養(yǎng)環(huán)境與標準化實驗動物指遺傳背景明確、飼養(yǎng)環(huán)境與動物體內(nèi)的微生物得到控制、符合一定標準的實驗動物體內(nèi)的微生物得到控制、符合一定標準的實驗動物。動物。 只有選用標準化實驗動物，而且實驗過程也只有選用標準化實驗動物，而且實驗過程也在標準環(huán)境中飼養(yǎng)的動物，在實驗中才能排除因動在標準環(huán)境中飼養(yǎng)的動物，在實驗中才能排除因動物雜交、遺傳上的不均質(zhì)及環(huán)境條件的變化，所引物雜交、遺傳上的不均質(zhì)及環(huán)境條件的變化，所引起的個體反應不一致。起的個體反應不一致。 排除因動物攜帶細菌、病毒、寄生蟲和潛在排除因動物攜帶細菌、病毒、寄生蟲和潛在疾病的影響，才能

10、便于分析實驗結果，減少實驗誤疾病的影響，才能便于分析實驗結果，減少實驗誤差，提高科學性，準確性，把所獲得的結果與同類差，提高科學性，準確性，把所獲得的結果與同類研究進行比較、交流，并得到承認。研究進行比較、交流，并得到承認。 在實驗研究中應避免使用隨意交配繁殖的在實驗研究中應避免使用隨意交配繁殖的動物，而應根據(jù)研究目的選擇用遺傳學控制的方動物，而應根據(jù)研究目的選擇用遺傳學控制的方法培育出來的近交系、突變系、系統(tǒng)雜交或封閉法培育出來的近交系、突變系、系統(tǒng)雜交或封閉群動物。群動物。 同時應對實驗動物進行微生物控制，發(fā)展同時應對實驗動物進行微生物控制，發(fā)展使用無菌動物、已知菌動物或無特定病原體（使用

11、無菌動物、已知菌動物或無特定病原體（SPFSPF）動物。動物。 實驗動物的分類實驗動物的分類 按遺傳控制分類：按遺傳控制分類： （1 1）近交系，即純系動物：其動物遺傳的均質(zhì)）近交系，即純系動物：其動物遺傳的均質(zhì)性保證了實驗反應的穩(wěn)定性。性保證了實驗反應的穩(wěn)定性。 （2 2）封閉群動物：能較好地代表自然群體的遺）封閉群動物：能較好地代表自然群體的遺傳特性。傳特性。 （3 3）雜交一代動物（）雜交一代動物（F1F1）：在一定程度上，兼）：在一定程度上，兼有近交系和封閉群的特點。有近交系和封閉群的特點。 （4 4）突變動物：往往具有鮮明的人類疾病模型）突變動物：往往具有鮮明的人類疾病模型特征。特征

12、。 按微生物控制的程度，我國將實驗動物按微生物控制的程度，我國將實驗動物分為四個等級：分為四個等級： （1 1）普通級動物（）普通級動物（CVCV動物）動物） ：一般為教學：一般為教學示范用。示范用。 （2 2）清潔級動物（）清潔級動物（CLCL動物）動物） ：國內(nèi)科研工作：國內(nèi)科研工作要求的標準動物，適合于大多數(shù)科研課題。要求的標準動物，適合于大多數(shù)科研課題。 （3 3）無特定病原體動物（）無特定病原體動物（SPFSPF動物）：國際標動物）：國際標準實驗動物。準實驗動物。 （4 4）無菌動物（）無菌動物（GFGF動物）和悉生動物（動物）和悉生動物（GNGN動動物）物） ：僅在特殊課題需要時使

13、用。：僅在特殊課題需要時使用。圖圖9 實驗動物中心實驗動物中心 實驗動物中心是我省規(guī)模較大、標準最高、設實驗動物中心是我省規(guī)模較大、標準最高、設施最完善，集教學、科研、技術服務和培訓為一體施最完善，集教學、科研、技術服務和培訓為一體的實驗動物中心。的實驗動物中心。 實驗動物中心為實驗動物中心為3 3層大樓，層高層大樓，層高4.5 M4.5 M，建筑面，建筑面積積2197M2197M2 2。大樓總體分布：一層東側為犬等動物實。大樓總體分布：一層東側為犬等動物實驗區(qū)域；一層西側為辦公區(qū)及部分附屬設施。二層驗區(qū)域；一層西側為辦公區(qū)及部分附屬設施。二層西側為教學、科研用兔實驗室；二層東側為動物實西側為

14、教學、科研用兔實驗室；二層東側為動物實驗室（驗室（“兔類實驗動物技術服務基地兔類實驗動物技術服務基地”配套功能實配套功能實驗室）。三層西側為屏障系統(tǒng)區(qū)，驗室）。三層西側為屏障系統(tǒng)區(qū)，SPFSPF級動物實驗室；級動物實驗室；三層東側為動物實驗室（三層東側為動物實驗室（“GLPGLP中心中心”配套動物實驗配套動物實驗實驗室）。實驗室）。技術服務項目技術服務項目動物代養(yǎng)：實驗動物的日常管理，提供實驗動物飼料等服務。動物代養(yǎng)：實驗動物的日常管理，提供實驗動物飼料等服務。動物實驗：動物藥理學、毒理學藥物有關動物實驗。動物實驗：動物藥理學、毒理學藥物有關動物實驗。動物模型：如高血壓動物模型、糖尿病動物模型

