一點紅黃酮(最后修改)

1、一點紅中總黃酮的提取與測定方法研究 胡文海，紀(jì)敏琳，黃銳濤，陳燕婷，陳光孝，姜濤*化學(xué)與藥學(xué)系，吉林大學(xué)珠海學(xué)院，珠海市，廣東省，519041摘 要：本文采用正交實驗的方法，以一點紅中總黃酮得率為考察指標(biāo)，對影響一點紅總黃酮提取方法的因素進行了探討，分別得出了用連續(xù)回流提取法和超聲波提取法提取一點紅中總黃酮的最佳實驗條件。連續(xù)回流提取法：乙醇濃度為75，回流時間為3h，固液比為1:25，總黃酮含量為8.773mg/g；超聲波提取法：乙醇濃度為65，震蕩時間為60min，固液比為1:20，總黃酮含量為9.945mg/g。關(guān)鍵詞：一點紅；黃酮；連續(xù)回流提取法；超聲波提取法； Extraction

2、and Determination of Total Flavonoidsabout Emilia SonehifoliaWenhai Hu, Minlin Ji, Ruitao Huang, Yanting Chen, Guangxiao Chen, Tao JiangDepartment of chemistry and pharmacy, ZhuHai College of JiLin University, ZhuHai , GuangDong, 519041Abstract: In this paper, orthogonal experiment method, with Emil

3、ia sonehifolia in total flavonoids was investigated indicators, the factors affecting the Emilia sonehifolia total flavonoids extraction methods were discussed were obtained by extraction with continuous reflux extraction and ultrasonic extraction Emilia optimal conditions of total flavonoids. Conti

4、nuous reflux extraction: ethanol concentration of 75%, a reflux time was 3h, solid-liquid ratio of 1:25, the total flavonoid content was 11.07mg / g; ultrasonic extraction: ethanol concentration of 65%, shock time of 60min, solid-liquid 1:20, total flavonoid content was 12.5mg / g.Keywords: Emilia s

5、onehifolia; Flavonoid; continuous reflux extraction; ultrasonic extraction;一點紅是廣西傳統(tǒng)中草藥，為菊科植物一點紅(Emilia sonchifolia DC.)的干燥全草，具有清熱解毒，消炎，利尿的功效1。一點紅主要含有黃酮類，生物堿類，植物甾醇，脂肪酸等化學(xué)成分2-3。目前對一點紅的研究主要在部分化學(xué)成分和栽培技術(shù)等方向4,對含量研究比較少。據(jù)報道5，黃酮類物質(zhì)是一點紅中抗氧化和消炎的活性成分，故通過測定一點紅的總黃酮含量來控制原料藥的質(zhì)量，對確保成品藥的療效有重要的意義。1. 材料與儀器1.1 儀器 索氏提取器(

6、公司名稱)；RE-52C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海青浦瀘西儀器廠)；紫外分光光度計(日本島津)；離心機（公司名稱），超聲波清洗機（AS7240ADT）1.2 材料 一點紅草藥；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所）；乙醇；石油醚等試劑均為分析純。2. 實驗方法與步驟2.1. 連續(xù)回流提取法提取總黃酮的方法考察通過設(shè)計正交試驗，分別對乙醇濃度為65%、75%、85%，回流時間為2h、3h、4h，固液比為1:20、1：25、1:30進行最佳提取條件的選擇。用分析天平準(zhǔn)確稱取5.0000g干燥的一點紅藥草粉末，裝入索氏提取器中；加入相應(yīng)的乙醇，回流至相應(yīng)的時間；回流提取完成后將所得的提取液轉(zhuǎn)移到RE-52C旋轉(zhuǎn)

7、蒸發(fā)器中，控制溫度50，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至乙醇盡可能的除去；將濃縮液轉(zhuǎn)入布氏漏斗中，連接減壓裝置，采用減壓抽濾的方法，除去不溶物質(zhì)；所得的濾液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，加入石油醚進行萃取，反復(fù)萃取至石油醚層無色，所得的即為總黃酮提取液。22.2. 超聲波提取法提取總黃酮的方法考察運用正交實驗思維對乙醇濃度為65%、75%、85%，超聲波震蕩時間為30min、45min、60min，固液比為1：15、1：20、1：25進行探究提取條件對總黃酮提取效率的影響。其方法是用分析天平準(zhǔn)確稱取5.0000g干燥一點紅藥草粉末到錐形瓶中，加入乙醇，放入AS7240ADT超聲波清洗機中震蕩，震蕩完成后采用減壓抽濾的方法分離提

8、取液和藥渣，濾液取出轉(zhuǎn)移到RE-52C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮提取液，減壓抽濾除去不溶物，濃縮液用的石油醚萃取直至石油醚層澄清，將總黃酮加入多倍量95%乙醇離心，回收乙醇，得到的即為總黃酮提取液。62.3. 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備用移液管取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液(c=0.2mg/ml)25.00ml于50.00ml容量瓶中，用95%乙醇定容至刻度，搖勻。用移液槍精密吸取蘆丁溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于6支10ml的比色管中，加入95%乙醇至5ml，加入5%的亞硝酸鈉溶液0.30ml搖勻，靜置6min，加入10%的硝酸鋁0.30ml，搖勻，靜置6min，加入4%的氫氧化鈉4.00

9、ml，搖勻，用蒸餾水稀釋至刻度。搖勻，靜置15-20min，在510nm處測吸光度，以第一組為空白對照，繪制蘆丁溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線。以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的濃度（mg/ml）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，得到蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y=1.2614X, R2=0.99962.4. 樣品總黃酮的含量測定將總黃酮提取液轉(zhuǎn)移到50.00ml容量瓶中，用95%乙醇定容至刻度，搖勻；用移液槍取3.00ml至比色管中，加入2.00ml的95%乙醇，搖勻；加入5%的亞硝酸鈉0.30ml搖勻，靜置6min；加入10%的硝酸鋁0.30ml，搖勻，靜置6min；加入4%的氫氧化鈉4.00ml，搖勻，用蒸餾水定容至刻度。搖勻，靜置

10、15-20min，以95%乙醇-亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉作對照，在510nm處測吸光度。將黃酮提取液測得吸光度代入回歸方程Y=1.2614X即得稀釋后的溶度。根據(jù)公式總黃酮含量（mg/g）=C×D×V/M式中：C：供試品的濃度 D：稀釋倍數(shù) V：樣品的容量 M：一點紅的取樣量3. 實驗結(jié)果與分析3.1. 連續(xù)回流提取法實驗結(jié)果采用L9(34)正交表進行試驗，以總黃酮含量為參考指標(biāo)。表1 連續(xù)回流提取法實驗因素水平表水平因素(A)乙醇濃度(%)(B)回流時間(h)（C)固料比16521:2027531:2538541:30表2連續(xù)回流提取法測定結(jié)果試驗號(A)乙醇濃度(%)

11、(B)回流時間(h)（C)固料比含量(mg/g)11113.96421226.97631334.49242124.59852235.60262315.33873133.85883216.18493324.6515.1444.1405.1624.7395.1796.2545.4085.3914.8984.8274.6515.091R0.2822.1140.7580.652注：-i因素下水平1出現(xiàn)3次含量之和的平均值-i因素下水平2出現(xiàn)3次含量之和的平均值-i因素下水平3出現(xiàn)3次含量之和的平均值R-i因素下中最大值與最小值之差由表2極差分析可以看出R2>R3>R1，所以連續(xù)回流提取法影

12、響總黃酮提取得率的因素的主次因素為BCA，即：回流時間>固料比>乙醇濃度。最佳搭配水平為B2C2A2，即回流時間為3h，固料比為1:25，乙醇濃度為75%。根據(jù)該最佳條件，測得總黃酮的含量為8.773mg/g。另外，該實驗的三個因素的R1,R2,R3與R4（誤差）相比較，R1<R43.2.超聲波提取法實驗結(jié)果采用L9(34)正交表進行試驗，以總黃酮含量為參考指標(biāo)。表3 超聲波提取法實驗因素水平表水平因素(A)乙醇濃度(%)(B)震蕩時間(min)(C)固料比165301:15275451:20385601:25表4超聲波提取法測定結(jié)果試驗號(A)乙醇濃度(%)(B)震蕩時間(

13、min)(C)固料比含量(mg/g)11116.24521226.67731339.94542124.44052236.14862316.10473136.28083215.09193326.8007.6225.6555.8146.3985.5645.9725.9726.3546.0577.6167.4586.492R2.0581.9611.6880.138由表4極差分析可以看出R1>R2>R3，所以超聲波提取法影響總黃酮提取得率的因素的主次因素為ABC，即：乙醇濃度>震蕩時間>固料比。最佳搭配水平為A1B3C3，即震蕩時間為60min，固料比為1:20，乙醇濃度為65

14、%。根據(jù)該條件，測得總黃酮的含量為9.945mg/g。4. 結(jié)論采用連續(xù)提取法提取一點紅的總黃酮，乙醇濃度對總黃酮提取的影響小，從節(jié)省原料的角度考慮，可適當(dāng)降低乙醇濃度從而降低研究或生產(chǎn)成本。并且提取過程密封，不會受外界環(huán)境影響，藥材能夠不斷地接觸新溶媒，總黃酮能提取得更加充分，特別適合易揮發(fā)的有機溶劑。采用超聲波提取法提取總黃酮，其方法較連續(xù)回流提取法步驟復(fù)雜，提取的雜質(zhì)也多，提取條件要嚴(yán)格控制，但是相對時間減少，而且提取得率有所提高。致謝感謝廣東省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目（項目編號：201413684014）及吉林大學(xué)珠海學(xué)院第八批百人工程項目（項目編號：）對本實驗提供資金贊助并感謝吉林大學(xué)珠海學(xué)院為本實驗提供試劑及器材。參考文獻：1 廣西壯族自治區(qū)革命委員會衛(wèi)生局.廣西本草選編（下冊）M.南寧：廣西人民出版社，1974：940.2 李秀信，王榮花，楊秀萍.一點紅黃酮成分的分析及含量測定J.西北植物學(xué)報，2003，23（4）：671.3 高建軍，程東亮.一點紅化學(xué)成分的研究J.中國中藥雜志，1993，18（2）：102.4 李