15、建立與疾病治療、異常毒性試驗、動物模型：如高血壓動物模型、糖尿病動物模型建立與疾病治療、異常毒性試驗、熱原試驗等。熱原試驗等。技能操作：如給藥，采血，注射等。技能操作：如給藥，采血，注射等。人員培訓工作人員培訓工作自自20092009年年0909月旗山校區(qū)實驗動物中心啟用以來，已舉辦了月旗山校區(qū)實驗動物中心啟用以來，已舉辦了1818期動物實驗崗前培訓。期動物實驗崗前培訓。為校內(nèi)外教師和同學開展動物實驗研究工作提供相應的技術服務。為校內(nèi)外教師和同學開展動物實驗研究工作提供相應的技術服務。 圖11 清潔級準備室 圖12 清潔級走廊 圖13 大鼠、小鼠飼養(yǎng)室3 3選用解剖、生理特點符合實驗目的要求選

16、用解剖、生理特點符合實驗目的要求的實驗動物的實驗動物催吐實驗催吐實驗適宜選用猴、貓，不選用大小鼠。適宜選用猴、貓，不選用大小鼠。膽囊功能實驗膽囊功能實驗不選用大鼠。不選用大鼠。因為大因為大/ /小鼠無嘔吐反應小鼠無嘔吐反應因為大鼠無膽囊因為大鼠無膽囊發(fā)汗中藥的研究發(fā)汗中藥的研究不能選用小鼠。不能選用小鼠。慢性支氣管炎的實驗慢性支氣管炎的實驗不能選用大小鼠。不能選用大小鼠。無汗腺無汗腺因為大因為大/ /小鼠氣管及支氣管腺不發(fā)達小鼠氣管及支氣管腺不發(fā)達計劃生育研究計劃生育研究常選用小鼠和大鼠。因繁常選用小鼠和大鼠。因繁殖力強，性周期和妊娠期短，生長快。如常用小殖力強，性周期和妊娠期短，生長快。如常

17、用小鼠做抗生育、抗著床、抗早孕、抗排卵等實驗應鼠做抗生育、抗著床、抗早孕、抗排卵等實驗應用上的首選動物。用上的首選動物。心血管病研究心血管病研究豬豬( (辛克萊小型豬辛克萊小型豬/ /廣西巴廣西巴馬小型豬馬小型豬/ /歐米尼豬歐米尼豬) )。豬冠狀動脈，在解剖學、。豬冠狀動脈，在解剖學、血液動力學上與人類相似。對高膽固醇食物的反血液動力學上與人類相似。對高膽固醇食物的反應與人一樣，很容易出現(xiàn)動脈粥樣硬化的典型病應與人一樣，很容易出現(xiàn)動脈粥樣硬化的典型病灶。灶。實驗外科學研究實驗外科學研究犬犬( (比格犬比格犬/ /華北犬華北犬/ /西西北犬北犬/ /狼犬狼犬) )。內(nèi)臟與人相似，比例近似。臨床

18、醫(yī)。內(nèi)臟與人相似，比例近似。臨床醫(yī)生在研究新的手術或麻醉方法時往往選用犬來做生在研究新的手術或麻醉方法時往往選用犬來做動物實驗，取得經(jīng)驗和技巧后用于臨床。如心血動物實驗，取得經(jīng)驗和技巧后用于臨床。如心血管外科，腦外科，斷肢再植，管外科，腦外科，斷肢再植， 器官和組織移植器官和組織移植等。等。行為學和精神病及神經(jīng)生物學研究行為學和精神病及神經(jīng)生物學研究獼猴。獼猴。制造和鑒定脊髓灰質(zhì)炎疫苗制造和鑒定脊髓灰質(zhì)炎疫苗獼猴是唯一獼猴是唯一的實驗動物。的實驗動物。4 4選用不同種屬品系實驗動物某些特選用不同種屬品系實驗動物某些特殊反應，使適合于不同研究目的的需要殊反應，使適合于不同研究目的的需要腫瘤研究腫

19、瘤研究常選用近交系小鼠，如常選用近交系小鼠，如AKRAKR小小鼠白血病發(fā)生率可達鼠白血病發(fā)生率可達9090；C3HC3H小鼠乳腺癌發(fā)病小鼠乳腺癌發(fā)病率達率達9797，而不選用，而不選用C57BLC57BL等小鼠，因其乳腺癌等小鼠，因其乳腺癌發(fā)病率極低發(fā)病率極低( (5 5) )。發(fā)熱、解熱和檢查致熱源實驗發(fā)熱、解熱和檢查致熱源實驗適宜選用適宜選用兔做實驗，因?qū)俸銣貏游?，對致熱物質(zhì)反應敏感。兔做實驗，因?qū)俸銣貏游铮瑢χ聼嵛镔|(zhì)反應敏感。高血壓病研究高血壓病研究選用選用SHRSHR大鼠，因自發(fā)性大鼠，因自發(fā)性高血壓，心血管疾病發(fā)病率高，對降壓藥物有反高血壓，心血管疾病發(fā)病率高，對降壓藥物有反應。應。

20、耳科學研究耳科學研究豚鼠聽神經(jīng)對聲波特別是豚鼠聽神經(jīng)對聲波特別是7007002000Hz2000Hz的純音最敏感，常用于聽覺和內(nèi)耳的純音最敏感，常用于聽覺和內(nèi)耳疾病的研究。疾病的研究。免疫學研究免疫學研究豚鼠易引起變態(tài)反應，產(chǎn)生豚鼠易引起變態(tài)反應，產(chǎn)生大量補體，是過敏性休克和變態(tài)反應研究的首選大量補體，是過敏性休克和變態(tài)反應研究的首選動物。動物。5 5實驗動物種屬、品系的選擇實驗動物種屬、品系的選擇如果實驗結論只針對某一品系則使用一個品如果實驗結論只針對某一品系則使用一個品系。系。如果實驗結論針對整個物種在內(nèi)的一般性研如果實驗結論針對整個物種在內(nèi)的一般性研究則使用多個不同來源的品種、品系。究則

21、使用多個不同來源的品種、品系。一般對多物種進行實驗時，應先選小型動物，一般對多物種進行實驗時，應先選小型動物，再推廣到大型物種；要求只能建立在對多個物種再推廣到大型物種；要求只能建立在對多個物種進行實驗的基礎上，才能推廣到人類，也稱動物進行實驗的基礎上，才能推廣到人類，也稱動物實驗外推。常用順序時小鼠、大鼠、兔、犬、猴。實驗外推。常用順序時小鼠、大鼠、兔、犬、猴。6 6遵守動物實驗的一般規(guī)則遵守動物實驗的一般規(guī)則 （1 1）年齡、體重）年齡、體重應根據(jù)實驗目的來選擇適齡動物。一般實驗應根據(jù)實驗目的來選擇適齡動物。一般實驗均用成年動物進行；幼齡動物一般較成年動物敏均用成年動物進行；幼齡動物一般較

22、成年動物敏感；老年動物的代謝活動及各種機能低下，反應感；老年動物的代謝活動及各種機能低下，反應遲鈍，除了作老年醫(yī)學研究外，其它專業(yè)很少應遲鈍，除了作老年醫(yī)學研究外，其它專業(yè)很少應用。同一實驗所選動物年齡應一致，體重大致相用。同一實驗所選動物年齡應一致，體重大致相近，一般不應相差近，一般不應相差10%10%。（2 2）性別）性別不同性別動物對同一實驗處理（如藥物、刺不同性別動物對同一實驗處理（如藥物、刺激等）的感受性常有差異，在實驗研究中如無特激等）的感受性常有差異，在實驗研究中如無特殊要求，一般宜選用雌雄各半做實驗。殊要求，一般宜選用雌雄各半做實驗。（3 3）生理狀態(tài)與健康情況）生理狀態(tài)與健康

23、情況動物的不同生理狀態(tài)如懷孕、授乳時對外界動物的不同生理狀態(tài)如懷孕、授乳時對外界刺激的反應常有所改變，在一般研究中應從實驗刺激的反應常有所改變，在一般研究中應從實驗組中刪除；必須選用健康動物進行實驗。組中刪除；必須選用健康動物進行實驗。（4 4）實驗季節(jié)和晝夜過程）實驗季節(jié)和晝夜過程不同季節(jié)和不同晝夜，動物機體反應性會有不同季節(jié)和不同晝夜，動物機體反應性會有一定改變，在實驗動物選擇中也應予以注意。一定改變，在實驗動物選擇中也應予以注意。（5 5）實驗的重復與肯定）實驗的重復與肯定由于不同種動物有不同的功能和代謝特點，由于不同種動物有不同的功能和代謝特點，所以在肯定一個實驗結果時，往往采用兩種以

24、上所以在肯定一個實驗結果時，往往采用兩種以上動物進行比較觀察，尤其將動物實驗結果推斷到動物進行比較觀察，尤其將動物實驗結果推斷到人的實驗時應該慎重。例如，所選的實驗動物如人的實驗時應該慎重。例如，所選的實驗動物如一種為嚙齒類動物，另一種應該為非嚙齒類動物。一種為嚙齒類動物，另一種應該為非嚙齒類動物。常用的序列是小鼠、大鼠、狗或猴。常用的序列是小鼠、大鼠、狗或猴。二、中醫(yī)動物實驗研究的注意點二、中醫(yī)動物實驗研究的注意點實驗動物在中醫(yī)實驗的應用和發(fā)展中，建議實驗動物在中醫(yī)實驗的應用和發(fā)展中，建議注意以下幾個方面。注意以下幾個方面。1 1中醫(yī)動物實驗研究應以中醫(yī)理論為指導中醫(yī)動物實驗研究應以中醫(yī)理論

25、為指導2 2中醫(yī)動物實驗研究應從中醫(yī)臨床出發(fā)中醫(yī)動物實驗研究應從中醫(yī)臨床出發(fā)3 3中醫(yī)動物實驗研究應突出中醫(yī)治療原則中醫(yī)動物實驗研究應突出中醫(yī)治療原則一、證動物模型的開創(chuàng)和發(fā)展一、證動物模型的開創(chuàng)和發(fā)展自本世紀自本世紀6060年代以來，在中醫(yī)證的動物模型制年代以來，在中醫(yī)證的動物模型制作與研究方面做了大量的研究工作。迄今證的動物作與研究方面做了大量的研究工作。迄今證的動物模型逾模型逾150150多種。其中包括各種虛證（陰虛、陽虛、多種。其中包括各種虛證（陰虛、陽虛、氣虛、血虛、各臟腑虛）、血瘀證、肝郁證、寒證、氣虛、血虛、各臟腑虛）、血瘀證、肝郁證、寒證、熱證、溫病衛(wèi)氣營血諸證、里實證等模型，

26、等等。熱證、溫病衛(wèi)氣營血諸證、里實證等模型，等等。實驗動物疾病模型應用于中醫(yī)臨床研究，為中醫(yī)診實驗動物疾病模型應用于中醫(yī)臨床研究，為中醫(yī)診療方法研究提供了大量的實驗模型，為臨床理論的療方法研究提供了大量的實驗模型，為臨床理論的深化與新理論的形成提供了便利。深化與新理論的形成提供了便利。中醫(yī)動物實驗研究的主要內(nèi)容中醫(yī)動物實驗研究的主要內(nèi)容1 1感染病原體，如用肝炎病毒復制肝炎模型感染病原體，如用肝炎病毒復制肝炎模型4 4手術損傷，如用血管結扎復制腦缺血模型手術損傷，如用血管結扎復制腦缺血模型2 2藥物和化學試劑，如用利尿劑復制陰虛模型藥物和化學試劑，如用利尿劑復制陰虛模型3 3改變生活和飲食條件

27、，如用低溫寒冷復制痹癥模型改變生活和飲食條件，如用低溫寒冷復制痹癥模型5 5其他，致癌物質(zhì)誘發(fā)各種腫瘤其他，致癌物質(zhì)誘發(fā)各種腫瘤動物模型復制方法動物模型復制方法問題是，常用實驗動物，大鼠、小鼠能不能實現(xiàn)問題是，常用實驗動物，大鼠、小鼠能不能實現(xiàn)四診，能不能實現(xiàn)基于四診的辨證，以及辨證論治？四診，能不能實現(xiàn)基于四診的辨證，以及辨證論治？小鼠辨證論治方法的由來和進展方肇勤方肇勤 潘志強潘志強 陳曉陳曉 盧文麗盧文麗 付曉伶付曉伶李海燕李海燕 陳德溯陳德溯 侯俐侯俐 廖明娟廖明娟 湯偉昌湯偉昌管冬元管冬元 吳中華吳中華 許敏許敏 闞衛(wèi)兵闞衛(wèi)兵 許家佗許家佗上海中醫(yī)藥大學上海中醫(yī)藥大學 引 言 辨證論

28、治是中醫(yī)學的優(yōu)勢。在新形式下，如何深入揭辨證論治是中醫(yī)學的優(yōu)勢。在新形式下，如何深入揭示辨證論治的機制、提高辨證論治的療效，是中醫(yī)、中西示辨證論治的機制、提高辨證論治的療效，是中醫(yī)、中西醫(yī)結合基礎學科的重要研究方向。醫(yī)結合基礎學科的重要研究方向。 辨證論治的基礎研究主要借助于小鼠等實驗動物。為辨證論治的基礎研究主要借助于小鼠等實驗動物。為了滿足研究的需要，國內(nèi)學術界業(yè)已發(fā)展出了滿足研究的需要，國內(nèi)學術界業(yè)已發(fā)展出200200余種證候的余種證候的動物模型，集中在常見的氣、血、陰、陽虛證和實熱、血動物模型，集中在常見的氣、血、陰、陽虛證和實熱、血瘀等實證。在很大程度上彌補了辨證論治研究動物模型的瘀

29、等實證。在很大程度上彌補了辨證論治研究動物模型的欠缺，促進了辨證論治基礎研究與發(fā)展。欠缺，促進了辨證論治基礎研究與發(fā)展。 但是迄今為止，尚缺乏小鼠四診和基于四診的辨證論但是迄今為止，尚缺乏小鼠四診和基于四診的辨證論治方法和技術，這成為新時期中醫(yī)藥基礎研究的瓶頸。治方法和技術，這成為新時期中醫(yī)藥基礎研究的瓶頸。 那么，為什么要實現(xiàn)基于四診的小鼠辨證？那么，為什么要實現(xiàn)基于四診的小鼠辨證？這是因為一些學術問題已凸現(xiàn)出來：這是因為一些學術問題已凸現(xiàn)出來： （1 1）證候是體內(nèi)多系統(tǒng)、組織、細胞、分子）證候是體內(nèi)多系統(tǒng)、組織、細胞、分子等不同層次生物學變化外在的綜合反映。由于缺少等不同層次生物學變化外

30、在的綜合反映。由于缺少小鼠四診方法，以往有關小鼠證候判斷，主要依據(jù)小鼠四診方法，以往有關小鼠證候判斷，主要依據(jù)實驗室檢測數(shù)據(jù)，或治療反證，一直未能建立起證實驗室檢測數(shù)據(jù)，或治療反證，一直未能建立起證候與實驗室指標一一對應的聯(lián)系。而大量的研究表候與實驗室指標一一對應的聯(lián)系。而大量的研究表明，目前一些常用實驗室指標還不能代表證候。明，目前一些常用實驗室指標還不能代表證候。 （2 2）實驗室檢測，大多要求損傷、處死動物，）實驗室檢測，大多要求損傷、處死動物，如此難以動態(tài)觀察證候的自然演變和辨證論治療效。如此難以動態(tài)觀察證候的自然演變和辨證論治療效。 （3 3）實驗室檢測，大多成本高、檢測周期長，）實

31、驗室檢測，大多成本高、檢測周期長，不利于辨證論治基礎研究和發(fā)展的高效、批量要不利于辨證論治基礎研究和發(fā)展的高效、批量要求。求。 （4 4）大量的證候動物模型、實驗室檢測和方）大量的證候動物模型、實驗室檢測和方證論治一再證明，實驗用大鼠、小鼠是存在證候證論治一再證明，實驗用大鼠、小鼠是存在證候的。的。 （5 5）我們長期的動物實驗，一再觀察到實驗）我們長期的動物實驗，一再觀察到實驗動物大鼠、小鼠存在體質(zhì)差異，以及同病異證、動物大鼠、小鼠存在體質(zhì)差異，以及同病異證、異病同證的現(xiàn)象，不加辨證的單方治療，療效往異病同證的現(xiàn)象，不加辨證的單方治療，療效往往受到限制，甚至會產(chǎn)生副作用。往受到限制，甚至會產(chǎn)

32、生副作用。 那么，那么，如何實現(xiàn)小鼠的四診呢？比如問診如何如何實現(xiàn)小鼠的四診呢？比如問診如何問？中醫(yī)四診重視面色和舌診，小鼠頭面布滿被問？中醫(yī)四診重視面色和舌診，小鼠頭面布滿被毛，舌又不會配合地伸出來，如何望診？小鼠如毛，舌又不會配合地伸出來，如何望診？小鼠如何把脈？何把脈？一些學者還一直對中醫(yī)四診有顧慮，不能量化，一些學者還一直對中醫(yī)四診有顧慮，不能量化，小鼠四診能否量化？小鼠四診能否量化？對此他們開展了長期的探索和研究，結果如下對此他們開展了長期的探索和研究，結果如下： 圖圖1 正常與晚期荷瘤小鼠面容正常與晚期荷瘤小鼠面容 圖圖2 正常小鼠正常小鼠 圖圖3 腫瘤腫瘤壓迫張口呼吸小鼠壓迫張口

33、呼吸小鼠 一、疾病小鼠存在證侯及其演變一、疾病小鼠存在證侯及其演變圖圖4 4 早期荷瘤昆明種小鼠早期荷瘤昆明種小鼠 圖圖5 5 中期荷瘤氣虛小鼠中期荷瘤氣虛小鼠 圖圖6 6 中晚期荷瘤氣虛小鼠中晚期荷瘤氣虛小鼠 圖圖7 7 中晚期荷瘤陰虛小鼠中晚期荷瘤陰虛小鼠 圖圖8 8 晚期荷瘤陰陽兩虛小鼠晚期荷瘤陰陽兩虛小鼠 以下為不同組別荷瘤小鼠爪： 圖圖11 11 爪消瘦而略紅爪消瘦而略紅 圖圖12 12 爪淡掌略胖爪淡掌略胖圖圖9 9 正常小鼠爪正常小鼠爪 圖圖10 10 爪淡伸展無力爪淡伸展無力以下為編號為H9荷瘤小鼠不同日期拍攝的爪： 圖圖15 15 腫瘤接種第腫瘤接種第2 2周周 圖圖16 1

34、6 腫瘤接種第腫瘤接種第2.52.5周周圖圖13 13 腫瘤接種第腫瘤接種第1 1周周 圖圖14 14 腫瘤接種第腫瘤接種第1.51.5周周二、正常小鼠存在體質(zhì)差異/證候差異 圖圖17 17 正常昆明種小鼠后爪正常昆明種小鼠后爪 圖圖18 18 偏虛證的正常昆明種小鼠后爪偏虛證的正常昆明種小鼠后爪 三、小鼠如何問診三、小鼠如何問診 人、鼠對話是困難的，但是問診所期望采人、鼠對話是困難的，但是問診所期望采集的信息卻大多是可以獲得的，而且部分信息集的信息卻大多是可以獲得的，而且部分信息的完整性、可靠性還優(yōu)于普通臨床上的問診。的完整性、可靠性還優(yōu)于普通臨床上的問診。 為什么呢？眾所周知，問診歸納起來

35、是十為什么呢？眾所周知，問診歸納起來是十問：問：一問寒熱二問汗，三問頭身四問便，五問一問寒熱二問汗，三問頭身四問便，五問飲食六胸腹，七聾八渴俱當辨，九問舊病十問飲食六胸腹，七聾八渴俱當辨，九問舊病十問因，還要參考服藥。因，還要參考服藥。臨床上，患者的一般情況臨床上，患者的一般情況也是問診的重要內(nèi)容。也是問診的重要內(nèi)容。 小鼠通過何途徑實現(xiàn)？小鼠通過何途徑實現(xiàn)？ 1. 1. 問寒熱問寒熱。小鼠畏寒，往往表現(xiàn)為扎堆，飼。小鼠畏寒，往往表現(xiàn)為扎堆，飼養(yǎng)中可以觀察到；畏寒的另一特點是畏寒的局部養(yǎng)中可以觀察到；畏寒的另一特點是畏寒的局部體表溫度下降，通過體表紅外成像數(shù)碼拍攝和圖體表溫度下降，通過體表紅外

36、成像數(shù)碼拍攝和圖像處理，可以精確定量；而體內(nèi)和體表溫度的改像處理，可以精確定量；而體內(nèi)和體表溫度的改變，可以分別通過肛溫、腋溫、尾溫、爪溫檢測變，可以分別通過肛溫、腋溫、尾溫、爪溫檢測獲得。因此，以上檢測可以很好地達到問寒熱的獲得。因此，以上檢測可以很好地達到問寒熱的主要目的，而且部分實現(xiàn)了量化。主要目的，而且部分實現(xiàn)了量化。 2. 2. 問汗問汗。有報道嘗試通過特殊染色技術，檢。有報道嘗試通過特殊染色技術，檢測爪面出汗點和數(shù)量多寡；有的實驗觀察了皮毛測爪面出汗點和數(shù)量多寡；有的實驗觀察了皮毛潮濕的程度，部分彌補了問汗的困難。潮濕的程度，部分彌補了問汗的困難。 3. 3. 問頭身問頭身。頭身的

37、感受可以綜合兩個方面。頭身的感受可以綜合兩個方面的信息獲得：的信息獲得：1 1）造模方法，如果這些方法在臨）造模方法，如果這些方法在臨床上可能造成頭身證候的，比如頭顱手術、高床上可能造成頭身證候的，比如頭顱手術、高血壓、感冒等，可以參考；血壓、感冒等，可以參考；2 2）小鼠曠場自主探）小鼠曠場自主探究和活動、抖攏檢測，如果頭身痛楚，則小鼠究和活動、抖攏檢測，如果頭身痛楚，則小鼠活動和探究頻率和幅度會減少?；顒雍吞骄款l率和幅度會減少。 4. 4. 問便問便。飼養(yǎng)可以直接觀察大便的數(shù)量和。飼養(yǎng)可以直接觀察大便的數(shù)量和質(zhì)量，小便可以通過代謝籠完整回收，觀測其質(zhì)量，小便可以通過代謝籠完整回收，觀測其數(shù)

38、量和性狀。數(shù)量和性狀。 5. 5. 問飲食問飲食。攝食量和飲水量可以精確測量，。攝食量和飲水量可以精確測量，嚙齒頻率（通過聲音采集與分析）可以部分反嚙齒頻率（通過聲音采集與分析）可以部分反映其脾胃健康與否。映其脾胃健康與否。 6. 6. 胸腹胸腹。方法類似于問頭身。方法類似于問頭身。 7. 7. 聾聾。生理學有聽覺反應檢測，可以采用；。生理學有聽覺反應檢測，可以采用；小鼠曠場、抖攏檢測可以觀察小鼠反應的靈敏小鼠曠場、抖攏檢測可以觀察小鼠反應的靈敏與遲鈍，間接反映其聽覺。與遲鈍，間接反映其聽覺。 8. 8. 渴渴。飲水量的精確測量，以及結合代謝籠。飲水量的精確測量，以及結合代謝籠尿液收集數(shù)量、顏

39、色，判斷其可能水分通過呼吸、尿液收集數(shù)量、顏色，判斷其可能水分通過呼吸、汗液、尿液代謝的途徑：陽熱盛往往表現(xiàn)為飲多汗液、尿液代謝的途徑：陽熱盛往往表現(xiàn)為飲多而尿少且赤；下消則飲一溲一，等等。而尿少且赤；下消則飲一溲一，等等。 9. 9. 問舊病問舊病。實驗動物的疾病遺傳，以及疾病。實驗動物的疾病遺傳，以及疾病或證候造模方法是明確的，而臨床卻往往做不到?；蜃C候造模方法是明確的，而臨床卻往往做不到。 10. 10. 問病因問病因。同上，而且造模藥物干預過程也。同上，而且造模藥物干預過程也是明確的。是明確的。 11. 11. 參服藥參服藥。治療干預記錄是十分明確的。治療干預記錄是十分明確的。 12.

40、 12. 一般情況一般情況。包括動物購入和實驗日期、品。包括動物購入和實驗日期、品系、月齡、性別，飼養(yǎng)、繁殖背景等均是明確的。系、月齡、性別，飼養(yǎng)、繁殖背景等均是明確的。 因此，小鼠雖然難以實現(xiàn)傳統(tǒng)意義上的問因此，小鼠雖然難以實現(xiàn)傳統(tǒng)意義上的問診，比如疼痛的性質(zhì)或持續(xù)時間，但問診許多診，比如疼痛的性質(zhì)或持續(xù)時間，但問診許多重要內(nèi)容，卻是可以詳細、準確獲得的。而且，重要內(nèi)容，卻是可以詳細、準確獲得的。而且，大多可以精確地定量，因而其可靠性、準確性大多可以精確地定量，因而其可靠性、準確性往往還要優(yōu)于通常意義上的臨床問診。往往還要優(yōu)于通常意義上的臨床問診。 四、小鼠如何望診四、小鼠如何望診 1. 1

41、. 望面色望面色 以下圖右是正常小鼠，腫瘤虛證小鼠在左側。以下圖右是正常小鼠，腫瘤虛證小鼠在左側。從圖中可以看到，正常小鼠頭部上抬，直視相機鏡從圖中可以看到，正常小鼠頭部上抬，直視相機鏡頭，很關注；眼裂寬，眼色紅潤、有神；吻部飽滿、頭，很關注；眼裂寬，眼色紅潤、有神；吻部飽滿、紅潤；腫瘤虛證小鼠則相反，頭低垂、目光呆滯，紅潤；腫瘤虛證小鼠則相反，頭低垂、目光呆滯，失去了好奇；雙目色暗；吻部瘦削、色暗滯。失去了好奇；雙目色暗；吻部瘦削、色暗滯。圖圖21 21 正常與腫瘤小鼠面容與體態(tài)正常與腫瘤小鼠面容與體態(tài) 2. 2. 望舌望舌 清醒狀態(tài)下，小鼠舌不易自主伸出，如果強清醒狀態(tài)下，小鼠舌不易自主伸

42、出，如果強迫其伸出，必然嚴重干擾氣血運行，不符合中醫(yī)迫其伸出，必然嚴重干擾氣血運行，不符合中醫(yī)四診原則。當小鼠麻醉后，可以方便地輕輕撐開四診原則。當小鼠麻醉后，可以方便地輕輕撐開小鼠嘴，使其舌自然伸出口腔之外，采用顯微放小鼠嘴，使其舌自然伸出口腔之外，采用顯微放大（大（8-158-15），是可以清晰觀察到的。其表現(xiàn)與），是可以清晰觀察到的。其表現(xiàn)與人類舌象十分相似。血虛舌淡，陰虛陽盛舌偏紅。人類舌象十分相似。血虛舌淡，陰虛陽盛舌偏紅。 但是，麻醉會干擾小鼠氣血運行；不同模型但是，麻醉會干擾小鼠氣血運行；不同模型小鼠對麻醉的耐受度還不同，甚至難以接受；麻小鼠對麻醉的耐受度還不同，甚至難以接受；麻

43、醉過深會導致小鼠死亡，過淺則小鼠會出現(xiàn)掙扎、醉過深會導致小鼠死亡，過淺則小鼠會出現(xiàn)掙扎、不配合等等。因此，常規(guī)地開展舌診，有一定的不配合等等。因此，常規(guī)地開展舌診，有一定的限制。限制。有沒有部分可以替代的方法？有沒有部分可以替代的方法？ 圖圖22正常小鼠舌正常小鼠舌 圖圖23環(huán)磷酰胺模型環(huán)磷酰胺模型 圖圖24乙酰苯肼模型乙酰苯肼模型 圖圖25甲狀腺素模型甲狀腺素模型 圖圖26丙基硫氧嘧啶模型丙基硫氧嘧啶模型 圖圖27正常小鼠爪正常小鼠爪 圖圖28環(huán)磷酰胺模型環(huán)磷酰胺模型 圖圖29乙酰苯肼模型乙酰苯肼模型 圖圖30甲狀腺素模型甲狀腺素模型 圖圖31丙基硫氧嘧啶模型丙基硫氧嘧啶模型 圖圖32正常小

44、鼠尾正常小鼠尾 圖圖33環(huán)磷酰胺模型環(huán)磷酰胺模型 圖圖34乙酰苯肼模型乙酰苯肼模型 圖圖35甲狀腺素模型甲狀腺素模型 圖圖36丙基硫氧嘧啶模型丙基硫氧嘧啶模型 小鼠舌象與爪尾的比較小鼠舌象與爪尾的比較 3. 3. 望爪和尾望爪和尾 與人類不同，小鼠爪、尾的角化質(zhì)比較薄，與人類不同，小鼠爪、尾的角化質(zhì)比較薄，可以較好地反映氣血充盈和陰陽盛衰的表現(xiàn)。以可以較好地反映氣血充盈和陰陽盛衰的表現(xiàn)。以上不同模型小鼠爪、尾（上不同模型小鼠爪、尾（8 8）各取自以上舌象）各取自以上舌象的同一小鼠。就紅色的程度而言，各模型舌、爪、的同一小鼠。就紅色的程度而言，各模型舌、爪、尾是一致的，爪、尾色可以部分替代舌色和

45、面色。尾是一致的，爪、尾色可以部分替代舌色和面色。 以上結果說明：以上結果說明： （1 1）舌、爪、尾顏色的變化趨勢是一致的，）舌、爪、尾顏色的變化趨勢是一致的，r r值的變化趨勢也一致。值的變化趨勢也一致。 （2 2）反映紅色的程度，舌優(yōu)于爪、爪優(yōu)于）反映紅色的程度，舌優(yōu)于爪、爪優(yōu)于尾。因此，要觀察氣血寒熱，優(yōu)先觀察舌、其次尾。因此，要觀察氣血寒熱，優(yōu)先觀察舌、其次是爪。是爪。 4. 4. 望診其他采集內(nèi)容望診其他采集內(nèi)容 包括：稱重、望形體虛實、望形體神、望形包括：稱重、望形體虛實、望形體神、望形體寒熱、望運動步態(tài)、望精力、望毛色虛實、體寒熱、望運動步態(tài)、望精力、望毛色虛實、望呼吸狀況、望

46、眼神、望耳、望鼻、望唇、望望呼吸狀況、望眼神、望耳、望鼻、望唇、望腹、望二陰、望大便、望小便、望爪、望尾、腹、望二陰、望大便、望小便、望爪、望尾、望睡眠、爪和尾顯微拍照（顏色、胖瘦、光澤、望睡眠、爪和尾顯微拍照（顏色、胖瘦、光澤、爪舒展、爪伸展、爪老嫩、爪潔凈、爪潰爛）。爪舒展、爪伸展、爪老嫩、爪潔凈、爪潰爛）。 5. 5.不同品系小鼠爪等的證候表現(xiàn)非常不同品系小鼠爪等的證候表現(xiàn)非常一致一致 以上望診方法，是否適用于常見不同品系小以上望診方法，是否適用于常見不同品系小鼠？黑色與白色小鼠是否一致？鼠？黑色與白色小鼠是否一致？ 他們比較了常用不同品系小鼠他們比較了常用不同品系小鼠C57C57小鼠（

47、黑小鼠（黑色）、色）、BALBcBALBc、ICRICR、昆明小鼠（均為白色）的、昆明小鼠（均為白色）的四診表現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)具有很高的一致性。四診表現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)具有很高的一致性。 這一結果提示，他們所建立的望診方法是這一結果提示，他們所建立的望診方法是適用于常用不同品系小鼠的。適用于常用不同品系小鼠的。以下是不同品系小鼠的爪：以下是不同品系小鼠的爪： 圖圖38 C57小鼠爪小鼠爪 圖圖39 BALBc小鼠爪小鼠爪 圖圖40 ICR小鼠爪小鼠爪 圖圖41 昆明小鼠爪昆明小鼠爪 五、小鼠如何切診五、小鼠如何切診 1. 1. 小鼠如何把脈小鼠如何把脈 他們沒有開展小鼠把脈的研究，主要是擔心他們沒有開展小鼠把脈

48、的研究，主要是擔心會干擾其氣血運行。然而，他們建立了小鼠自然會干擾其氣血運行。然而，他們建立了小鼠自然狀態(tài)下心電的快速采集。該設計思路和采集裝置狀態(tài)下心電的快速采集。該設計思路和采集裝置已經(jīng)獲得中華人民共和國專利，專利號為：已經(jīng)獲得中華人民共和國專利，專利號為：ZL03116816.7ZL03116816.7。可以類似于檢測脈的至數(shù)與節(jié)律，?？梢灶愃朴跈z測脈的至數(shù)與節(jié)律，如促、結、代、數(shù)、疾、緩、遲等脈象。如促、結、代、數(shù)、疾、緩、遲等脈象。2. 2. 切診的其他項目與內(nèi)容切診的其他項目與內(nèi)容 包括體溫和膚之溫涼、腫塊的大小與質(zhì)地、肌力的包括體溫和膚之溫涼、腫塊的大小與質(zhì)地、肌力的強弱等，不同

49、疾病和證候動物還會有一些特殊的檢測內(nèi)強弱等，不同疾病和證候動物還會有一些特殊的檢測內(nèi)容。容。 六、小鼠如何聞診六、小鼠如何聞診 小鼠聞診內(nèi)容目前主要為嗅氣味，聲音的標準采集小鼠聞診內(nèi)容目前主要為嗅氣味，聲音的標準采集和分析將有助于判斷小鼠的虛實。和分析將有助于判斷小鼠的虛實。 七、小鼠四診的標準化、客觀化、計量化七、小鼠四診的標準化、客觀化、計量化采集與分析采集與分析 為實現(xiàn)小鼠非創(chuàng)傷性的標準化、客觀化、計量化四為實現(xiàn)小鼠非創(chuàng)傷性的標準化、客觀化、計量化四診檢測，他們提出并初步建立了小鼠四診工作站。診檢測，他們提出并初步建立了小鼠四診工作站。 1. 思路和原則 繼承中醫(yī)四診和辨證論治的理論與方

50、法，模擬中醫(yī)臨床四診信息的采集方式，實現(xiàn)小鼠的非創(chuàng)傷性四診檢測，同時部分實現(xiàn)四診檢測的標準化、量化，提高四診檢測速度，以適應大樣本的檢測之需。即： （1）非創(chuàng)傷性檢測； （2）標準化、客觀化、計量化； （3）可操作原則，即操作容易和方便，便于掌握和普及； （4）低成本原則，利于普及； （5）流水作業(yè)原則，以提高檢測速率。 2. 小鼠四診工作站內(nèi)容 （1）小鼠行為學曠場實驗檢測單元 （2）小鼠爪、尾顯微放大拍攝單元 （3）小鼠舌顯微放大拍攝單元 圖圖42 42 小鼠曠場檢測小鼠曠場檢測 圖圖42-1 42-1 小鼠爪尾顯微放大拍攝單元小鼠爪尾顯微放大拍攝單元（4）小鼠自然狀態(tài)下心電快速采集單元

51、圖圖43 43 小鼠清醒狀態(tài)下前后肢引導出的心電小鼠清醒狀態(tài)下前后肢引導出的心電圖圖42423 3 小鼠爪持法小鼠爪持法 圖圖42423 3 小鼠尾持法小鼠尾持法（5）小鼠腋溫采集單元（6）小鼠體重采集單元 （7）小鼠整體外觀攝影單元（8）小鼠抖攏自主活動狀況采集單元（9）小鼠攝食量稱量單元（10）小鼠飲水量測量單元（11）荷瘤小鼠瘤徑的測量（12）信息綜合處理單元八、小鼠常見證候辨證標準1四診信息的標準采集2建立各四診信息的正常參考值（1）建立實驗前各四診信息的正常參考值（2）建立正常對照組動態(tài)的正常參考值（3）部分檢測數(shù)據(jù)基數(shù)校正3癥狀歸類預處理表1 形質(zhì)、遲動、淡、紅、青紫、瘀、寒熱癥狀

52、類類別癥狀形質(zhì)減少如消瘦、體重減輕/偏輕、爪和尾瘦癟，等形質(zhì)增加如胖、體重偏重/重、爪和尾胖/腫，等動心率偏數(shù)/數(shù)、吻和軀體移動增加，等遲心率緩/遲、吻和軀體移動減弱，等淡唇、耳、爪、尾淡/偏淡等紅唇、耳、爪、尾紅/偏紅等熱腋溫偏高/高等寒腋溫低/偏低、蜷縮、扎堆、發(fā)抖等青紫、瘀唇、耳、爪、尾暗、偏暗/青紫、腫塊，等表2 虛實、濕、毒、病因病邪、病態(tài)癥狀歸類類別癥狀實如：病邪造模、腫瘤，等虛如：老年、發(fā)育不良，食量減少、體重減輕等濕大便偏濕、粘液便、皮毛濕，等毒如癌腫等病因病邪如接種腫瘤、血管結扎、失血，等病態(tài)如爪不潔、污物附著，等表3 五臟定位癥狀歸類類別癥狀心神志異常、眼中無神、嗜臥、心臟

53、病變等肝筋脈拘攣、目疾、多怒撕咬、或肝臟病變等脾飲食減少、腹脹滿、肌體羸瘦、瀉利等肺皮膚病變、喘急、鼻孔見有出血和撓鼻等腎老年、羸瘦、發(fā)育不良、生殖及生殖器異常等 4常見的寒熱、虛實、氣血、陰陽、病邪、五臟證候辨證標準 （1）寒、熱、虛、實等的辨證標準 表4 寒、熱、虛、實等的辨證標準證辨證標準寒證寒表現(xiàn)1項或以上偏寒證寒表現(xiàn)1項或以上，權重分值低熱證紅、熱表現(xiàn)1項或以上偏熱證紅、熱表現(xiàn)1項或以上，權重分值低虛證虛、形質(zhì)減少、遲、色淡等表現(xiàn)1項或以上，項目多，程度重偏虛證虛、形質(zhì)減少、遲、色淡等表現(xiàn)1項或以上，權重分值低實證實、形質(zhì)增加、濕、毒、病因病邪等表現(xiàn)1項或以上，愈重愈實偏實證實、形質(zhì)增加、濕、毒、病因病邪等表現(xiàn)1項或以上，權重分值低（2）陰虛證、陰虛火旺、陽虛證、陰陽兩虛、氣虛證、血虛證等的辨證標準 表5陰虛證、陰虛火旺、陽虛證、陰陽兩虛、氣虛證、血虛證等的辨證標準證辨證標準陰虛證形質(zhì)減少1項，或虛證+紅、熱、動1項或以上偏陰虛證形質(zhì)減少1項，或虛證+紅、熱、動1項或以上，權重分值低陰虛火旺證陰虛證+火征，紅、熱、動分值高陽虛證虛證+（寒1項或以上，或+